志贺菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性及耐药机制研究

目的检测志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药情况,探讨染色体介导DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ基因突变存在与志贺菌喹诺酮类药物耐药性的相关性。方法用琼脂稀释法对60株志贺菌进行耐药性检测;PCR法检测喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关基因gyrA、gyrB、parC、parE,并对其中20株PCR扩增所得的阳性产物进行测序分析;分析志贺菌gyrA、gyrB、parC基因突变与喹诺酮类药物耐药性的关系。结果 60株志贺菌对萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率分别为90.0%、35.0%、28.3%和15.0%;测序结果显示gyrA、gyrB、parC基因突变率分别为85%、30%和100%,parE基因未发现突变。结论志贺菌对喹诺酮类耐药严重;靶基因突变是喹诺酮类药物耐药的主要机制之一,以DNA旋转酶GyrA基因突变为主,DNA拓扑异构酶IVparC基因突变次之。     

2010—2011年广东地区人源主要血清型沙门菌喹诺酮耐药特征分析

目的了解广东省沙门菌对喹诺酮耐药特征及其基因突变情况。方法选用2010—2011年广东省非伤寒沙门菌监测收集的4种主要血清型沙门菌,采用半定量药敏检测法测定2010—2011年收集的沙门菌临床株对萘啶酸和环丙沙星的最小抑菌浓度（MIC）;通过PCR扩增鼠伤寒沙门菌株的gyrA和parC的基因,并对序列进行测定,对比野生株,发现突变位点及突变类型。结果共对2010—2011年收集的496株鼠伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌变种、肠炎沙门菌和斯坦利沙门菌进行耐药性分析,75.4%（374/496）沙门菌对萘啶酸耐药,其中鼠伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌变种、肠炎沙门菌、斯坦利沙门菌耐药率分别为82.5%（207/251）、84.0%（84/100）、79.5%（70/88）、22.8%（13/57）;5.4%（27/496）沙门菌对环丙沙星耐药,其中鼠伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌变种、肠炎沙门菌的耐药率分别为8.0%（20/251）、5.0%（5/100）、2.3%（2/88）。71.7%（180/251）鼠伤寒沙门菌发生基因突变,其中86.1%（155/180）发生gyrA上突变,37.2%（67/180）发生parC上突变,23.3%（42/180）发生双基因突变。环丙沙星耐药株、中敏株、敏感株分别有7株（35.0%,7/20）、1株（3.1%,1/32）、6株（3.0%,6/199）发生gyrA Ser83位点突变,3组间Ser83位点突变率差异有统计学意义（P〈0.01）;环丙沙星耐药株、中敏株、敏感株分别有15株（75.0%,15/20）、21株（65.6%,21/32）、111株（55.8%,111/199）发生gyrA Asp87位点突变,3组间突变率差异无统计学意义（P〉0.05）。5株parC Ser80位点突变株均突变为Arg,此突变的菌株均伴有Ser83Phe及Asp87Asn;9株parC Thr57突变株均对萘啶酸耐药。结论广东省沙门菌对萘啶酸普遍耐药,对环丙沙星仍普遍敏感;gyrA和parC中可能影响沙门菌耐药的突变位点应进一步确认其对耐药的影响。     

耐喹诺酮类福氏志贺菌基因突变分析

目的研究福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因突变与其喹诺酮类药物耐药的关系.方法对临床收集的1株喹诺酮类药物敏感福氏志贺菌、2株喹诺酮类药物耐药程度不同的福氏志贺菌,对上述2个靶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增及核酸序列分析.结果首次发现临床分离喹诺酮类耐药福氏志贺菌parC基因突变,导致121,129,131,134,141,L51位5个位点氨基酸编码改变;耐药程度较高的菌株共发现gyrA、parC基因上6个突变位点,耐药程度较低的菌株发现gyrA基因1个突变位点.结论福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因和拓扑异构酶ⅣparC基因突变均与其喹诺酮类药物耐药有关,靶基因突变位点数量可能与喹诺酮类药物耐药程度有关,临床耐药株靶基因突变存在多态性.     

甲型副伤寒沙门菌超广谱β-内酰胺酶和喹诺酮类耐药基因检测

目的探讨甲型副伤寒沙门菌(SAA)对喹诺酮类药物的耐药性变异产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的机制。方法对2007-2008年67株萘啶酸耐药菌株进行喹诺酮类药物耐药分析和耐药基因检测,药敏检测采用VITEK32、Etest和纸片扩散法进行;耐药基因采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增含有喹诺酮类耐药基因决定区(QRDR)gyrA、gyrB、parC、parE基因片段;ESBL包括SHV、TEM、CTX-M和AmpC型β-内酰胺酶。结果 67株萘啶酸耐药菌株58株发生gyrA基因在Ser83位或Asp87位发生突变,gyrB、parC和parE未发现突变,突变株SHV、TEM、CTX-M阳性率分别为7.5%、4.8%、1.5%,未检出AmpC耐药基因;萘啶酸耐药率由0上升至100.0%。结论 SAA对喹诺酮类耐药严重,主要机制是QRDR gyrA基因的第Ser83位或Asp87位表现出高频突变,其耐药表型和基因突变有较高的一致性。     

门诊患者尿液分离大肠埃希菌喹诺酮类耐药机制研究

目的回顾性分析社区尿液分离大肠埃希菌喹诺酮类抗菌药物耐药机制,为临床抗感染治疗提供参考。方法收集2013年6月-2015年6月门诊就诊患者尿液标本中分离的环丙沙星耐药大肠埃希菌,经VITEK 2全自动鉴定药敏仪进行鉴定和药敏分析,PCR检测质粒介导喹诺酮耐药基因qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac(6')-Ib-cr、qep A、oqx A、oqx B,同时测序分析喹诺酮耐药决定区gyrA、gyrB、parC、parE突变情况。结果共分离到大肠埃希菌131株,其中环丙沙星耐药56株,耐药率为42.7%,qnr S检出1株(1.7%)、oqx A及oqx B阳性各4株(7.1%)、aac(6')-Ib-cr阳性26株(46.4%)、qnr A阳性10株(17.9%)、qnr B阳性3株(5.4%),未检出qnr C、qnr D、qep A。此外,gyrA基因发生Ser83→Leu突变3株(5.4%)、gyrB发生基因Asp87→Leu突变3株(5.4%);parC基因发生Ser80→Ile突变2株(3.6%)。结论门诊患者尿液分离大肠埃希菌喹诺酮类耐药机制以质粒介导为主,尤其是aac(6')-Ib-cr耐药基因。由于质粒介导喹诺酮耐药基因易在不同菌株中播散,应加强监测。     

耐环丙沙星鲍氏不动杆菌的gyrA基因及parC基因突变分析

目的 研究本地区临床分离鲍氏不动杆菌环丙沙星耐药表型与DNA旋转酶A亚单位gyrA基因及拓扑异构酶Ⅳ parC基因突变的关系。方法收集28株耐药株及2株敏感株，通过PCR扩增其gyrA基因及parC基因，并对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）及DNA序列分析。结果敏感株的gyrA基因产物经HinfⅠ酶切后可产生两个片段，耐药株则产生1个片段；而parC基因产物经Hinf Ⅰ酶切后，敏感株及耐药株均产生两个片段；DNA测序显示，5株耐药株gyrA基因存在Ser83→Leu及Ala88→Thr突变，其中Ser83→Leu的突变是导致Hinf Ⅰ酶切位点消失的原因，而1株敏感株无突变；1株敏感株与1株耐药株的pcrC基因存在Ser108→Ile突变，另外14株耐药株存在多位点同义突变。结论与parC基因相比，gyrA基因突变是鲍氏不动杆菌对环丙沙星耐药的主要分子基础，环丙沙星的高水平耐药可能需要多种不同的突变。     

环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药机制研究

目的探讨环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药的分子机制。方法10株临床分离的肺炎链球菌体外用不同浓度梯度环丙沙星逐级诱导成为耐药株,检测诱导前后菌株对环丙沙星的MICs,PCR扩增诱导前后菌株parC/parE和gyrA/gyrB基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)、测序并与GenBank公布序列比对。结果8株临床菌株成功诱导为耐药株,诱导后MICs是诱导前16倍以上,诱导后2株只发现parC/parE基因的QRDR有突变其耐药水平较低MICs分别为8μg/ml和16μg/ml,6株parC/parE和gyrA/gyrB基因的QRDR同时存在点突变耐药水平较高,MICs分别为64μg/ml和128μg/ml。结论逐步增加药物浓度可以诱导肺炎链球菌parC/parE和/或gyrA/gyrB基因的QRDR点突变导致对环丙沙星耐药。     

志贺菌对喹诺酮类药物耐药分子机制的研究

目的 研究志贺菌对喹诺酮类药物耐药性及其耐药基因gyrA和parC的变异。方法对73株临床分离的志贺菌及标准株51573进行吡哌酸(PI)、氧氟沙星(OFL)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)4种药物的药敏试验,对其DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因N末端编码区分别进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,对grA基因进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对parC基因进行RFLP及单链构象多态性(SSCP)分析。结果 标准株51573对4种喹诺酮类药物均敏感;73株临床分离的志贺菌属细菌对PI、CIP、NOR、OFL的耐药率分别为79.5％、60.3％、41.1％和36.9％;67株(91.8％)菌株对喹诺酮类药物敏感性降低,其中gyrA基因突变率为91％,parC基因突变率为7.5％,6株临床敏感株及标准株51573均未检测出以上两基因突变。结论 志贺菌对喹诺酮类药物耐药严重;靶基因突变是其耐喹诺酮类药物的主要机制之一,以DNA旋转酶gyrA基因突变为主,拓扑异构酶ⅣparC基因突变次之。     

鼠伤寒沙门菌临床分离株对喹诺酮类药物耐药机制的研究

目的 研究引起儿童腹泻鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制.方法 采用K-B法测定62株鼠伤寒沙门菌对常用抗菌药物的敏感性;应用PCR法和DNA测序法检测喹诺酮耐药决定区(QRDRs)和质粒介导的喹诺酮耐药基因;采用接合试验测定耐药基因的转移性;PFGE法测定耐药菌株的同源性.结果 62株肠伤寒沙门菌中有40株对环丙沙星耐药(MIC≥0.5 μg/ml),其中28株为低水平耐药,12株为高水平耐药,且所有对环丙沙星耐药菌株同时对其他多种抗菌药物耐药;40株环丙沙星耐药菌株分属于4种PFGE型,分别是A型7株、B型4株、E型1株、D型28株;两株对环丙沙星高水平耐药菌株同时存在gyrA和parC两个位点的突变,其余环丙沙星耐药菌株仅发现gyrA 1个位点的突变,未检测到qnr和qepA基因;62株鼠伤寒沙门菌中有23株为aac-(6′)-Ib-cr阳性,其中19株PFGE分型为D型.结论 腹泻患儿分离的肠伤寒沙门菌对环丙沙星耐药率高,喹诺耐耐药决定区gyrA基因的点突变和携带aac-(6′) -Ib-cr基因是导致鼠伤寒沙门菌对环丙沙星耐药的主要原因.     

甲型副伤寒沙门菌对喹诺酮类药耐药机制的研究

目的探讨甲型副伤寒沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性变异及其机制。方法药敏检测，采用VITEK-32自动微生物分析系统或纸片扩散法；基因分析，采用聚合酶链反应（PCR）法扩增含有喹诺酮类耐药决定区的gyrA、gyrB、parC和pare4个基因片段，并进行测序分析。结果3528株甲型副伤寒沙门菌的耐药率在1999—2006年8年中上升最显著的是喹诺酮类药，其中萘啶酸由20．00升至99．07％，培氟沙星由0升至97．37％（χ^2=259．39，P〈0．01；χ^2=406．20，P〈0．01）；青霉素类也有不同程度的耐药。15株耐药菌株上述4个基因序列检测结果，gyrA基因均存在同一个突变位点，即83位氨基酸Ser→Phe突变（TCC→TTC），突变率达100％；其余3个基因未发现突变。结论甲型副伤寒沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性严重，主要机制是喹诺酮类耐药区gyrA基因的第83位表现出高频单点突变，其耐药表型和基因突变有较高的一致性。     

Molecular analysis of fluoroquinolone-resistant Salmonella Paratyphi A isolate, India

Salmonella enterica serovar Paratyphi A is increasingly a cause of enteric fever. Sequence analysis of an Indian isolate showed a unique strain with high-level resistance to ciprofloxacin associated with double mutations in the DNA gyrase subunit gyrA (Ser83-->Phe and Asp87-->Gly) and a mutation in topoisomerase IV subunit parC (Ser80-->Arg).     

Molecular analysis of high-level ciprofloxacin resistance in Salmonella enterica serovar Typhi and S. Paratyphi A: need to expand the QRDR region?

Fourteen strains of S. Typhi (n=13) and S. Paratyphi A (n=1) resistant to ciprofloxacin were compared with 30 ciprofloxacin decreased-susceptibility strains on the basis of qnr plasmid analysis, and nucleotide substitutions at gyrA, gyrB, parC and parE. In ciprofloxacin-resistant strains, five S. Typhi and a single S. Paratyphi A showed triple mutations in gyrA (Ser83-->Phe, Asp87-->Asn, Glu133-->Gly) and a novel mutation outside the quinolone resistance determining region (QRDR) (Met52-->Leu). Novel mutations were also discovered in an isolate (minimum inhibitory concentration 8 microg/ml) in gyrA gene Asp76-->Asn and outside the QRDR Leu44-->Ile. Out of 30 isolates with reduced susceptibility, single mutation was found in 12 strains only. Genes encoding qnr plasmid (qnr A, qnr B, AAC1-F) were not detected in ciprofloxacin-resistant or decreased-susceptibility strains. Antimicrobial surveillance coupled with molecular analysis of fluoroquinolone resistance is warranted for reconfirming novel and established molecular patterns of resistance, which is quintessential for reappraisal of enteric fever therapeutics.     

氟喹诺酮耐药肠球菌gyrA和parC基因突变特征及其与环丙沙星耐药相关性分析

目的 探讨氟喹诺酮耐药肠球菌的gyrA和parC基因突变特征与环丙沙星耐药程度的相关性。方法 收集2016 - 2018年临床分离59株粪肠球菌和62株屎肠球菌,使用PCR方法特异性扩增gyrA和parC基因,并进行基因测序检测分析。结果 粪肠球菌和屎肠球菌对环丙沙星耐药率分别为59.32%和80.65%。粪肠球菌gyrA基因Ser83突变（χ2 = 51.252, P＜0.001）和parC基因Ser80突变（χ2 = 55.115, P＜0.001）与粪肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16μg/ml）的相关性差异具有统计学意义;屎肠球菌gyrA基因Ser83突变（χ2 = 42.014, P＜0.01）和parC基因Ser80突变（χ2 = 62.000, P＜0.01）与屎肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16 μg/ml）的相关性差异具有统计学意义。结论 gyrA基因Ser83突变和parC基因Ser80突变与肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16 μg/ml）可能相关。     

Ciprofloxacin-resistant Salmonella enterica Typhimurium and Choleraesuis from pigs to humans, Taiwan

We evaluated the disk susceptibility data of 671 nontyphoid Salmonella isolates collected from different parts of Taiwan from March 2001 to August 2001 and 1,261 nontyphoid Salmonella isolates from the National Taiwan University Hospital from 1996 to 2001. Overall, ciprofloxacin resistance was found in 2.7% (18/671) of all nontyphoid Salmonella isolates, in 1.4% (5/347) of Salmonella enterica serotype Typhimurium and in 7.5% (8/107) in S. enterica serotype Choleraesuis nationwide. MICs of six newer fluoroquinolones were determined for the following isolates: 37 isolates of ciprofloxacin-resistant (human) S. Typhimurium (N = 26) and Choleraesuis (N = 11), 10 isolates of ciprofloxacin-susceptible (MIC <1 mg/mL) (human) isolates of these two serotypes, and 15 swine isolates from S. Choleraesuis (N = 13) and Typhmurium (N = 2) with reduced susceptibility to ciprofloxacin (MIC >0.12 microg/mL). Sequence analysis of the gryA, gyrB, parC, parE, and acrR genes, ciprofloxacin accumulation, and genotypes generated by pulsed-field gel electrophoresis with three restriction enzymes (SpeI, XbaI, and BlnI) were performed. All 26 S. Typhimurium isolates from humans and pigs belonged to genotype I. For S. Choleraesuis isolates, 91% (10/11) of human isolates and 54% (7/13) of swine isolates belonged to genotype B. These two genotypes isolates from humans all exhibited a high-level of resistance to ciprofloxacin (MIC 16-64 mg/mL). They had two-base substitutions in the gyrA gene at codons 83 (Ser83Phe) and 87 (Asp87Gly or Asp87Asn) and in the parC gene at codon 80 (Ser80Arg, Ser80Ile, or Ser84Lys). Our investigation documented that not only did these two S. enterica isolates have a high prevalence of ciprofloxacin resistance nationwide but also that some closely related ciprofloxacin-resistant strains are disseminated from pigs to humans.     

铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制研究

目的:研究铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制,为临床抗感染治疗提供依据。方法:用PCR法检测染色体介导的喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB、parC、parE和质粒介导的喹诺酮类耐药基因qn-rA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、aac(6’)-Ib-cr、oqxA和oqxB,并对gyrA和parC阳性结果进行测序分析。结果:98株耐环丙沙星的铜绿假单胞菌中未检出parE、qnrC和qnrS基因。gyrA、gyrB和parC的阳性率分别为96.9%、87.8%和75.5%。测序证实84株菌(85.7%)发生gyrA或parC基因突变。90株菌(91.8%)携带质粒介导的耐药基因,qnrA、qnrB、qnrD、qepA、aac(6’)-Ib-cr、oqxA和oqxB的阳性率分别为31.6%、86.7%、15.3%、11.2%、53.1%、8.2%和26.5%,其中qnrB和aac(6’)-Ib-cr具有高携带率。结论:染色体介导的喹诺酮类耐药基因突变以及质粒携带qnr、qepA、aac(6’)-Ib-cr和oqxAB耐药基因是铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的主要机制。首次在铜绿假单胞菌中发现qnrB基因和qnrD基因。     

2018—2021年北京市沙门菌血清型及喹诺酮类耐药表型和基因型分析

目的 分析2018—2021年北京市肠道门诊哨点医院分离到的沙门菌血清型及喹诺酮类药物耐药表型和耐药基因的流行情况。方法 采用玻片凝集法鉴定血清型;微量肉汤稀释法测定药物敏感性;全基因组测序数据通过与MLST和ResFinder数据库比对,查询ST型别和耐药基因。结果 228株沙门菌共检出42种血清型,51种ST型。其中肯塔基沙门菌、肠炎沙门菌和黄金海岸沙门菌等9种血清型比较常见。77株沙门菌（33.8%）对萘啶酸耐药;40株（17.5%）对环丙沙星和左氧氟沙星耐药;38株（16.7%）对吉米沙星耐药。不同血清型对喹诺酮类药物的耐药性不同。228株沙门菌共筛选出5种喹诺酮耐药基因:qnrS（23.7%）、aac(6’)-Ib-cr（8.3%）、qnrB（6.6%）、OqxAB（1.3%）和qepA（0.4%）;喹诺酮耐药决定区存在gyrA和parC的7种氨基酸突变:以parC:T57S（70.2%）最常见,其次是gyrA:D87N（14.9%）、parC:S80I（14.5%）、gyrA:S83F（14.5%）、gyrA:D87Y（7.9%）、gyrA:D87G（5.3%）和gyrA:S83Y（1.8%）。在组合突变中,以parC:S80I-gyrA:D87N-gyrA:S83F三突变,并伴随parC:T57S最多。耐药基因和突变位点在9种常见血清型中的检出率存在差异。结论 北京市沙门菌血清型及ST型种类繁多,携带喹诺酮耐药基因以qnrS、aac(6’)-Ib-cr和 qnrB为主,存在gyrA和parC多个位点突变并协同作用。应持续监测血清型和耐药性,以指导临床有针对性合理用药。