英文文摘

1．肋软骨细胞和牙髓干细胞及FGF9的共培养对组织工程软骨形成和骨化的影响（英）／DaiJ…／／Biomaterials．-2012,33（31）．-7699—7711． 牙髓干细胞（DPSCs）来源于颅神经嵴细胞,具有多向分化潜能,是颅面组织再生的重要种子细胞。与关节软骨细胞相比,肋软骨细胞（CCs）容易获取,增殖扩增能力更强。CCs具有软骨形成能力,能够有效地修复关节缺损。     

预培养比格犬干细胞的牙本质片复合牙周膜细胞膜片裸鼠体内移植研究

目的：探索预培养干细胞的牙本质片复合牙周膜细胞（PDLCs）膜片对牙周组织再生的可行性。方法：将比格犬牙根制成牙本质片,其上接种骨髓基质干细胞（BMSCs）或PDLCs,应用成骨诱导液或α-MEM培养液培养,电镜观察牙本质片表面细胞附着与基质形成情况。并构建细胞／牙片／膜片／煅烧陶瓷牛骨CBB复合体,裸鼠体内皮下移植,8周后取材HE染色观察。结果：预培养干细胞的牙本质片,电镜检测到表面有足够的细胞和细胞外基质分布。裸鼠体内结果显示牙本质片接种BMSCs或PDLCs经成骨诱导组可见类牙骨质基质形成,但无类牙周膜纤维,未经成骨诱导组无类牙骨质基质形成,但有明显的类牙周膜纤维样组织形成;空白组无类牙骨质基质及类牙周膜纤维样组织形成。结论：在牙本质片上预培养BMSCs或PDLCs,复合PDLC膜片和CBB后异位移植,有利于类牙周膜纤维的形成。加入成骨诱导液诱导,有利于基质的形成。     

基质细胞衍生因子-1与口腔组织修复

基质细胞衍生因子-1（SDF-1）因具有定向趋化多种细胞的特性,有望被应用于口腔组织修复再生领域。当机体组织器官发生损伤时,受损部位的细胞分泌表达SDF-1并募集骨髓源性的干细胞或祖细胞向损伤部位迁移,从而促进损伤部位新血管形成和组织细胞的代偿修复。本文就近年来有关SDF-1在口腔组织修复中的作用和应用研究做一综述。     

舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株醛脱氢酶高表达亚群细胞生物学特性的研究

目的检测醛脱氢酶（ALDH）在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中的表达,研究ALDH高表达（ALDHhig）亚群细胞的生物学特性。方法采用流式细胞仪检测Tca8113细胞株中ALDH的表达;分选ALDHhig与ALDHlow亚群细胞,体外培养观察其增殖、分化及在无血清培养基中的成球能力;利用抑制消减杂交（SSH）技术筛选ADLHhig亚群细胞高表达基因。结果舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中仅有1.3%的细胞高表达ADLH;分选出的ADLHhig肿瘤细胞增殖能力高于ALDHlow细胞和未分选的肿瘤细胞;随着培养时间的延长,体外培养的ALDHhig细胞比例逐渐下降至分选前水平;ALDHhig亚群细胞能够在无血清培养基中悬浮生长形成肿瘤球,且高表达干细胞相关基因。结论舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中有一小群细胞高表达ALDH,具有干细胞的生物学特性;ALDH可能是舌鳞状细胞癌干细胞的标志物之一。     

猪牙胚细胞条件培养基可诱导人牙髓干细胞的牙向分化

牙源性干细胞的分化受其所处的局部微环境所调控。以往研究表明牙胚细胞条件培养基可诱导牙髓干细胞向成牙的细胞谱系分化。然而，采用人牙胚细胞条件培养基诱导在实际操作中不可行，所以推测异种的牙胚细胞条件培养基可能对人牙髓干细胞产生类似的效应。本研究采用猪的牙胚细胞条件培养基（pTGC-cM）来诱导人牙髓干细胞，评估其诱导前后的细胞形态学、集落形成、体外多向分化、与成牙相关的蛋白和基因表达、体内分化能力等。     

英文文摘

1．人血清在体内外可促进人牙髓干细胞的成骨分化（英）／Pisciotta A…／／PLoS One．-2012，7（11）．-e50542 人牙髓干细胞（hDPSCs）是以细胞为基础的组织工程研究中很有前途的种子细胞来源，易获取，对病人侵袭性低，细胞可自我更新和多向分化。目前，间充质干细胞体外培养通常添加含胎牛血清（FCS）的培养基。FCS 含大量生长因子，可促进细胞在塑料表面的附着、增殖和分化。然而，动物源性的 FCS 可能传播疾病，甚至导致异体免疫反应。因此， FCS 的替代物可避免 FCS 的上述不足。我们的研究证实人血清（HS）是 FCS 合适的代替者，将其加入培养基中可提高hDPSCs的增殖率，并促进其在体外的成骨分化。将 hDPSCs在体外 HS 培养基中预分化培养10 d后植入大鼠的颅骨区，能够修复临界大小颅骨缺损。这些研究表明，hDPSCs 体外培养及分化过程中，HS 是 FCS 的有效代替品。     

舌鳞状细胞癌中肿瘤干细胞对放疗敏感性体外研究

目的：探讨舌鳞状细胞癌中肿瘤干细胞对放疗的敏感性。方法：采用磁珠分选技术、细胞免疫荧光染色和细胞增殖活性试验等方法,研究经分选后得到的肿瘤干细胞和阴性细胞在放疗后细胞增殖活性方面的差异。结果：细胞免疫荧光结果显示,CD133和 CD44在分选出来的 CD133＋/CD44＋细胞高表达,而在 CD133-/CD44-细胞基本不表达。CCK8实验结果显示,分选出来的 CD133＋/CD44＋细胞较 CD133-/CD44-细胞在放疗的作用下具有更高的细胞相对增殖率。结论：经磁珠分选出来的舌癌肿瘤干细胞（CD133＋/CD44＋细胞）更能耐受放疗的作用。     

舌鳞状细胞癌中肿瘤干细胞耐药性研究

目的：探讨舌鳞状细胞癌中肿瘤干细胞对化疗的耐受作用。方法：用磁珠分选技术、细胞免疫荧光染色和药物毒性试验等方法,研究经分选后得到的肿瘤干细胞和阴性细胞在化疗药物作用后其细胞增殖活性的差异。结果：细胞免疫荧光结果显示,CD133和CD44在分选出来的CD133^＋／CD44^＋细胞高表达而在CD133^-／CD44^-细胞基本不表达。CCK8实验结果显示分选出来的CD133^＋／CD44^＋细胞较CD133^-／CD44^-细胞在化疗药物作用下有更高的细胞成活率。结论：经磁珠分选出来的舌癌肿瘤干细胞（CD133^＋／CD44^＋细胞）更能耐受化疗药物的作用。     

不同细胞外基质对人胚胎干细胞体外定向诱导分化为角化细胞的影响

目的：探讨不同细胞外基质对胚胎干细胞源性角化细胞生长、增殖及分化的影响。方法：体外培养的人类胚胎干细胞经RA、BMP4、AA诱导后,分别接种到以Matrigel（A组）、Ⅰ型胶原（B组）、Ⅳ型胶原（C组）、明胶（D组）包被的培养皿中培养,E组为无包被培养皿作为空白对照组。通过倒置显微镜观察细胞生长情况;用CCK8法检测细胞的增殖能力;并通过Western Blot检测CK14表达量,测定各组灰度值。结果：A组生长的E－KCs细胞最快到达生长对数期,增殖能力最强,且细胞集落形成率最高,与其他组比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）;A组与正常口腔黏膜组（阳性对照）CK14表达量条带灰度值差异无统计学意义,但与B、C、D组比较差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：Matrigel与其他3种细胞外基质相比能显著提高人类胚胎干细胞向角化细胞诱导分化的能力,并能促进E－KCs生长和增殖。     

外周血来源的间充质干细胞与内皮祖细胞体外构建血管化组织的研究

目的利用两种外周血细胞在体外构建出血管样组织。方法从外周血提取内皮祖细胞与间充质干细胞并鉴定,在纤维蛋白凝胶中以不同的密度培养,在显微镜下观察至第7天。结果兔外周血可以提取出内皮祖细胞与间充质干细胞,内皮祖细胞与间充质干细胞的比值为100万/m L:200万/m L时可以在体外形成血管样结构。结论外周血中可以提取出特定细胞并在体外共培养形成血管样组织。     

甲壳胺对老年人牙周膜细胞分化功能的影响

目的：探讨甲壳胺（Chi）对老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。方法：将不同浓度的Chi（0．05g／L，0．1g／L，0．2g／L）分别与体外培养的老年人牙周膜细胞一同培养后，采用酶动力学方法和放射免疫法检测老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌水平，并与青年人牙周膜细胞进行比较。结果：①在老年组，Chi（0．05g／L）组细胞裂解液中和Chi（0．1g／L）及Chi（0．2g／L）组细胞培养液中碱性磷酸酶活性明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，甲壳胺各组无论是细胞裂解液还是培养液中碱性磷酸酶活性青年组均明显高于老年组（P〈0．05，P〈0．01）。②在老年组，只有21d时的Chi（0．1g／L）组、Chi（0．2g／L）组骨钙素分泌高于对照组（P〈0．05）。在青年组，7d时Chi（0．05g／L）和Chi（0．1g／L）组、14d时Chi（0．1g／L）组及21d时Chi（0．1g／L）组骨钙素分泌均明显强于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，7d和21d时Chi（0．05g／L）、（0．1g／L）组骨钙素分泌青年组明显高于老年组。结论：一定浓度的甲壳胺不论对青年人还是老年人的牙周膜细胞向成骨样细胞转化和成骨能力均有明显的增强作用，对青年人牙周膜细胞的作用程度强于老年人。     

rhBMP-2微球温敏型凝胶剂的药剂学特征及对人PDLCs增殖的影响

目的：观察rhBMP-2微球温敏型凝胶的药剂学特征及对人牙周膜细胞（PDLCs）增殖的影响。方法：采用W／O／W型乳化溶剂挥发法以聚乳酸-乙醇酸共聚物（PLGA）为材料制备空白微球,通过吸附法制备rhBMP-2载药微球。以单甲基聚乙二醇-羟基乙酸共聚物（MPEG—PLGA）为材料制备凝胶,采用夹心酶联免疫吸附法测定释药速度。采用四唑盐比色法（MTT）及酶动力学法测定细胞增殖和碱性磷酸酶活性。结果：rhBMP-2微球呈规则球形,表面多孔,粒径为（19．6±2.3）μm,微球凝胶剂相转变温度为36℃左右,微球凝胶剂体外释药曲线符合Higachi方程,28d的累积释放度为80％。rhBMP-2微球凝胶剂能明显促进牙周膜细胞的增殖和提高ALP活性,随时间推移在第10d时rhBMP微球凝胶促PDLCs生长的作用明显强于rhBMP溶液。结论：rhBMP-2微球温敏型凝胶剂具有明显的缓释特征,与溶液剂相比促进PDLCs增殖作用更持久。     

磷［~（32）P］玻璃微球联合加热或平阳霉素的体外抗肿瘤作用

采用集落形成试验，观察了磷（＾３２Ｐ）玻璃微球（＾３２Ｐ－ＧＭＳ）联合加热（水浴，４３℃，２０ｍｉｎ）或化疗药物（平阳霉素，终浓度０．０８μｇ／ｍｌ）对人舌磷状细胞癌，Ｔｃａ８１１３的作用。结果表明：＾３１Ｐ－ＧＭＳ联合加热有协同增效作用（Ｅ／Ｏ值为１．６３），联合平阳霉素有相加作用（Ｅ／Ｏ值１．０１）。     

脉冲超声及电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞体外成软骨分化过程中细胞外基质溢出的影响

目的 研究脉冲超声以及脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞微球体外成软骨分化中细胞外基质向培养基中溢出的影响。方法 将干细胞微球在成软骨培养基中进行培养,分为无刺激组（N组）、脉冲超声（100、150、200 mW·cm^-2）刺激组和脉冲电磁场（1、2、5 mT）刺激组。2周后采用酶联免疫吸附测定法检测培养液中Ⅱ型胶原和糖胺聚糖的质量浓度。结果 脉冲超声刺激组细胞外基质分泌较N组增多（P<0.05）,但3个刺激组间的差异无统计学意义（P>0.05）;脉冲电磁场组对Ⅱ型胶原分泌无明显影响（P>0.05）,1 mT组对糖胺聚糖的分泌无明显影响（P>0.05）,2 mT和5 mT组糖胺聚糖的分泌减少（P<0.05）。结论 在促进干细胞成软骨分化的过程中,特定参数的脉冲电磁场可能起到防止增多的细胞外基质向组织外扩散溢出的作用。     

头颈部鳞状细胞癌干细胞的研究进展

肿瘤干细胞假说认为,只有一小部分细胞可维持肿瘤的生长,这一小部分细胞被称为“肿瘤干细胞”,其他的大部分细胞只有有限的或根本没有生长潜能。在头颈部鳞状细胞癌在内的多种肿瘤中已经初步鉴定和分离出了肿瘤干细胞。本文就CD44阳性细胞、醛脱氢酶阳性细胞、侧群细胞和八聚体4／nanog／CD133阳性细胞等与头颈部鳞状细胞癌干细胞相关的研究现状作一综述。     

纤维结合蛋白对牙周韧带细胞中细胞外基质合成的影响

为了进一步探讨纤维结合蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）促进牙周新附着形成的机理，采用免疫荧光染色及定量分析等方法，观察了外源性ＦＮ对牙周韧带细胞（ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｃｅｌｓ，ＰＤＬ－ｃｅｌｓ）中几种细胞外基质蛋白合成的影响。结果显示，适量外源性ＦＮ（０．０４４μｍｏｌ／Ｌ）可显著促进ＰＤＬ细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成，而抑制内源性ＦＮ的合成，差异均有高度显著性。本研究表明，在牙周组织愈合时，应用外源性ＦＮ，有利于合成新胶原而促使牙周新附着形成     

人根尖牙乳头细胞分离、培养的研究

目的：探讨采用组织块法从根尖牙乳头中分离AP细胞,为牙体及牙髓再生研究奠定基础。方法：前磨牙根尖分离牙乳头;组织块法分离AP细胞,计算集落形成率;免疫荧光、流式细胞仪检测细胞标记物。结果：细胞集落形成率为10～20colonies/103细胞;细胞贴壁生长梭形或多角形核浆比大;原代细胞生长慢,传代后细胞生长快,可传12代以上;细胞表达间质干细胞标记物,AP细胞还表达神经干细胞标记物CD24、Nestin;不表达DSP。结论：组织块法能有效分离牙乳头细胞,AP细胞不同于牙髓干细胞（CD24-）。     

纳米珍珠粉对小鼠骨髓间充质干细胞活性影响研究

目的    探讨纳米珍珠粉（nano-pearl powder，NPP）对小鼠骨髓间充质干细胞活性的影响。方法    研究于2016年8月至2017年3月在中南大学湘雅医学院附属海口医院实验中心进行。 将NPP以100、300、500 μg/mL的质量浓度与小鼠骨髓间充质干细胞共培养24 h（NPP组），用CCK8法测定吸光度值，计算细胞相对增殖率，评定其细胞毒性级别；用Annexin-FITC/PI法检测细胞凋亡率。两者综合评定NPP对小鼠骨髓间充质干细胞活性的影响，并与相同质量浓度纳米羟基磷灰石（nano-hydroxyapatite，NHA）（NHA组）进行对比。结果    NPP与NHA细胞毒性检测均合格，NPP在100 μg/mL时细胞相对增殖率最高；NPP组细胞凋亡率均低于NHA组，在质量浓度为100和500 μg/mL时的差异有统计学意义（P < 0.01）。结论    NPP细胞毒性检测合格，其对小鼠骨髓间充质干细胞活性的影响优于NHA。     

人CD146＋牙周膜干细胞的分选及其干细胞特性的鉴定

目的：通过酶消化法及流式细胞分选技术分选CD146＋牙周膜干细胞（Periodontal ligament cells,PDLCs）,探讨其干细胞特性。方法：采用流式细胞技术从人牙周膜细胞中分选CD146＋PDLCs,并对其进行免疫组化染色（角蛋白、波形丝蛋白及Stro-1）,成骨、成脂诱导分化及克隆形成实验鉴定其干细胞特性。结果：CD146＋PDLCs表达波形丝蛋白及Stro-1,具有成骨及成脂分化能力,体外培养能形成细胞克隆。结论：以CD146为分选指标的流式细胞分选技术可作为牙周膜干细胞筛选的方法。     

人牙周膜干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的实验研究

目的体外定向诱导人牙周膜干细胞分化为神经元样细胞,探讨人牙周膜干细胞的多向分化潜能。方法体外分离、培养人牙周膜细胞,待细胞达一定量后用有限稀释法进行克隆化培养,筛选鉴定牙周膜干细胞（PDLSC）,用含10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的预诱导培养液诱导培养24 h,然后换用含5 mmol/L β-巯基乙醇（β-ME）的诱导培养液诱导培养6 h,光镜下观察诱导细胞形态学的改变,免疫荧光、RT-PCR等方法检测鼠抗人神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。同时以未诱导细胞为对照。结果体外诱导培养6 h细胞即发生形态学改变,可看到典型的神经元样细胞;免疫荧光、RT-PCR检测诱导细胞表达神经元细胞特异性标志NSE、NF,未诱导细胞无表达。结论人牙周膜干细胞在体外可以诱导分化为神经元样细胞,具有多向分化的潜能。