促进脂肪移植的最佳SVFs浓度的实验研究

目的 探讨应用自人脂肪组织新鲜分离的不同浓度的血管基质层细胞( stromal vasvular fraction cells,SVFs)辅助脂肪移植,从而提高移植物的存活率的方法.方法 脂肪组织来自临床行吸脂术者,提取SVFs,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与浓度为①5×105个/ml(A组);②1 × 106个/ml(B组);③2×106个/ml(C组)的SVFs混合,另设对照组为完全培养基+单纯脂肪颗粒(D组),随机注射移植于6只裸鼠背部皮下.术后3个月观察移植物情况:①湿重.②切片HE 染色计数血管密度.③方网测试系统“点计数”法检测存活脂肪细胞计数以及纤维坏死组织计数.结果 ①湿重:A组(60.000±6.325) mg,B组(81.670±7.528) mg,C组(68.330±7.528) mg,D 组(48.330±7.528) mg,B组脂肪存活率均高于A、C、D组(P<0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②血管密度:A、B、C组血管密度均高于D组,且B组明显高于其他3组(P＜0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).③点计数:B组存活脂肪细胞计数均高于A、C、D组(P＜0.05),纤维组织计数均低于D组(P ＜0.05),A、C2组之间比较差异均无统计学意义(P＞　0.05).结论 来源于人自体SVFs复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中1×106个/ml数量级的SVFs移植脂肪的存活率最高,更适合用于脂肪移植,具有广阔的临床应用前景.     

血管基质片段细胞携血管内皮生长因子对移植颗粒脂肪血管化的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)复合血管基质片段细胞( stromal vascular fraction cells,SVFs)细胞疗法对移植颗粒脂肪组织血管化的影响,寻找一种安全、有效、简单的细胞辅助脂肪移植术式.方法 取患者植皮术后废弃的皮下脂肪,提取SVFs.用DiI染色观察SVFs染色标记情况,锥虫蓝染色观察SVFs活性.将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与0.2 ml下列细胞混合:①复合有VEGF的SVFs(A组);②SVFs(B组);③DMEM完全培养基(C组).按照随机化原则将3组脂肪组织混合物分别注射移植于裸鼠背部皮下,每只裸鼠背上注射3个点(共12只).观察移植物外形、成活情况、湿重、直径,HE染色及CD31染色镜下观察并计数毛细血管密度.使用SPSS 16.0进行方差分析检验.结果 新鲜提取的SVFs可被DiI标记染色,加用VEGF仍能保持较好的细胞活性,移植术后2个月3组移植脂肪的湿重为:A组(191.90 ±9.81)mg、B组( 177.01±10.50)mg、C组(92.05±8.30)mg,A组＞B组＞C组(P＜0.01).移植物直径为:A组(0.49±0.24)cm、B组(0.40±0.26) cm、C组(0.32±0.28) cm,A组＞B组＞C组(P＜0.01).CD31染色镜下,每高倍镜视野微血管密度:A组(14.58±2.06)个、B组(11.55±2.18)个、C组(7.87±1.55)个,与B组和C组比较,A组较少见纤维结缔组织增生及坏死凋亡细胞.结论 结合VEGF因子的SVFs辅助脂肪移植是一种临床可操作性强、简便可行的较理想的细胞疗法,比单纯SVFs更能有效地促进移植脂肪血管化.     

基质血管成分与体外扩增的脂肪来源干细胞促进移植脂肪成活的对比研究

目的:比较血管基质成分(st romal vascul ar fract i on,SVF)与体外扩增的脂肪来源干细胞(adi pose-deri ved st emcel l s,ASCs)对移植脂肪成活的促进作用。方法:用手术方法切取家兔腹股沟脂肪,进行ASCs体外分离培养;取第3代ASCs分别进行成脂、成骨诱导实验,CD29和CD31流式鉴定;制备SVF,进行CD29和CD31流式鉴定;脂肪移植裸鼠实验分为3组:SVF、ASCs、和空白对照组(DMEM/F12),每组4只裸鼠,沿背部脊柱两侧对称部位4个移植位点,每组共16个注射移植位点,每点0.3ml脂肪颗粒(adi pose granul e,AG)+0.2ml细胞成分;术后4m时取材称重、固定行HE染色观察移植脂肪组织结构,行CD31免疫组化染色观察新生血管及其密度。结果:家兔ASCs体外分离培养成功,为贴壁生长,第3代细胞形态均呈长梭形。成脂诱导实验油红O染色显示形成脂滴,成骨诱导实验茜素红染色显示形成钙化结节。流式鉴定显示SVF:CD29:17.0%,CD31:1.3%;ASCs:CD29:96.2%,CD31:3.8%。SVF、ASCs和空白对照组各组移植脂肪成活量分别为0.2096±0.0024g,0.1798±0.0033g,0.1350±0.0020g,两两比较差异均有统计学意义,P<0.05。HE染色显示SVF组移植脂肪成活较好,组织结构完整,脂滴大小均一,可见脂肪组织中间有丰富的血管存在;ASCs组移植脂肪成活尚可,组织结构尚完整,脂滴大小一般均一,可见脂肪组织中有结缔组织纤维间隔和新生血管形成;空白对照组结缔组织纤维间隔明显增多,脂滴大小不一,有少量较大空泡形成。各组移植脂肪新生血管密度分别32.6±2.1条/mm2,29.3±1.6条/mm2,23.3±1.9条/mm2,两两比较均有统计学意义,P<0.05。结论:新鲜的干细胞成分SVF比体外扩增的ASCs能更好的促进移植脂肪成活。     

SVF细胞影响移植脂肪LPL表达的实验研究

目的 探讨脂肪移植后脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)在SVF(Stromal vascular fraction)辅助移植脂肪组织中的表达模式。方法 本实验以新鲜分离的自体SVF细胞辅助移植的脂肪组织为实验组,以脂肪组织与等量生理盐水的混合物为对照组,随机在裸鼠背部两侧注射建立动物模型,对两组移植物进行脂周蛋白免疫组化染色分析、LPL免疫组化染色分析和LPL蛋白含量测定。结果 TPL蛋白含量测定及LPL免疫组化染色分析显示,随着移植时间的延长,实验组和对照组LPL表达逐渐下降,在第2周、第3周、第4周时,实验组LPL表达明显高于对照组。脂周蛋白免疫组化染色分析显示,两组脂肪移植后的存活细胞均逐渐减少,但第2周、第3周、第4周实验组存活细胞数高于对照组。结论 SVF促进脂肪组织表达LPL,表达差异在移植后的第2周开始出现,这可能与SVF提高脂肪组织存活率和ASCs(Adipose-derived stromal cells)成脂分化有关。     

人高活性血管基质层细胞快速分离及荧光标记的实验研究

目的探讨一种人高活性血管基质层细胞(stromal vascular fraction cells,SVFs)快速分离及荧光标记的有效方法,为SVFs用于临床奠定理论基础。方法取植皮手术患者自愿捐赠的腹部皮下脂肪组织,分别用0.065%、0.125%、0.185%3种浓度的Ⅰ型胶原酶消化,提取SVFs。收集细胞悬液进行细胞计数,锥虫蓝染色计算细胞成活率。用1’双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羧化青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-2-tetramethy-lindocyanine perchlorate,DiI)荧光标记0.125%浓度组SVFs,倒置荧光显微镜下观察标记情况;将DiI标记的SVFs接种培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测DiI标记前后细胞增殖能力。结果 0.065%、0.125%及0.185%浓度组SVFs细胞总数分别为(138.68±11.64)×104、(183.80±10.16)×104、(293.07±8.31)×104个,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);细胞成活率分别为91%±2%、90%±2%、81%±2%,0.065%浓度组和0.125%浓度组均显著高于0.185%浓度组(P<0.01),0.065%浓度组和0.125%浓度组比较差异无统计学意义(P=0.881)。倒置荧光显微镜观察示,0.125%浓度组细胞均可被DiI荧光标记,标记后的细胞膜完整,细胞质丰富,细胞形态正常,细胞核未染荧光;DiI标记的SVFs细胞悬液接种培养后,细胞能顺利贴壁及传代。MTT法检测示DiI标记前后SVFs细胞生长曲线相似,生长趋势吻合。结论 0.125%浓度的Ⅰ型胶原酶可有效消化脂肪中的胶原组织,获取大量SVFs,同时对细胞损伤较小,是理想的工作浓度;DiI可有效标记SVFs。     

脂肪干细胞复合脂肪颗粒移植的实验研究

目的 探索脂肪来源干细胞(ADSCs)与脂肪颗粒复合移植对植入脂肪成活率的影响.方法 将1ml通过吸脂术获得的纯化脂肪颗粒分别与1ml含有下列细胞浓度的PBS混合:①原代ADSCs 1×106/ml(A组);②原代ADSCs 2×106/ml(B组);③二代ADSCs 2×106/ml(D组);④二代ADSCs 2×107/ml(E组);对照组为单纯的脂肪颗粒和1ml PBS混合移植(C组).随机注射移植于40只裸鼠背部皮下.移植12周后,取出移植物,进行如下测量:①大体观察;②重量和体积测定;③HE染色,观察细胞形态和小血管形成情况;④计算机图像分析测定血管密度;⑤统计学比较各实验组与对照组移植物体积、重量以及血管密度的差异.结果 ①湿重与体积:A、B、D、E组与C组之间差异有统计学意义(P ＜0.01);A组与B、D、E组之间差异有统计学意义(P ＜0.01);B、D、E组之间差异无统计学意义(P ＞0.05);②血管密度:A、B、D、E组与C组间差异有统计学意义(P ＜0.01);A、B、D、E各组间差异无统计学意义 (P ＞0.05).结论 原代和二代不同浓度的ADSCs与脂肪颗粒复合移植均可提高脂肪移植物成活率,相同浓度的原代与二代的ADSCs在促进脂肪颗粒成活上无显著差异,在一定范围内,随ADSCs浓度的增加,脂肪颗粒成活率也会相应提高;但是超过了一定范围,脂肪颗粒成活率不会随ADSCs浓度的增加而无限提高.     

血管内皮祖细胞促进游离移植脂肪颗粒组织存活的实验

目的探讨血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）移植促进游离移植的脂肪颗粒组织的血管新生，提高移植脂肪颗粒组织存活率。方法体外分离、培养人脐血中EPCs，然后与来自人体的脂肪颗粒组织混合移植于裸鼠背部。结果脐血中分离培养的EPCs表达血管内皮细胞生长因子受体（KDR）及细胞表面标记CD34、CD133，EPCs与脂肪颗粒组织混合移植到裸鼠3个月后，EPCs整合到缺血部位新生血管中，与对照组的脂肪颗粒组织存活率分别为（89．3±6．8）％、（42．2±2．5）％（P〈0．05），而且实验组与对照组脂肪颗粒组织周边区毛细血管密度差异有统计学意义（P〈0．05）。术后3个月2组脂肪颗粒组织周边区的EPCs密度分别为（95．2±10．5）个／mm^2、0个／mm^2（P％O．05）。结论体外培养的脐血EPCs移植体内可促进游离移植的脂肪颗粒组织的血管新生，提高存活率。     

Exendin-4促进兔自体游离脂肪移植保留率的初步实验研究

目的 探讨Exendin-4对兔自体游离脂肪移植保留率的影响。方法 自2020年9月至2022年3月,哈尔滨医科大学附属第二医院整形美容科将兔随机均分为3组即对照组（生理盐水组）、实验组A(10 nmol/L Exendin-4)和实验组B(20 nmol/L Exendin-4),建立兔背部自体脂肪移植模型。分别在术后2、4、12周对移植物进行取材,观察移植物的大体保留情况,通过天平及排水法测定移植物的质量及体积。并对移植物行HE染色观察组织纤维化、炎症浸润、细胞完整性等情况;CD31免疫组织化学染色,观察移植物的血管生成情况。结果 实验组A与实验组B的脂肪移植物的质量和体积明显高于对照组（P<0.05）。在不同时间点,与对照组相比,实验组A与实验组B脂肪移植物具有较少的纤维结缔组织、炎症细胞的浸润及空泡出现情况均较少（P<0.05）。随着实验时间的不断延长,各组移植物的血管密度均有所增加。在各时间点实验组A与实验组B均较对照组具有更好的血管生成情况（P<0.05）。与实验组A比较,实验组B具有更好的移植物体积保留率以及更好的脂肪细胞完整性,血管的生成情况也更佳。结...     

脂肪基质血管细胞群的分离：一项针对细胞群4种商用细胞分离系统的直接对比

背景与目的在脂肪移植物中加入基质血管细胞群（stromalvascularfraction，SVF）细胞是一项用于改善脂肪移植可靠性的新技术。市场上有各种各样的用于分离SVF细胞的系统。因缺乏在标准环境下操作系统的性能数据，而缺少客观的性能评估。因此，对4种商用SVF分离系统的临床门诊手术环境下的操作表现进行前瞻性、盲性对照研究。方法对4种不同的系统进行比较：①PNC’SMultiStation；②CHABiotechCha—Station；③CytoriCelution800／CRSSystem；④Medi—Khan’sLipokitwithMax—Stem。从5例志愿者供体获取相同的脂肪抽吸物样本，用于评估系统的处理时间、活细胞产量、成分、残余物酶属性及生产费用。结果平均处理时间的范围为88—115min。可获取活性有核细胞量最高的为Celution系统（2．41×10^5／g），其次为MultiStation（1．07×10^5／g）。Lipokit和Cha—Station生产出较少的有核细胞，分别为0．35×10^5／g和0．05×10^5／g。Celution系统同样可以生产更多的内皮细胞，CD34^＋CD31-细胞和脂肪来源干细胞（集落生成单位——成纤维细胞）。观察残余物酶属性水平，MultiStation、Cha—Station和Lipokit分别是Celution的5．1倍、13．0倍和57．0倍。结论紧缩所有系统均可生成大量可测得的SVF，但在数量、特性、获取活细胞的安全性方面存在明显差异。须行并列的临床研究，以确定此类差异的关联。     

脂肪来源干细胞促进颗粒脂肪游离移植后再血管化的机制

目的对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)促进颗粒脂肪游离移植后再血管化的机制进行综述。方法查阅近年有关ADSCs在游离脂肪移植和血管形成中的基础研究文献并进行综述。结果血管形成在时间和空间是一个序惯发生的过程,受到多种因素调控。ADSCs能分泌多种促血管生成因子,并且具有多向分化的潜能。结论 ADSCs作用于血管生成过程的每个部分,具有明确的促血管生成作用,但具体机制仍需要进一步研究。     

自体基质血管成分改善脂肪组织移植效果的实验研究

目的：分析自体脂肪基质血管成分（stromal vascular fraction cells,SVF）对脂肪颗粒（adipose granule,AG）移植的作用。方法：从6只健康新西兰家兔背部肩胛区获取脂肪组织,实验组将自体SVF与自体AG复合,植入家兔耳部皮下,对照为单纯脂肪移植。在术后1、3、6个月,用B超和游标卡尺测量移植脂肪体积;术后6个月取材常规组织学观察。结果：术后1、3、6个月对照组脂肪组织存活率分别为：（64.35±8.36）%、（58.22±2.88）%、（50.61±9.47）%;实验组脂肪组织存活率分别为：（77.42±5.1）%、（67.95±6.09）%、（72.75±4.37）%。两组比较均存在显著性差异（P〈0.05）。术后6个月组织学观察两组呈正常脂肪组织形态,未见明显差异。结论：自体SVF复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,为临床脂肪移植提供实验依据。     

脂肪组织来源干细胞提高游离脂肪移植存活率的研究

目的 探讨脂肪组织来源干细胞移植在体内促进游离移植脂肪组织的再血管化,提高移植脂肪组织存活率的可行性.方法 自人体吸脂术中脂质部分分离、培养AScs,行成脂、骨和软骨分化.将ASCs以DiI标记后与人体吸脂术获得的脂肪组织混合移植于18只裸鼠背部,裸鼠背部随机注入3组移植物:ASCs组(A组)、胰岛素组(B组)及培养基对照组(C组).术后6个月观察移植物情况,通过组织观察、HE染色和免疫组化进行分析.结果 抽脂术脂质部分能获取大量的ASCs,能分化成脂肪、成骨和软骨细胞.术后6个月3组移植脂肪的湿重分别为A组(165.97±5.51)mg,B组(93.42±5.12)mg,C组(67.64±5.09)lIIg.A组移植脂肪的存活率高于B、C组(P=0.000).纤维化程度的测定,"网格点计数"3组移植物的点个数分别为A组(152.2±9.8)个/10HF,B组(743.9±20.4)个/10HF,C组(892.2±16.5)个/10HF.A组移植脂肪的纤维化及坏死程度低于B、C组(P=0.000).免疫组化证实:ASCs散在分布于部分脂肪细胞及小叶间隔中,ASCs在体内能够部分转化为血管内皮细胞.结论 脂肪组织来源干细胞移植在体内可促进游离移植脂肪组织的再血管化,提高移植脂肪组织的存活率并改善了移植物的质地.AsCs辅助移植可能是一种较为理想的细胞疗法.     

The effect of adipose derived stromal vascular fraction on stasis zone in an experimental burn model

Background

Stasis zone is the surrounding area of the coagulation zone which is an important part determining the extent of the necrosis in burn patients. In our study we aim to salvage the stasis zone by injecting adipose derived stromal vascular fraction (ADSVF).

The effect of adipose stromal vascular fraction on transverse rectus abdominis musculocutaneous flap: an experimental study

Background: Transverse rectus abdominis musculocutaneous (TRAM) flap is one of the options in reconstruction after breast cancer surgery for breast reconstruction. Tissue necrosis often occurs in the third and fourth perfusion zones of the flap. A study was planned to find out the effects of adipose stromal vascular fraction (SVF) cells on viability of TRAM flap and the experimental model was designed to be applicable in clinical practice. Methods: Right inferior epigastric artery pedicled, 5?×?2.5?cm sized TRAM flap was used as a flap model in 30 rats in three groups (group 1: sham; group 2: phosphate-buffered saline (PBS); group 3: SVF cell injected). The viability of the flaps were assessed on the postoperative 7th day with photographs and software for the calculations. Results: The mean viable flap percentage to total flap area was recorded as 51.8%?±?11.19, 49.5%?±?10.30, 82.3%?±?9.56, in group 1, group 2, and group 3, respectively (p?<?0.05). The mean capillary density was noted as 5.15?±?0.56, 4.37?±?0.58, and 12.40?±?1.17 in groups 1, 2, and 3, respectively (p?<?0.05). The fibrosis gradient indicated no difference between the groups (p?>?0.05). The in-vivo differentiation of SVF cells to endothelial cells was noted. The blood VEGF levels showed a marked increase in the experimental group (p?<?0.05). Conclusion: The adipose SVF cells were found out to improve the TRAM flap viability and decrease necrosis, especially in zone 3 and 4.     

The effect of stromal vascular fraction in an experimental frostbite injury model

BackgroundDespite current treatment modalities, frostbite remains an injury with a poor prognosis which may cause functional morbidities. Several experimental and clinical studies have demonstrated that stromal vascular fraction is an autologous mixture, which can improve wound healing and vasculogenesis. The aim of this study was to show the beneficial effects of stromal vascular fraction on experimental frostbite healing.Material and methodsStromal vascular fraction (SVF) was harvested from 5 rats after excision of the inguinal fat pads. Another 20 rats were separated into 2 groups of 10 as the SVF group and the control group. A frostbite injury was created on each rat using a cryoprobe frozen with liquid nitrogen (?196 °C). SVF was applied to the SVF group and phosphate-buffered saline to the control group. All injections were performed subcutaneously within the frostbite injury area. Biopsies were performed on days 5 and 14 for histopathological and immunochemical evaluations. The tissue perfusion rates of both groups were assessed on day 14 using indocyanine green angiography (SPY system).ResultsThe increase in mean tissue perfusion was 373.3% ( ± 32.1) in the SVF group and 123.8% ( ± 16.3) in the control group (p < 0.001). The macroscopic wound reduction rates of the SVF and control groups were 25.5% ( ± 19.1) and 18.0% ( ± 5.9), respectively on day 5%, and 78.2% ( ± 9.2) and 57.3% ( ± 16.7) on day 14 (p = 0.007; p = 0.003). Acute inflammation and the fibrosis gradient were significantly decreased in the SVF group compared to the control group (p = 0.004, p = 0.054 respectively on day 14). Granulation tissue amount, re-epithelialization score and neovascularization were significantly increased in the SVF group (p = 0.006, p = 0.010 and p = 0.021, respectively on day 14).ConclusionsThe study results demonstrated that SVF increases frostbite wound healing by increasing tissue perfusion rate, neovascularization and re-epithelialization, and modulating acute inflammation and fibrosis.