紫外线减毒弓形虫对小鼠旋毛虫感染的影响

目的探讨紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染的影响。方法ICR小鼠分为两组，实验组为紫外线减毒弓形虫免疫3周后再感染旋毛虫，对照组为旋毛虫单独感染。结果与旋毛虫单感染相比，小鼠预先经紫外线减毒弓形虫免疫再感染旋毛虫，在感染后5～14d其小肠内的成虫数明显增加（肠道排虫明显延迟），而感染后23-90d其肌肉中的幼虫数明显下降。结论紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染具有一定的免疫调节和异源性保护作用。     

大蒜素对弓形虫感染小鼠体液免疫的影响

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种人畜共患的寄生虫病病原体,在宿主免疫功能低下时可造成严重后果,属机会性致病原虫.     

旋毛虫感染对小鼠结肠上皮通透性的影响

目的: 观察旋毛虫( T.spiralis )感染对小鼠结肠上皮通透性的影响及其作用机制。方法: T.spiralis 感染BALB/c小鼠。7 d后直肠灌注辣根过氧化物酶(HRP),在其后的0 min、60 min、120 min,分别检测小鼠血液中HRP的情况,尾静脉采血检测IgG₁和IgG_2a,随后处死小鼠,以ELISA法和流式细胞术检测肠系膜淋巴结中白细胞介素4(IL-4)的表达。另外,以 T.spiralis 感染 STAT6 敲除小鼠,同前法一样操作,观察相同指标。结果: T.spiralis 感染组结肠通透性明显增加,IL-4和IgG₁明显增高,IgG_2a明显降低(均P<0.05)。 STAT6 敲除小鼠实验, T.spiralis 感染并未导致结肠通透性的增加(P>0.05);与BALB/c感染组小鼠相比, STAT6 敲除感染组小鼠IL-4明显较低(P<0.05)。结论: T.spiralis 感染能够导致小鼠结肠上皮通透性的增加,其作用机制可能是通过诱导IL-4的分泌来实现的。     

旋毛虫感染经PD-1途径对BCG免疫小鼠细胞因子产生的影响?

探讨PD-1信号通路在旋毛虫感染影响卡介苗(Mycobacterium bovis bacille Calmette-Gu'erin,BCG)免疫小鼠细胞因子产生中的作用。首先,以旋毛虫肌幼虫(400条/只)分别感染C57BL/6遗传背景野生(WT)小鼠和PD-1基因缺失(PD-1~(-/-))小鼠,于感染后42 d处死小鼠,分离脾淋巴细胞以刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)刺激培养48 h,ELISA检测培养上清中Th1型IFN-γ、IL-2、TNF-α,Th2型IL-4,和调节性TGF-β、IL-10细胞因子水平;进而,在上述相同感染条件下,于感染后28 d接种BCG,分别于免疫后7和28 d分离WT小鼠和PD-1~(-/-)小鼠的脾淋巴细胞,用卡介菌纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)体外刺激培养48 h,ELISA检测细胞培养上清中上述细胞因子分泌水平。结果显示,在单纯旋毛虫感染及感染后BCG免疫条件下,各细胞因子变化趋势趋于一致。WT小鼠感染组Th1型IFN-γ、IL-2水平明显低于未感染组,Th2型IL-4及调节性TGF-β、IL-10水平明显高于未感染组(P0.05),TNF-α水平无显著差异。而PD-1~(-/-)小鼠中,与未感染组相比,感染组Th1型IFN-γ、IL-2和TNF-α的下降水平,以及Th2型IL-4和调节性TGF-β、IL-10的上升水平较WT小鼠明显减小。上述结果表明,旋毛虫感染可经PD-1信号通路抑制BCG免疫诱导的Th1型细胞因子的产生,而促进Th2型细胞因子IL-4及调节性细胞因子的IL-10和TGF-β的生成。本研究为蠕虫感染抑制抗结核疫苗保护性效果的潜在机制提供了实验依据。     

旋毛虫感染对胶原诱导性关节炎小鼠肠道菌群的影响

寄生蠕虫能否通过调节宿主肠道菌群进而改善炎症性疾病是近年的研究热点。为探讨旋毛虫感染对胶原诱导性关节炎(Collagen-Ⅱinduced arthritis,CIA)小鼠肠道菌群构成和丰度的影响,将15只小鼠随机分为正常对照组、关节炎(CIA)组和预先感染旋毛虫关节炎(CIA.TS)组,在首次胶原诱导后第50 d,取小鼠粪便进行16S rDNA测序,然后将CIA组和对照组之间的差异菌属与关节炎评分进行Spearman相关分析。结果显示,与对照组相比,CIA组小鼠菌群结构发生了明显的改变,其丰富度和多样性有上升趋势;在门水平上,脱铁杆菌门、变形菌门和梭杆菌门的丰度明显增加;在属水平上,未分类毛螺菌科、Mucispirillum属和脱硫弧菌属的丰度明显增加,Alistipes属和理研菌属的丰度明显减少。CIA组小鼠中丰度显著升高的菌属,其相对丰度与关节炎评分呈正相关;而丰度显著降低的菌属,其相对丰度与关节炎评分呈负相关。与CIA组相比,预先感染旋毛虫的关节炎小鼠(CIA.TS)菌群的丰富度和多样性有下降趋势,脱铁杆菌门和变形菌门的丰度明显减少,Mucispirillum属和脱硫弧菌属的丰度明显减少,理研菌属的丰度明显增加。以上结果表明,CIA小鼠肠道菌群结构改变与关节炎疾病严重程度密切相关,而预先感染旋毛虫可缓解CIA小鼠的关节炎症,其改善作用可能与调节CIA小鼠肠道菌群结构有关。     

两种方法制备的旋毛虫ES抗原对小鼠免疫保护作用研究

旋毛虫病流行于世界各地,是一种危害严重的人兽共患病.旋毛虫的抗原可分为虫体抗原、表面抗原、杆细胞颗粒相关抗原以及排泄分泌抗原(excretory-secretory antigen,简称ES抗原).ES抗原是旋毛虫的代谢分泌产物,与宿主免疫系统直接接触,具有较强的免疫原性[1].ES抗原也可用于人旋毛虫病的诊断[2].     

旋毛虫感染不同时期对小鼠胶原诱导性关节炎影响的差异性观察?

观察旋毛虫感染的不同阶段对小鼠胶原诱导性关节炎（ Collagen?Ⅱ induced arthritis, CIA）的影响并初步探讨其机制。建立雄性DBA／1小鼠胶原（CⅡ）诱导性关节炎（CIA）模型,以旋毛虫肌幼虫（400条／只）分别于造模前14 d、造模当天感染小鼠。关节评分评价足爪关节病变的发生及严重程度。于胶原首次诱导后第50 d处死小鼠,取足爪关节切片观察组织病理学变化; ELISA检测血清抗CⅡ特异性IgG、IgG1、 IgG2a水平;分离脾淋巴细胞以ConA刺激培养, ELISA检测培养上清中IFN?γ、 IL?4、 IL?10、 IL?17和TNF?α细胞因子水平。结果显示,与单纯CIA造模组相比,预先14 d感染旋毛虫的CIA小鼠关节炎发病率、关节评分及组织学评分均显著降低,血清IgG1水平则显著升高,脾细胞培养上清Th2型细胞因子IL?4和调节性细胞因子IL?10水平显著增加。而造模当天感染旋毛虫的CIA小鼠关节评分和组织学评分显著升高,血清IgG2a水平显著升高,细胞培养上清Th1型细胞因子IFN?γ和促炎细胞因子IL?17、 TNF?α水平显著升高,且差异具有统计学意义。该结果表明,旋毛虫感染早期可加重胶原诱导性小鼠关节炎,而感染后期则对关节炎有一定抑制作用,提示旋毛虫对小鼠胶原诱导性关节炎的影响作用因感染时限的不同而存在差异,且该差异可能与不同感染时期诱导的Th反应类型的变化有关。     

孕期弓形虫感染对小鼠胎盘补体调节蛋白表达水平的影响

目的 通过检测弓形虫感染对C57BL/6孕鼠胎盘补体调节蛋白的表达水平,探索孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子免疫机制.方法 将C57BL/6孕鼠随机分为感染组和正常对照组,每组12只,感染组每只孕鼠于孕8 d腹腔注射200个弓形虫强毒株(RH株)速殖子,对照组于相应时间注射等量生理盐水.所有孕鼠均于孕14 d无菌分离胚胎组织,观察胎鼠发育情况.采用实时荧光定量PCR检测胎盘补体调节蛋白Crry、GPI-DAF及CD59a的mRNA的表达水平;采用流式细胞术检测胎盘单细胞悬液中Crry、GPI-DAF阳性细胞率.结果 弓形虫感染导致感染组死胎率显著升高(感染组死胎率为80.95%,对照组为4.41%),两组之间差异有统计学意义(P＜0.01);弓形虫感染组及对照组Crry、GPI-DAF和CD59a的mRNA表达水平分别为0.786±0.199、0.594±0.096、0.880±0.179和0.550±0.077、0.221±0.074、0.591±0.075,3类补体调节蛋白感染组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);感染组和对照组Crry、GPI-DAF的阳性细胞百分率分别为(10.03±2.11)%、(2.95±1.04)%和(3.15±1.32)%、(0.66±0.26)%,两类补体调节蛋白感染组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 弓形虫感染导致孕鼠胎盘3种补体凋节蛋白Crry、GPI-DAF及CD59a表达水平均升高,打破了母胎界面维持正常妊娠所需的免疫微环境,这可能是孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子免疫机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the expression of complement regulatory proteins on placentas of pregnant C57BL/6 mice infected with Toxoplasma gondii in order to explore the molecular immunological mechanism for abnormal pregnancy induced by T. gondii infection. Methods Twenty-four pregnant C57BL/6 mice were randomly divided into two groups equally. The infection group was intraperitoneally injected with 200 of living T, gondii RH strain tachyzoites on the 8th day of gestation, and the normal group of mice was injected with physiological saline. All mice were killed on day 14 after gestation and placentas were collected. The expression levels of Crry, GPI-DAF and CD59a mRNA were analyzed by real-time quantitative PCR, and the positive rates of Crry and GPI-DAF were measured with flow cytometry. Results The died fetus rates of infected group and control were 80. 95% and 4. 41% , respectively. The infected group was significantly higher than of that the control group (P＜0.01). The expression levels of Crry, GPT-DAF and CD59a mRNA in the infected and control group were 0.786 ±0. 199, 0.594 ±0.096, 0.880 ±0. 179 and 0.550 ±0.077, 0.221 ±0.074, 0.591 ± 0.075 , respectively, and the difference of three kind of complement regulation proteins between two groups was all significant (P＜0.01). The positive percentages of Crry and GPI-DAF cells of infected and control group were (10. 03 ± 2. 11) % , (2.95 ±1.04)% and (3. 15 ± 1. 32) % , (0. 66 ±0. 26) % , respectively, and the difference of the two kind complement regulation proteins between two groups was also significant ( P ＜ 0. 01). Conclusion The expression level of mouse placental complement regulatory proteins was increased after infection with T. gondii, and then immunological microenvironment at the fetomaternal interface was destroyed. It may be one of important immunological mechanism for abnormal pregnancy induced by T. gondii infection.     

弓形虫感染宫内垂直传播的免疫特点

弓形虫感染宫内垂直传播对母体胎儿有很大危害。妊娠母体处于特殊的免疫状态，即正常妊娠是以Th2型免疫为主，以避免细胞免疫对胎儿的危害；而感染弓形虫后的机体是以Th1型免疫为主来防御细胞内寄生原虫的危害；这两种免疫反应之间的矛盾造成感染弓形虫的母体免疫反应的进一步偏移。这种矛盾的免疫现象也与性激素的免疫抑制作用和子宫内局部免疫有关。同时，由于体液免疫各抗体在母体和胎儿的弓形虫感染宫内垂直传播中变化复杂，给疾病诊治带来很大困难。     

霍乱毒素佐剂联合弓形虫ESA鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染作用

目的 观察霍乱毒素（cholera toxin,CT）佐剂和弓形虫排泄-分泌抗原（ESA）鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用。方法 6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为3组,每组20只。分别用PBS 20μl、ESA 20μg或CT 1.0μg＋ESA 20μg每只滴鼻免疫2次,间隔2周。末次免疫后14 d,用4×104个弓形虫速殖子每只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况。速殖子攻击后30 d,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子。结果 CT作为佐剂联合弓形虫ESA滴鼻免疫小鼠的健康状况明显好于PBS组和ESA组,存活率（95%）也显著高于PBS组（55%）。与PBS组相比,CT＋ESA组肝和脑组织内速殖子数分别减少了80.19%（P〈0.001）和78.24%（P〈0.005）。CT作为佐剂联合ESA滴鼻免疫小鼠诱导了高水平的黏膜免疫应答和系统免疫应答。结论 CT作为佐剂联合弓形虫ESA滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答可有效抵抗弓形虫速殖子攻击。     

Correlates of Immune Response in Trichinella spiralis Infection

Trichinella spiralis infection induces Trichinella-specific IgG antibody and high level of blood eosinophil. However, the kinetics induced by different parasite burdens during infectious periods remains unclear. In this study, rats were infected with 100, 1000, or 3000 larvae of T. spiralis (100 TS, 1000 TS, or 3000 TS). Correlates of eosinophils, antibody responses, and Regulated on Activation, Normal T Cell Expressed and Secreted (RANTES) with worm burdens were evaluated at 1 week, 2 weeks, 1 month, and 2 months postinfection. Heavy infections (1000 TS and 3000 TS) showed significantly higher levels of eosinophil, IgG, and IgG1 antibody responses at 2 weeks postinfection compared to light infection (100 TS). The highest RANTES mRNA expression was also found in the heavy infection group (3000 TS). The results indicate, at early stage of infection (week 2), heavy infection induced higher levels of IgG, IgG1, eosinophil, and RANTES responses. However, at late stage of infection (month 2), there were no correlates of immunity with parasite burdens. Higher levels of IgG and IgG1 antibody responses are critical in heavy T. spiralis infection. These results provide important information in evaluating immune responses by T. spiralis infective stage during the T. spiralis infection.     

斑点ELISA与环幼沉淀试验诊断旋毛虫病的研究

目的比较斑点ELISA法（Dot—ELISA）和玻片环幼沉淀试验（CPT）检测感染旋毛虫大鼠血清抗体的敏感性和特异性。方法采用Dot-ELISA和CPT两种免疫学诊断技术检测实验感染旋毛虫大鼠血清特异性抗体。结果Dot．ELISA和CPT法检测阳性率分别为97．5％和95．O％,差异无统计学意义（x2=0．3463,P〉0．05）。同时用此两种血清学方法检测正常大鼠、斯氏狸殖吸虫感染大鼠、日本血吸虫感染兔及蛔虫病人血清,除1例蛔虫病人CPT阳性外,其他均为阴性。从第2周开始旋毛虫感染大鼠Dot—ELISA和CPT均能测出抗体,第5周达高峰。结论Dot．ELISA和CPT对旋毛虫特异性IgG抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。     

三种旋毛虫肌肉期幼虫染色方法的比较研究

目的为寻找简便有效的旋毛虫病病原学诊断方法,本文比较研究了吉姆萨、天狼猩红和苏木素-伊红（HE）染色对肌肉中旋毛虫幼虫染色后的观察效果。方法BALB／c小鼠口饲感染旋毛虫肌期幼虫300条,分别于感染后90d和120d处死小鼠,取其膈肌,福尔马林固定后,一分为四,分别行吉姆萨染色、天狼猩红染色和HE染色,同时设不染色的对照,光镜下观察肌肉中虫体的显示效果。结果吉姆萨染色对旋毛虫肌期幼虫的显示效果较好,天狼猩红染色对幼虫周围纤维囊壁的显示效果较好。结论吉姆萨和天狼猩红染色均有助于对小鼠膈肌中的旋毛虫幼虫进行观察,且二者各具特点。     

旋毛虫新生幼虫T668重组抗原对小鼠的保护性免疫

目的研究旋毛虫新生幼虫T668重组抗原的免疫原性,制备基因工程疫苗。方法以旋毛虫新生幼虫期特异性基因T668在大肠杆菌中的表达蛋白为抗原免疫小鼠,每间隔10d免疫1次,共免疫3次。末次免疫后10d,每只小鼠攻击感染200条旋毛虫感染性肌幼虫,感染后5周用消化法检查肌幼虫(ML)负荷。结果T668重组抗原免疫组肌幼虫减虫率明显高于佐剂组和对照组。结论T668重组抗原能诱导小鼠产生一定程度的保护性免疫,且可激发特异性体液免疫。     

旋毛虫对三硝基苯磺酸和噁唑酮诱导肠炎小鼠结肠中Th1/Th2类细胞因子表达的影响

目的 研究旋毛虫(T. spiralis)对三硝基苯磺酸(TNBS)和噁唑酮(OXZ)诱导的实验性肠炎小鼠结肠中Th1/Th2类细胞因子表达的影响.方法 雌性BALB/c小鼠,随机分为50%乙醇对照组、T. spiralis应用组、TNBS(OXZ)诱导肠炎模型组、预先感染T. spiralis后诱导TNBS(OXZ)模型组(每组小鼠取材时保证6只以上).对各组小鼠肠黏膜固有层单个核细胞(LPMC)进行分离培养,采用ELISA方法观察感染T.spiralis和未感染T.spiralis小鼠于TNBS或OXZ诱导肠炎后3 d和7 d结肠中Th1/Th2类细胞因子蛋白的表达变化,包括IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10的表达量分析.结果 预先感染T. spiralis后诱导TNBS模型组小鼠在造模后3 d及7 d肠黏膜LPMC产生IFN-γ的水平均低于模型组(P＜0.05),而IL-4、IL-10的表达高于模型组(P＜0.05).预先感染T. spiralis后诱导TNBS模型组小鼠在造模后3 d肠黏膜LPMC产生IL-12的水平低于模型组(P＜0.05),第7天与模型组相比未见明显差异(P＞0.05).预先感染T. spiralis后诱导OXZ模型组小鼠在造模后3 d及7 d肠黏膜LPMC产生IFN-γ、IL-4及IL-10的水平均高于单纯造模组(P＜0.05).结论 T. spiralis对TNBS诱导的肠炎模型小鼠肠道局部免疫作用机制可能是通过诱导Th2型免疫反应及Tr1型细胞因子而抑制结肠炎小鼠Th1型过度免疫应答而实现的.在T.spiralis对OXZ模型小鼠的干预性研究中,没有按理论所设想的感染T.spiralis所产生的Th2型免疫反应会对OXZ诱导的Th2型炎症反应起叠加作用而加重病情.这提示我们,需要进一步探讨T.spiralis对拥有Th2型免疫应答的OXZ模型的具体作用机制.     

IgE在小鼠旋毛虫感染急性期免疫反应中的作用

目的观察感染旋毛虫小鼠IgE水平的动态变化及其抗体依赖细胞介导的细胞毒效应（antibody-dependent cell cytotoxicity,ADCC）,并通过IL-4、IL-5的表达测定,探讨IgE在旋毛虫感染小鼠急性期免疫反应中的作用。方法采用双抗体夹心ELISA法,分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28、35、60d小鼠外周血中总IgE水平,同时用间接ELISA法测定特异性IgE水平,采用体外培养法做IgE介导嗜酸性粒细胞对旋毛虫肌幼虫的体外杀伤实验,按分组设计在96孔细胞培养板的板孔中加入感染旋毛虫小鼠外周血提取的嗜酸性粒细胞（Eos）、感染鼠血清及感染鼠的旋毛虫肌幼虫与含有10%灭活小牛血清的RPMI-1640培养液,共培养2d。显微镜下,分别在12、24、48h观察小鼠Eos对旋毛虫肌幼虫的影响,另外,用RT-PCR方法观察感染旋毛虫小鼠脾脏中IL-4、IL-5的mRNA含量,观察这两种细胞因子的表达情况。结果实验组较对照组总IgE水平增高,在14、21d达到高峰（P〈0.01）,第3周后逐渐下降,特异性IgE在14和21d组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,阳性率达88.9%。在体外培养的条件下,单纯Eos对旋毛虫肌幼虫无杀伤作用,在免疫血清参与下,Eos对幼虫的杀伤作用明显增强,灭活IgE后,Eos的杀伤作用明显减弱,与单纯Eos的情况无差别。感染组小鼠脾脏中IL-4和IL-5mRNA的含量均明显高于对照组。结论血清中IgE抗体参与了旋毛虫急性期的免疫,主要作用为快速排出肠道内的旋毛虫脱囊幼虫,Eos对旋毛虫肌幼虫杀伤的过程需要IgE的参与,且IgE是Eos发挥ADCC效应所依赖的重要免疫球蛋白,感染旋毛虫小鼠的IL-4和IL-5表达量明显升高,故说明IgE是小鼠旋毛虫感染急性期重要的抗体。     

Trichinella spiralis immunomodulation: an interactive multifactorial process

Many epidemiological data support the postulate that infection with helminths might provide some protection against allergic and autoimmune diseases. Hence arises the concept that helminths strongly influence the immune system and enable protective pathways against these hyperimmune-associated disorders. This review discusses how Trichinella spiralis can make the immune system smarter in dealing with hyperimmune-associated disorders. T. spiralis possesses the capacity to direct the immune system towards a mixed Th1/Th2 phenotype with predominance of Th2 response, or it may interfere with dendritic cell maturation, induce the alternatively activated macrophages and elicit the regulatory arm of the immune response via Treg or regulatory B cells.     

旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX的克隆表达及免疫学特性初步分析

目的克隆表达一个新的旋毛虫组织蛋白酶基因CathepsinX,初步探讨其免疫学特性,为研究新的防治方法奠定科学基础。方法从GenBank旋毛虫核酸数据库中筛选出功能未知的CathepsinX基因部分EST序列。使用RACE-PCR方法得到其全长编码基因序列。半定量RT—PCR分析该基因的转录。构建该基因的原核表达载体pET30a-TsCPX,大肠杆菌中IPTG诱导表达,His—tag亲和层析纯化获重组蛋白TsCPX;将纯化的重组蛋白40斗g／只免疫BALB／c小鼠,免疫前1周及每次免疫后2周收集免疫血清,间接ELISA检测血清总IgG、亚类IgG1、IgG2a抗体浓度。结果RACE—PCR克隆出TsCPX全长基因序列,共1227bp;RT．PCR揭示TsCPX在旋毛虫三个发育时期均有380bp扩增条带,条带光密度分析显示最高转录水平出现在新生幼虫期。E．coli原核表达体系中成功克隆表达出重组蛋白TsCPX;重组蛋白免疫小鼠二次后,免疫血清总IgG迅速上升,三次免疫后达到峰值（P〈0．001）;IgG亚类IgGl抗体浓度随着免疫次数的增加迅速上升,亚类IgG2a无明显上升,两者间差异有统计学意义（P〈0．001）。结论成功克隆的TsCPX基因在旋毛虫的三个生长发育时期均有转录表达,TsCPX重组蛋白具有较强免疫原性,能引起宿主（小鼠）Th2型为主的免疫应答．具有作为旋毛虫病免疫预防研究靶分子的潜在价值。