siRNA沉默Bmi-1基因对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默Bmi-1基因表达后,对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭迁移能力的影响.方法:设计并合成针对Bmi-1基因序列特异性的双链小干扰RNA(Bmi-1-siRNA),转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H,用流式细胞仪观察转染效率,荧光实时定量PCR和Westernblot检测Bmi-1基因的mRNA和蛋白表达水平;通过体外Transwell小室基质侵袭和迁移实验,观察Bmi-1表达沉默后对人肝癌细胞株MHCC97-H侵袭和迁移能力的影响.结果:将针对Bmi-1基因序列特异性的小干扰RNA(Bmi-1-siRNA)转染高转移性人肝癌细胞株MHCC97-H后,流式细胞仪显示,转染效率可达到91%.与空白组、对照siRNA组相比,实验组Bmi-1-siRNA能有效抑制MHCC97-H细胞中Bmi-1基因的mRNA(F=56.199,P<0.05)和蛋白表达水平.通过Transwell小室基质侵袭和迁移实验,我们分析了不同组细胞的侵袭迁移能力.结果发现,与空白组、对照siRNA组相比,Bmi-1-siRNA转染的MHCC97-H细胞穿透能力明显降低(F=186.66,12.746,P<0....     

RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将Bcl-xL小干扰RNA（siRNA）转染食管癌EC109细胞,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot方法检测食管癌细胞Bcl-xL mRNA和蛋白,采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型检测癌细胞增殖和侵袭力。结果与对照组相比,siRNA转染组细胞Bcl-xL mRNA和蛋白水平明显下调（P均〈0.05）,所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少（P均〈0.05）,并均呈浓度依赖性。结论采用RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达,可抑制食管癌细胞的增殖和侵袭能力。     

siRNA沉默Bmi-1表达对肺腺癌A549细胞侵袭能力的影响

目的观察Bmi-1基因沉默对A549细胞增殖和侵袭影响并初步探讨其机制。方法根据四条针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列,将其瞬时转染到A549细胞中,选择最有效的一条链并构建到逆转录病毒真核表达载体p SUPERretro-Neo中,形成重组载体,然后将其稳定转染至A549细胞中,构建了稳定转染Bmi-1-shRNA的A549细胞。应用MTT实验检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外增殖的影响;Transwell小室观察其对A549侵袭能力的影响;RT-PCR和明胶酶谱法分别观察siRNA对A549细胞MMP-2/MMP-9表达及活性的影响。结果 Bmi-1 siRNA能够抑制A549细胞的增殖能力和侵袭能力,Bmi-1 siRNA能够抑制A549细胞MMP-2/MMP-9的表达和活性。结论 Bmi-1 siRNA对A549细胞侵袭能力的抑制和MMP-2/MMP-9的活性降低有关。     

沉默Bmi-1基因表达对胃癌细胞BGC823衰老和转移的作用

目的:研究靶向Bmi-1 siRNA对胃癌BGC823细胞衰老和转移的作用.方法:设计Bmi-1的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人胃癌BGC823细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测Bmi-1基因mRNA和蛋白表达的变化.SA-β-Gal染色检测和细胞体外侵袭实验检测分析对细胞衰老和侵袭、转移的影响.结果:靶向Bmi-1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析,插入片段正确:RT-PCR和Western blot检测显示,Bmi-1基因的表达水平明显降低,其中以1 104-1 122 nt(GGAGGAGGTGAATGATAAA)为靶序列的siRNA沉默作用最佳,Bmi-1mRNA和蛋白表达几乎完全抑制.转染siRNA组的衰老细胞百分率显著升高、穿透Matrigel的细胞数显著下降,与未转染和转染空载体组比较差异有显著性(P<0.01).结论:抑制胃癌BGC823细胞Bmi-1基因表达,可以增加细胞的衰老和降低细胞侵袭、转移的能力.     

PDECGF特异性RNA抑制片段对膀胱癌细胞作用的研究

目的研究siRNA（small interfering RNA）对膀胱癌t24细胞株PDECGF基因表达的抑制作用及对癌细胞增殖和侵袭能力抑制的作用。方法体外合成特异针对人PDECGF基因的siRNA；荧光标记法标记PDECGFsiRNA；转入t24细胞株；流式细胞术检测siRNA的转染效率；western blot检测siRNA对PDECGF表达的抑制作用；MTT法检测siRNA对细胞牛长增殖抑制作用；Boyden小室法检测siRNA对细胞侵袭能力的影响。结果siRNA转染组PDECGF表达水平明显下降。siRNA转染组细胞牛艮增殖抑制率随作用时间而增高。siRNA转染组细胞侵袭能力明显低于对照组和空载体组。结论sIRNA能特异有效下调PDECGF基因的表达，能有效抑制膀胱癌细胞增殖及侵袭能力。     

siRNA沉默Annexin-1基因对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响

目的观察RNA干扰技术沉默Annexin-1基因表达对膀胱癌T24细胞增殖能力的影响。方法针对Annexin-1基因不同部位设计并化学合成3对不同的靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染膀胱癌T24细胞,转染后应用半定量RT-PCR和Western印迹法检测Annexin-1mRNA和蛋白的改变,透射电镜观察细胞凋亡情况,用MTT法检测沉默Annexin-1表达对膀胱癌T24细胞增殖的影响。结果转染siRNA后膀胱癌T24细胞Annexin-1mRNA和蛋白水平显著下降(P0.05),转染siRNA沉默Annexin-1基因表达后膀胱癌T24细胞出现典型凋亡细胞,增殖能力显著下降(P0.05)。结论 RNA干扰Annexin-1基因后其mRNA和蛋白水平显著下降,诱导了膀胱癌T24细胞凋亡,并且抑制细胞的增殖。     

沉默畸胎瘤衍生生长因子-1基因对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响

目的 探讨TDGF-1基因沉默对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响.方法 设计并合成3个(S1、S2、S3)靶向TDGF-1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),筛选出沉默效果最好的siRNA.以该siRNA的不同浓度(3.125、6.25、12.5 nmol/L)转染PANC1细胞,并设对照组和脂质体组.采用实时定量PCR和Western blotting检测TDGF-1 mRNA和蛋白表达,以软琼脂集落培养试验和Boyden小室检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,并将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察癌细胞的体内侵袭.结果 siRNA转染组细胞的TDGF-1 mRNA和蛋白表达水平呈浓度和时间依赖性下降,且较脂质体组明显降低(P值均＜0.01).对照组细胞集落形成数和穿膜细胞数分别为19.8±2.2和49.8±2.6;siRNA组呈浓度依赖性明显减少,12.5 nmol/L转染组分别为5.6±1.2和8.1±1.1.对照组、脂质体组和12.5 nmol/L转染组接种4周后裸鼠种植瘤体积分别为(2.228±0.026)cm3、(2.186±0.028)cm3和(0.728±0.023)cm3.对照组和脂质体组种植瘤侵犯周围肌层组织,转染细胞组未见侵犯.结论 采用RNA干扰技术沉默PANC 1细胞的TDGF-1基因表达可抑制癌细胞的侵袭力.     

siRNA靶向沉默PcG蛋白EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响

背景：PcG蛋白是一组转录抑制因子,其核心成分EZH2在胃癌组织中表达增高,并与胃癌的进展相关。目的：应用RNA干扰（RNAi）技术研究EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响,从细胞水平探讨EZH2参与胃癌发生的机制。方法：使用EZH2小干扰RNA（siRNA）转染MKN45细胞,以实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测EZH2mRNA和蛋白表达,CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期．MatrigelTM侵袭实验检测细胞侵袭力。结果：EZH2siRNA能有效抑制MKN45细胞的EZH2mRNA和蛋白表达。与阴性对照siRNA组相比,EZH2siRNA组MKN45细胞增殖抑制率为14．7％（P＜0．05）,侵袭能力显著降低[穿过Transwell小室膜细胞数：（38．5±3．4）个／HPF对（92．7±9．7）个／HPF,P＜0．05）,细胞周期阻滞于G0／G1和G2／M期。结论：EZH2siRNA可抑制人胃癌细胞的增殖和侵袭力,证实EZH2通过促进细胞增殖和侵袭在胃癌发生中发挥作用。     

沉默GRP78基因对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭力的抑制作用

目的 探讨RNA干涉技术(RNAi)沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭力的影响,阐明GRP78基因沉默对SKOV3细胞侵袭力抑制作用的生物学机制.方法 设计并构建pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒,脂质体介导转染至SKOV3细胞.RT-PCR和Western印迹法检测GRP78基因表达;RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mRNA表达;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭力;Transwell小室迁移实验检测细胞迁移率.结果 RT-PCR及Western印迹检测转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞GRP78基因表达抑制;RT-PCR结果显示与对照组相比转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达降低;Transwell小室侵袭实验和迁移实验结果显示转染GRP78 siRNA重组质粒SKOV3细胞穿透细胞数(P＜0.05)和迁移率均明显降低(P＜0.05).结论 ①转染GRP78 siRNA重组质粒有效抑制SKOV3细胞GRP78基因表达;②抑制GRP78基因表达能降低SKOV3细胞的侵袭力和迁移力,有望为抑制卵巢癌转移基因治疗提供新的靶点.     

表皮型脂肪酸结合蛋白-5基因沉默对人卵巢癌细胞A2780增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的探讨通过siRNA干扰技术沉默表皮脂肪酸结合蛋白(FABP)-5基因表达对人卵巢癌A2780细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法以人卵巢癌A2780细胞为研究对象,根据FABP-5 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,实施瞬时转染卵巢癌A2780细胞。将人卵巢癌A2780细胞分为FABP-5 siRNA组,阴性对照组、空白对照组。用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和Western印迹法分别从mRNA水平和蛋白水平检测FABP-5基因的表达。细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定细胞体外增殖能力;流式细胞技术(FCM)检测各组细胞周期和凋亡的变化情况,划痕愈合实验、细胞侵袭实验评价沉默FABP-5基因对人卵巢癌A2780细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western印迹法显示,FABP-5 siRNA组较阴性对照组和空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白相对表达水平均显著降低。FABP-5 siRNA组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;与阴性对照组和空白对照组相比,FABP-5 siRNA组细胞的凋亡率明显升高(P0.01),迁移、侵袭力显著下降(P0.05)。结论特异性干扰FABP-5基因表达可抑制人卵巢癌A2780细胞的迁移和侵袭能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,FABP-5的siRNA序列可能成为治疗宫颈癌的有效靶点。     

siRNA沉默Bmi-1表达对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制作用

目的:探讨运用RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胰腺癌细胞恶性行为的影响,为胰腺癌基因治疗提供新的靶点和思路.方法:构建反义Bmi-1真核表达载体转染人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光显微镜下观察、MTT、Western blot、流式细胞术检测转染效果及细胞周期、凋亡变化.结果:成功构建反义Bmi-1真核表达载体并且...     

RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响

目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞NucleosteminmRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-timePCR和Westernblot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降;NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P<0.05;1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P<0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P>0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.     

胰腺癌细胞TM4SF1的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 检测5株人胰腺癌细胞株中TM4SF1 mRNA的表达,探讨TM4SF1基因对癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 采用实时PCR方法检测人胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、HPAC、PANC1、AsPC-1的TM4SF1 mRNA表达,并与人正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）的TM4SF1mRNA表达进行比较.应用RNA干扰方法将靶向TM4SF1的siRNA及阴性对照siRNA瞬时转染MPanc96、MiaPaCa-2细胞.采用MTS法检测转染细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力.结果 胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、PANC1、AsPC-1、HPAC的TM4SF1 mRNA相对表达量分别为1.205±0.073、1.096±0.260、1.382±0.075、1.374±0.363、0.744±0.096,均显著高于HPDE的0.020±0.003（F =22.26,P＜0.01）.与转染阴性对照siRNA的细胞比较,TM4SF1基因表达沉默的MPanc96、MiaPaCa-2细胞的增殖无显著变化,但细胞的迁移力分别降低（62.5±7.6）％、（72.8±4.0）％,侵袭能力分别下降（69.5±5.7）％、（78.6±6.3）％.结论 TM4SF1在人胰腺癌细胞中高表达,并增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力.     

Survivin靶向RNA干扰对人结肠癌HCT116细胞生长影响的研究

目的设计和构建survivin特异性的siRNA真核表达载体,观察survivin siRNA重组体对人大肠癌HCT116细胞株生长的影响,为大肠癌的基因治疗提供理论依据。方法针对survivin mRNA序列设计合成编码siRNA的DNA模板,构建2个survivin RNAi真核表达载体;实验分为survivin siRNA重组质粒转染组、空载体组和HCT116组,转染大肠癌细胞HCT116细胞,采用RT-PCR法检测survivin mRNA的表达,观察重组质粒对转染的HCT116细胞survivin基因表达的影响;用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测量细胞生长情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果测序表明survivin干扰序列完全正确,RT-PCR结果显示2条survivin siRNA真核表达质粒均能有效抑制survivin mRNA的转录表达。MTT比色法检测显示,与阴性对照组及未转染组细胞比较,干扰组细胞增殖率明显下降（P〈0．05）。流式细胞术检测的转染重组质粒组细胞凋亡率高于脂质体对照组和空质粒对照组（P〈0．05）。结论成功构建了survivin干扰真核表达载体,siRNA重组体能有效抑制人大肠癌细胞survivin mRNA表达,并抑制结肠癌细胞生长,促进其凋亡。     

siRNA沉默NHE1基因对MHCC97-H肝癌细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA干扰沉默NHE1基因后对人肝癌细胞株MHCC97-H细胞侵袭迁移的影响,方法:应用NHE1基因小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.转染成功后采用RT-PCR和Western blot分别从基因和蛋白水平...