羟基红花黄色素A对常氧/低氧犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响

目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对常氧/低氧两种条件下体外培养的犬胸主动脉内皮细胞增殖的影响.方法 采用内膜消化刮取法获取犬胸主动脉内皮细胞;在常氧(21%)/低氧(10%)两种条件下,分别以噻唑蓝(MTT)法观察HSYA对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响,血管内皮生长因子(VEGF)作为阳性对照.结果 常氧条件下HYSA 1、0.1 mmol/L在72、96、120 h时对VEC有明显促增殖作用;低氧条件下HYSA 1、0.1、0.01mmol/L在24、48 h时对VEC有明显促增殖作用,且具有浓度和时间依赖性.HYSA 1 mmol/L与VEGF 2.6×10-7mol/L在同样条件下对VEC的促增殖作用强度相当.结论 在常氧/低氧两种条件下,HSYA均具有明显促VEC增殖作用,且在低氧条件更为明显.     

加味四物汤对荷骨肉瘤小鼠肿瘤VEGF及受体表达的影响

目的:探讨加味四物汤对对荷骨肉瘤小鼠肿瘤VEGF及其受体表达的影响.方法:建立KHOS成骨肉瘤原位移植模型,通过加味四物汤灌胃干预动物模型,采用RT-PCR方法定量检测移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体KDR和Flt-1的表达.结果:加味四物汤高剂量组有明显抑制肿瘤组织VEGF、Flt-1、KDR表达的作用(P<0.05);中、低剂量组抑制肿瘤组织VEGF、Flt-1、KDR表达的作用不明显(P>0.05);中药高剂量组抑制肿瘤组织VEGF、Flt-1、KDR表达的作用优于中、低剂量组(P<0.05).结论:加味四物汤通过抑制VEGF、KDR、Flt-1的表达控制肿瘤新生血管的生长而达到阻止恶性骨肿瘤体内生长、转移的目的,但与药物浓度相关.     

沙苑子黄酮对肿瘤血管形成的影响

 目的 观察沙苑子黄酮（ FAC ）对肿瘤血管形成的影响,并探讨其作用机制。 方法 采用四甲基偶氮唑盐蓝（ MTT ）法观察正常条件培养基和肿瘤条件培养基下 FAC 对细胞 ECV304 增殖的作用;采用鸡胚绒毛尿囊膜（ CAM ）模型和裸鼠移植瘤组织微血管密度（ MVD ）分析,观察 FAC 对肿瘤新血管生成的影响;采用免疫组织化学方法观察 FAC 对裸鼠肿瘤组织血管生成因子 (VEGF) 及其受体 Flt-1 、 Flk-1/KDR 、 Flt-4 和血管生成抑制因子内皮抑素 (ES) 蛋白表达的影响。 结果 FAC 对经人肝癌 SMMC-7721 细胞上清液处理的血管内皮细胞增殖有较明显的抑制作用,而对正常状态下的血管内皮细胞毒性较低; FAC 明显抑制 CAM 新生血管生成, FAC-a （ 400 mg·L^-1 ）组的血管指数为 67.5% ;裸鼠移植瘤 MVD 和 VEGF 及其受体 Flt-1 和 Flk-1/KDR 的蛋白表达明显降低, ES 的蛋白表达显著增强。 结论 FAC 可抑制肿瘤组织血管形成,其作用机制与下调 VEGF 及其受体的表达和上调 ES 的表达有关。     

羟基红花黄色素A对实验性心肌梗死大鼠的保护作用及机制

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠缺血心肌的保护作用及其作用机制。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型,观察HSYA对大鼠心肌梗死面积(MIS),血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、血栓烷B2(TXB2)和血管紧张素(Ang)的影响。结果与模型组比较,HSYA明显减小急性心肌梗死大鼠MIS,显著提高血清NOS活性,明显增加NO及6-Keto-PGF1α的量,显著降低血清CK-MB、LDH、TXB2及Ang水平。结论HSYA对急性缺血心肌具有保护作用,其机制与HSYA调节NO、6-Keto-PGF1α、TXB2和Ang的水平,从而增加心肌供血供氧,减轻心肌细胞损伤、凋亡有关。     

乌鸡白凤丸对衰老血虚大鼠子宫内膜VEGF及其受体表达的影响

目的:探究乌鸡白凤丸对衰老血虚大鼠子宫内膜VEGF及其受体表达的影响,并从分子生物学水平进一步探讨乌鸡白凤丸治疗肾虚血亏型月经不调的作用机理。方法:采用放血、饥饿加灌服羟基脲的方法制备肾虚血亏大鼠模型,并用乌鸡白凤丸进行干预。病理切片HE染色观察子宫内膜形态学结构变化;放射免疫法测定各组大鼠血清雌二醇、孕酮的表达水平;免疫组化检测子宫内膜VEGF、KDR及Flt-1蛋白的表达。结果:乌鸡白凤丸干预后能有效增加肾虚血亏大鼠子宫内膜的厚度;与空白组比较,模型组血清雌二醇水平明显降低(P0.01)、孕酮水平明显增高,均具有显著统计学意义(P0.01);子宫内膜VEGF蛋白、KDR蛋白、Flt-1蛋白表达减少(P0.01);与模型组比较,乌鸡白凤丸高剂量组雌二醇水平增高,具有统计学意义(P0.05);子宫内膜VEGF蛋白、KDR蛋白、Flt-1蛋白表达明显增加,具有显著统计学意义(P0.01)。与模型组比较,乌鸡白凤丸低剂量组与中剂量组血清雌二醇、孕酮水平有升高的趋势,不具备统计学意义(P0.05);子宫内膜子宫内膜VEGF蛋白、KDR蛋白、Flt-1蛋白表达明显增加,具有显著统计学意义(P0.01)。结论:乌鸡白凤丸发挥作用的可能机制为通过升高血清雌二醇水平、降低孕酮水平来提高VEGF蛋白、KDR蛋白、Flt-1蛋白的表达,从而促进子宫内膜修复,达到调节月经的作用。     

红花组分HSYA对人胃腺癌BGC-823移植瘤裸鼠VEGF蛋白、KDR与缺氧诱导因子表达的影响

目的:研究红花组分羟基红花黄色素A(HSYA)对人胃腺癌皮下移植瘤裸鼠血管内皮生长因子(VEGF)蛋白、含激酶插入区受体(KDR)和缺氧诱导因子(HIF-1α)mRNA与蛋白表达的影响。方法:采用BALB/C nu/nu裸小鼠接种人胃腺癌细胞株BGC-823于右前肢腋部皮下建立裸鼠人癌移植瘤模型,随机分为模型组、对照组、HSYA高、低剂量组(0.056g/L、0.028g/L),观察抑瘤作用,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测瘤组织VEGF与HIF-1α蛋白以及血清VEGF蛋白表达;蛋白印迹(Western blotting)法测定瘤组织KDR磷酸化蛋白的表达;实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)法检测瘤组织KDR及HIF-1αmRNA表达。结果:HSYA低剂量组抑瘤明显,该组瘤组织及血清VEGF蛋白表达降低,瘤组织KDR磷酸化蛋白表达减弱,与模型组比较差异明显(P0.05,P0.01);HIF-1α蛋白表达较模型组瘤组织明显减少(P0.01)。KDR mRNA表达与模型组相比减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论:一定浓度的HSYA抑制肿瘤生长的可能机制与抑制VEGF、HIF-1α蛋白的表达,减弱KDR蛋白磷酸化及其基因表达,从而抑制内皮细胞活化阻碍肿瘤血管新生以及降低肿瘤缺氧微环境对血管生成的诱导有关。     

黄芪丹参提取物配伍对大鼠骨髓源性EPCs中VEGF,KDR,AngⅠ及eNOS表达的影响

目的:探讨黄芪丹参提取物配伍对骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体KDR(kinase insert domain receptor,KDR),血管生成素Ⅰ(angiopoietinⅠ,AngⅠ)及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitricoxide sythase,e NOS)表达的影响及其可能的作用机制。方法:将离体培养、鉴定后的骨髓源性EPCs,使用黄芪提取物、丹参提取物、黄芪丹参提取物配伍(10,10 mg·L-1,各5 mg·L-1)分别处理,并设置空白组,使用逆转录PCR(RT-PCR)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各处理组EPCs中VEGF,KDR,AngⅠ和e NOS mRNA的表达水平;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EPCs中VEGF,KDR,AngⅠ和e NOS蛋白的表达情况。并使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养液上清中VEGF的含量。结果:PCR结果显示,与空白组比较,丹参提取物、黄芪提取物组及黄芪丹参提取物配伍组的VEGF,KDR,AngⅠ和e NOS mRNA的表达水平均有显著上调(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,与空白组比较,丹参提取物、黄芪提取物组VEGF,KDR,AngⅠ和e NOS蛋白表达均有显著上调(P0.05,P0.01),而黄芪丹参提取物配伍组中的表达量显著高于其他3组(P0.01),尤其是EPCs细胞培养液上清中的VEGF。ELISA结果显示,黄芪丹参配伍组EPCs中VEGF蛋白含量显著高于其他3组(P0.01)。结论:以"益气化瘀通络生脉"为治则的黄芪丹参提取物配伍可显著调控EPCs促血管新生作用,其作用可能与上调VEGF密切相关。     

简述血管内皮细胞生长因子（VEGF）的研究进展

VEGF受体（VEGFR）只存在于血管内皮细胞表面,具有酪氨酸激酶活性。目前已确认的VEGFR有2种,即：胎-肝激酶-1/含激酶插入区受体（flk-1/KDR）及fms样酪氨酸激酶（flt-1）共属于酪氨酸激酶受体[1]。KDR具有强烈的酪氨酸激酶活性,是血管形成的主要信号传递[2],Habeck等人通过研究发现[3],它具有明显的趋化作用和促有丝分裂活性,活化后可引起血管内皮细胞的分裂、增殖和迁移,说明KDR是血管形成的主要调控因子。     

瓜蒌皮注射液对缺血缺氧的内皮祖细胞保护作用

目的探讨瓜蒌皮注射液对缺血缺氧的内皮祖细胞(EPC)的保护作用及机制。方法提取大鼠骨髓单个核细胞,M199培养基添加血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)诱导培养成EPC。将能吸收凝集素和乙酰化低密度脂蛋白的EPC进行低氧无血清培养以成缺血缺氧损伤模型,同时在培养液中添加系列质量浓度的瓜蒌皮注射液培养上述细胞,MTT法检测其存活率,ELISA法检测细胞VEGF分泌量。结果和对照组相比,缺血缺氧组EPC存活率、VEGF分泌水平均显著低下;瓜蒌皮注射液处理可明显升高细胞存活率、VEGF表达量,作用效果与剂量密切相关。结论瓜蒌皮注射液可能通过促进VEGF的表达,从而提高EPC缺血缺氧条件下的生存能力。     

当归补血汤调控缺氧血管内皮细胞增殖及其分子机制研究

目的: 通过当归补血汤对缺氧血管内皮细胞增殖及分子表达的研究,探讨当归补血汤调控缺氧血管内皮细胞增殖的可能分子机制。 方法: 应用连二亚硫酸钠溶液建立缺氧血管内皮细胞(EA.hy926)模型(以下简称缺氧模型),不同剂量当归补血汤干预24 h后,CCK-8法观察缺氧血管内皮细胞的增殖;ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR1,VEGFR2,sVEGFR1,sVEGFR2)的表达。 结果: 与正常血管内皮细胞比较,缺氧后血管内皮细胞增殖能力显著下降(P<0.01);当归补血汤能够促进正常血管内皮细胞及缺氧血管内皮细胞的增殖,其中高、中剂量组促进缺氧血管内皮细胞增殖的幅度明显大于促正常血管内皮细胞增殖的幅度(P<0.01)。当归补血汤各剂量组均能促进缺氧血管内皮细胞VEGF,VEGFR1,VEGFR2的表达,且与剂量呈正相关,抑制缺氧血管内皮细胞sVEGFR1,sVEGFR2的表达。 结论: 当归补血汤能够促进缺氧血管内皮细胞的增殖,其机制可能与其调节VEGF与VEGFR和sVEGFR两种受体的结合有关。     

羟基红花黄色素A缓解大鼠心肌细胞凋亡作用的研究

目的 以整体和离体实验观察羟基红花黄色素A(HSYA)缓解心肌细胞凋亡的作用.方法 以异丙肾上腺素(ISO)造成人鼠急性心肌缺血,以TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡,免疫组化法和RT-PCR法观察心肌组织中bax、bcl-2基因表达的变化;用缺精缺氧/再复氧模型诱导原代培养心肌细胞凋亡,以PI 流式细胞法观察凋亡情况,以Rhodamine 123荧光法考察线粒体膜电位的变化.结果 60、120、240 mg/kg HSYA ip给药可以减轻心肌缺血大鼠的线粒体肿胀、核凝集及固缩,降低心肌细胞凋亡率(P＜0.01),下调心肌组织Bax蛋白(P＜0.05)及bax mRNA的表达(P＜0.01).0.64、1.3、2.5 mmol/L HSYA可减少缺氧/再复氧造成的细胞凋亡(P＜0.05),且可缓解该损伤造成的心肌线粒体膜电位下降(P＜0.05).结论 抑制心肌细胞凋亡是HSYA缓解心肌缺血的重要机制.     

冰片及石菖蒲促进羟基红花黄色素A透过血脑屏障的实验研究

目的考察芳香开窍药冰片及石菖蒲对羟基红花黄色素A(HSYA)血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法 ig给予大鼠20.00 mg/kg HSYA混悬液,分别配伍冰片及石菖蒲水提液,给药后采集大鼠血浆及脑组织。HPLC测定大鼠血浆及脑组织内HSYA浓度,以各组HSYA的AUC脑/AUC血为评价指标,进行冰片及石菖蒲对BBB通透性影响的评价。结果 HSYA、HYSA+冰片、HYSA+石菖蒲组HSYA在大鼠血浆及脑匀浆中的AUC0～8 h分别为(77 228.76±2 873.19)、(81 949.04±2 283.11)、(28 479.63±2 431.71)ng.mL-1.min及(55 925.0±2 434.28)、(82 768.53±3 277.00)、(70 914.29±2 900.71)ng.mL-1.min,各组AUC脑/AUC血分别为0.72、1.01、2.49。结论 HSYA配伍冰片及石菖蒲后,AUC脑/AUC血均显著升高(P<0.05)。冰片及石菖蒲均对BBB有开启作用,且石菖蒲可影响HSYA在大鼠体内的分布。     

加味补阳还五汤对氧化型低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:观察加味补阳还五汤(BHT)含药血清和含药血浆对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤血管内皮细胞(VEC)的保护作用及机制,同时比较加味BHT含药血清和含药血浆对VEC生成影响的差异。方法:制备加味BHT含药血清和含药血浆,体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),采用ox-LDL造模,通过噻唑蓝(MTT)法观察细胞活力和Hoechst33258染色法、流式细胞术观察细胞凋亡率,并通过测定一氧化氮(NO),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力,探讨加味BHT含药血清和含药血浆对ox-LDL损伤VEC的保护作用及含药血清和含药血浆之间的差异。结果:与空白组比较,模型组细胞死亡和凋亡率明显升高(P0.05),和模型组比较,加味BHT含药血清组和含药血浆组能显著降低ox-LDL造成的HUVECs的凋亡和死亡率(P0.05),细胞活性显著增强(P0.05),NO含量,SOD和GPx活力显著提高,MDA含量均显著下降(P0.05)。此外,含药血清组与含药血浆组比较细胞凋亡和死亡率更低(P0.05),含药血浆组与含药血清组比较产生NO含量明显增加(P0.05)。结论:加味BHT含药血清和含药血浆对于oxLDL损伤的VEC具有一定保护作用,其机制可能与改善内皮细胞功能、抗氧化损伤、抑制细胞凋亡有关。在一定条件下对于加味BHT含药血浆保护VEC的作用强于含药血清。     

红花定量压制饮片压制前后的煎煮效率比较

目的：优选生发凝胶剂的制备工艺并建立其质量控制方法。方法：以凝胶剂的物理性状和外观变化为指标,通过单因素试验考察基质种类及用量、保湿剂用量;建立生发凝胶剂的TLC和含量测定等质控方法,采用HPLC测定补骨脂素、异补骨脂素含量,流动相乙腈-水（35：65）,检测波长246 nm。结果：最优处方为卡波姆-941用量0.2%,甘油用量4%;补骨脂素和异补骨脂素线性范围分别为0.109 6~0.328 8,0.103 2~0.309 6 μg,平均加样回收率分别为99.87%,100.94%,暂定本品每克含补骨脂素、异补骨脂素总质量≥0.4 mg。结论：该凝胶制备工艺简单可行,重复性较好;建立的质量控制方法简便可靠,可推广于生发凝胶的工业生产。     

Protective effect of hydroxysafflor yellow A on MSCs against senescence induced by D-galactose

Objective To examine the protective effects of hydroxysafflor yellow A (HSYA) against the senescence of mesenchymal stem cells (MSCs) induced by D-galactose (D-gal) in vitro, and investigate the potential mechanism involved. Methods Grouping experiment, Normal control (NC) group: conventional culture with complete medium; Senescence group: MSCs were cultured for 48 h with complete medium containing 10 g/L D-gal; HSYA group: on the basis of senescence induction, HSYA with the suitable concentration was used to protect MSCs. The key experimental indices associated with oxidative stress, inflammatory response, cell senescence, proliferation and apoptosis were measured through chemical colorimetry, β-galactosidase staining, EdU incorporation and flow cytometry, respectively. The relative quantity (RQ) of proteins related closely to cell proliferation, apoptosis, and NF-κB signaling were measured by Western blotting. Results As compared with Senescence group, treatment with HSYA (120 mg/L) effectively ameliorated the adverse situation of MSCs. Oxidation stress and inflammation along with D-Gal induction was dramatically alleviated in MSCs; The β-Gal-positive staining indicated that MSC senescence was significantly mitigated; The proliferative capability of MSCs was significantly increased by up-regulating PCNA and inhibiting p16 expression; The anti-apoptotic effect on MSCs was exerted by down-regulating the RQ of cleaved Caspase-3 and Bax; The activity of NF-κB signaling in MSCs was notably suppressed through inhibiting phosphorylation of IKKβ and p65. Conclusion HSYA (120 mg/L) significantly delayed the D-Gal-induced senescence process in MSCs through attenuating inflammatory reaction and oxidative stress, and suppressing the activity of NF-κB signaling.     

羟基红花黄色素A对裸鼠人胃腺癌BGC 823移植瘤血管及VEGF，bFGF mRNA表达的影响

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人癌裸鼠皮下移植瘤血管生长、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA表达的影响.方法:运用BALB/C nu/nu裸小鼠接种人胃腺癌细胞株BGC-823于右前肢腋部皮下建立裸鼠人癌移植瘤模型,随机分为模型组、阳性药对照组、HSYA高、低剂量组,模型组给予生理盐水腹腔注射,HSYA两组分别给予0.056,0.028 g·L~(-1)HSYA溶液腹腔注射,此3组均每只每日注射2次,间隔4～6 h,每次0.2 mL;阳性药对照组给予2 g·L~(-1)环磷酰胺(cytoxan,CTX)每只腹腔注射0.2 mL,每2天1次.20 d后,检测各组肿瘤体积、重量,光镜观察瘤组织病理改变,实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测瘤组织VEGF和bFGF mRNA的表达.结果:HSYA 0.028 g·L~(-1)组移植瘤体积(607.42±252.96)mm~3、质量(0.88±0.14)g,VEGF mRNA表达0.49±0.13,bFGF mRNA表达0.60±0.48均较模型组低(P＜0.05或P＜0.01);给药组较模型组瘤组织血管生成明显减少.结论:一定浓度的HSYA有抑制肿瘤生长的作用,其机制可能与抑制肿瘤血管生成有关.     

丹酚酸B对心肌缺血大鼠缺血心肌血管新生的影响

目的:观察丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对心肌缺血大鼠缺血心肌血管新生的作用。方法:选取SD大鼠60只,结扎大鼠结扎大鼠冠状动脉左降支,建立大鼠心肌缺血模型,随机分为模型组,Sal B 1.6,3.2,6.4 mg.kg-1组,和血管内皮生长因子(VEGF)组(10μg/只),并设立假手术组,每组10只,给药2周后,HE染色法检测心肌梗死面积;试剂盒检测心肌组织中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和VEGF含量;免疫组化法检测大鼠缺血心肌中微血管数(MVC)。结果:Sal B3.2,6.4 mg.kg-1组梗死面积(7.18±3.15)%,(5.74±2.02)%较模型组(14.84±5.40)%明显减小;Sal B能增加心肌组织中NO,NOS,VEGF含量;Sal B 3.2,6.4 mg.kg-1组心肌梗死边缘区MVC(28.6±5.86),(30.20±5.07)条,较模型组(15.60±4.62)条,明显增多。结论:Sal B可促进心肌缺血后大鼠缺血心肌血管新生,其作用机制与VEGF、NO释放增加有关。     

Effects of Puerarin on Experimental Model of Retinal Vein Occlusion in Rats

Objective To establish a model of retinal vein occlusion(RVO)in rats and to study the effect of puerarin on ischemic retinal disease and the corresponding mechanism.Methods RVO was induced in 10 adult male Sprague-Dawley(SD)rats by laser photothrombosis.Retinal blood flow was examined before and after 1 h of the operation,and model rats with the retinal vein blood flow decreasing by 50%compared to the basic value were chosen and then puerarins(20,40,and 80 mg/kg)were given.The levels of vascular endothelial growth factor(VEGF),interleukin-1β(IL-1β),and nitric oxide(NO)were analyzed.In addition,the histopathology of RVO-eyes was performed.Results RVO-eyes displayed the signs of retinal damage and ischemia on Doppler Flowmeter and histopathology.Puerarin(20,40,and 80 mg/kg)increased blood flow by 9.3%(P0.05),33.1%(P0.001),and 41.5%(P0.001),respectively.On the other hand,the histological changes were less severe at different degrees,relieving the symptoms such as edematous and thick neuroretinal layers,lax,edematous,and disorganized optic fibers layers,swollen and confused inner and outer nuclear layer.Besides,dose-dependent decrease of VEGF and IL-1βand increase of NO in vitreous fluid were observed,with respect to the model group.Conclusion A rat model of laser photochemical-induced RVO is established and a decrease in the retinal blood flow and histological damage is detected.The puerarin has therapeutic benefit in the rat model of RVO,through the pathway of neovascularization,anti-inflammation,and increase of NO.