玻璃化冷冻保存羊卵巢组织异种移植的实验研究

目的:探讨羊卵巢组织玻璃化冷冻复苏后异种移植的卵泡生长发育情况。方法:取绵羊的卵巢,将卵巢皮质切块,应用玻璃化快速冷冻法保存。羊卵巢组织片复苏后在裸鼠的颈部皮下移植,每只裸鼠移植2块组织,于移植1个月后获取移植物,HE染色观察存活卵泡的情况。结果:共移植组织16块,取材时肉眼可见其中一块组织纤维化萎缩,镜下见此块组织纤维化,移植组织存活率87.5%(14/16)。HE染色观察每只移植小鼠的2块移植物中基本只有1块有可视卵泡。1只鼠未见可视卵泡;1只鼠见1个不典型原始卵泡;1只鼠有2个不典型原始卵泡;余下5只鼠的移植卵巢组织中均可见多个典型的存活卵泡。结论:羊卵巢组织经冷冻复苏后能够成功移植于裸鼠的颈部皮下,大部分卵泡处于良好的存活状态。     

兔卵巢组织玻璃化冷冻的实验研究

目的:探讨玻璃化冷冻法保存兔卵巢组织的效果。方法:随机将25只新西兰雌兔分为对照组(5只)、慢速冷冻组(10只)和玻璃化冷冻组(10只),比较各组冻融前后卵巢组织学、超微结构、卵泡凋亡(原位末端标记法,TUNEL)和子宫系膜内移植后卵巢功能的恢复情况。结果:新鲜组织、慢速冷冻复苏组织和玻璃化冷冻复苏组织中正常形态卵泡比例分别为87.36%、81.96%和82.72%,两冷冻组正常卵泡比例均低于对照组,差异有统计学意义?P(0.05),但玻璃化冷冻组与慢速冷冻组差异无统计学意义(P>0.05)。3组间卵泡凋亡比率分别为21.4%、13.5%和17.1%,差异无统计学意义(P>0.05);3组移植后兔动情周期出现率均为100%,动情周期出现天数差异无统计学意义?P>0.05);移植存活的卵巢组织内可见各级形态正常的卵泡发育。结论:玻璃化冷冻可有效保存卵巢组织的结构和功能,是一种简单、可行的兔卵巢组织冷冻保存法。     

3种玻璃化液对新生鼠卵巢的渗透反应及冻存效果的比较

目的:探索适宜新生鼠卵巢保存的玻璃化液和冷冻方案。方法:观察新生SD大鼠卵巢在预平衡液及3种玻璃化液中不同时间段的表面积变化,冻融后进行组织学观察和成年SD大鼠肾被膜下异体移植后在体活力分析。结果:新生鼠卵巢在预平衡液中出现渗透性脱水变化,移入EFS40(A组)、EG5.5(B组)、EG5.5/30(C组)3种玻璃化液中,再次剧烈皱缩。3min后,卵巢表面积分别为等渗液对照组表面积的63.2%、82.4%、70.8%。此脱水状态的卵巢玻璃化冻融后形态完整的卵泡百分率均与新鲜移植组(D组)无显著性差异(P>0.05);异体移植后,动情周期出现率和动情周期出现时间均与D组无显著性差异(P>0.05)。各冷冻移植组存活移植物均可见不同发育阶段的各级卵泡,但卵泡数目少于D组,移植20d时A组与D组间有显著性差异(P<0.05);移植60d时B组卵泡数少于D组,组间有差异(P<0.05);C组在各时间点上取材的卵泡数与D组均无差异(P>0.05)。结论:在预平衡液中15min、改良的EG5.5/30液中3min的二步渗透平衡法适宜新生鼠卵巢的玻璃化冷冻。     

两种冷冻保护剂玻璃化冷冻小鼠卵巢的比较研究

目的:探讨两种玻璃化冷冻保护剂对小鼠卵巢组织学和功能的影响。方法:将23只4周龄ICR雌鼠随机分为新鲜卵巢移植组(6只)、去势组(5只)、EG40组(6只)和ED20组(6只)。EG40组和ED20组分别应用乙二醇(EG)和联合应用EG与二甲基亚砜(DMSO)玻璃化冷冻小鼠卵巢组织,一周后解冻,将一部分复苏卵巢组织自体移植入小鼠肾被膜下,另一部分组织行组织学观察。移植术后5d开始观察所有小鼠的动情周期,一个月后处死小鼠,对存活的卵巢组织行组织学观察。结果:EG40组、ED20组和新鲜卵巢移植组小鼠动情周期出现率均为100%,出现动情周期的天数分别为10.2±1.2d、8.0±0.9d和6.8±1.0d,EG40组动情周期出现天数明显多于新鲜卵巢移植组(P<0.01);ED20组与新鲜卵巢移植组差异无显著性(P>0.05)。移植存活的卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡,形态正常,但冻融卵巢组织内卵泡数量比新鲜组织少。结论:联合应用玻璃化冷冻保护剂EG和DMSO对小鼠卵巢组织学和功能的影响较小。     

玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10的影响研究

目的探索玻璃化冷冻对乳鼠卵巢Dnmt1和Grb10 mRNA和蛋白表达的影响。方法 26只出生10 d的C57BL/6雌性小鼠,每只乳鼠双侧卵巢均分成新鲜组和玻璃化冷冻组。免疫组织化学法检测Dnmt1蛋白在玻璃化冻融前、后卵巢组织卵泡中的表达变化;通过qRT-PCR检测Dnmt1和Grb10 mRNA在玻璃化冻融前、后卵巢组织中的表达变化;通过Western blotting方法检测Dnmt1和Grb10蛋白在玻璃化冻融前后卵巢组织中的表达变化。结果 Dnmt1在玻璃化冻融前、后的乳鼠卵巢组织各级卵泡的颗粒细胞及卵母细胞胞核表达。与新鲜组相比,玻璃化冷冻组卵巢内Dnmt1蛋白和mRNA表达水平均显著下调(P0.05);Grb10蛋白和mRNA表达水平均显著上调(P0.05)。结论玻璃化冷冻复苏过程导致卵巢内Dnmt1表达降低,使印记基因Grb10过表达,可能使配子糖代谢性表观遗传信息紊乱的的风险增加。     

荷人卵巢上皮癌裸鼠冻融卵巢组织移植的效果评价

目的:获取人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁正常卵巢组织,经安全筛查并冻融后移植至去势裸鼠体内,探讨移植后效果,为临床应用提供依据。方法:将人卵巢上皮癌OVCAR3细胞种植于裸鼠皮下以获取瘤源,并进行卵巢原位移植,建立卵巢癌原位移植瘤模型,解剖裸鼠获取癌旁正常卵巢组织。癌旁组:取筛选后的癌旁卵巢组织进行玻璃化冷冻,复苏后分别进行皮下及原位移植,各20例;对照组:同龄正常裸鼠卵巢组织,皮下移植及原位移植各20例;去势裸鼠组:20只同龄去势裸鼠;正常卵巢组:20只同龄正常裸鼠。移植12周后,分析各组裸鼠卵巢组织内卵泡形态及激素分泌功能。结果:40只人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中共获取35份活检正常的癌旁卵巢组织,获取率87.5%(35/40)。玻璃化冷冻前后卵巢组织中卵泡形态及各级卵泡比例均无显著差异(P>0.05),癌旁冷冻组织和癌旁新鲜组织的异常卵泡比例差异无统计学意义(P>0.05),冷冻组织以初级卵泡及次级卵泡等窦前卵泡为主。癌旁组皮下移植组织存活率80%(16/20),对照组皮下移植组织存活率90%(18/20),癌旁组原位移植组织存活率90%(18/20),对照组原位移植组织存活率95%(19/20)。移植后组织内卵泡以次级卵泡及窦状卵泡为主,各级卵泡的形态及构成比和未移植的同龄正常裸鼠卵巢相似(P>0.05);癌旁组卵泡数明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植组织内的各级卵泡数差异无统计学意义(P>0.05)。癌旁组卵泡刺激素水平明显低于去势裸鼠组,而雌二醇水平明显高于去势裸鼠组(P<0.01);癌旁组卵泡刺激素水平明显高于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01),而雌二醇水平明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植的卵泡刺激素水平和雌二醇水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:癌旁卵巢组织冻融移植后有正常卵泡发育及激素分泌功能;皮下移植和原位移植均可取得较好的效果;癌旁卵巢组织冻融移植有望作为卵巢上皮癌患者治疗后恢复卵巢内分泌功能的有效手段。     

抗冷冻蛋白Ⅲ减少家兔卵巢组织冷冻损伤的效果观察

目的:评价抗冷冻蛋白Ⅲ(AFPⅢ)对玻璃化冷冻家兔卵巢组织的影响。方法:收集家兔卵巢30只,随机分为新鲜卵巢组、添加AFPⅢ玻璃化冷冻组(AFPⅢ终浓度为500 ng/ml)和常规玻璃化冷冻组,各组10只,解冻后分析各组卵巢的组织学结构、卵泡形态正常率、卵巢组织超微结构、卵母细胞凋亡率及卵泡存活率。结果:新鲜卵巢组的卵泡形态正常率(91.6%)、卵泡存活率(81.75%)显著高于两冷冻组(P0.01),卵母细胞凋亡率(12.0%)显著低于两冷冻组(P0.01);添加AFPⅢ玻璃化冷冻组卵泡形态正常率(77.5%)、卵泡存活率(45.31%)显著高于常规玻璃化冷冻组(分别为62.1%、37.25%)(P0.01),卵母细胞凋亡率(25.8%)显著低于常规玻璃化冷冻组(41.2%)(P0.01)。结论:家兔冷冻卵巢组织的卵泡形态正常率、卵泡存活率显著低于新鲜组织,冷冻保护剂中加入AFPⅢ可减少家兔卵巢组织冷冻损伤。     

4种冷冻-解冻方法对家兔卵巢组织形态学的影响

目的:探讨适宜的卵巢组织冻存方案。方法:采用PROH(A2组)及DMSO(B2组)慢速程序化冷冻和DMSO+PROH(C2组)及DMSO+EG(D2组)玻璃化冷冻方法,冻存家兔卵巢组织,解冻复苏后,以相应的4组新鲜组织为对照(A1-D1组),做HE染色,行组织形态学分析。结果:A1-D1组始基卵泡的形态正常率分别为90.1%、91.5%、91.8%、92.2%,其相对应的A2-D2组分别下降为67.6%、69.7%、70.5%、80.1%,差异均有统计学意义(P均<0.05)。冷冻组中A2组始基卵泡形态正常率最高,与B2、C2、D2组比,差异有显著性(P<0.05)。C2、D2组间比,差异无显著性(P>0.05)。各冷冻组合并后形态正常率始基卵泡为72.7%,初级卵泡为55.7%,两者比较有统计学差异(P<0.05)。4个冷冻组中均可见卵巢组织结构受损的表现。结论:4种冷冻解冻方法对卵巢皮质中各级卵泡及卵巢组织结构均造成一定程度的损害,使各级卵泡的形态正常率明显下降,卵巢间质细胞连接变得疏松;PROH慢速程序化冷冻法明显优于DMSO法及玻璃化法,较适合卵巢组织中始基卵泡的保存;冻存卵巢组织对初级卵泡的影响大于始基卵泡。     

开放式和封闭式玻璃化冷冻法对人类胚胎发育潜能的影响

目的:比较开放式与封闭式自制叶片玻璃化冷冻技术对人早期胚胎冷冻复苏的效果。方法:以自制开放式与封闭式的叶片为冷冻载体,用玻璃化冷冻方法冷冻体外受精-胚胎移植第3天移植后剩余的优质胚胎,观察胚胎复苏及临床妊娠情况。结果:开放式冻存组共复苏112个周期、288个胚胎,胚胎复苏率、复苏5h继续卵裂率、空泡出现率、胚胎丢失率、临床妊娠率、植入率及流产率分别为97.2%、30.7%、9.3%、1.7%、50.5%、23.6%、14.5%,相较于封闭式冻存组(共复苏93个周期、222个胚胎)的胚胎复苏率(96.4%)、复苏5h继续卵裂率(34.6%)、空泡出现率(7.9%)、胚胎丢失率(1.4%)、临床妊娠率(59.8%)、植入率(29.0%)、流产率(10.9%)均无统计学差异(P>0.05)。结论:封闭式玻璃化冷冻法能获得与开放式同样的冷冻效率,且能使胚胎与液氮完全隔离,能更好地保护胚胎避免潜在的病原微生物、病毒的污染,是冷冻人早期胚胎理想的方法。     

两种玻璃化法冻存小鼠卵巢的研究

目的:探讨2种玻璃化法对小鼠卵巢组织、器官形态和功能保存作用的影响。方法:以改良的DMEM-F12为玻璃化液,分别采用常规玻璃化法(A组)和超速玻璃化法(B组)冻存小鼠卵巢组织及器官,解冻后通过组织学观察、卵巢组织异体、卵巢器官自体肾被膜下移植,观察动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况,并分别以新鲜卵巢组织异体移植、卵巢器官自体移植(C组)为对照,评价2种玻璃化法的冻存效果。结果:①A组、B组、C组卵巢组织异体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别10.5±5.4d、8.0±2.2d、6.3±1.0d。A组与C组比,差异显著(P<0.05);B组与C组无差异,A组与B组间也无差异(P均>0.05)。②A组、B组、C组卵巢器官自体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别为9.4±0.9d、6.9±1.1d、6.1±1.1d,A组与B、C组相比有统计学差异(P<0.05),而B组与C组间无差异(P>0.05)。移植存活的卵巢组织、器官内均可见不同发育阶段的卵泡,形态正常。结论:2种玻璃化法可有效地冻存卵巢组织及器官,但超速玻璃化法效果较优。     

玻璃化冷冻与程序化冷冻对胚胎发育潜能及临床结局的影响

目的:比较玻璃化冷冻与程序化冷冻对胚胎发育潜能及临床结局的影响。方法:回顾性分析590个复苏周期,比较2种冷冻方法的胚胎复苏率、临床妊娠率、胚胎种植率和流产率等各项指标。结果:玻璃化冷冻组的平均移植胚胎数(2.2±0.5枚)显著少于程序化组(2.5±0.6枚)(P<0.05),复苏率(94.4%)、完整胚胎率(73.7%)、临床妊娠率(50.8%)和种植率(30.2%)显著高于程序化组(77.2%、44.3%、36.2%、21.1%)(P<0.05),而流产率和周期取消率组间均无统计学差异(16.6%vs 27.7%,1.3%vs 2.3%)(P>0.05)。程序化冷冻胚胎的种植率在完整胚胎(13.5%)和非完整胚胎(16.0%)组间无统计学差异(P>0.05);玻璃化冷冻完整胚胎组的种植率(30.4%)显著高于非完整胚胎组(20.1%)(P<0.05);而2种冷冻方法的流产率完整胚胎组(35.7%,15.1%)均显著高于非完整胚胎组(8.7%,2.9%)(P<0.05)。在玻璃化冷冻中,卵裂期胚胎组的各项指标与囊胚期组相比均无统计学差异(P>0.05)。结论:玻璃化冷冻法适用于人类胚胎的保存,对卵裂期和囊胚期胚胎有同样理想的保存效果和临床结局,玻璃化冷冻中,胚胎完整性对胚胎种植率起着重要的作用。     

玻璃化冻融和程序化冻融胚胎移植的妊娠结局比较

目的:探讨移植玻璃化冻融胚胎的妊娠结局。方法:对300个玻璃化冻融移植周期(共移植720枚胚胎)和151个程序化冻融移植周期(共移植333个胚胎)进行回顾性分析,比较它们的妊娠结局。结果:玻璃化组和程序化组的胚胎复苏率分别为91.60%和76.56%(P<0.01);平均移植胚胎数分别为2.4枚和2.2枚(P>0.05),胚胎种植率分别为19.72%和14.41%(P<0.05);周期临床妊娠率分别为36.33%和25.83%(P<0.05),多胎分娩率分别为24.71%和6.25%(P<0.01),早产率为32.08%和14.29%(P<0.01)。结论:玻璃化冷冻胚胎具有更好的复苏和着床能力,是现阶段有效和相对安全的胚胎冷冻方式。     

人工皱缩后玻璃化冷冻小鼠扩张囊胚的效果观察

目的:观察冷冻前人工皱缩小鼠扩张期囊胚的囊胚腔,冻融后小鼠扩张期囊胚的存活率及体外和体内继续发育能力。方法:冻前先应用自制的玻璃微细管人工皱缩小鼠囊胚腔后,再应用冷冻环进行玻璃化冷冻小鼠扩张期囊胚150个。冻融后培养3h观察胚胎存活情况,以新鲜扩张囊胚为对照,并将存活胚胎及新鲜未冻囊胚移植受体孕鼠子宫内,观察胚胎的妊娠率和产仔率。结果:人工皱缩后小鼠扩张囊胚的存活率及孵出率均显著高于未皱缩组(P<0.05),皱缩组与对照组无显著差异(P>0.05)。移植后皱缩组的妊娠率及产仔率均显著高于未皱缩组(P<0.05),皱缩组与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:冻前人工皱缩小鼠扩张期囊胚的囊胚腔后,再应用冷冻环进行玻璃化冷冻是个行之有效的方法,能明显提高囊胚的玻璃化冷冻效率。     

两种玻璃化冷冻载体对小鼠自然周期及超排卵周期卵母细胞冻融结局的影响

目的:建立优化玻璃化冷冻卵母细胞的方法,了解超排卵后小鼠卵母细胞的复苏率及体外受精率,为改善人类卵母细胞玻璃化冷冻技术提供依据。方法:建立小鼠超排卵及自然周期模型,比较开放式拉细麦管(open pulled straw,OPS)及叶片两种玻璃化冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞的复苏率及体外受精率。结果:(1)叶片法玻璃化冷冻卵母细胞复苏率高于OPS法(自然周期组:75.0%vs55.6%,P=0.0003,超排卵周期组:65.3%vs46.3%,P=0.0000);(2)自然周期组卵母细胞的冷冻复苏率(OPS组:55.6%vs46.3%,叶片组:75.0%vs65.3%),体外受精率(OPS组:53.5%vs40.5%,叶片组:52.8%vs39.0%)均高于超排卵周期组。结论:叶片载体玻璃化法优于OPS载体玻璃化法;自然周期组小鼠卵母细胞玻璃化冷冻复苏率及体外受精率均高于超排卵周期组。     

玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果的比较

目的:比较辅助生殖技术中玻璃化和程序化2种冷冻方法对卵裂期胚胎的冷冻复苏效果。方法:对265个玻璃化冷冻周期和276个程序化冷冻周期的相关资料进行回顾性统计学分析,比较冷冻胚胎复苏后的胚胎存活率、胚胎种植率和临床妊娠率等指标。结果:玻璃化冷冻复苏265个周期,解冻809个胚胎,存活710个(87.8%),移植259个周期,临床妊娠98个周期(37.8%),其中双胎妊娠26例,三胎妊娠3例。程序冷冻复苏276个周期,解冻968个胚胎,存活532个(55.0%),移植246个周期,临床妊娠70例(28.5%),其中双胎妊娠4例,三胎妊娠1例。玻璃化冷冻后的胚胎存活率和完整性胚胎存活率均显著高于程序化冷冻,复苏周期移植取消率显著低于程序化冷冻,而临床妊娠率则明显高于程序化冷冻,差异均有统计学意义(P<0.05)。但2种方法的胚胎种植率无统计学差异(P>0.05)。结论:玻璃化法能够较好地避免冷冻引起的损伤,适用于卵裂期胚胎的冷冻保存。     

冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应

目的 探讨冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应.方法 将36只性成熟雌性小白鼠随机分为新鲜移植组、冻融移植组和对照组,每组12只.新鲜移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,立即移植人双侧肾被膜下;冻融移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,采用玻璃化冷冻方法冷冻保存,2周后将冷冻卵巢组织复苏,移植入小鼠双侧肾被膜下.卵巢组织移植2周后,新鲜移植组和冻融移植组每组随机取6只小鼠应用7.5 IU人绝经期促性腺激素及10 IU绒毛膜促性腺激素,观察移植后的卵巢组织对促性腺激素的反应.同时应用免疫组化染色方法观察各组卵泡中卵泡刺激素受体的表达情况.结果 新鲜移植组、冻融移植组和对照组未应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为2.3%、2.3%和2.6%,应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为4.2%、4.0%和5.8%,各组内分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);新鲜移植组和冻融移植组与对照组比较,差异均元统计学意义(P＞0.05).新鲜移植组、冻融移植组和对照组卵泡刺激素受体表达积分吸光度值在窦状卵泡中分别为9408±2777、9175±3093和8838±2064,在窦前卵泡中分别为4531±1903、4808±1386和5516±1136,各组间分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 卵巢组织冷冻保存、复苏及移植过程未影响卵巢卵泡刺激素受体的表达,冻融后移植的小鼠卵巢组织对外源性促性腺激素的反应未受冷冻、复苏及移植等过程影响.     

两种冷冻方法对人类卵巢组织卵泡形态和组织增殖活性的影响

目的:探讨玻璃化冷冻和慢速冷冻何者更适于冻存人卵巢组织。方法:将10例因卵巢良性囊肿剔除术获取的人卵巢皮质组织切成薄片后随机分配到新鲜卵巢组(A组)、玻璃化冷冻组(B组)和慢速冷冻组(C组),通过光学显微镜和透射电子显微镜观察比较卵泡形态变化,免疫组织化学检测组织细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化。结果:A、B、C组中形态正常的原始卵泡比例分别占71.4%、70.1%、52.3%;形态正常的初级卵泡比例分别占76.0%、43.5%、31.8%;C组中形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例均明显低于A、B组(P<0.05);B组形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例与A组相比无统计学差异(P>0.05)。A、B组中形态正常的原始卵泡超微结构无明显改变,但B组中初级卵泡和C组中原始卵泡和初级卵泡的超微结构存在一定程度的改变。PCNA阳性表达主要见于卵母细胞、颗粒细胞和卵巢组织间质细胞,3组中均有PCNA表达,且表达无统计学差异。结论:玻璃化冷冻较慢速冷冻对人卵巢组织影响小,是一种较适宜的人卵巢组织冷冻保存方法。     

整体卵巢冷冻及移植的研究进展

卵巢组织冷冻是保存女性生育能力和内分泌功能的一种极具潜力的方法。卵巢组织移植后的缺血损伤导致卵泡大量丢失,同时由于小块卵巢组织所含的卵泡少,因此移植术后难以长久维持卵巢功能。整个卵巢行显微血管吻合移植术可避免移植后的缺血性损伤。适宜的整体卵巢的冷冻保存方法是施行整体卵巢移植的难点,目前未有统一的标准方法。综述国内外对整体卵巢冷冻及移植的研究进展,探讨如何选择合适的冷冻方法。     

生育力保护之卵巢组织冷冻技术的研究进展

肿瘤治疗可导致儿童、青少年及年轻患者丧失生育能力及生殖内分泌功能,卵巢组织冷冻技术是继胚胎冷冻、卵子冷冻的新型技术,不仅能够保存患者生育力,同时也能维持生殖内分泌功能。卵巢组织冷冻技术分为慢速程序化冷冻和玻璃化冷冻两种,目前尚未形成冷冻方案的统一共识,两种冷冻技术优缺点各异,且当前仍处在一些关键的技术难点。本文将就卵巢冷冻技术研究进展进行阐述。     

有无卵丘细胞对玻璃化冷冻后小鼠卵母细胞细胞骨架及体外发育能力的初步研究

目的:探讨卵丘细胞在玻璃化冷冻中对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响。方法:采用玻璃化冷冻技术,保存带卵丘细胞或完全剥除卵丘细胞的小鼠MⅡ期和GV期卵丘复合体/裸卵(COC/DO),复苏且GV卵体外培养成熟后分别作体外受精或免疫荧光标记检查纺锤体和染色体的完整性。结果:MⅡ-COC和GV-COC的复苏率均显著高于MⅡ-DO和GV-DO(分别为86.49%vs60.92%和85.94%vs64.93%,P<0.01)。GV-COC组的受精率、囊胚率均高于GV-DO组,且MⅡ-COC组和GV-COC组的纺锤体和染色体均正常率均分别高于MⅡ-DO组和GV-DO组,但无显著性差异(P>0.05)。结论:卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中能有效减少冷冻对细胞骨架的损伤,并改善卵子复苏及胚胎发育潜能。