2009-2010年濮阳市新甲型H1N1流感病毒检测分析

目的 在国家流感网络实验室平台框架下,通过对濮阳市2009-2010年流感感染人群流感病毒核酸的实验室检测,了解新甲型H1N1及其它流感病毒在濮阳市感染人群中病毒型别的构成,密切关注新甲型H1N1流感病毒变异情况,及时对病毒变异等重要情况进行分析,向国家流感中心提供重要检测数据,为甲型H1N1流感防控提供科学依据.方法...     

湖州市甲型H1N1流感病毒株的HA基因分析

目的:研究2010年湖州市甲型H1N1流感分离株(A/Huzhou/2010(H1N1))的HA基因特征。方法:采用MD-CK细胞对患者咽拭子和漱口液标本进行病毒分离,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒HA基因并进行序列测定,用DNAstar和MegAlign等软件分析处理。结果:湖州市2010年甲型H1N1分离株的HA基因为1739个核苷酸,与湖州市2009年的分离株及WHO2010/2011推荐的甲型H1N1疫苗株相比,没有核苷酸的插入与丢失,氨基酸同源性分别为99.0%和98.9%。进化树分析显示,本次分离株与湖州市2009年的分离株及WHO2010/2011推荐的疫苗株非常相似。结论:甲型H1N1流感分离株的分子生物学特征及变异特征分析,对制定科学有效的防控策略具有重要意义。     

安徽省2009年～2011年甲型H1N1流感病毒HA基因特性监测

目的了解安徽省2009~2011年安徽省甲型H1N1流感病毒HA的基因特性。方法提取病毒RNA,经RT-PCR扩增HA基因后测序,进行同源性分析和基因进化分析。结果传入阶段HA基因同源性为99.4%~99.6%,蔓延阶段为99.4%~99.7%,稳定阶段为98.8%~99.5%,再现阶段为98.8%~99.1%,说明甲型H1N1流感病毒HA基因在研究两年期间保持较高的稳定性。结论 2011年甲型H1N1流感毒株HA基因较2009年流行毒株存在一定程度的进化,但基本保持遗传的稳定性。     

甲型H1N1流感病毒抗原HA基因进化分析

目的 分析甲型H1N1流感病毒抗原HA基因的突变和分子进化树.方法 由河南省各市(地)疾病预防控制中心和流感监测哨点医院采集流感患者咽拭样本,从咽拭样本中分离甲型H1N1流感病毒毒株,选择20株提取病毒RNA,设计引物运用逆转录-聚合酶键反应(RT-PCR)技术扩增编码HA蛋白的基因序列,测序分析核酸和编码的蛋白序列突变位.结果 分离到51株新型H1N1流感病毒;扩增20株HA编码基因,18株成功扩增到HA编码基因,2部分基因片段分别为1 024 bp和654 bp,与预期大小相符;BLAST分析结果显示,在中国多个地区分布有甲型H1N1流感病毒HA基因433 T/C(N端145 S/P)突变株,进化树分析结果显示,这一位点的突变有可能是来自于猪-人之间相互感染.结论 甲型H1N1流感病毒抗原HA基因在中国内地传播期间个别氨基酸位点发生了突变,但是抗原性未改变.     

2015年盐城市甲型H3N2亚型流感病毒HA1基因分子进化特征分析

目的了解盐城市2015年甲型H3N2流感病毒分离株表面血凝素HA1基因分子进化特征。方法对哨点医院流感样病例标本进行核酸检测、病毒分离;选取甲型H3N2毒株,采用一步法RT-PCR扩增其HA1区,并进行序列分析,采用DNAStar软件包中MegAlign进行核苷酸及氨基酸同源性分析,以MEGA6.0软件进行序列比对及基因种系进化特征分析。结果 2015年盐城市流感样病例(ILI)监测样本中流感病毒核酸阳性率为8.36%,乙型、甲型H3N2、新甲H1N1型交替流行。抽取的7株甲型H3N2分离株,其HA1基因核苷酸同源性为98.7%~100.0%,氨基酸同源性为97.9%~100.0%;其HA1区氨基酸位点变异呈散在性分布,均未发生氨基酸的丢失和插入,氨基酸突变主要位于抗原决定簇的A、B和C区。除A/JSYC/11025/2015外,其余6株新增2个糖基化位点,其中158aa位点位于抗原决定簇B区。结论 2015年盐城市流感流行以甲型H3N2和乙型Yamagata系为主,具有典型的冬、夏双高峰特点。病毒HA1区基因特性逐渐发生变异,可能导致抗原变化,应进一步加强流感病原学监测。     

广州市白云区2009年甲型H1N1流感流行特征分析

目的分析广州市白云区2009年甲型H1N1流感疫情的流行病学特征,探讨甲型H1N1流感流行规律和防控对策。方法采用描述性流行病学方法对2009年白云区甲型H1N1流感病例及学校和家庭聚集疫情资料进行分析,对发病3d内的现症患者采集咽拭子标本,采用Real-time RT-PCR方法检测甲型H1N1流感病毒核酸。结果2009年共报告250例甲型H1N1流感病例,其中学生169例（占67．6％）,发病年龄以7～24岁为主（182例,占72．8％）。全区有13所学校和2个家庭发生甲型H1N1流感聚集性疫情,以9月最多,共11起。结论甲型H1N1流感疫情流行病学特征与季节性流感相似,学校是疫情多发场所。早发现,早报告,早隔离治疗患者,狠抓各项防控措施的落实,尽快接种甲型H1N1流感疫苗,可以有效控制学校或家庭甲型H1N1流感聚集性疫情的发生和蔓延。     

阜阳市2009年甲型H1N1流行性感冒流行特征分析

2009年3月,墨西哥暴发甲型H1N1流感疫情,并迅速在全球范围内蔓延[1]。2009年5月11日我国确诊内地首例甲型H1N1流感患者[1],截至2009年12月31日,全国31个省份累计报告甲型H1N1     

新甲型H1N1流感与中国甲型H1流感HA基因进化比较研究

目的比较新甲型H1N1流感与中国甲型H1亚型流感病毒HA基因的进化。方法用非度量多维尺度法分析下载自GenBank的中国人和猪甲型H1亚型流感HA序列及WHO北半球流感疫苗推荐株HA序列和新甲型H1N1流感HA序列,构建HA基因进化图谱。结果新甲型H1N1流感病毒HA基因与猪甲型H1亚型流感病毒的亲缘关系较近,而和中国人甲型H1亚型流感病毒及WHO近年推荐的疫苗株亲缘关系很远,并且新甲型H1N1流感病毒HA序列在进化上与中国猪甲型H1亚型流感病毒仍然存在一定距离。结论从基因层面上提示我国人群既往免疫和疫苗对新甲型H1N1流感可能不能提供有效保护,病毒有可能会在人群中流行。同时分析结果提示了尚无证据表明这次始于北美的新甲型H1N1流感来自中国。     

2005年-2009年大连市季节性甲型H1N1流感病毒HA基因序列分析

目的:分析大连市2005年-2009年流感病毒H1N1亚型血凝素抗原性及其基因变异情况,为流感防治提供技术支持。方法:采集流感样病例的鼻咽拭子标本,用MDCK细胞进行流感病毒的病原分离,采用红细胞凝集实验测定病毒的滴度,用血凝抑制试验和RT-PCR进行流感病毒型别鉴定,通过RT-PCR扩增血凝素HA片段的基因,电泳、纯化后进行基因序列测定,利用生物信息学进行序列分析。结果:2005年-2009年共分离到季节性甲型H1N1流感病毒39株,其中28株进行了测序。与当年的疫苗株相比,2005年、2006年、2007年和2008年分离株的HA1区分别发生了11个、9个、15、15个突变。结论:在近几个年度的流行季节中,该地区有H1N1亚型流感的存在。该地H1N1流感病毒分离株有多处氨基酸发生替换,氨基酸的替换导致毒株的抗原性发生了漂移。     

2009-2011年珠海市甲型H1N1流感流行特征分析

目的分析珠海市甲型H1N1流感的流行特征,为采取相应的防控措施提供科学依据。方法在珠海市设立28家流感样病例监测点、14家流感病原学监测点和8家肺炎住院病例监测点组成的监测网络,收集门诊就诊流感样病例及肺炎住院病例的监测数据及调查资料,对采集的标本使用逆转录聚合酶链式反应法进行甲型H1N1流感病原学检测．并采用描述性流行病学方法分析珠海市甲型H1N1流感的流行特征。结果2009年6月至2011年5月珠海市流感监测系统共报告门诊流感样病例173451例,其中检测3598例,确诊甲型H1N1流感病例531例,占受检流感样病例的14．76％（531／3598）;肺炎住院病例监测点共报告门诊流感样病例41852例,符合条件的肺炎住院病例1006例,检出甲型H1N1流感病例共41例,其中死亡1例。门诊确诊甲型H1N1流感病例中男性302例,女性229例;不同年龄组中,0～10岁组占门诊确诊病例数的77．21％（410／531）,11～20岁组占17．51％（93／531）,样本中检出甲型H1N1流感病毒阳性率最高年龄组为11～20岁组（37．35％,93／249）和21一30岁组（16．67％,17／102）;在职业分布上,甲型H1N1流感病毒阳性率最高分别为学生30．65％（213／695）、幼托儿童15．04％（186／1237）;甲型H1N1流感病毒检出率在2009年9—12月出现高峰,各月依次分别为29．32％（78／266）、31．37％（48／153）、60．70％（139／229）、40．63％（45／160）,甲型H1N1流感病例数与流感样病例数两者存在线性正相关关系,其复相关系数为0．51（P〈0．05）;甲型H1N1流感病例的发病就诊间隔时间平均为0．11d,其临床表现主要为发热（100．00％,531／531）、咳嗽（60．83％,323／531）、咽痛（56．31％,299／531）,肺炎仅占1．13％（6／531）;观察期内估算甲型H1N1流感发病就诊人数达14．42万,住院率为0．66％。结论珠海市甲型H1N1流感病例以轻症为主,发病高峰在2009年9—12月,发病人群以儿童和青少年为主。     

长沙市甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因序列分析

目的对长沙市甲型H1N1流感病毒A/changsha/78/2009的神经氨酸酶（neuraminidase,NA）基因进行测序分析,以期了解该病毒的来源及变异情况。方法利用国家流感中心（CNIC）和世界卫生组织（WHO）推荐的NA基因测序引物和CEQTM8000 Genetic Analysis System对2009年长沙市甲型H1N1流感患者阳性鼻咽拭子标本（A/changsha/78/2009）进行测序,测序结果提交至GenBank并利用Lasergene和Mega5软件对测序结果进行氨基酸比对和进化树分析。结果 A/changsha/78/2009 NA基因GenBank登录号为：GQ463958.1,与瑞典斯德哥尔摩甲型H1N1流感病毒分离株A/Stockholm/37/2009（H1N1）核苷酸同源性为100%;进化树分析显示A/changsha/78/2009 NA基因属于欧亚猪流感分支,包含A/changsha/78/2009在内的甲型H1N1流感病毒与A/swine/Spain/WVL6/1991（H1N1）亲缘关系近;A/chang-sha/78/2009与A/swine/Spain/WVL6/1991 NA基因均有7个潜在糖基化位点,A/changsha/78/2009 NA基因未发生H274Y位点突变。结论包含A/changsha/78/2009在内的甲型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒,A/changsha/78/2009病毒对神经氨酸酶抑制剂类药物敏感。     

2007-2009年郴州市H3N2亚型流感病毒HA1基因特性研究

目的了解2007-2009年郴州市H3N2亚型流感病毒流行情况及血凝素基因变异特征。方法 按时间先后顺序随机选择2007-2009年流感病原学监测中分离到的H3N2亚型毒株8株,提取病毒核糖核酸（RNA）,采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定并推导其氨基酸序列进行基因特性分析。结果H3N2亚型流感病毒在2007年为优势株,2008-2009年相对H1N1亚型流感病毒为弱势株;2007年分离株与该年疫苗株（A/Wisconsin/67/2005）比较,变异位点主要为G50E、S138A、K140I、R142G、N144D和L157S,抗原性发生了漂移;2008年分离株与2008-2009年疫苗株（A/Brisbane/10/2007）比较,变异位点主要为R142G、L157S;2009年分离株与该年疫苗株比较,变异位点主要为L157S、K173Q,2008-2009年分离株与该年疫苗株比较未发生明显变异。结论郴州市2007年H3N2亚型流感病毒HA1发生了明显变异,H3N2流感病毒较活跃,当年生产的疫苗预防效果较差;2008-2009年H3N2亚型流感病毒HA1与该年度疫苗株相比未发生明显变异,人群对其建立较好的免疫屏障,这是郴州市2008-2009年H3N2亚型流感病毒活动水平较低的主要原因。     

Influenza A(H6N1) Virus in Dogs,Taiwan

We determined the prevalence of influenza A virus in dogs in Taiwan and isolated A/canine/Taiwan/E01/2014. Molecular analysis indicated that this isolate was closely related to influenza A(H6N1) viruses circulating in Taiwan and harbored the E627K substitution in the polymerase basic 2 protein, which indicated its ability to replicate in mammalian species.     

Novel Reassortant Influenza A(H1N2) Virus Derived from A(H1N1)pdm09 Virus Isolated from Swine,Japan, 2012

We isolated a novel influenza virus A(H1N2) strain from a pig on January 13, 2012, in Gunma Prefecture, Japan. Phylogenetic analysis showed that the strain was a novel type of double-reassortant virus derived from the swine influenza virus strains H1N1pdm09 and H1N2, which were prevalent in Gunma at that time.     

甲型流感病毒SwH1N1血凝素蛋白HA1真核表达载体的构建与表达

目的构建甲型流感病毒SwH1N1血凝素蛋白(HA1)的真核表达载体,并表达其编码蛋白HA1。方法利用RT-PCR技术扩增HA1基因,克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T-HA1质粒。双酶切pMD18-T-HA1与PXJ40后回收并连接回收片段,构建PXJ40-HA1真核表达载体,鉴定后转染293T细胞,用免疫印迹法(western-bolt)鉴定重组HA1蛋白的表达。结果实验成功构建HA1基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达出分子量为40kD的重组蛋白。结论成功构建的甲型流感病毒SwH1N1HA1基因的真核表达载体,可为后期的流感快速检测及基因工程疫苗的制备奠定良好的基础。