中药泰山盘石饮对局部移植物抗宿主反应(GVHR)的影响及其机制的初步研究

先前的工作表明,泰山盘石饮灌入小鼠,可显著延长同种游离心脏组织移植物的存活时间。鉴于移植物抗宿主反应(GVHR)是移植物中免疫活性细胞对组织型不相配的、免疫缺陷的宿主进行攻击而引起的病理过程,不仅其机制与移植排斥反应相似,而且是某些同种移植如骨髓移植、胸腺移植及肝脏移植时的重要并发症,我们就泰山盘石饮对异种局部GVHR的影响进行了实验观察,并对其机制进行了初步研究,结果表明,泰山盘石饮有抑制异种局部GVHR的作用,经泰山盘石饮处理的小鼠脾脏中组胺受体_2阳性细胞明显增加。     

RDP1258对淋巴细胞功能及移植物存活的影响

目的 探讨RDP1258对T细胞功能及大鼠移植心脏存活时间的影响。方法 人工合成RDP1258，用MTT法分别进行淋巴细胞增殖试验、单向混合淋巴细胞反应(Mixed lymphocyte reaction，MLR)和淋巴细胞毒(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)试验。建立大鼠心脏移植模型，观察不同组大鼠移植心脏存活时间。结果 RDP1258显著抑制ConA刺激的淋巴细胞增殖，抑制单向MLR反应体系中应答细胞对刺激细胞的反应能力和CTL的细胞毒功能。RDP1258组大鼠移植心脏存活时间长于对照组。结论 RDP1258体外能抑制由丝裂原或同种异体抗原引起的淋巴细胞增殖反应和CTL的杀伤功能，体内明显延长大鼠移植心脏的存活时间。     

重组免疫毒素对同种小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用

目的 观察重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1对小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用.方法 采用同种异体小鼠皮肤移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响、移植后外周血T细胞亚群变化以及移植物的组织病理学观察.结果 hIL-2-Luffin P1组小鼠皮肤存活时间延长(13.86±2.11)d,与空白对照组比较相差显著(P<0.01),且与hIL-2-Luffin P1的剂量呈正相关;而Luffin P1处理组与对照组相比无明显差异.同时,移植后外周血T细胞亚群活化程度减轻,病理显示hIL-2-Luffin P1处理组移植皮肤淋巴细胞浸润较轻.结论 hIL-2-Luffin P1能够抑制T细胞的异常活化,从而抑制免疫排斥反应,达到延长移植物存活时间的目的 .     

DC单抗调节供、受体大鼠免疫功能和抑制排斥反应的研究

目的：研究体内应用大鼠DE单抗WZD3对大鼠免疫状态的影响，在此基础上应用DE单抗同时处理供、受体，进行同种异体心脏移植，研究单抗诱导供、受体间双向移植耐受可能机理，为联合应用单抗和耐受性Dc诱导移植免疫耐受奠定基础。方法：用不同剂量WZD3处理SD(受体)和Wistar(供体)大鼠，两周后观察单向、双向混合淋巴细胞培养结果和经ConA或LPS刺激脾细胞产生的细胞因子水平变化。选择合适WZD3剂量同时对供、受体大鼠体内注射，进行异体异位心肺联合移植，术后观察移植器官存活时间和器官排斥终点时受体脾细胞分泌细胞因子水平。结果：高剂量(8mg/kg体重)WZD3对大鼠单向、双向MLC以及脾细胞产生IL-2和TNF有明显抑制作用，且能明显延长移植心脏存活时间；中剂量(4mg/kg体重)和低剂量(2mg/kg体重)WZD3对上述指标有轻度或无抑制作用。结论：采用高剂量WZD3能下调大鼠免疫功能；同时处理供、受体大鼠，能诱导供、受体间双向免疫耐受，明显延长移植器官存活时间，其机制可能与清除DE、下调Th1细胞功能有关。     

人AAT基因在糖尿病细胞治疗中对β细胞的免疫保护作用

目的:建立稳定表达人α1-抗胰蛋白酶(hAAT)基因的NIT-hAAT细胞系,观察hAAT基因在糖尿病细胞治疗中对β细胞的免疫保护作用。方法:构建hAAT的真核表达载体,转染并筛选得到NIT-hAAT细胞系。将该细胞系移植到糖尿病模型小鼠左肾包膜下,通过检测不同移植组小鼠的血糖、血清胰岛素水平和生存期,观察不同移植细胞对糖尿病的治疗效果;RFPCR检测移植部位的hAAT表达情况以及对小鼠左肾进行石蜡切片和苏木素-伊红(HE)染色,鉴定hAAT对NIT-1细胞的免疫保护作用。结果:糖尿病小鼠接受NIT-hAAT细胞移植后,hAAT可有效延长NIT-1细胞的存活时间,使血糖明显降低并维持至正常血糖水平,小鼠的生存率也明显提高(P<0.05);移植部位的病理HE染色结果证实hAAT可明显减轻小鼠对移植物炎症反应。但RT-PCR结果显示hAAT在体内的表达量随时间增长而出现逐渐下降,NIT-hAAT细胞最终因免疫排斥反应而失去功能。结论:NIT-hAAT细胞具有明显抑制体内免疫排斥反应,可有效延长β细胞存活时间,对胰岛细胞移植具有免疫保护作用。     

氨茶碱对移植物抗宿主反应及同种心脏移植物存活时间的影响

本文报告氨茶碱对移植物抗宿主反应及同种异位心脏移植物存活时间的影响。结果表明,人类T细胞在体外对氨茶碱共同温育后可分为茶碱抵抗(TR)和茶碱敏感(TS)两种,它们可分别增强和抑制总T细胞所引起的移植物抗宿主反应(GVHR)。给小鼠胃饲氨茶碱,其脾脏淋巴细胞所引起的GVHR也较胃饲生理盐水者为弱,提示氨茶碱在体内也可诱导具有免疫抑制作用的细胞。在此基础上,观察了氨茶碱对小鼠同种异位心脏移植物存活时间的影响,结果表明它可显著延长小鼠移植物的存活时间。     

抗激活小鼠T细胞抗原单抗抑制同种移植物排斥反应的作用及其机理

为阐明活化 T 细胞主动免疫同系小鼠诱导同种移植物存活期延长的机理,利用本室制备的抗活化小鼠 T 细胞抗原单克隆抗体(2H_3)观察它对同种免疫反应的影响;结果表明给接受同种移植物的受者转输2H_3能显著地延长同种心肌移植物的存活时间;在 ConA 诱导的淋巴细胞增生反应、混合淋巴细胞反应和诱导同种 T 杀伤性细胞的体外实验中加入2H_3,观察到2H_3对上述反应的明显抑制作用。提示活化 T细胞主动免疫同系小鼠诱导同种移植物存活期延长的机理,可能与免疫动物体内产生了相应的抗体,抑制了同种免疫反应的进行有关。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在同种异体移植免疫耐受中的研究进展

同种异体器官移植已经成为终末器官衰竭患者修复病损的组织和器官,并重建其功能必要的治疗方法。受者往往都需要长期接受免疫抑制剂来维持移植物在其体内的存活。由于免疫抑制剂的非特异性及毒副作用,长期应用该类药物会导致受者免疫力低下而出现易感染、癌症等副作用。因此,解决该问题的关键是诱导受者对供者移植抗原产生特异性地"移植免疫耐受"。大量研究结果显示,CD4+CD25+调节性T细胞能特异性地抑制免疫排斥反应,在调控免疫应答与维持外周免疫耐受中发挥着重要作用。本文对近年来CD4+CD25+调节性T细胞的作用机制及其在同种异体移植免疫耐受方面的研究进行了综述。     

联合阻断CD28/B7和ICOS对同种异体C57BL/6小鼠皮肤移植的影响

目的探讨CD28/B7共刺激通路阻断剂和ICOS/ICOSL共刺激通路阻断剂对同种异体小鼠皮肤移植的影响。方法实验动物随机分为4组,每组6只,供体、受体均为C57BL/6。CTLA4Ig处理组;ICOSIg处理组;CTLA4Ig+ICOSIg处理组;空白对照组。将C57BL/6小鼠背部全层皮肤移植于同种小鼠中段背部。前3组分别以150mg/kg的抗体经腹腔注射,空白对照组只注射同等量的生理盐水,注射时间为皮肤移植后0、2、4d,术后观察皮肤存活情况。术后6d分别处死各组受体鼠和供体鼠,取受体脾脏淋巴细胞与供体脾脏淋巴细胞作混合淋巴细胞反应(MLR),用MTT法测定细胞活力和细胞增殖反应。术后7d切取皮肤移植物作组织学分析。结果与对照组相比,各阻断剂单独治疗组能明显延长移植物的存活时间(<0.05),各阻断剂治疗组淋巴细胞对供体淋巴细胞产生特异性低反应(<0.05),能有效抑制淋巴细胞对同种抗原的免疫应答。组织学检查发现,各抗体治疗组移植皮肤结构基本正常。结论 CTLA4Ig、ICOSIg可以抑制免疫应答,诱导移植皮肤发生免疫耐受,延长存活时间。     

四肽化合物CMS030抗移植排斥作用的实验研究

目的：CMS030是从脾脏提取的四肽化合物,本研究观察CMS030对小鼠皮肤和心肌移植排斥反应的影响。方法：通过体外T淋巴细胞转化实验和混合淋巴细胞反应（MLR）实验,观察CMS030在体外的免疫抑制作用,建立小鼠皮肤移植和心肌移植模型,观察CMS030对小鼠同种移植物存活时间的影响,观察CMS030对移植受体小鼠T淋巴细胞转化和脾细胞分泌IL-2的影响。结果：CMS030在体外能够抑制T淋巴细胞转化和MLR,在体内可以明显延长小鼠皮肤移植物和心肌移植物存活时间,抑制皮肤移植受体小鼠T淋巴细胞转化能力和脾细胞分泌IL-2水平。结论：CMS030通过抑制T淋巴细胞分泌IL-2,抑制T淋巴细胞功能,有效拮抗移植排斥反应。     

冬虫夏草提取物的免疫抑制功能

本实验系统地观察了冬虫夏草的三种提取物对小鼠细胞免疫和体液免疫功能的影响。体内,体外实验的结果表明,冬虫夏草的粗品,乙醇提取物和水提取物均能明显抑制小鼠脾细胞对刀豆蛋白A(ConA),细菌脂多糖(LPS)的增殖反应;明显减少小鼠特异的抗体分泌细胞数;减低同种异型抗原诱导的迟发型超敏反应及混合淋巴细胞反应,延长小鼠同种异体移植皮片的存活时间。用流式细胞仪(FACS)对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的分析结果表明:虫草的以上各种提取物,均能增加小鼠脾脏CD8~+亚群的细胞数。提示虫草对小鼠免疫功能的抑制作用可能在于选择地增强抑制细胞亚群而发挥其对免疫应答的负反馈调节作用。     

α-黑素细胞刺激素基因修饰的树突状细胞延长小鼠移植心脏的存活时间

为观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)基因修饰的树突状细胞(DC)抑制同种异型基因小鼠心脏移植排斥反应的效果,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入BALB/c小鼠骨髓来源的未成熟DC,制备了α-MSH基因修饰的DC(α-MSH-DC)。在小鼠心脏移植前7 d,将α-MSH-DC输至受者C57BL/6小鼠体内,通过免疫组化方法观察供者α-MSH-DC在受者脾脏内存在的情况,用混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性。通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化。结果显示,α-MSH-DC在受者脾脏内存在时间延长,能诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,使移植心脏存活天数延长至(19.3±2.35)d,较PBS对照组的(7.0±0.33)d明显延长(P<0.01)。使受者小鼠血清IL-2和IFNγ-水平显著降低(P<0.01),明显升高IL-4、IL-10水平(P<0.01)。表明移植前输入供者α-MSH基因修饰的DC能延长同种异型基因心脏移植的存活时间。     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究——Ⅱ.抗独特型T细胞免疫反应

同种特异T细胞疫苗(TCV)免疫诱导出同种免疫反应低下,同种移植物存活时间显著延长,推测其作用机制可能是同种特异TCV免疫诱导机体抗同种特异TCV(独特型)T细胞的上调.实验证实了“抗TCV-T细胞”的存在.以同种特异TCV免疫动物可诱导出对TCV特异的细胞增殖反应.TCV免疫小鼠淋巴细胞能特异杀伤TCV细胞.将TCV免疫小鼠脾细胞作为调节细胞,观察到它能显著地抑制同种MLR,表明它是一“抑制性T细胞”.这些结果提示,同种特异TCV免疫可诱导机体免疫网络中独特型-抗独特型的上调,产生了同种反应T细胞的独特型T细胞,从而保护同种移植物免受同种反应性T细胞的攻击使同种移植物存活时间显著延长.     

一氧化氮在免疫调节中的作用与组织移植

一氧化氮（ＮＯ）是一个多功能调节因子，具有调节免疫反应、松弛血管平滑机、抑制血小板聚集和作为神经递质等作用。本文综述了ＮＯ在免疫调节中的作用，特别是在组织移植过程中对移植物存活的影响，这对于预防免疫排斥反应的发生和延长移植物的存活时间具有重要的意义     

未成熟树突细胞免疫诱导同种移植物存活延长

目的利用未成熟DC免疫受鼠诱导同种移植物存活延长,分析未成熟DC在诱导同种免疫低应答反应中的可能机理。方法以小鼠耳后心肌移植为模型,观察未成熟DC和成熟DC免疫受鼠同种移植心肌的存活情况。同时检测未成熟DC免疫的小鼠脾细胞对同种细胞的CTL活性。结果未成熟DC免疫受鼠的同种移植物存活时间明显延长,平均存活期从9.1±0.73d延长到25.4±4.27d,联合使用阿霉素效果更好,平均存活期为30.5±3.98d;C57BL/6未成熟DC免疫的Balb/c小鼠脾细胞对C57BL/6靶细胞的杀伤(3H-TdR释放率为16.32％)明显低于经成熟DC免疫的受鼠的脾细胞(3H-TdR释放率为39.58％)。结论未成熟DC免疫可诱导同种移植心肌的存活明显延长,可能与受鼠体内的效应T细胞对移植物细胞杀伤低下有关。     

诱导血红素加氧酶-1表达在器官移植中的保护作用

器官移植术中及术后移植器官的缺血再灌注损伤(ischemia-repeffusion injury,IRI)和免疫排斥反应一直困扰着外科医生.血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)是血红素代谢过程中的限速酶,广泛分布于哺乳动物的各种组织细胞中.血红素在它的催化下降解代谢为一氧化碳(CO)、胆绿素和游离铁离子.HO-1在氧化应激、炎性反应、低氧和缺血等状态下均能高度表达.HO-1及其催化血红素代谢产物主要通过抗炎性反应、抗氧化反应、调节同种异体反应性T细胞的活性及增殖、抗内皮细胞凋亡、抑制内皮细胞活化等作用机制,对移植器官起到抗IRI和抗免疫排斥作用,从而增加移植器官成活率及延长其存活时间.     

转化生长因子β1基因修饰树突状细胞延长移植心脏存活时间的研究

为探讨移植前输注人转化生长因子 β1 (TGFβ1 )基因修饰供者树突状细胞 (DC )对移植心脏存活时间的影响。采用重组质粒TGFβ1 pcDNA3转染供者F344大鼠DC ,RT PCR和Westernblot检测转染后DC的TGFβ1基因表达。收集转染各组细胞静脉输注Lewis大鼠。 1周后检测TGFβ1 DC在受者大鼠脾和淋巴结的分布。另一部分输注大鼠接受DC来源的F344同种异体心脏移植 ,观察各组转染DC输注后移植心脏存活时间的变化以及相同时间点移植心脏重量的变化 ,比较移植后各时间点移植排斥反应级别以及输注不同DC各组移植心脏出现排斥反应的时间。结果 :TGFβ1 DC输注受者后 ,1周内可在脾和淋巴结内形成微嵌合 ,输注后DC在受者体内的迁移以及不同时间的存活数量不同。同时发现TGFβ1 DC输注大鼠 ,移植心脏存活时间 (33 1 4± 7 88)d比对照组 (6 5 7± 1 76 )d明显延长 ,移植后排斥反应级别明显低于对照组 ,并且该组移植心脏排斥反应出现时间也明显晚于各对照组。因此 ,TGFβ1 DC能有效抑制移植排斥反应 ,延长移植心脏存活时间。     

TLSFJM抑制大鼠心脏移植排斥反应的作用

目的　在同种异体大鼠异位心脏移植模型中 ,探讨TLSFJM对急性移植排斥反应的抑制作用及机制。方法　以F344大鼠作为心脏移植受体 ,以LOU/CN大鼠作为心脏移植供体 ,建立大鼠异位心脏移植模型。受体大鼠分为 3组 ,于移植前后分别施以RPMI16 4 0、CsA或TLSFJM。每天观察移植心脏跳动情况 ,并于停跳当天或之前解剖观察。分别取供体大鼠脾细胞作为刺激细胞 ,取受体大鼠脾细胞作为反应细胞 ,进行单向混合淋巴细胞反应。结果　TLSFJM可明显延长大鼠异位移植心脏的存活时间 :RPMI16 4 0对照组移植心脏的存活期全部为 6d ,TLSFJM治疗组最长均可存活 2 7d ,高剂量 (15mg/kg·d)CsA治疗组存活期超过 2 7d。TLSFJM治疗组大鼠脾细胞增殖的cpm值均低于对照组。结论　TLSFJM具有良好的抗急性移植排斥反应作用。TLSFJM对同种异体抗原诱导T细胞增殖的明显抑制 ,可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一     

T细胞疫苗诱导同种移植物存活期延长

以同种细胞体内免疫小鼠，取免疫脾细胞经体外低剂量ＣｏｎＡ培养扩增后，用戊二醛来活法制备了Ｔ细胞疫苗，然后以此免疫同系正常小鼠，观察小鼠同种心肌移植物存活时间的改变，Ｔ细胞疫苗免疫组移植存活时间显著延长，与正常对照组比较Ｐ〈０．００１；但发现在Ｔ细胞疫苗免疫中，与用于免疫制备Ｔ细胞凋苗同一来源的移植物存活期又比无关来源的同种移植物存活期显著延长，而后者与抗原非特异活化Ｔ细胞免疫组比较无显著差异，结果     

蛇毒因子消耗补体对大鼠同种心脏移植急性排斥反应的影响

目的探讨蛇毒因子(CVF)消耗补体对大鼠同种心脏移植急性排斥反应的影响。方法建立Wistar至SD大鼠同种异位心脏移植模型,实验组经静脉注射CVF以消耗受体血清中补体,观察移植心存活时间,并从实验组和对照组中分别抽取5只大鼠于术后1、3、5、6、7 d定时活杀,对比观察移植心急性排斥反应程度,血清补体活性以及CD4+、CD8+T细胞浸润程度。结果使用CVF的实验组,其移植心存活时间显著延长,平均达(32.39±23.82)d,部分移植心甚至达到长期存活,而对照组为(6.60±0.65)d(P<0.01),病理检查及免疫组化证实实验组急性排斥反应程度、组织内C3沉积情况和CD4+、CD8+T细胞浸润程度均较同期对照组明显减轻。结论CVF清除补体可抑制大鼠同种心脏移植急性排斥反应,显著延长移植心存活时间。