孕妇血浆中胎儿DNA在产前诊断中的初步应用--胎儿SRY基因、STR基因型的鉴定

目的 :利用孕妇血浆中游离胎儿 DNA进行非创伤性产前基因诊断。方法 :对 6 5例 5～ 4 1孕周孕妇血浆胎儿DNA进行 SRY的 PCR扩增 ,以检出男性胎儿 DNA;同时采用短串联重复序列 (STR)多态位点即 CSFIPO、TPOX、THO1(CTT)三个位点的复合扩增方法对 19例妊娠女性胎儿的孕妇血浆 DNA进行扩增 ,以检出女性胎儿 DNA。两种扩增均采用母体血浆直接作为模板进行。结果 :SRY- PCR中 ,4 6例妊娠男性胎儿的孕妇中 ,有 30例血浆中出现 SRY基因扩增带 ,19例妊娠女性胎儿的孕妇血浆中仅 1例孕中期者为假阳性 (5 .3% )。本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为 6 0 %、84 .0 9%、5 0 % ,总符合率为 73.85 % .CTT- PCR中 ,19例妊娠女胎孕妇血浆中有 15例检出父源性等位基因即女性胎儿 DNA。结论 :应用孕妇血浆中胎儿 DNA作产前诊断敏感性和特异性较高 ,尤其是在孕中期 ,它是一种非创伤性产前诊断方法 ,适用于临床。     

应用Rh阴性孕妇外周血胎儿游离DNA进行RhD血型产前基因诊断

目的探讨利用Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿RhD血型的方法。方法通过SRY基因确定胎儿DNA的存在，采用PCR-SSP技术对32例妊娠11～40周的单胎RhD阴性孕妇血浆中胎儿游离DNA进行RHD基因外显子5、7、10和内含子4的特异性扩增，其基因型结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比性分析，回顾性评价胎儿基因分型结果的准确性。结果32例样本中，28例基因定型结果与血清学表型相符，准确率达到87．5％，通过检测RHD1227A等位基因鉴定了RhD放散型，使结果达到93．75％（30／32）的准确率。结论利用Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性诊断胎儿RhD血型，是一种简便、快速且无损伤性的产前基因诊断的可行性方法，可用于新生儿溶血病的预防和诊断，值得临床推广应用。     

应用套式聚合酶链反应技术检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

目的 依据孕妇血浆中存在游离胎儿ＤＮＡ的理论,寻找一种非创伤性产前基因诊断的新方法。方法 用套式聚合酶链反应技术对１２例１２￣４０孕周的初产妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ进行特异性扩增,扩增的基因为Ｙ染色体短臂单拷贝基因片段（ＤＹＳ１４基因）,扩增片段的大小分别为２３９ｂｐ和１９８ｂｐ,１２例孕妇均采用母体血浆直接作为模板进行套式聚合酶链反应扩增。结果 １０例妊娠男性胎儿孕妇中有８例血浆中出现ＤＹＳ１４基     

母血清及血浆中胎儿游离DNA的研究进展

发现母血浆及血清中胎儿游离DNA,为无创性产前诊断技术开辟新途径.利用母血中有男胎睾丸确定基因(SRY)特异性序列确定胎儿DNA存在.用PCR技术扩增SRY的单拷贝序列(DYS14),确定性别敏感性60%～100%.利用实时定量PCR技术测定母血清和血浆中胎儿DNA浓度,妊娠7周母血清中可确定胎儿DNA,随妊娠周增加胎儿DNA量也增高.另证明非整倍体核型胎儿在母血浆中的DNA浓度高于正常核型胎儿,母血浆中定量测定胎儿游离DNA技术可能成为筛查染色体非整倍体核型胎儿的一种手段.     

运用O型血孕妇血浆中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型

目的:探讨利用O型血孕妇血浆中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型的可行性。方法:用酚/氯仿法从39例O型血孕妇(孕36~40+3周)且孕男性胎儿的血浆中提取胎儿DNA,巢式PCR扩增血浆中的SRY基因证实胎儿DNA存在,再用特异性序列-聚合酶链反应(SSP-PCR)检测胎儿ABO血型。用常规血清学方法测母体及新生儿血型。结果:10例孕A型血胎儿的孕妇血浆中扩增出A基因8例,6例孕B型血胎儿的孕妇血浆中扩增出B基因6例,23例孕O型血胎儿扩增出O基因而无A或B基因21例,准确性和敏感性分别为89.7%(35/39)和87.5%(14/16)。结论:利用孕妇外周血中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型可行,对诊断和预防新生儿ABO血型不合性溶血病的发生具有积极意义。     

孕妇血浆中胎儿DNA检测在产前诊断中的应用

目的 探讨孕妇血浆中提取胎儿游离DNA,鉴别胎儿性别以诊断胎儿遗传性疾病的方法。方法 选择妊娠7-38周,B超确诊为单胎,经绒毛和羊水细胞染色体检测,确诊为妊娠男性胎儿的正常孕妇16例,妊娠女性胎儿的正常孕妇8例;X性连锁遗传病（假性肥大性肌营养不良,血友病,色盲,无汗性外胚层发育不良症）家族史行产前诊断者4例,用酚提取法,纯化孕妇血浆中胎儿DNA,然后用巢式聚合酶链反应（PCR）技术测定男性胎儿睾丸决定因子（SRY）。结果 16例妊娠男性胎儿孕妇血浆中,胎儿游离DNA第1次巢式PCR测定,检出SRY基因扩增片段10例,第1次检出率为62.5%;经第2次巢式PCR测定。另6例全部检出SRY基因扩增片段,累计检出率为100%,妊娠女性胎儿的8例孕妇血浆中,均未检出SRY基因扩增片段,4例X性连锁遗传病家族史者均检出SRY基因扩增片段。结论 从孕妇血浆中提取胎儿游离DNA行胎儿性别诊断是一种快速,简便,准确的产前诊断方法。     

母血清及血浆中胎儿游离DNA的研究进展

发现母血浆及血清中胎儿游离DNA，为无创性产前诊断技术开辟新途径。利用母血中有男胎睾丸确定基因(SRY)特异性序列确定胎儿DNA存在。用PCR技术扩增SRY的单拷贝序列(DYSl4)，确定性别敏感性60％～100％。利用实时定量PCR技术测定母血清和血浆中胎儿DNA浓度，妊娠7周母血清中可确定胎儿DNA，随妊娠周增加胎儿DNA量也增高。另证明非整倍体核型胎儿在母血浆中的DNA浓度高于正常核型胎儿，母血浆中定量测定胎儿游离DNA技术可能成为筛查染色体非整倍体核型胎儿的一种手段。     

利用孕妇血浆游离胎儿DNA产前诊断胎儿RhD血型的研究

目的探讨无损伤性产前诊断胎儿RhD血型的方法。方法西安交通大学第二医院1999年2月至2001年12月，以妊娠14～40周的单胎孕妇为对象，其中RhD阴性孕妇8例，RhD阳性孕妇12例，利用PCR技术对孕妇血浆中游离胎儿DNA进行RhD基因第10外显子的特异性扩增，扩增片段长度为186bp，另外以等位基因RhCE基因为内对照，扩增片段长度为136bp，结果能同时扩增出186bp和136bp两条带，判断所妊娠胎儿血型为RhD阳性；扩增出136bp一条带，判断所妊娠胎儿血型为RhD阴性。8例RhD阴性孕妇中，5例扩增出136bp一条特异性片段，3例同时扩增出136bp和186bp两爷特异性片段；12例RhD阳性孕妇血浆标本，均同时扩增出136bp和186bp两条特异性片段，所有RhD-PCR扩增结果均得到脐血血清学检测结果的证实。结论利用孕妇血浆中游离胎儿DNA对胎儿RhD血型进行诊断，是一种简便、快速、特异性较高的产前诊断方法，值得临床推广应用、     

应用表观遗传学方法检测母体循环中游离胎儿DNA

目的:探讨表观遗传学方法检测孕妇血浆中游离胎儿DNA水平的应用价值。方法:随机选择早、中、晚期妊娠孕妇各20例,以非妊娠妇女20例为对照组。提取血浆中的总游离DNA,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各组血浆标本中目的基因m-maspin(一种肿瘤抑制基因启动子的甲基化序列)、u-maspin(前者的未甲基化序列)的表达水平,再进行相对定量,对妊娠组和对照组样本均数进行统计学分析。结果:(1)m-maspin在妊娠早、中、晚期孕妇血浆中的浓度分别是非妊娠妇女血浆中浓度的1.0、1.1、1.1倍,差异无统计学意义(P>0.05);(2)u-maspin在正常非妊娠妇女血浆中未能检测到,在60例孕妇血浆中57例可检测到,它在孕妇血浆中的浓度随妊娠进展呈升高趋势,中、晚期妊娠妇女血浆中其浓度相对于早期妊娠分别为1.7倍和3.1倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:m-maspin不是妊娠特异性标志物,u-maspin为妊娠特异性标志物。u-maspin基因可作为孕妇血浆中游离胎儿DNA水平变化的表观遗传学标志,相对于以胎儿性别基因作为遗传学标志的检测方法,它有助于扩大非创伤性产前诊断的临床应用范围。     

荧光定量PCR检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

目的探讨荧光定量PCR（fluorescence quantitative PCR，FQ-PCR）方法检测孕妇血浆中胎儿DNA的可行性，探讨胎儿DNA在孕妇血浆中的含量及其在孕期的变化规律。方法以胎儿SRY基因序列作为胎儿DNA在孕妇血浆中的标志，应用荧光MGB（Minor Groove Binder）探针实时定量PCR方法连续测定30例孕妇在不同孕期和产后共237份血浆标本中胎儿DNA的含量。结果使用该方法最低可检测到20000个女性DNA中的一个男性DNA。孕妇血浆中最早检出SRY序列的时间为孕6^＋6周。孕8周起，所有怀男胎孕妇的标本中均可检出SRY序列，其含量随着妊娠的进展而增高，在晚期妊娠达高峰，产后24～48h血浆中SRY序列检测均为阴性。胎儿DNA在孕妇血浆总DNA含量中的相对浓度分别为孕早期4．88％、孕中期6．10％、孕晚期4．77％。全部实验无假阳性和假阴性出现。结论FQ-PCR方法是一种灵敏度和准确性高，特异性强的定量检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的方法，孕妇血浆中存在高浓度的胎儿DNA，可用于无创伤性产前基因诊断。     

上推膀胱直肠后再次宫颈环形电切术对保留生育功能的价值

目的:探讨上推膀胱直肠后再次宫颈环形电切术(LEEP)在宫颈疾病治疗中的可行性,评价其对年轻患者保留子宫及生育功能的价值。方法:回顾性分析2010年1月至2014年4月在复旦大学附属妇产科医院就诊,因宫颈LEEP术后切缘阳性或术后随访复发、无法在门诊行常规LEEP而行上推膀胱直肠后再次LEEP的38例患者的临床资料。结果:38例患者均顺利完成了上推膀胱直肠后再次LEEP,术中均未出现膀胱、直肠损伤等并发症。手术时间38±7分钟,术中出血量20±5 ml,住院天数2.7±0.6天;其中1例患者术前病理检查为宫颈高度鳞状上皮内瘤变,术后升级为原位鳞癌合并原位腺癌行全子宫切除术,37例患者(97.4%)成功保留子宫,随访至今1例术后12个月低度鳞状上皮内瘤变行宫颈激光治疗,余均未见宫颈病变复发。12例患者有生育意愿,7例患者已成功妊娠,6例已分娩。结论:上推膀胱直肠后再次LEEP安全可行,可实现未生育妇女及年轻妇女保留子宫及生育能力的意愿。     

Responsiveness of gynecologic tumors to chemotherapeutic agents in the 6-day subrenal capsule assay

Various gynecologic malignancies have been tested in the 6-day subrenal capsule assay, which is an in vivo test of human tumor responsiveness to drug therapy. Fresh surgical explants of ovarian, endometrial, and cervical tumors were implanted as 1-mm³ fragments under the renal capsule of normal mice and tested against a spectrum of clinically active agents. Regardless of the site of origin, human tumors showed variations in growth rate when implanted under the renal capsule that appeared to reflect both the growth potential characteristic of each tumor as well as the heterogeneity of the cell populations comprising each tumor. An average of 60% of tumors showed positive growth and 11% demonstrated no measurable change in size. The response rates of 18 ovarian, 28 endometrial, and 20 cervical carcinomas to clinically active chemotherapeutic agents were determined. A range of responses, in terms of drugs indicated to be active and of the degree of responsiveness to active agents, was obtained with each histologic type. Response rates varied from 6% to tamoxifen in cervical carcinomas to 80% to 5-fluorouracil in ovarian carcinomas. The results of this study support the variability in chemotherapy responsiveness observed clinically with gynecologic tumors and suggest the feasibility of using the subrenal capsule assay as a predictive test.