栀子苷对甲型H1N1流感病毒的抑制作用

为探讨栀子苷对甲型H1N1病毒的抑制效应,进行了相关体内外实验研究。体外实验中采用MTT法判定栀子苷对MDCK细胞的毒性作用。以帕拉米韦为阳性对照药,根据MTT比色值,观察栀子苷对甲型H1N1流感病毒感染的MDCK细胞的细胞病变效应(cytopathic effects,CPE),计算不同给药方式(预防给药、直接灭活及治疗给药)及不同药物剂量干预下,栀子苷对甲型H1N1流感病毒的抑制效率;体内实验以甲型H1N1流感病毒感染ICR小鼠,建立甲型H1N1流感病毒小鼠肺炎模型,比较栀子苷不同剂量干预下,小鼠肺指数、肺组织病理学检查及小鼠存活率。实验结果显示,栀子苷的细胞毒性小,其TD₅₀大于1 040 μmol/L;栀子苷在预防、直接灭活及治疗给药方式下,对甲型H1N1流感病毒感染的MDCK细胞抗病毒EC₅₀分别为91.90、96.25和87.68 μmol/L,对CPE有明显抑制作用;栀子苷可显著降低甲型H1N1流感病毒感染小鼠的肺指数、减轻肺组织炎症损伤、降低小鼠死亡率、延长生存时间。实验结果表明,栀子苷在体外能有效抑制甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的CPE,在体内能有效保护甲型H1N1流感病毒对小鼠肺部的攻击作用,可能为流感病毒的防治提供一个新的选择。     

连花清瘟颗粒抗呼吸道合胞病毒感染BALB/c小鼠的药效作用研究

【目的】观察连花清瘟颗粒体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的药效作用。【方法】采用BALB/c小鼠RSV感染模型,通过观察小鼠体质量变化、肺病毒滴度、肺内炎症因子m RNA表达及肺组织病理变化评价药物的体内抗病毒药效。【结果】连花清瘟颗粒高剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内病毒滴度(P0.05)。连花清瘟高、低剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内炎症因子白细胞介素IL-6,IL-1βm RNA的表达量(P0.01);肺组织病理检查结果显示:连花清瘟颗粒高、低各剂量组均可以缓解病毒所致肺组织病理性炎症。【结论】连花清瘟颗粒可有效抑制RSV感染小鼠肺内病毒滴度,对小鼠病毒性肺炎具有一定的改善作用。     

疏风宣肺解毒方抗病毒的实验研究

目的通过现代实验学方法对疏风宣肺解毒方体内外抗流感病毒的实验观察,探讨疏风宣肺解毒方抗流感病毒的实验依据。方法接种流感病毒FM1株于MDCK细胞（狗肾细胞）,观察疏风宣肺解毒方体外抗流感病毒的作用;小鼠鼻腔内接种含流感病毒的鸡胚尿囊液,观察疏风宣肺解毒方对病毒感染小鼠死亡率、存活时间、肺指数和肺病变程度的影响。结果疏风宣肺解毒方中、高剂量组对感染流感病毒MDCK细胞有一定的保护作用;疏风宣肺解毒方中、高剂量组与流感模型组比较,在降低病毒感染小鼠死亡率、延长平均存活天数方面差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,并能明显改善病毒感染小鼠的肺指数和肺病变程度（P〈0.05或P〈0.01）。结论疏风宣肺解毒方具有良好的抗病毒作用。     

连花清瘟胶囊对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

目的 观察连花清瘟胶囊对流感病毒感染小鼠T淋巴细胞亚群和小鼠肺组织γ-IFN的影响.方法 ICR小鼠滴鼻建立感染模型.用流式细胞法测定小鼠血T淋巴细胞亚群的变化,采用双抗体夹心ABCELISA法检测肺组织γ-IFN.结果 ①连花清瘟胶囊大剂量对小鼠感染流感病毒FM1后血中CD4+和CD4+/CD8+明显下降有一定的抑制作用,与模型组比较有显著差异(P＜0.05).②连花清温胶囊高、中、低3个剂量均能明显升高小鼠肺匀浆中的γ-IFN含量,与模型组比较差异显著(P＜0.05,0.01).结论 ①连花清瘟胶囊对流感病毒感染引起的细胞免疫功能降低有一定的抑制作用.②连花清瘟胶囊能提高流感病毒感染小鼠肺中γ-IFN的水平.      

连花清瘟胶囊对流感病毒感染小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的:观察连花清瘟胶囊对流感病毒感染小鼠T淋巴细胞亚群的影响.方法:ICR小鼠滴鼻建立感染模型,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、连花清瘟胶囊大剂量组和小剂量组.用流式细胞法测定小鼠血T淋巴细胞亚群CD4 、CD8 及CD4 /CD88 的变化.结果:小鼠感染流感病毒FMl后血中的CD4 、CD4 /CD8 明显下降,而连花清瘟胶囊高剂量对此有一定的抑制作用,与模型组比较有显著差异(P＜0.05).结论:连花清瘟胶囊对流感病毒感染引起的细胞免疫功能降低有一定的抑制作用.     

银翘柴桂汤抗甲型流感病毒作用的实验研究

目的 观察甲型流感病毒FM1感染小鼠体内流感病毒复制量的不同,研究中药复方银翘柴桂汤体内抗甲型流感病毒的作用.方法 NIH小鼠分为正常对照组、病毒模型组、利巴韦林组及银翘柴桂汤组,除空白对照组外,将甲型流感病毒FM1稀释液滴鼻感染各组小鼠,建立流感病毒感染模型.病毒感染前1 d及感染后4 d,银翘柴桂汤组及利巴韦林组分别灌胃银翘柴桂汤和利巴韦林,病毒感染后第5天处死小鼠,解剖,提取肺组织总RNA,实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法测定小鼠肺组织流感病毒复制量.结果 正常对照组无扩增曲线,Ct>30,流感病毒病原体检测阴性;银翘柴桂汤组、利巴韦林组及病毒模型组扩增曲线Ct分别为19.49±1.40、21.02±4.25、15.80±4.18,流感病毒病原体检测阳性.与病毒模型组病毒复制量(128 973.40±18.14)相比,利巴韦林组病毒复制量(33 327.29±19.56)降低,有显著差异性(P<0.05);银翘柴桂汤组病毒复制量(79 104.28±2.52)降低,有显著性差异(P<0.05).结论 建立的流感病毒感染模型可靠,银翘柴桂汤对流感病毒感染小鼠肺内流感病毒增殖具有明显抑制作用,有抗流感病毒作用.     

板蓝根颗粒对甲型流感病毒小鼠的作用

目的测定板蓝根颗粒抗流感病毒的药效作用。方法 A/California/7/2009(CA7)病毒滴鼻感染BALB/c小鼠观察14d,观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的保护作用,计算小鼠存活率、存活天数以及延长生命率。感染的小鼠第5天每组小鼠处死一半,取肺组织,观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺组织的保护作用。结果板蓝根可明显延长甲型H1N1流感病毒感染小鼠的存活天数并提高存活率,病理结果显示板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠的肺组织有一定程度的保护作用,与模型组比较差异显著(P0.05)。结论板蓝根颗粒对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠有较好的保护作用。     

抗感颗粒抗甲型流感病毒的实验观察

目的 观察抗感颗粒在鸡胚和BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用.方法 (1)鸡胚实验:将甲型流感病毒鼠肺适应株FM1接种9日龄鸡胚,再将不同剂量的抗感颗粒注入鸡胚,以血凝效价为指标,观察抗感颗粒对流感病毒的作用,设立流感病毒对照组和利巴韦林片对照组,每组6个鸡胚.(2)小鼠实验:将BALB/c小鼠随机分为病毒感染模型组、正常对照组、利巴韦林片组及抗感颗粒低、中、高剂量组,每组20只小鼠.用流感病毒感染小鼠后灌胃给药,以实验小鼠的生存情况、死亡保护率及延长生命率等指标观察抗感颗粒的抗流感病毒作用.结果 在鸡胚实验中,抗感颗粒高、中剂量组均能抑制流感病毒复制并达到显效结果,病毒血凝效价比流感病毒对照组分别低了5个、3个稀释度.在小鼠实验中,抗感颗粒各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状,减少小鼠死亡,死亡保护率为35.0%～55.0%;生存时间延长,延长生命率为73.0%～88.9%、最低有效剂量为3.00g/kg.结论 抗感颗粒对甲型H1N1流感病毒的增殖有抑制作用,对流感病毒感染引起的小鼠死亡有保护作用.     

清肺解毒方对流感病毒感染小鼠的保护作用

目的研究清肺解毒方对流感病毒感染小鼠的保护作用及对病毒性肺炎的治疗作用。方法小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性对照组,以及清肺解毒方5、2.5和1.25g/kg剂量组,采用滴鼻感染流感病毒,造模2 h后灌胃给药,连续6 d后继续饲养至感染后14d,统计小鼠死亡率、平均存活时间、死亡保护率和生命延长率,观察清肺解毒方对流感病毒感染小鼠的保护作用;参照以上实验方法于造模后第3天和第6天取肺,以肺指数、肺脏病毒滴度和肺组织病毒载量为评价指标,观察清肺解毒方对病毒性肺炎小鼠的治疗作用。结果与模型组相比,清肺解毒方2.5和1.25g/kg剂量组死亡率显著降低,死亡保护率明显提高(P<0.01),存活时间明显延长,生命延长率明显增加(P<0.01);造模后第3天和第6天小鼠的肺指数、肺脏病毒滴度及肺脏病毒载量显著降低(P<0.01)。结论清肺解毒方2.5和1.25 g/kg剂量组具有明显的抗流感作用。     

银翘柴桂颗粒体内抗甲Ⅰ型流感病毒作用研究

【目的】观察银翘柴桂颗粒的体内抗甲Ⅰ型流感病毒作用。【方法】选用NIH小鼠,随机分为正常组,模型组,阳性对照药组(利巴韦林,100 mg·kg-1·d-1),银翘柴桂颗粒高、中、低剂量组(剂量分别为6、3、1.5 g·kg-1·d-1);建立甲Ⅰ型流感病毒鼠肺适应株FM1人工感染NIH小鼠模型,以肺湿干比率、死亡保护率及肺组织病理变化为主要评价指标,观察银翘柴桂颗粒对感染甲Ⅰ型流感病毒鼠肺适应株FM1小鼠的防治效果。【结果】模型组小鼠肺湿干比率和死亡率显著升高,与正常组比较差异均有统计学意义(P0.01),肺组织出现明显炎性病变;银翘柴桂颗粒高、中、低剂量组均可显著降低模型小鼠肺湿干比率和死亡率,与模型组比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01),并可改善感染小鼠的肺组织炎性病变,作用与阳性对照药利巴韦林相仿。【结论】银翘柴桂颗粒具有一定的体内抗甲Ⅰ型流感病毒作用。     

犀角地黄汤合银翘散对流感病毒性肺炎小鼠肺病毒滴度和肺组织病理改变的影响

目的观察经典合方犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染致病毒性肺炎小鼠的治疗作用,分析病毒滴度与肺组织病理改变的关系。方法 ICR小鼠120只随机分为6组:正常组,模型组,犀角地黄汤合银翘散中药高、中、低剂量组,利巴韦林组,25μL 50LD50病毒液滴鼻建立流感病毒鼠肺适应株感染的小鼠肺炎模型(除正常组外),感染后1 h,正常组和模型组予以双蒸水灌胃;中药高、中、低剂量组分别给予中药46、23、11.5 g/(kg.d)灌胃;利巴韦林组腹腔注射利巴韦林注射液0.1 g/(kg.d);各组均给药2次/d,连续给药7 d。每日观察小鼠的生存率、平均存活天数,体重、体温的变化至感染后14 d。BALB/c小鼠72只随机分为4组,正常组、模型组、中药中剂量组和利巴韦林组,在感染后的24、6、d分别取材,动态观察小鼠肺匀浆中病毒血凝滴度、肺组织切片在光镜和电镜下的病理改变。结果临床等效剂量(中剂量)的犀角地黄汤合银翘散可明显降低感染小鼠的死亡率,延长生存时间,增加体重和升高体温。感染组肺病毒滴度在第2天最高,随后显著下降,而肺组织病理改变在第6天达高峰,二者不同步。犀角地黄汤合银翘散在第2天可降低肺匀浆中的病毒滴度,第4天、第6天与模型组比无差异;在第6天可明显减轻感染小鼠肺组织炎症病变。结论犀角地黄汤合银翘散对小鼠流感病毒性肺炎有明显的治疗作用,直接的抗病毒增殖非其主要作用,可能主要通过抑制机体的炎症级联反应发挥作用。     

疏风解毒胶囊防治流感体内药效学实验研究

目的评价疏风解毒胶囊在体内对H1N1流感病毒感染的防治作用。方法本研究中采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8株滴鼻感染正常小鼠造成肺炎模型,分别进行治疗性和预防性给药,观察小鼠肺指数、病死率。结果①感染当天开始给予疏风解毒胶囊治疗,连续4 d后3个剂量组肺指数均明显降低;②预防性给予疏风解毒胶囊连续4 d,对两种病毒感染正常小鼠引起的肺部炎症有明显预防作用。③感染前预防性给予疏风解毒胶囊4 d,FM1株三个剂量组动物的死亡数均显著降低。结论疏风解毒胶囊可改善流感病毒引起的小鼠肺炎症状,降低H1N1感染小鼠的肺指数,对病毒性感冒有较好的治疗和预防作用;并可明显降低感染动物的死亡率,延长评价存活天数。     

金银花提取物抗病毒的作用研究

目的:探讨金银花提取物的抗病毒作用.方法:采用甲型流感病毒(A/PR/8/34)感染小鼠,观察肺指数抑制率和保护率.结果:金银花提取物20g/kg和40g/kg剂量组对甲型流感病毒(A/PR/8/34)感染小鼠具有明显的保护作用,保护率分别为58.7%和69.0%,能明显降低甲型流感病毒感染小鼠的肺指数值,肺指数抑制率分别为14.6%和18.7%.与病毒对照组比较具显著性差异(P<0.05,P<0.01),组织病理学检查结果显示小鼠病毒性肺炎,主要表现为化脓性支气管炎.小叶性肺炎和间质性肺炎.金银花提取物各剂量组可明显减轻肺部病变.结论:金银花提取物具有抗甲型流感病毒感染的作用.     

金翘片体内抗流感病毒作用研究

【目的】探讨金翘片的体内抗流感病毒作用。【方法】以15 LD50流感病毒滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,经预防或治疗给药5 d后,取小鼠肺组织,称重,采用实时荧光定量PCR反应检测肺组织中的病毒载量,采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测肺组织和血清中的γ-干扰素(γ-IFN)水平,观察金翘片对小鼠肺指数、病毒载量和γ-IFN的影响;以3LD50流感病毒滴鼻感染小鼠造成肺炎模型,经预防或治疗给药7 d后,观察动物发病情况和死亡数,共14 d,评价金翘片对小鼠死亡保护和生命延长的作用。【结果】金翘片能明显抑制小鼠肺指数升高,提高死亡保护率和生命延长率,降低肺组织的病毒载量,提高γ-IFN水平(P0.05或P0.01);金翘片抗流感病毒作用明显优于银翘解毒片和连花清瘟胶囊,相当于达菲;金翘片预防作用优于治疗作用,但无明显差异。【结论】金翘片具有明显的抗甲型H1N1流感病毒作用。     

龙芩草喷雾剂抗流感病毒A1型(H1N1)作用的实验研究

目的验证龙芩草喷雾剂抗流感病毒A1型(H1N1)的作用.方法将实验小鼠感染流感病毒,给药组予龙芩草喷雾剂,阳性对照药组给利巴韦林,病毒对照组给生理盐水,计算死亡率、保护率、延长生命率及肺部病变抑制率,并将所得数据进行统计学处理.结果龙芩草喷雾剂能显著降低感染流感病毒A1型(H1N1)小鼠肺部病变抑制率、死亡率,并提高延长生命率,统计学处理结果显示,给药组和阳性对照药组与病毒对照组相比具有显著性差异(P＜0.01).结论龙芩草喷雾剂具有显著的抗流感作用.     

盐藻多糖抗病毒实验研究

目的通过体内外抗病毒实验观察盐藻多糖抗副流感病毒的作用。方法接种副流感病毒1型(HVJ)于狗肾细胞(MDCK),观察盐藻多糖对病毒致细胞病变效应的作用;体内实验以副流感病毒滴鼻感染小鼠,观察盐藻多糖对感染病毒小鼠的死亡率、生存时间、肺指数和肺病变程度的影响。结果盐藻多糖10、30、100μg/mL的浓度均有明显抑制病毒致细胞病变的作用;盐藻多糖30、100 mg/kg剂量组能显著降低病毒感染小鼠的死亡率,延长小鼠的生存时间,降低肺指数,减轻肺病变程度。结论盐藻多糖具有良好的抗副流感病毒的作用。      

加味神术散雾化剂抗流感病毒的实验研究

目的探讨加味神术散雾化剂在体外对甲型H1N1流感病毒增殖的影响。方法以甲型H1N1流感病毒感染狗肾传代细胞（MDCK cell）为载体,观察加味神术散雾化剂不同药物浓度对流感病毒引起的细胞病变（CPE）的影响。采用Reed-Muench法计算流感病毒对MDCK细胞的半数细胞感染量(TCID50)。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）测定光密度（OD）值,计算不同药物对MDCK细胞的破坏率,通过Probit回归计算不同药物对MDCK细胞的最大无毒浓度（TC0）及半数中毒浓度(TC50)。计算不同药物对流感病毒增殖的抑制率,通过Probit回归计算半数抑制浓度(IC50)和治疗指数（TI）。结果甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的TCID50为10-8/0.1mL。加味神术散雾化剂对MDCK细胞的TC50为366.63μg/mL,TC0为31.25μg/mL;利巴韦林对MDCK细胞的TC50为109.85μg/mL,TC0为8.02μg/mL。加味神术散雾化剂对流感病毒直接抑制作用的IC50=9.79μg/mL,TI=37.45;对预防流感病毒感染的IC50=8.72μg/mL,TI=41.04;对治疗流感病毒感染的IC50=17.40μg/mL,TI=21.07。利巴韦林对预防流感病毒感染的IC50=84.30μg/mL,TI=1.30。结论加味神术散雾化剂可明显抑制甲型H1N1流感病毒在MDCK细胞中的增殖,具有抗甲型H1N1流感病毒作用。     

银芩胶囊抗流感病毒的活性

目的研究银芩胶囊在体内、外的抗流感病毒活性。方法采用噻唑蓝（MTT）比色法检测银芩胶囊对体外模型狗肾细胞（MDCK细胞）的毒性浓度；采用细胞病变效应（CPE）观察法测定银芩胶囊体外抑制流感病毒有效浓度；流感病毒感染动物模型为昆明种小鼠，口服给予银芩胶囊剂量分别为每日1．0、0．3和0．1g／kg，分2次给予，共给药6d，通过观察流感病毒FM1感染小鼠死亡率、生命延长情况及肺病变程度指标判定其抗流感病毒作用。结果银芩胶囊在1．25mg／mL浓度下对MDCK细胞无毒性，在0．6mg／mL浓度下能有效抑制流感凡病毒CPE产生；每日口服1．0、0．3和0．1g／kg银芩胶囊，对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护率分别为40％、20％和5％，生命延长率分别为51．1％、29．1％和23．4％，减轻小鼠肺病变分别为64．3％、56．1％和34．6％。结论银芩胶囊在体内、外均有良好的抗流感病毒活性。     

MEK1/2抑制剂U0126体内外抗流感病毒研究

目的观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激酶MEK1/2抑制剂U0126对甲型H1N1流感病毒PR/8/34株感染正常小鼠肺炎模型和人肺泡上皮细胞(A549)感染模型的作用。方法采用PR/8/34株感染ICR小鼠模型,通过肺指数评价感染后第2天和第5天U0126的抗病毒作用,采用实时荧光定量PCR技术观察U0126对小鼠肺脏组织病毒载量的作用。采用PR/8/34株感染A549细胞模型,通过观察细胞病变(CPE)法研究U0126对细胞病变的作用。结果 PR/8/34株流感病毒感染小鼠第2天,U0126组与模型对照组比较肺指数和病毒载量均显著降低(P0.05);U0126对A549细胞病变作用具有明显的抑制作用。结论 U0126对体内外甲型流感病毒感染模型均具有抗病毒作用。结果提示,药物抗病毒作用可能通过抑制MAPK(Raf/MEK/ERK)信号反应途径实现的设想,为研究新的抗病毒药物提供新思路,为进一步揭示药物抗病毒机理提供药效学研究基础。     

疏风解毒胶囊防治流感体内药效学研究

目的评价疏风解毒胶囊在体内对H1N1流感病毒感染的防治作用。方法研究采用甲型H1N1流感病毒FM1株和PR8株滴鼻感染免疫低下小鼠造成肺炎模型,分别进行治疗性和预防性给药,观察小鼠肺指数、病死率,并进一步进行分子机理研究。结果①致免疫低下小鼠肺炎模型实验中,治疗性给予疏风解毒胶囊4d后,三个剂量组肺指数、肺组织中的病毒载量均明显降低;FM1株三个剂量组动物的死亡数均显著降低,PR8株中剂量组动物的存活天数显著增加;②致正常小鼠肺炎模型实验中,治疗性给药可明显降低肺组织中的病毒载量;提高小鼠肺组织IFN-γ含量,增加血清中SOD活力;并降低血清中TNF-α的含量。结论疏风解毒胶囊可通过影响小鼠免疫功能,改善流感病毒引起的小鼠肺炎症状;降低H1N1感染小鼠的肺指数,对病毒性感冒有较好的治疗;并可明显降低感染动物的死亡率,延长存活天数。