慢性肾功能衰竭患者线粒体基因组D-loop区突变研究

目的通过研究慢性肾功能衰竭（CRF）患者及家系成员中线粒体D-loop区的基因变异情况,探讨其与CRF发病之间可能的联系。方法收集42例CRF患者（CRF组）和95名家系成员（UAPM组）,以及随机选取的122例正常人（对照组）的外周血,提取线粒体DNA,通过PCR扩增D-loop区并对产物纯化,然后进行基因测序来检测线粒体基因组D-Loop区域基因变异情况,并进行比较,分析该区域基因变异与CRF发病的可能相关性。结果通过与对照组及标准序列比较,共发现79个核苷酸改变,3个高频变异位点,其中总的碱基突变率在CRF组及UAPM组明显增加,两组与对照组碱基变异率差异均有统计学意义（均P＜0.01）。CRF组及UAPM组在D310区线粒体微卫星不稳定（mtMSl）及碱基变异率与对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）。结论线粒体基因组D-Loop区突变可能与CRF的发生、发展有一定的关系。     

卵巢肿瘤中线粒体DNA D-环区的突变

目的研究线粒体DNAD-环区在卵巢肿瘤中的突变情况。方法选择25例卵巢肿瘤组织及其邻近的正常组织,用PCR方法将线粒体DNAD-环区同时扩增测序。结果在25例卵巢肿瘤中有8例存在线粒体DNAD-环区突变,突变率为32%,突变位点26个。在26个突变位点中,19个突变位点存在于2例交界性肿瘤中,6个属于微卫星不稳定。25例肿瘤中有11个基因库未记载的新的多态性变化。结论线粒体DNAD-环区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在卵巢肿瘤中突变率较高。     

Mutations in the D-loop region of mitochondrial DNA in g astric cancer

Objective: To investigate the mutations in the D-loop region of mitochondrial DNA (mtDNA) in gastric cancer.Methods: The mtDNA of D-loop region was amplified by PCR and ,sequenced in 20 samples from gastric cancer tissue and adjacent normal membrane. Results: There were 7/20(35% ) mutations in the mtDNA of D-loop region in gastric cancer patients. There were four microsatellite instabilities among the 18 mutations. Nine new polymorphisms were identified in 20 patients. Conclusion: The mtDNA of D-loop region might be highly polymorphoric and the mutation rate is high in patients with gastric cancer.     

线粒体DNA与糖尿病的研究进展

线粒体细胞内氧化应激的平衡会影响线粒体DNA(mt DNA)的生物合成,导致mt DNA突变和水平的改变,线粒体基因突变导致三羧酸循环障碍,引起胰岛β细胞分泌胰岛素不足导致糖尿病。同一个体不同组织mt DNA的水平不同,外周血mt DNA水平的改变与2型糖尿病的关系尚无定论。该文将探讨mt DNA突变的研究进展,mt DNA单倍群涉及糖尿病及其并发症的病理学,以线粒体为靶向位点的药物或者治疗对于预防和治疗2型糖尿病具有巨大潜力。     

肾癌患者线粒体基因组D环区基因突变的研究

目的：通过检测肾癌基因组 D 环区体细胞突变及种系性变异情况,探讨其与肾癌发生的关系。方法选取肾癌患者20例,对其癌组织、癌旁组织及外周血细胞总 DNA进行 PCR扩增并测序,相关结果与线粒体文库中剑桥序列进行比对,综合分析基因突变类型。结果在20例肾癌患者各组织中,共有7例检出线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）的D-环区（displancement loop,D-Loop）存在突变,突变发生率为35%,涉及突变位点17个,其中4个属微卫星不稳定序列;20例患者中共发现9个基因库未记载的新的多态性变化。结论肾癌患者mtDNA的D环区具有高度多态性和高度突变率,该区的基因突变在肾癌的形成中可能发挥重要作用。     

线粒体DNA突变和疾病的关系研究进展

线粒体是细胞能量生成的场所,人类线粒体DNA(mtDNA)上有37个编码基因,其中有13个蛋白质基因,2个rRNA基因和22个tRNA基因。mtDNA突变是引起多因素疾病和部分遗传疾病的重要原因之一,本文就线粒体基因组学、mtDNA疾病模型,mtDNA疾病的临床特征以及mtDNA疾病的防治进展进行综述。     

实验用西藏小型猪线粒体DNA控制区变异类型及其血液指标比较研究

目的 分析实验用西藏小型猪线粒体DNA控制区碱基序列变异分化类型,比较血液生理生化指标的差异,为实验动物新品种的培育奠定分子遗传学基础.方法 采集59头西藏小型猪血液,分别进行全基因组DNA提取、线粒体DNA控制区的扩增、测序并分类,同时进行血液生理生化指标的测定和比较研究.结果 根据串联重复区重复片段的变化,西藏小型猪线粒体DNA控制区分为A、B两种类型,分别占57.6%和42.4%,几乎与5'端序列在305、500和691的三个主要转换位点的变化相对应.A、B两类西藏小型猪18项血液生理生化指标统计结果显示,红细胞数(RBC)差异(P<0.01)有统计学意义,其他指标差异均无统计学意义.结论 根据线粒体DNA控制区序列碱基变异,西藏小型猪分为两个类群,两个群体之间红细胞数存在明显差异.

Abstract：

Objective To analyze the mitochondrial DNA (mtDNA) D-loop region sequence variation in Tibet Mini-Pigs in relation to the blood parameters and provide the molecular genetic basis for developing new species of laboratory animals.Methods The genomic DNA was extracted from the whole blood samples of 59 Tibet mini-pigs to amplifying the mtDNA D-loop for sequence analysis. Nine physiological and nine biochemical blood parameters of Tibet mini-pigs were measured .Results Based on the variation of the tandem repeat motif, the mtDNA D-loop region of Tibet mini-pigs was classified into two types, namely type A and B with the percentage of 57.6% and 42.4%, respectively, roughly matching the 3 transform sites (305, 500, 691) at the 5' end. In the 18 blood parameters, only red blood cell count showed significant differences between types A and (P<0.01). Conclusion Based on the sequence variation of the mtDNA D-loop region, Tibet mini-pigs can be divided into two types that show a significant difference in red blood cell count.     

宣威地区非小细胞肺癌患者线粒体DNA突变与多态性研究

【目的】寻找宣威地区肺癌患者肺组织中线粒体DNA突变和多态性情况,为进一步研究宣威地区女性肺癌高发机制提供参考。【方法】征集28例宣威籍肺癌患者,收集癌组织和相应癌旁正常肺组织,提取线粒体DNA ,实时荧光定量PCR和直接测序方法检测线粒体DNA突变和多态性改变。【结果】28例肺癌组织样本同对应癌旁组织比较,有21例（75．0％）发生mtDNA突变,15例有多种突变,突变发生在DLOOP 区,以及呼吸链编码区等区域。突变与患者年龄、性别,及组织学类型无明显联系。28例肺癌组织、相应癌旁组织同M t-DNA剑桥序列比较,有3例有mtDNA多态性改变。【结论】宣威肺癌患者线粒体DNA存在特异性的突变位点,以及多态性位点,可能和当地特殊的燃煤污染暴露及遗传易感性有关。     

良性前列腺增生线粒体DNA控制区突变

目的：研究良性前列腺增生细胞中线粒体DNA控制区的突变情况。方法：取手术切除的22例良性前列腺增生组织和同一患者的淋巴细胞,经提取线粒体DNA、PCR、产物鉴定、重组克隆和DNA测序等过程,得到患者良性前列腺增生细胞和淋巴细胞线粒体DNA控制区序列,观察良性前列腺增生细胞线粒体DNA控制区突变。结果：排除线粒体DNA控制区的多态性改变以后,发现在22例良性前列腺增生患者中18例存在良性前列腺增生细胞线粒体DNA控制区突变,突变位点有27个,多数在第一高变区和第二高变区,突变率为81%（18/22）,突变频率为2.4%（27/1120）,突变类型为转换、颠换和缺失。个体的突变碱基数为0～8个,与患者年龄和增生前列腺重量均无明确关系（P〉0.05）。患者外周血淋巴细胞线粒体DNA控制区的变异与正常前列腺相似,两组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：良性前列腺增生细胞线粒体DNA控制区存在高突变率,这些突变既不随前列腺增大和增龄而积累,也不波及外周血淋巴细胞,其意义有待进一步研究。     

喉鳞状细胞癌组织线粒体基因D-310区碱基的多态性

目的 探讨喉鳞状细胞癌组织中线粒体基因D310区碱基序列多态性及其临床意义。方珐提取11例喉鳞状细胞癌组织总DNA,利用聚合酶链反应（PCR）对线粒体基因包含D310区的D-LOOP区部分序列进行扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳并直接测序,观察该区碱基序列的改变。结果D310区多态性表现为多聚C保守片段胞嘧啶碱基数量的改变,发生率为8／11（72．73％）。5/8（62．50％）的标本突变是同质性的,3／8（37．50％）标本为异质性突变。共检测到6种不同的序列改变,以单个胞嘧啶的插入最常见,约占全部序列改变的50％。结论在喉鳞状细胞癌组织。D310区具有明显多态性,是突变的多发区域之一。     

肝细胞性肝癌线粒体DNA D-100p区基因突变的研究

目的研究肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D—loop区基因的突变情况。方法选择40例肝细胞性肝癌组织和其相应癌旁组织,取对应患者外周静脉血,提取线粒体DNA后进行PCR扩增和测序。结果40例肝细胞性肝癌组织线粒体DNA D-loop区中,发生突变16例（40．0％）,共发现突变住点34个,其中16个位点为点突变,5个位点发生插入,13个位点发生缺失;另外新发现2个多态性位点。结论线粒体DNA D-loop区是一个具有高度多态性和突变性的区域,在肝细胞性肝癌组织中突变率较高。     

西南地区母系遗传性耳聋家系的线粒体DNA分析

目的　检测 15 5 5 A→ G突变在西南地区母系遗传性非综合征性耳聋家系中的发生率 ,探讨其听力学特征 ,为建立相应的基因诊断方法提供依据。方法　对六个家系成员共 10 2人进行听力学评估 ,并收集每人的外周静脉血标本 ,提取 DNA,用 PCR- RFL P法 (Alw 2 6 限制性内切酶 )检测 15 5 5 A→ G突变。结果　听力损害的共同特点为双侧、对称性进行性耳蜗性聋 ,氨基甙类抗生素致聋 (AAID)家系 1、2所有母系成员共 17人有 15 5 5 A→ G突变 ,非 AAID家系 6母系成员 10人也有此突变。非母系成员及家系 3、4、5所有成员无此突变。结论　 mt DNA15 5 5 A→ G突变是这类耳聋的遗传基础之一 ,而氨基甙类抗生素是其重要的环境因素。 15 5 5 A→ G突变在西南地区 AAID及非综合征性耳聋家系均有较高发生率。此突变的筛查有重要临床意义     

97例线粒体肌病/脑肌病患者的线粒体DNA突变分析

目的 探讨我国不同临床类型的线粒体脑肌病的线粒体DNA(mtDNA)突变特点以及基因型和表型之间的相关性.方法 对经临床和病理诊断为线粒体肌病/线粒体脑肌病的97例患者,提取其肌肉和/(或)白细胞mtDNA,用Southern杂交检测mtDNA的大片段缺失、以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测常见类型的点突变(包括A3243G、A8344G、T8993G、　T8993C、T3271C突变)、并对部分患者进行mtDNA伞长测序寻找有无其他的突变位点.结果 97例患者中有81例患者存在mtDNA突变,突变类型包括单一的大片段缺失21例,多发的大片段缺失4例,A3243G突变43例,A8344G突变6例,T8993G、T8993C、T3271C突变各1例.KSS/CPEO与单发的mtDNA大片段缺失相关、MELAS与A3243G点突变、MERRF与A8344G点突变、母系遗传的Leigh　病与8993位点的突变相关.另外在4例线粒体肌病患者中发现细胞色素b编码基因A15316G　(T194A)、G15221A(D159N),ATPase6编码基因G9196A(D224N)和16SrRNA C2835T突变各1例.结论 国人不同类型线粒体肭肌病的mtDNA突变类型与国外外的报道道基本一致.虽然线粒体脑肌病的临床表刑和基因型之间有一定的相关件,但不同的基因型和临床表型之间也存在一定的交叉,反映了线粒体病的异质性特点.     

常见线粒体DNA病的分子遗传学研究进展

Inthepastdecade ,mitochondrialdysfunctionhasbecomeincreasinglyrecognizedasanetiologyforabroadvarietyofhumangeneticdisorders.Thus ,un derstandingthemoleculardefectsinmitochondrialgenomeisimportantindifferentialdiagnosis ,geneticcounseling ,andproperpatientmanagement .DisorderscausedbymutationsinmitochondrialDNA (mtDNA)haveextremelyheterogeneousclinicalmanifestations .However,advancesingenetictestingcanassistintheidentificationofpatients .ThispaperreviewsthetypesofmutationsfoundinmtDNAandthe…     

慢性进行性眼外肌麻痹及Kearns-Sayre综合征患者线粒体DNA突变的研究

目的:检测慢性进行性眼外肌麻痹(chronic progressive external ophthalmoplegia,CPEO)及Kearns-Sayre综合征(KSS)患者骨骼肌细胞线粒体DNA的缺失情况。方法:从11例CPEO和KSS患者的骨骼肌活检标本中,提取总体DNA。限制性内切酶PvuⅡ消化1 h,将消化后的DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,使DNA片段按大小分离。用毛细转移法将凝胶上的DNA转移至正电荷尼龙膜上。从正常人全血中提取全长线粒体DNA作为探针,进行地高辛-dUTP标记,并与正电荷尼龙膜进行预杂交、杂交、杂交后冲洗及显色反应。结果:11例中,7例除有一条正常大小杂交带外,还有一条异常的缺失型线粒体DNA杂交带。剂量分析表明,缺失型线粒体DNA占总线粒体DNA的50%~75%。缺失片断在4.5~5.5 kb之间。结论:CPEO及KSS患者骨骼肌线粒体DNA缺失率较高,线粒体DNA基因缺失与线粒体疾病密切相关。     

A Mitochondrial DNA A8701G Mutation Associated with Maternally Inherited Hypertension and Dilated Cardiomyopathy in a Chinese Pedigree of a Consanguineous Marriage

Background:

Cardiovascular diseases, including dilated cardiomyopathy (DCM) and hypertension, are the leading cause of death worldwide. The role of mitochondrial DNA (mtDNA) in the pathogenesis of these diseases has not been completely clarified. In this study, we evaluate whether A8701G mutation is associated with maternally inherited hypertension and DCM in a Chinese pedigree of a consanguineous marriage.

Methods:

Fourteen subjects in a three-generation Han Chinese family with hypertension and DCM, in which consanguineous marriage was present in the parental generation, were interviewed. We divided all the family members into case (7 maternal members) and control group (7 nonmaternal members) for comparison. Clinical evaluations and sequence analysis of mtDNA were obtained from all participants. Frequency differences between maternal and nonmaternal members were tested to locate the disease-associated mutations.

Results:

The majority of the family members presented with a maternal inheritance of hypertension and DCM. Sequence analysis of mtDNA in this pedigree identified eight mtDNA mutations. Among the mutations identified, there was only one significant mutation: A8701G (P = 0.005), which is a homoplasmic mitochondrial missense mutation in all the matrilineal relatives. There was no clear evidence for any synergistic effects between A8701G and other mutations.

Conclusions:

A8701G mutation may act as an inherited risk factor for the matrilineal transmission of hypertension and DCM in conjunction with genetic disorders caused by consanguineous marriage.     

非综合征型耳聋线粒体基因突变的检测

目的：通过分析内蒙古鄂尔多斯市特殊教育学校非综合征型耳聋患者群体中mtDNA 12SrRNA A1555G突变,以探讨该群体与线粒体突变的关系。方法：对鄂尔多斯市特殊教育学校102名非综合征型耳聋患者进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试、声导抗测试、提取外周血DNA,聚合酶链反应扩增mtDNA目的片段,对扩增片段进行限制性内切酶检测,对阳性标本进行DNA序列分析。结果：该校102名学生中,全部为感音性耳聋,其中54例使用过氨基糖苷类抗生素,7例（6.9%）存在线粒体基因A1555G位点突变。结论：该群体线粒体A1555G位点的突变率高于以往的报道,携带有该突变的个体对氨基糖苷类抗生素有高度易感性,该基因突变是感音神经性耳聋的原因之一。     

DNA聚合酶γ基因突变研究进展

DNA聚合酶γ(polγ)是已知DNA聚合酶中唯一位于线粒体并参与线粒体DNA复制与修复的酶。POLG的突变可导致其编码的polγ功能异常,从而使线粒体DNA的复制发生障碍,影响线粒体的功能,引起线粒体相关的疾病。目前已发现POLG1基因的致病性突变多达130种,可导致Alpers综合征、渐行性眼外肌麻痹等线粒体疾病。现从DNA聚合酶γ的分子结构及其在线粒体DNA复制与修复中所起到的作用,阐述POLG突变与线粒体疾病的关系,并简要介绍几个常见的突变位点。     

非综合征型耳聋线粒体基因A1555G突变分析

目的通过分析内蒙古鄂尔多斯市特殊教育学校中非综合征型耳聋患者群体中线粒体基因12S rRNAA1555G突变,以探讨该群体与线粒体突变的关系。方法对鄂尔多斯市特殊教育学校102名非综合征型耳聋患者进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试、声导抗测试及线粒体A1555G基因突变检测。结果102名非综合征型耳聋患者全部为感音神经性耳聋,54例有明确的氨基糖甙类抗生素用药史,7例(6.9%)存在线粒体基因A1555G位点突变。结论mtDNA 12S rRNA A1555G在该研究群体中有较高的发生频率,携带有该突变的个体对氨基糖甙类抗生素的耳毒作用有高度易感性。     

线粒体脑肌病的线粒体3271T＞C、8356T＞C、9176T＞C/G和13513G＞A位点突变筛查

目的 了解中国线粒体脑肌病患儿的线粒体DNA(mtDNA)3271T＞C、8356T＞C、9176T＞C/G和13513G＞A位点的突变情况.方法 选择2005年10月至2009年10月500例线粒体脑肌病患儿,提取外周血DNA,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法进行mtDNA 3271T＞C、8356T＞C、9176T＞C/G和13513G＞A位点的突变筛查分析;用DNA直接测序方法验证PCR-RFLP的结果.结果 在500例线粒体脑肌病患儿中未发现3271T＞C、8356T＞C、9176T＞C/G和13513G＞A位点的突变.结论 在中国线粒体脑肌病患儿中线粒体3271T＞C、8356T＞C、9176T＞C/G和13513G＞A位点不是常见突变.

Abstract：

Objective To investigate the spectrum of mitochondrial DNA (deoxyribonucleic acid)3271T＞C, 8356T ＞ C, 9176T ＞ C/G and 13513G ＞ A mutations in Chinese patients with mitochondrial encephalomyopathies. Methods Peripheral blood samples were collected from 500 mitochondrial encephalomyopathic patients clinically diagnosed as mitochondrial encephalomyopathy lactic acidosis & stroke-like episodes (MELAS), myoclonus epilepsy & ragged-red fibers (MERRF) or Leigh's syndrome from October 2005 to October 2009. The methods of PCR- polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism ( RFLP ) and PCR-sequencing were performed to identify the mutations. Results No patients with the 3271T ＞ C, 8356T ＞ C, 9176T ＞ C/G or 13513G ＞ A mutations were identified.Conclusion The mutations of 3271T ＞ C, 8356T ＞ C, 9176T ＞ C/G and 13513G ＞ A are rare causes of mitochondrial encephalomyopathies in Chinese patients.