山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:终浓度为10、20和40 μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期.结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期.     

黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

目的:分析黄芩苷(BA)对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用的机制.方法:无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色,不同终浓度的BA预孵育4 h,加入刀豆蛋白(ConA)或佛波醇酯类多克隆刺激剂PDB和离子霉素Ion进行刺激,以流式细胞术(FCM)结合荧光抗体染色技术检测黄芩苷对CD3+ T细胞增殖率的影响;以碘化丙锭(PI)染色结合FCM分析其细胞周期分布.结果:BA(10、15、20、25 ms/L)对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+ T细胞增殖均有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈浓度依赖性.对细胞周期分析表明,BA能使ConA或PDB和Ion刺激的小鼠淋巴细胞停滞于G0/G1 期、S期,阻止其进入G2/M期,阻止作用随浓度的增加而增强.结论:BA对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+ T细胞增殖有明显抑制作用,能够将淋巴细胞阻滞在G1/G1 期和S期,表现出明显的周期特异性.本研究提示黄芩苷有发展成免疫抑制剂的潜力.     

橙皮素对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的:研究橙皮素(Hes)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并探讨其作用机制.方法:用ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度Hes与T细胞共培养,利用荧光标记抗体双染色结合流式细胞术(FCM),检测各药物浓度Hes对ConA诱导的小鼠T细胞表达早期活化抗原CD69的作用;以酶标仪结合MTT比色法检测Hes药物的细胞毒性和对ConA诱导的小鼠淋巴结来源的淋巴细胞增殖的影响;以羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色结合FCM检测Hes对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的作用,并应用ModFit软件分析其增殖指数(PI).结果:淋巴细胞的存活率说明0.2 mL/L DMSO和25～75 μmol/L范围内的Hes对小鼠T淋巴细胞无毒副作用;MTT法、CFDA-SE法、双抗体染色法检测Hes对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞的增殖和活化结果均显示,终浓度为25、50、75 μmol/L的Hes对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞的增殖和活化均有抑制作用且呈剂量依赖关系.结论:有望通过进一步的研究将Hes发展为免疫抑制药物.     

芹菜素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的抑制作用

研究芹菜素(apigenin,AP)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,探讨其作用机制,以及将其开发为免疫抑制药物的可能。无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L)的芹菜素预孵育4 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导T细胞活化和增殖,并用MTT法检测该药物浓度对T细胞的毒性作用。荧光标记抗体双染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞表达早期、中期和晚期活化抗原CD69、CD25和CD71的影响;以二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(carboxyfluoresceindiacetate-succinim-idyl ester,CFDA-SE)染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,并应用ModFit软件分析其增殖指数(proliferation index,PI)。结果显示,25~200μmol/L AP对ConA诱导的T细胞CD69、CD25的表达有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖关系;25μmol/L和50μmol/L的AP抑制CD71的表达,但高浓度(大于100μmol/L)才有显著抑制作用(P<0.01)。各浓度AP对ConA诱导的T细胞增殖均有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖关系。表明在一定浓度范围内,AP可显著抑制ConA诱导的小鼠T细胞体外活化及增殖,有望通过进一步研究将其开发成免疫抑制药物。     

TMB-8对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的: 研究胞内钙离子释放阻断剂8- (N,N-二乙胺) 辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯（TMB-8）对刀豆蛋白A（Con A）介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法: 以Con A作为T细胞活化、增殖的刺激剂，以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A（CsA）联合作用于该系统，用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术，分析TMB-8在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色分析细胞周期的分布情况。结果: Con A作用6 h后，CD69+ T细胞的比率为（74.88±1.88）%，TMB-8在终浓度10、20、40 μmol/L下均抑制Con A介导的T细胞CD69表达（P<0.01），其中，40 μmol/L的TMB-8为（52.55±1.54）%, 达到最高抑制率。培养48 h和72 h，Con A刺激下的PI值分别为1.24±0.01和2.05±0.07，TMB-8从5 μmol/L起均抑制Con A介导的淋巴细胞增殖（P<0.01），以40 μmol/L的效果最为显著，PI值分别为1.01±0.01和1.10±0.01；10 μmol/L的TMB-8与25 μg/L的环孢菌素A（CsA）具有明显的协同抑制作用（P<0.01）。细胞周期分析显示，培养48 h的TMB-8从10 μmol/L起即显著抑制S期（P<0.01）。结论: TMB-8可明显抑制Con A介导下的T细胞早期活化及增殖，并具T细胞周期的S期阻滞作用。     

喜树碱对小鼠T淋巴细胞活化、增殖以及细胞周期的影响

目的： 研究喜树碱（CPT）对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响。方法：以ConA刺激小鼠T淋巴细胞，建立小鼠T淋巴细胞活化、增殖的模型，以不同浓度的CPT作用于该模型，流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术分析CPT 在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期的分布情况。 结果： ConA作用6 h后流式细胞术分析显示CD69的表达率为（58.88±0.55）%，不同浓度的CPT组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）CD69的表达率分别为（55.48±0.98）%、（54.67±1.05）%、（50.40±0.82）%、（42.47±1.32）%，均可明显抑制CD69的表达(P<0.01)；ConA刺激48 h后流式细胞术分析显示，不同浓度的 CPT 组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）的增殖指数（PI）明显低于对照组(P<0.05)；细胞周期分析显示刺激48 h后不同浓度的CPT组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）均出现明显的凋亡峰（apoptosis peak，AP），sub-G1期、G₀/G₁期细胞的比率明显高于ConA刺激组(P<0.01)。结论：CPT可明显抑制ConA刺激的T淋巴细胞的活化、增殖，同时使淋巴细胞阻滞于G₀/G₁期。     

银杏内酯B对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖与凋亡的影响

目的银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本文研究GB对小鼠T淋巴细胞活化、增殖及凋亡3大体外行为的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据。方法分离小鼠淋巴细胞,培养前以不同浓度的GB预孵;以刀豆蛋白A(Con A)诱导细胞的活化与增殖,以荧光抗体双色标记(anti-CD3 mAb-PE/anti-CD69 mAb-FITC、anti-CD3 mAb-PE/anti-CD25 mAb-FITC)结合流式细胞术分别检测T淋巴细胞早、中期活化标志--表面抗原CD69与CD25的表达,以活体荧光染料CFDA-SE标记结合流式细胞术检测细胞增殖并用MTT法佐证;以地塞米松(Dex)诱导细胞的凋亡,以荧光染料双色标记[DiOC6(3)/PI]结合流式细胞术区别凋亡、死亡与活细胞群。结果 Con A刺激后6 h和24 h,T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分别大量表达,Con A刺激后48 h活化的T细胞增殖至第4代,而经终浓度为5、10、20μmol/L GB在Con A刺激前对细胞进行4 h预孵处理可以显著下调T细胞表面抗原CD69、CD25的表达并能有效抑制细胞增殖。Dex诱导后12 h细胞凋亡和死亡群显著增大,而经同样的GB预孵处理可以在一定程度上抑制细胞的凋亡进程,对细胞凋亡显示出一定的保护作用。结论 GB能有效抑制小鼠T淋巴细胞的活化与增殖,并且对细胞凋亡起到一定的保护作用,凭借GB对T细胞此3大行为出色的调节作用,理应将其作为天然的免疫抑制剂候选者进行更深入的研究。     

淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法以MTT法检测T细胞药物毒性;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果ICA在终浓度0.3、1.5、3.0μmol·L-1时对于CD69的表达以及淋巴细胞48和72h增殖,均有明显的抑制作用(P<0.01)。结论ICA能抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性,即在最高浓度3.0μmol·L-1时抑制率最强。     

双黄连粉针剂对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的:探讨双黄连粉针剂(以下简称SHL)对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖的影响.方法:MTT法检测SHL对小鼠淋巴细胞的毒副作用;双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析SHL对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下体外活化抗原CD69表达的影响;MTT法以及羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术分析SHL对小鼠T淋巴细胞在ConA诱导下体外增殖的影响.结果:SHL对小鼠淋巴结来源的淋巴细胞毒副作用非常小;终质量浓度为60、 80、 100、 120 mg/L的SHL对ConA刺激下的T淋巴细胞体外活化抗原CD69表达具有抑制作用(P<0.01);MTT法和CFDA-SE染色法都显示, 终质量浓度为60、 80、 100、 120 mg/L的SHL对ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用具有明显的抑制作用(P<0.01).结论:SHL对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖具有明显的抑制作用.     

米诺环素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

研究米诺环素(MNC)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。以ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度的MNC与T细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为10、25和50μmol/L的MNC显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的71.20%±1.08%,分别降低为64.43%±1.39%、53.34%±1.26%和33.65%±1.91%;CFDA-SE染色结果显示,培养48 h和72 h的ConA组T细胞的增殖指数(PI)分别为1.57±0.03和2.06±0.02,各浓度的MNC对ConA刺激的T细胞增殖具有明显的抑制作用,以50μmol/L的MNC抑制作用最明显,48 h和72 h的PI分别为1.01±0.02和1.03±0.01,与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。MNC能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。具有独立于其抗菌活性的抗炎作用。     

白藜芦醇对小鼠T细胞活化、增殖及细胞因子分泌的影响

目的：研究白藜芦醇（RSV）对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响，为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法：无菌分离小鼠淋巴结细胞．加入不同浓度的RSV预先孵育1h，用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用^3H—TdR掺入法检测RSV对T细胞增殖的影响；用RT-PCR检测IL-2及IFN-γ mRNA的表达；用胞内细胞因子染色法分析IL-2和IFN-γ的分泌。结果：RSV能抑制T细胞增殖，也能在mRNA水平及蛋向水平上抑制IL-2及IFN-γ的分泌。结论：RSV对T细胞的免疫抑制作用，可能与其抑制T细胞的活化、增殖和细胞因子的分泌有关。     

连翘提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的:分析连翘(FS)提取物对小鼠淋巴结T细胞的体外活化与增殖的影响,初步探讨其免疫抑制作用机制.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)染色结合流式细胞术(FCM),检测小鼠T淋巴细胞的表达的活化抗原CD69、CD25、CD71的表达情况;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,以FCM分析FS对淋巴细胞体外增殖的影响.结果:终浓度为40、80、160 mg/L的FS均对ConA刺激诱导的T细胞CD69、CD25和CD71的表达有降低作用(P＜0.05).CFDA-SE染色分析显示,上述浓度的FS对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用(P＜0.05).结论:FS对ConA诱导的T细胞早、中、后期活化和体外增殖有抑制作用.     

p38 MAPK的活化促进小鼠T细胞增殖

研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在小鼠T细胞增殖中的作用。以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,通过流式细胞术分析p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580和p38 MAPK的激活剂茴香霉素在不同剂量下对ConA刺激的T细胞增殖作用,并测定其增殖的相关指数;采用碘化丙锭染色分析SB203580和茴香霉素对ConA或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠T细胞周期变化的影响。结果显示:0.5μmol/L～15.0μmol/L SB203580对ConA诱导的T细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖关系(r=-0.97,P<0.01);该浓度范围的SB203580能够呈明显剂量依赖性地阻止ConA或PDB加Ion诱导的T细胞进入S期或G2/M期(r_s=-0.98,P<0.01;r_(G2)/M=-0.97,P<0.01)。茴香霉素浓度在0.01～0.5ng/ml时能够增强ConA对T细胞的促增殖作用,并能够促进ConA诱导的T细胞进入G2/M期,促进PDB加Ion诱导的T细胞进入S期。以上提示p38信号通路的活化在促进小鼠T细胞增殖中可能起着重要作用。     

可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

目的:研究可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白在小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期中的作用.方法:选择有效剂量为500 μg/L Jagged 1/Fc嵌合蛋白(Jagged 1/Fc),以活体染料/羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激下评价淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析Jagged 1/Fc对淋巴细胞增殖的作用;采用碘化丙锭染色检测Jagged 1/Fc对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期变化的影响;利用荧光标记的mAb双染技术观察Jagged 1/Fc对T细胞早期和中期活化标志CD69和CD25表达的影响.结果:Jagged 1/Fc对ConA刺激或非刺激的CD3 细胞CD69和CD25的表达无明显影响,对ConA或PDB加Ion刺激或非刺激的淋巴细胞的增殖指数也无明显影响,导致非刺激的淋巴细胞sub-G0期细胞百分比增高,S期细胞百分比降低,但并不影响PDB加Ion诱导的淋巴细胞各期的变化.结论:这些结果提示500 μg/L Jagged 1/Fc对小鼠淋巴细胞活化和增殖无明显作用,对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期也无明显影响,但能促进未受刺激的淋巴细胞凋亡,使细胞停滞于GO/G1期,阻止其进入S期.     

Hydroxyurea exerts an anti-proliferative effect on T cells but has no direct impact on cellular activation

Hydroxyurea (HU) is a cytostatic drug which has been used as an anti-HIV agent due mainly to its synergistic activity when combined with certain anti-retrovirals. In addition, HU might have a beneficial effect on parameters involved in the pathogenesis of HIV infection, such as immune activation. To test this hypothesis, the effect of HU on T cell proliferation and T cell activation, as well as the potential association between these two phenomena, were examined in an in vitro model. HU exerted a dose-dependent anti-proliferative effect on T cells, and modulated the expression of different activation markers. In cells exposed to HU, expression of CD25 and CD38 diminished in a dose-dependent manner, whereas expression of CD69 increased. However, when the expression of these markers was examined separately on proliferating and non-proliferating lymphocytes, HU did not exert any significant effect. Thus, the effect of HU on T cell activation is not direct and seems to be mediated through its effect on T cell proliferation.