促进脂肪移植的最佳SVFs浓度的实验研究

目的 探讨应用自人脂肪组织新鲜分离的不同浓度的血管基质层细胞( stromal vasvular fraction cells,SVFs)辅助脂肪移植,从而提高移植物的存活率的方法.方法 脂肪组织来自临床行吸脂术者,提取SVFs,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与浓度为①5×105个/ml(A组);②1 × 106个/ml(B组);③2×106个/ml(C组)的SVFs混合,另设对照组为完全培养基+单纯脂肪颗粒(D组),随机注射移植于6只裸鼠背部皮下.术后3个月观察移植物情况:①湿重.②切片HE 染色计数血管密度.③方网测试系统“点计数”法检测存活脂肪细胞计数以及纤维坏死组织计数.结果 ①湿重:A组(60.000±6.325) mg,B组(81.670±7.528) mg,C组(68.330±7.528) mg,D 组(48.330±7.528) mg,B组脂肪存活率均高于A、C、D组(P<0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②血管密度:A、B、C组血管密度均高于D组,且B组明显高于其他3组(P＜0.05),A、C2组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).③点计数:B组存活脂肪细胞计数均高于A、C、D组(P＜0.05),纤维组织计数均低于D组(P ＜0.05),A、C2组之间比较差异均无统计学意义(P＞　0.05).结论 来源于人自体SVFs复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的成活率,其中1×106个/ml数量级的SVFs移植脂肪的存活率最高,更适合用于脂肪移植,具有广阔的临床应用前景.     

血管基质片段细胞携血管内皮生长因子对移植颗粒脂肪血管化的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)复合血管基质片段细胞( stromal vascular fraction cells,SVFs)细胞疗法对移植颗粒脂肪组织血管化的影响,寻找一种安全、有效、简单的细胞辅助脂肪移植术式.方法 取患者植皮术后废弃的皮下脂肪,提取SVFs.用DiI染色观察SVFs染色标记情况,锥虫蓝染色观察SVFs活性.将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与0.2 ml下列细胞混合:①复合有VEGF的SVFs(A组);②SVFs(B组);③DMEM完全培养基(C组).按照随机化原则将3组脂肪组织混合物分别注射移植于裸鼠背部皮下,每只裸鼠背上注射3个点(共12只).观察移植物外形、成活情况、湿重、直径,HE染色及CD31染色镜下观察并计数毛细血管密度.使用SPSS 16.0进行方差分析检验.结果 新鲜提取的SVFs可被DiI标记染色,加用VEGF仍能保持较好的细胞活性,移植术后2个月3组移植脂肪的湿重为:A组(191.90 ±9.81)mg、B组( 177.01±10.50)mg、C组(92.05±8.30)mg,A组＞B组＞C组(P＜0.01).移植物直径为:A组(0.49±0.24)cm、B组(0.40±0.26) cm、C组(0.32±0.28) cm,A组＞B组＞C组(P＜0.01).CD31染色镜下,每高倍镜视野微血管密度:A组(14.58±2.06)个、B组(11.55±2.18)个、C组(7.87±1.55)个,与B组和C组比较,A组较少见纤维结缔组织增生及坏死凋亡细胞.结论 结合VEGF因子的SVFs辅助脂肪移植是一种临床可操作性强、简便可行的较理想的细胞疗法,比单纯SVFs更能有效地促进移植脂肪血管化.     

脂肪干细胞复合脂肪颗粒移植的实验研究

目的 探索脂肪来源干细胞(ADSCs)与脂肪颗粒复合移植对植入脂肪成活率的影响.方法 将1ml通过吸脂术获得的纯化脂肪颗粒分别与1ml含有下列细胞浓度的PBS混合:①原代ADSCs 1×106/ml(A组);②原代ADSCs 2×106/ml(B组);③二代ADSCs 2×106/ml(D组);④二代ADSCs 2×107/ml(E组);对照组为单纯的脂肪颗粒和1ml PBS混合移植(C组).随机注射移植于40只裸鼠背部皮下.移植12周后,取出移植物,进行如下测量:①大体观察;②重量和体积测定;③HE染色,观察细胞形态和小血管形成情况;④计算机图像分析测定血管密度;⑤统计学比较各实验组与对照组移植物体积、重量以及血管密度的差异.结果 ①湿重与体积:A、B、D、E组与C组之间差异有统计学意义(P ＜0.01);A组与B、D、E组之间差异有统计学意义(P ＜0.01);B、D、E组之间差异无统计学意义(P ＞0.05);②血管密度:A、B、D、E组与C组间差异有统计学意义(P ＜0.01);A、B、D、E各组间差异无统计学意义 (P ＞0.05).结论 原代和二代不同浓度的ADSCs与脂肪颗粒复合移植均可提高脂肪移植物成活率,相同浓度的原代与二代的ADSCs在促进脂肪颗粒成活上无显著差异,在一定范围内,随ADSCs浓度的增加,脂肪颗粒成活率也会相应提高;但是超过了一定范围,脂肪颗粒成活率不会随ADSCs浓度的增加而无限提高.     

脂肪组织来源干细胞提高游离脂肪移植存活率的研究

目的 探讨脂肪组织来源干细胞移植在体内促进游离移植脂肪组织的再血管化,提高移植脂肪组织存活率的可行性.方法 自人体吸脂术中脂质部分分离、培养AScs,行成脂、骨和软骨分化.将ASCs以DiI标记后与人体吸脂术获得的脂肪组织混合移植于18只裸鼠背部,裸鼠背部随机注入3组移植物:ASCs组(A组)、胰岛素组(B组)及培养基对照组(C组).术后6个月观察移植物情况,通过组织观察、HE染色和免疫组化进行分析.结果 抽脂术脂质部分能获取大量的ASCs,能分化成脂肪、成骨和软骨细胞.术后6个月3组移植脂肪的湿重分别为A组(165.97±5.51)mg,B组(93.42±5.12)mg,C组(67.64±5.09)lIIg.A组移植脂肪的存活率高于B、C组(P=0.000).纤维化程度的测定,"网格点计数"3组移植物的点个数分别为A组(152.2±9.8)个/10HF,B组(743.9±20.4)个/10HF,C组(892.2±16.5)个/10HF.A组移植脂肪的纤维化及坏死程度低于B、C组(P=0.000).免疫组化证实:ASCs散在分布于部分脂肪细胞及小叶间隔中,ASCs在体内能够部分转化为血管内皮细胞.结论 脂肪组织来源干细胞移植在体内可促进游离移植脂肪组织的再血管化,提高移植脂肪组织的存活率并改善了移植物的质地.AsCs辅助移植可能是一种较为理想的细胞疗法.     

ADSCs与PRP联合脂肪颗粒移植对血运重建的影响

目的 探讨兔脂肪来源干细胞(ADSCs)联合富血小板血浆(PRP)对自体脂肪颗粒植入裸鼠皮下后血运重建的影响.方法 体外分离、培养、鉴定兔ADSCs,MTT法检测PRP、全血浆,对照组在不同时段(24、48、72h)对体外培养ADSCs增殖的影响.制备脂肪颗粒、明胶海绵颗粒.体内实验分为五组A组(脂肪颗粒+ADSCs+PRP+明胶海绵);B组(脂肪颗粒+ADSCs+生理盐水+明胶海绵);C组(脂肪颗粒+PRP+生理盐水+明胶海绵);D组(脂肪颗粒+全血浆+生理盐水+明胶海绵);E组(脂肪颗粒+生理盐水+明胶海绵).将各组移植入裸鼠皮下,分别于第7、14、30、90天取材,制作石蜡切片,免疫组化法检测血管数.结果 与其他各组相比,各时间段内A组血管数均明显增多,B、C组相对较多,D、E组血管数最少.结论 ADSCs与PRP联合可促进移植脂肪颗粒中血管生成.     

脂肪颗粒与生物蛋白胶联合应用预防硬膜外粘连的实验研究

目的:探讨自体脂肪颗粒(FP)与医用生物蛋白胶(FG)联合应用预防椎板切除术后硬膜外粘连的效果。方法:90只SD大鼠随机分为5组。1组为对照组(C组),其它4组分别于L1~L2椎板切除术后在硬膜外腔放置FP(FP组)、自体游离脂肪片(FF组)、FG(FG组)及FP FG(FPFG组)。术后分别于4、8、12周对各组动物进行大体、光镜观察和计算机图像分析。结果:FPFG组硬膜外瘢痕较其它各组显著减少(P<0.05),脂肪坏死面积比率较FP及FF组显著降低(P<0.01),而移植脂肪中再生毛细血管数量较FP及FF组显著增加(P<0.01)。结论:自体脂肪颗粒与医用生物蛋白胶联合应用可防止脂肪颗粒流失,提高脂肪存活率,起到三维的遮挡保护作用,能有效地防止椎板切除术后硬膜及神经根周围的纤维化与粘连。     

鼠脂肪来源干细胞自体皮下移植的研究

目的 观察大鼠自体脂肪来源干细胞皮下移植成活的情况.方法 将60只Vistar大鼠随机分为3组,每组20只.实验组,取自体腹股沟区皮下脂肪组织,用Ⅰ型胶原酶消化法提取脂肪来源干细胞并进行传代培养;用脂质体法对细胞进行eGFP(增强型绿色荧光蛋白)转染标记.实验对照组,细胞转染标记后,利用G418使其细胞灭活.空白对照组,注射生理盐水.分别将其注射移植至大鼠自体耳郭皮下层,在注射后第2、4、6周时进行冰冻切片观察,并定量分析所形成组织量的转归情况.结果 实验组切片可见明显的绿色荧光组织层存留,其体积在各个时间点无统计学意义(P>0.05).结论 将单纯自体脂肪来源千细胞移植于耳郭皮下组织,可以存活,并形成均一稳定的组织结构.     

脂肪移植处理技术研究进展

自体脂肪移植术已有一百多年历史,如何提高移植脂肪存活率,减少并发症,一直是整形外科的研究热点。整形科医生们仔细研究了术中的每一个步骤,如：供区的选择、脂肪的获取、纯化、注射的方法等以求提高移植存活率。近十几年来,在移植前处理脂肪的方法上有较多新理论、新技术出现,如：提取及添加基质血管成分与脂肪来源干细胞、制成纳米脂肪与基质血管成分胶等。脂肪移植前进行纯化和加工是有必要且有益的,本文针对脂肪移植的处理技术以及相应处理对移植脂肪的影响进行综述。     

脂肪衍生物辅助Coleman脂肪移植的研究现状

从自体脂肪移植技术开展至今,经历了从块状脂肪到颗粒脂肪,从Coleman脂肪到纳米脂肪（Nanofat）、脂肪胶(Stromalvascularfraction-gel,SVF-gel),从移植技术的不断改良到细胞辅助移植技术的出现,再到对细胞辅助脂肪移植技术的不断探索,虽然在基础研究和临床应用方面已经取得了不少成就和经验,但自体脂肪移植技术仍然处于一个发展和完善的阶段。本文就自体脂肪的衍生物辅助Coleman脂肪移植的研究现状进行综述。     

湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植五年临床回顾总结

目的:回顾总结2008～2013年笔者行湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪注射填充移植术五年的临床经验。方法:549例均采用湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植术,单次注射填充移植完成532例(96.91%),17例(3.09%)脂肪存活率较低(30%～40%)需二次注射填充移植完成。结果:本组仅2例(0.36%)出现轻微并发症,成活率和远期效果明显提高,取得预期临床效果。结论:随访1～5,采用规范的湿性肿胀技术和注射器吸脂法抽吸颗粒脂肪及湿性新鲜原代血管基质细胞和脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植注射填充移植技术效果明显持久,遵循其正确的临床操作原则和技术指南及标准操作流程,能明显提高移植脂肪成活率和良好远期效果,是一种切实、可行、有效的临床方法。     

基质血管成分与体外扩增的脂肪来源干细胞促进移植脂肪成活的对比研究

目的:比较血管基质成分(st romal vascul ar fract i on,SVF)与体外扩增的脂肪来源干细胞(adi pose-deri ved st emcel l s,ASCs)对移植脂肪成活的促进作用。方法:用手术方法切取家兔腹股沟脂肪,进行ASCs体外分离培养;取第3代ASCs分别进行成脂、成骨诱导实验,CD29和CD31流式鉴定;制备SVF,进行CD29和CD31流式鉴定;脂肪移植裸鼠实验分为3组:SVF、ASCs、和空白对照组(DMEM/F12),每组4只裸鼠,沿背部脊柱两侧对称部位4个移植位点,每组共16个注射移植位点,每点0.3ml脂肪颗粒(adi pose granul e,AG)+0.2ml细胞成分;术后4m时取材称重、固定行HE染色观察移植脂肪组织结构,行CD31免疫组化染色观察新生血管及其密度。结果:家兔ASCs体外分离培养成功,为贴壁生长,第3代细胞形态均呈长梭形。成脂诱导实验油红O染色显示形成脂滴,成骨诱导实验茜素红染色显示形成钙化结节。流式鉴定显示SVF:CD29:17.0%,CD31:1.3%;ASCs:CD29:96.2%,CD31:3.8%。SVF、ASCs和空白对照组各组移植脂肪成活量分别为0.2096±0.0024g,0.1798±0.0033g,0.1350±0.0020g,两两比较差异均有统计学意义,P<0.05。HE染色显示SVF组移植脂肪成活较好,组织结构完整,脂滴大小均一,可见脂肪组织中间有丰富的血管存在;ASCs组移植脂肪成活尚可,组织结构尚完整,脂滴大小一般均一,可见脂肪组织中有结缔组织纤维间隔和新生血管形成;空白对照组结缔组织纤维间隔明显增多,脂滴大小不一,有少量较大空泡形成。各组移植脂肪新生血管密度分别32.6±2.1条/mm2,29.3±1.6条/mm2,23.3±1.9条/mm2,两两比较均有统计学意义,P<0.05。结论:新鲜的干细胞成分SVF比体外扩增的ASCs能更好的促进移植脂肪成活。     

Periostin对自体脂肪移植成活率的影响

目的 探索Periostin复合自体脂肪颗粒移植后,对移植脂肪血管化及成活率的影响,以明确Periostin在自体脂肪移植中的作用。方法 体外实验验证低氧条件下Periostin对脂肪干细胞成血管的影响,RT-PCR检测CD133及CD144的基因表达情况;将Periostin复合自体脂肪组织移植到裸鼠体内,观察移植脂肪的成活情况。结果在低氧条件下,Periostin组细胞成血管能力明显优于空白对照组;RT-PCR检测结果显示,Periostin组的CD133和CD144表达量明显高于空白对照组;Periostin复合自体脂肪移植后1、3、6个月,移植脂肪成活率分别为79.50%±3.70%、67.71%±4.08%和64.78%±5.78%,明显高于对照组(51.83%±5.97%、39.45%±10.32%和34.20%±10.61%)。结论 Periostin能够改善脂肪移植早期组织对缺氧的耐受性,促进自体脂肪颗粒移植后的早期血管化,有利于移植脂肪颗粒的存活,可有效改善脂肪移植的成活率。     

人高活性血管基质层细胞快速分离及荧光标记的实验研究

目的探讨一种人高活性血管基质层细胞(stromal vascular fraction cells,SVFs)快速分离及荧光标记的有效方法,为SVFs用于临床奠定理论基础。方法取植皮手术患者自愿捐赠的腹部皮下脂肪组织,分别用0.065%、0.125%、0.185%3种浓度的Ⅰ型胶原酶消化,提取SVFs。收集细胞悬液进行细胞计数,锥虫蓝染色计算细胞成活率。用1’双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羧化青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-2-tetramethy-lindocyanine perchlorate,DiI)荧光标记0.125%浓度组SVFs,倒置荧光显微镜下观察标记情况;将DiI标记的SVFs接种培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测DiI标记前后细胞增殖能力。结果 0.065%、0.125%及0.185%浓度组SVFs细胞总数分别为(138.68±11.64)×104、(183.80±10.16)×104、(293.07±8.31)×104个,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);细胞成活率分别为91%±2%、90%±2%、81%±2%,0.065%浓度组和0.125%浓度组均显著高于0.185%浓度组(P<0.01),0.065%浓度组和0.125%浓度组比较差异无统计学意义(P=0.881)。倒置荧光显微镜观察示,0.125%浓度组细胞均可被DiI荧光标记,标记后的细胞膜完整,细胞质丰富,细胞形态正常,细胞核未染荧光;DiI标记的SVFs细胞悬液接种培养后,细胞能顺利贴壁及传代。MTT法检测示DiI标记前后SVFs细胞生长曲线相似,生长趋势吻合。结论 0.125%浓度的Ⅰ型胶原酶可有效消化脂肪中的胶原组织,获取大量SVFs,同时对细胞损伤较小,是理想的工作浓度;DiI可有效标记SVFs。     

自体富血小板血浆对自体脂肪颗粒组织移植存活率影响的研究

目的探讨混合注射富血小板血浆最佳浓度,并通过临床混合注射自体富血小板血浆及自体移植脂肪组织,观察自体富血小板血浆对移植脂肪颗粒组织存活率的影响。方法提取抽脂术中获取的脂肪颗粒组织中的脂肪来源干细胞,实验分为4组：A组（对照组）加入10％胎牛血清,B组添加5％富血小板血浆,C组添加10％富血小板血浆,D组添加15％富血小板血浆,传代培养,定时获取细胞行MTT实验,测试细胞生长曲线,并观察细胞形态变化。临床实验选取15例患者,抽取腹部脂肪组织颗粒后进行纯化;同时抽取静脉血,采用离心法提取自体富血小板血浆。纯化的脂肪颗粒与自体富血小板血浆按照10：1的质量比进行混合注射移植。术前、术后1周及术后3个月,患者在B超下行皮下组织厚度测定。结果第3代脂肪来源干细胞培养观察显示,C组有较好的细胞增殖性及活力;临床研究皮下组织厚度增加率为（158．4±83．1）％;术后3个月,皮下组织厚度增加率为（106．4±70．7）％。结论10％富血小板血浆混合浓度对细胞增殖较为适宜,且临床应用可以有效提高自体脂肪颗粒组织移植的存活率,移植后远期仍能达到较为满意的效果,可在临床上进一步推广应用。     

SVF细胞影响移植脂肪LPL表达的实验研究

目的 探讨脂肪移植后脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)在SVF(Stromal vascular fraction)辅助移植脂肪组织中的表达模式。方法 本实验以新鲜分离的自体SVF细胞辅助移植的脂肪组织为实验组,以脂肪组织与等量生理盐水的混合物为对照组,随机在裸鼠背部两侧注射建立动物模型,对两组移植物进行脂周蛋白免疫组化染色分析、LPL免疫组化染色分析和LPL蛋白含量测定。结果 TPL蛋白含量测定及LPL免疫组化染色分析显示,随着移植时间的延长,实验组和对照组LPL表达逐渐下降,在第2周、第3周、第4周时,实验组LPL表达明显高于对照组。脂周蛋白免疫组化染色分析显示,两组脂肪移植后的存活细胞均逐渐减少,但第2周、第3周、第4周实验组存活细胞数高于对照组。结论 SVF促进脂肪组织表达LPL,表达差异在移植后的第2周开始出现,这可能与SVF提高脂肪组织存活率和ASCs(Adipose-derived stromal cells)成脂分化有关。     

Therapeutic effect of osteogenically induced adipose derived stem cells on vascular deprivation-induced osteonecrosis of the femoral head in rabbits

Objective: To explore the therapeutic effect of osteogenically induced adipose-derived stem cells (ADSCs) on vascular deprivation-induced osteonecrosis of the femoral head (ONFH) in rabbit model. Methods: Vascular deprivation-induced ONFH was established by intramuscular injection of methylprednisolone, and vascular occlusion of the capital femoral epiphysis by electrocoagulation in adult New Zealand white rabbits. Eight weeks after the establishment of vascular deprivation-induced ONFH, animals were randomly divided into three equal groups. In Group A (control), no therapy was given. In Group B, core decompression was performed by drilling a hole (1.2 mm in diameter) from the outer cortex 2.5 cm distal to the proximal end of the greater trochanter. In Group C, 1 ×107 osteogenically induced ADSCs were resuspended in 0.5 ml PBS, and then injected directly into the femoral head. Femoral head specimens were obtained at postoperative 8 weeks. The bone formation and three-dimensional microstructure of the femoral head was evaluated by micro-computed tomography scans (μ-CT). Immunohistochemical analysis was performed to detect the expression of osteocalcin. Angiogenesis and repair of the femoral head were observed histologically. Results: In trabecular bone at the proximal femur region, the trabecular volume was higher in Group C (130.70 mm3± 4.33 mm3) than that in Groups A (101.07 mm3±7.76 mm3) and B (107.89 mm3±8.68 mm3, P＜0.01). Bone volume was significantly increased in Group C (40.09 mm3±6.35 mm3) than in Groups A (29.65 mm3±4.61 mm3) and B (31.80 mm3± 4.01 mm3, P＜0.01). The trabecular number was higher in Groups C (1.58±0.25) than other two groups (1.15±0.18, 1.16± 0.21, P＜0.01). Bone mineral density showed statistically significant difference between Groups C and A or B (375.38± 23.06) mg HA/ccm, vs (313.73 ±19.30) mg HA/ccm and (316.09± 16.45) mg HA/ccm, P<0.01). Histological examination indicated that there was more new bone formation in Group C than in other groups. Conclusion: Treatment with autologous osteogenically induced ADSCs transplantation results in an enhanced osteogenesis and microstructure of the vascular deprivation-induced osteonecrosis in rabbits.     

脂肪组织来源干细胞与脂肪瘤间充质干细胞特性的比较研究

目的 比较体外培养的脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)与脂肪瘤间充质干细胞(lipoma-derived mesenchymal stem cells,LMSCs)的生物特性,以探讨ASCs移植的安全性.方法 对正常脂肪组织和脂肪瘤组织进行切片染色,分离培养ASCs和LMSCs,观察细胞形态;MTS比色法检测细胞活性并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪测定细胞周期及表面分子表达;QRT-PCR检测高迁移率族蛋白2(HMGA2)表达水平;免疫组织化学染色法鉴定端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达.结果 正常脂肪组织和脂肪瘤组织切片差异明显;ASCs细胞形态一致性好,而LMSCs具有不均质性;MTS活性测定ASCs增殖活性要远低于LMSCs细胞(P=0.000);流式细胞仪检测结果显示ASCs与LMSCs在干细胞标志CD29、CD44、CD105上表达类似,而在肿瘤干细胞标志CD133表达上,ASCs(5.35%)要远低于LMSCs(26.87%);细胞周期显示ASCs的增殖能力低于LMSCs;定量PR-PCR显示ASCs中HMGA2平均aQ值为1,远低于在LMSCs中的表达(1.79),两者差异具有统计学意义(P<0.01);免疫细胞化学结果:hTERT在ASCs和LMSCs中的累计吸光度A值分别为1 379.597±498.617和3 328.108±902.856,面积分别为132 390.27±35 568.945和238 000.53±49 264.289,平均吸光度A值分别为0.009±0.003和0.014±0.003,ASCs中hTERT表达远低于LMSCs.结论 体外培养的ASCs生物学特性与LMSCs存在显著差异,未发现其恶性转、化为肿瘤干细胞的证据.     

脂肪干细胞/Ⅰ型胶原凝胶/聚乳酸聚乙醇酸-β-磷酸三钙骨组织工程复合体的构建及其异位成骨研究

目的 构建基于脂肪干细胞、Ⅰ型胶原凝胶以及聚乳酸聚乙醇酸-β-磷酸三钙支架(PLGA-β-TCP)的骨组织工程复合体并对其异位成骨进行研究.方法 设计构建脂肪干细胞-Ⅰ型胶原凝胶/PLGA-β-TCP复合体(A组),同时设立单纯细胞/PLGA-β-TCP材料复合体(B组)、单纯Ⅰ型胶原凝胶/PLGA-β-TCP复合体(C组)以及单纯PLGA-β-TCP支架材料(D组)作为对照.扫描电镜、相差显微镜观察细胞材料复合情况并对脂肪干细胞增殖以及成骨分化进行分析.体外成骨诱导培养2周后移植于自体股部肌袋,8周后取出,依次行放射学、组织学定性及半定量分析.结果 (1)体外成骨诱导2周,A组细胞增殖率慢于B组(P<0.05,n=4),但其细胞总数远高于后者(P<0.01,n=4).A组碱性磷酸酶(ALPase)活性、细胞外基质矿化程度均显著高于B组(P<0.01,n=4).A组细胞悬浮于Ⅰ型胶原凝胶并均匀分布于材料孔隙中而B组细胞仅见黏附于材料表面.(2)移植8周,X线片示A组高密度钙化影形成,B、C、D组未见有阳性结果.A组材料孔隙中均匀充满新生骨组织,可观察到骨小梁样结构.B组仅在少数孔隙中有类骨组织形成,同时伴有结缔组织长入.A组新生骨面积百分比显著高于B组(P<0.01,n=4).结论 通过应用Ⅰ型胶原凝胶来实现脂肪干细胞与PLGA-β-TCP多孔支架材料的均匀复合,能够有效促进脂肪干细胞在材料孔隙中的成骨分化及均质骨组织形成.     

自体静脉外支架对移植静脉内膜增生影响的实验研究

目的 探讨自体静脉外支架对动脉缺损静脉移植后内膜增生的影响.方法 选用36只5月龄雄性新西兰大白兔,体质量2.8～3.0 kg,随机分为A组、B组和C组(n=12).切取右侧颈外静脉6 cm,等分为3段,远心段均用作移植静脉;B组以中段作为自体外支架,A组以近心段套叠中段做成双层自体外支架.游离左侧颈总动脉,中间切除长0.5 cm一段,建立动脉缺损模型,将移植静脉远近端倒置后吻合于动脉缺损,通血后行移植静脉外径测量.分别于术后2、4周切取移植静脉,行HE染色、Masson染色观察移植静脉管壁组织学变化,增殖性细胞核抗原免疫组化染色观察移植静脉平滑肌细胞增殖情况.结果 通血后移植静脉直径A组(1.6±0.3)mm,B组(2.2±0.4)mm,C组(2.6±0.6)mm(P<0.05).术后4周移植静脉内膜增生程度和内膜细胞增殖指数分别为:A组1.01±0.07和6.84±1.98,B组1.32 4±0.08和11.01±2.61,C组1.55±0.03和14.96±4.14,均为A组相似文献