土震素B类似物的合成及其抑制乙酰胆碱酯酶作用的研究

 目的　探索土震素B结构类似物对乙酰胆碱酯酶抑制作用的构效关系。方法　以强效乙酰胆碱酯酶抑制剂土震素B为先导化合物 ,对天然产物酸枣仁皂苷元进行结构简化和改造 ,使其形成A/B环与土震素B一致的立体结构 ,并再引入土震素系列化合物中的芳基结构。用Elisa法测试了所合成的化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。结果　合成了两个系列的土震素B的类似物,其中化合物7c和15在10^-4mol·L^-1条件下分别显示出乙酰胆碱酯酶26%和32%的抑制活性。结论　初步探明了此类具有与土震素B的A/B环的立体化学一致的2-烯-1-酮A环结构以及含芳基酯基药效团的化合物对乙酰胆碱酯酶有一定的抑制活性。     

双氯芬酸选择性抑制表达环氧合酶-2的肝癌细胞的增殖

 目的检测体外培养的人肝细胞癌HepG2,Hep3B细胞和正常肝细胞系QSG7701细胞内环氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,观察环氧酶抑制剂双氯芬酸(diclofenac)对上述细胞增殖的作用,并检测前列腺素E₂(PGE₂)对双氯芬酸作用的影响,以探讨双氯芬酸抗增殖作用与细胞内COX-2的关系。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2 mRNA的表达水平,免疫印迹技术检测细胞内蛋白水平,cellcounting kit-8(CCK-8)细胞计数法测定细胞增殖活性。结果肝细胞癌HepG2和Hep3B细胞均高表达COX-2 mRNA和COX-2蛋白,正常肝细胞系QSG7701微弱表达COX-2。10～200μmol·L^-1的双氯芬酸浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖(P<0.01),作用72h的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为76.41和35.21μmol·L^-1。双氯芬酸对QSG7701的抑制作用较弱,IC₅₀值为170.23μmol·L^-1。20μmol·L^-1 PGE2与50μmol·L^-1双氯芬酸共同孵育能显著削弱后者抗HepG2和Hep3B细胞增殖的作用(P<0.01)。结论双氯芬酸通过抑制COX-2活性和PGE₂的生成,特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞的增殖。     

补骨脂抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶和抗菌活性成分研究

从补骨脂中分离得到12个化合物,分别为异补骨脂素(1),补骨脂素(2),8-甲氧基补骨脂素(3),补骨脂定(4),补骨脂宁(5),补骨脂甲素(6),大豆苷元(7),补骨脂乙素(8),补骨脂二氢黄酮甲醚(9),新补骨脂素异黄酮(10),大豆苷(11)和紫云英苷(12)。采用体外清除DPPH和ABTS自由基以及α-葡萄糖苷酶抑制活性对化合物1~4,6,7,11,12抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性进行筛选,利用K-B法筛选化合物5,8~10的抗菌活性。结果显示,补骨脂定具有清除DPPH自由基的能力(IC₅₀ 43.85 mg·L^-1);补骨脂定,补骨脂甲素,大豆苷,大豆苷元和紫云英苷具有清除ABTS自由基的能力 (IC₅₀分别为1.32,4.97,10.47,34.22,31.27 mg·L^-1);补骨脂定,补骨脂甲素和大豆苷元显示出强的α-葡萄糖苷酶抑制活性 (IC₅₀分别为40.74,45.73,49.44 mg·L^-1);补骨脂乙素和新补骨脂异黄酮均有明显的抑制SA,MRSA,ESBLs-SA的作用 (MIC分别为0.781 3,1.562 5,0.781 25 μg·disc^-1和6.25,6.25,6.25 μg·disc^-1)。     

雷公藤内酯醇抑制脂多糖诱导的PC-12细胞COX-2的表达

 目的　了解雷公藤内酯醇(TP)对PC-12细胞增殖和表达环氧化酶-2(COX-2)及合成前列腺素E₂ (PGE₂ )的影响 ,探讨TP应用于痴呆治疗的可能机制。方法　采用神经生长因子 (NGF)诱导培养PC-12细胞 ,用不同浓度的TP(0,0.28×10^-6,2.8×10^-6,2.8×10^-6mol·L^-1)预处理后 ,加或不加脂多糖(LPS),分别用氚-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)掺入法、竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶联免疫法及蛋白免疫印迹 (Western-blot)法检测PC-12细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE² 的水平、细胞COX-2mRNA及蛋白表达水平。同时提取各组细胞蛋白 ,测定其核转录因子 (NF-κB)活性。结果　TP对LPS诱导的PC-12细胞的COX-2mRNA ,蛋白表达 [空白对照与不同浓度下分别为[(0.34±0.12 )×10^-6,(1.92±0.26)×10^-6,(1.78±0.32)×10^-6,(1.14±0.22)×10^-6,(0.48±0.14 )×10^-6mol·L^-1,P <0.01]及PGE₂ 的合成 [分别为(2.28±0.32)×10^-6,(32.86±6.23)×10^-6,(31.28±5.44)×10^-6,(18.43±3.92)×10^-6,(4.18±1.79)×10^-6mol·L^-1,P<0.01]具有不同程度的抑制作用,与TP浓度(0～28×10^-6mol·L^-1)呈明显正相关性(分别为r=0.94和r=0.92),且对LPS激活的PC-12细胞的核转录因子NF-κB活性有明显的抑制作用[分别为(0.16±0.08)×10^-6,(1.39±0.18)×10^-6,(1.09±0.14)×10^-6,(0.52±0.15)×10^-6,(0.28±0.09)×10^-6mol·L^-1,P<1.01]。实验未观察到TP对PC-12细胞增殖的影响。结论TP可显著抑制LPS诱导的PC-12细胞COX-2细胞COX-2的表达及其产物PGE₂的合成,这种作用可能通过TP抑制PC-12细胞核转录因子NF-κB活性而实现。     

NBT光照法测定聚（2-乙基-2-NFDE6唑啉）化超氧化物歧化酶模拟物脂质体的活性

 目的 建立聚（2-乙基-2-NFDE6唑啉）[poly(2-ethyl-2-oxazoline),PEOZ]修饰超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）模拟物脂质体的活性测定方法。方法 以薄膜分散法制备聚（2-乙基-2-NFDE6唑啉）化超氧化物歧化酶模拟物脂质体,利用氮蓝四唑（NBT）光照法对超氧化物歧化酶模拟物及聚（2-乙基-2-NFDE6唑啉）化超氧化物歧化酶模拟物脂质体的活性进行测定。结果 超氧化物歧化酶模拟物的抑制率曲线方程为IR%=33.421lnρ+49.715（r²=0.999 2）,IC₅₀为1.008 6×10^-3 μmol·L^-1;聚（2-乙基-2-NFDE6唑啉）化超氧化物歧化酶模拟物脂质体的抑制率曲线方程IR%=33.521lnρ+49.671（r²=0.999 1）,IC₅₀为1.009 9×10^-3 μmol·L^-1。结论 氮蓝四唑光照法操作简单、稳定可靠、经济实用,可用于超氧化物歧化酶模拟物聚（2-乙基-2-NFDE6唑啉）脂质体的活性测定;经脂质体包裹后超氧化物歧化酶模拟物的活性未发生变化。     

野花椒中一个新的木脂素二聚体

为了研究野花椒的抗炎活性成分,通过各种柱色谱方法对野花椒进行成分分离,用波谱法鉴定其成分的结构,并且用对脂多糖诱导RAW 264.7细胞产生一氧化氮的抑制效果评价其成分的抗炎活性。从野花椒中分离鉴定了4个化合物,分别为isozanthpodocarpin B(1), kobusin(2), (+)-辛夷脂素(3)和表桉叶明(4),同时,化合物1具有一定的抑制一氧化氮生成活性,IC₅₀为14.49 μmol·L^-1,其中化合物1为新的木脂素二聚体。     

3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

 目的观察3,6二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,寻找CK2的抑制剂。方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度3,6二羟黄酮对CK2活性的影响,并通过酶的动力学分析其抑制作用机制。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ³²P]ATP的[³²P]放射活度来检测。结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致。3,6二羟黄酮对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC₅₀为1393μmol·L^-1;进一步分析,它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数K_i值为10.67μmol·L^-1;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数K_i值为17.34μmol·L^-1。结论3,6二羟黄酮是一种重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。重组人CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

长穗桑中的α-葡萄糖苷酶抑制剂成分研究

 目的 研究长穗桑中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化学成分。方法 采用各种离子交换树脂对长穗桑水提取物进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱分析手段鉴定化合物结构。结果 从长穗桑水提取物中分离到11个化合物,其中7个多羟基生物碱类化合物,2个酰胺类化合物,1个氨基酸以及甜菜碱。分别鉴定为1-deoxynojirimycin (1),fagomine (2),3-epi-fagomine (3),1,4-dideoxy-1,4-imino-D-arabinitol (4),2-O-α-D-galactopyranosyl-1-deoxynojirimycin (5),4-O-β-D-glucopyranosyl-fagomine (6),1,4-dideoxy-1,4-imino-(2-O-β-D-glucopyranosyl)-D-arabinitol (7),(2S)-citrullinamide (8),grateloupinamide (9),天冬氨酸(10),甜菜碱(11)。化合物1~10分别进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选。结论 化合物1~11均为首次从该植物中分离得到。4个多羟基生物碱(1,5~7)以及1个酰胺类化合物(9)有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中化合物1的IC₅₀为0.07 μmol·L^-1;化合物5的IC₅₀为0.39 μmol·L^-1,与阳性对照阿卡波糖(acarbose,IC₅₀=0.52 μmol·L^-1)相当;化合物6,7,9的IC₅₀值在1~5 μmol·L^-1。     

ε-葡萄素抑制bFGF诱导血管新生作用分析

目的： 葡萄素（viniferin）是一类寡聚茋类物质,存在于葡萄等植物中,本文探讨ε-葡萄素（ε-viniferin）对血管新生是否具有抑制作用。 方法： MTT比色法测定ECV304细胞密度5×10⁴/mL条件下ε-viniferin浓度分别为0,10,20,30,40,50 μmol·L^-1时24 h和48 h的增殖抑制率;体外模型以0.5,1,5,10 mol·L^-1 ε-葡萄素的含药血清组和空白血清组培养碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的人脐静脉内皮细胞系ECV304,用细胞划痕法和重建基底膜法测定药物对细胞迁移作用和内皮细胞拟管腔形成的影响;体内模型,用含5,10 mol·L^-1 ε-葡萄素的基质胶,Matrigel plug 法测定药物对bFGF诱导体内新生血管的影响;通过酶联反应法（ELISA法）检测5,10,20 mol·L^-1药物处理24 h的黑色素瘤细胞系（B16F10）培养上清液中血管内皮生长因子（VEGF）和bFGF浓度。 结果： 20 μmol·L^-1以上的ε-葡萄素能有效抑制ECV304细胞的增殖,0.5~10 μmol·L^-1的ε-葡萄素能抑制bFGF诱导的ECV304细胞迁移,在1~10 μmol·L^-1ε-葡萄素的作用下均可抑制bFGF诱导的ECV304细胞管腔形成,5~10 μmol·L^-1ε-葡萄素在体内Matrigel Plus模型也表现出抑制血管新生的活性。5~20 μmol·L^-1的ε-葡萄素能抑制黑色素瘤细胞B16F10细胞分泌bFGF和VEGF,其抑制能力强于紫檀茋。 结论： ε-葡萄素可以抑制血管的新生。     

芦丁-硒配合物的合成及抗肿瘤活性研究

 目的合成芦丁-硒配合物,并探讨其抗肿瘤活性。方法用芦丁跟氯化氧硒反应合成芦丁-硒配合物,采用四氮唑盐(MTT)法考察芦丁-硒配合物对CNE2(鼻咽癌)、HEP2(喉癌)、BEL-7404(肝癌)、KB(口腔上皮癌)及HELA(宫颈癌)的IC₅₀;同时考察了芦丁的抗肿瘤活性。结果目标化合物结构经紫外、红外、LC-MS及¹H-NMR确认。初步药理筛选结果显示:芦丁-硒配合物对CNE2、HEP2、BEL-7404、KB及HELA有显著的抑制作用,IC₅₀分别为26.78,0.42,8.37,1.89和0.35 mg·L^-1,芦丁则表现为促进CNE2、HEP2和BEL-7404细胞的体外增殖。结论合成出的芦丁-硒配合物具有较强的抗肿瘤活性,有关配合物的研究有待进一步深入。     

藏药中乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选

目的:从8种藏药中筛选对乙酰胆碱酯酶具有高抑制活性的提取物。方法:药材经乙醇提取、酸碱处理、氯仿和正丁醇萃取后,得到氯仿部分和正丁醇部分。各部分用薄层色谱生物自显影法初步筛选其乙酰胆碱酯酶抑制活性,再用改良的Ellman法进一步测定抑制率及半数抑制浓度(IC50)。结果:8种藏药生物碱提取物的氯仿部分有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中止泻木Holarrhena antidysenterica、秦艽花Gentiana straminea、山莨菪Anisodus tanguticus抑制活性最强,IC50分别为6.32,28.20,34.80 mg·L-1。正丁醇部分中,山莨菪的抑制活性显著,IC50为51.70 mg·L-1。结论:止泻木、秦艽花、山莨菪具有显著的乙酰胆碱酯酶抑制活性,说明其含有抑制乙酰胆碱酯酶的成分,为进一步跟踪分离活性成分奠定基础。     

山茱萸环烯醚萜苷在体外对胆碱酯酶活性的影响

该研究的目的是观察山茱萸环烯醚萜苷(CIG)在体外试验中对胆碱酯酶的作用,以探讨该药在治疗阿尔茨海默病(AD)中的作用机制.使用人红细胞、大鼠全脑匀浆和人血浆作为酶源,采用生物化学方法测定乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)的活性,检测CIG对胆碱酯酶的影响.结果显示,CIG对人红细胞及大鼠全脑匀浆AChE活性具有抑制作用,50％抑制率(IC50)分别为1.6,3.3g·L-1,并且CIG对AChE的抑制是可逆的.CIG对人血浆BuChE也具有抑制作用,IC502.9 g·L-1.实验结果表明,CIG在体外试验中对AChE和BuChE具有一定的抑制作用,这可能为GIG治疗AD的作用机制之一.     

延胡索水提物及左旋延胡索乙素抗吗啡条件性位置偏爱效应机制研究和效果比较

目的:研究延胡索水提物及左旋延胡索乙素(L-THP)抗吗啡条件性位置偏爱(CPP)效应的机制并进行效果比较.方法:吗啡剂量递增注射10d建立大鼠吗啡CPP模型(起始剂量10 mg·kg-1,每天递增10 mg·kg-1,至注射10d时100mg·kg-1),延胡索水提液2,1,0.5 g·kg-1(分别含L-THP 0.153,0.077,0.038 mg),以及L-THP 3.76,1.88,0.94 mg·kg-1灌胃治疗6d后,检测大鼠CPP效应,用比色法和免疫组化分别测定其中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC)神经环路各脑区内谷氨酸递质含量和NR2B的表达.结果:与生理盐水治疗组比较,延胡索2,1g·kg-1及L-THP 3.76,1.88 mg·kg-1组大鼠在白箱(吗啡伴药箱)停留时间明显减少(P＜0.05或P＜0.01),同时VTA,NAc和PFC内谷氨酸含量及NR2B表达均显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:延胡索与L-THP均能加速吗啡CPP效应的消退,逆转VTA-NAc-PFC神经环路中升高的谷氨酸含量和下调NR2B的表达,可能是二者加速吗啡CPP效应消退的机制之一;含1倍量L-THP单体的延胡索中药不但在抑制吗啡CPP行为学方面相当于单独应用约24倍L-THP单体的效果,而且,在对VTA-NAc-PFC环路中谷氨酸递质和NR2B的药理作用机制方面也具有很大的相似性.     

天麻素对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用及其机制

目的:研究天麻素对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用并探讨其可能的机制。方法:记录去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的离体大鼠主动脉环张力变化,观察天麻素的舒血管作用及不同工具药对其作用的影响。结果:天麻素对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol.L-1)和KCl(6×10-2mol.L-1)引起的去内皮和内皮完整胸主动脉环的收缩均有舒张作用,二者没有显著差别;L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol.L-1)、亚甲蓝(MB,1×10-5mol.L-1)、吲哚美辛(INDO,1×10-5mol.L-1)并不能抑制天麻素对胸主动脉环的舒张作用;钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol.L-1)、四乙基胺(TEA,1×10-3 mol.L-1)、格列苯脲(glibenclamide,1×10-5mol.L-1)、BaCl2(1×10-4mol.L-1)均能抑制天麻素对血管环的舒张作用;在无钙环境下,预孵育天麻素对去甲肾上腺素收缩有明显抑制作用。结论:天麻素有浓度依赖性的血管舒张作用,此作用不依赖血管内皮,与钾离子通道及抑制血管平滑肌细胞内质网储存钙的释放和外钙内流有关系。     

三种冬凌草素和毛萼乙素体外对人血管生成的影响

 目的研究4种二萜化合物(冬凌草甲素、信阳冬凌草甲素、冬凌草乙素、毛萼乙素,分别简称为SH-A、SX-A、SH-B、ER-B)在体外对血管生成的影响,为发现新的抗肿瘤药物提供线索。方法采用人脐静脉内皮细胞ECV304增殖、迁移试验及小管形成试验研究了4种化合物对血管生成的影响。结果4种二萜化合物对ECV304(人脐静脉内皮细胞系)的增殖、迁移、小管形成具有不同程度的抑制作用,IC₅₀值分别在1.47×10^-5～3.76×10^-5mol·L^-1(抑制作用SX-A>SH-A>SH-B>ER-B)、8.01×10^-7～5.41×10^-6mol·L^-1(抑制作用SH-B最强,而SH-A、SX-A和ER-B相仿)和4.25×10^-7～2.80×10^-6mol·L^-1内(抑制作用SH-B>SH-A>SX-A>ER-B),抑制血管迁移、小管形成的IC₅₀值均低于抑制增殖的IC₅₀。结论4种二萜化合物在体外对人脐静脉内皮细胞系血管形成均有不同程度的抑制作用,值得作为抗肿瘤药物的候选物进一步深入研究。     

Catechol alkenyls from Semecarpus anacardium: acetylcholinesterase inhibition and binding mode predictions

Ethnopharmacological relevance

The fruits of Semecarpus anacardium L. f. (Anacardiaceae) are used in Ayurvedic medicine and also in Iranian Traditional Medicine for various indications, among those for retarding and treatment of dementia.

Aim of the study

The severity of Alzheimer's disease obviously correlates with a cholinergic deficit. In a screening for acetylcholinesterase (AChE) inhibitory activity, an extract from the fruit resin of Semecarpus anacardium was among the most active ones. Thus, the aim of this study was to isolate the active compounds and to investigate them in detail. Their binding mode to the active site of AChE was investigated by in silico docking experiments.

Materials and methods

From a dichloromethane extract in an activity-guided fractionation the active compounds were isolated under use of different chromatographic techniques. Their structures were unambiguously identified by one and two-dimensional ¹H and ¹³C NMR spectroscopy and mass spectrometry and their cholinesterase inhibitory activities were determined by a microplate assay. In order to compare the 3D active sites of AChE from Torpedo californica (TcAChE) and from Electrophorus electricus (EeAChE), three files from the Protein Data Bank (PDB) were used and for docking experiments, GOLD 3.1 software was employed. The concentrations of active compounds in the extract and the fruits were determined by HPLC analysis.

Results

The active compounds were determined as 1′,2′-dihydroxy-3′-pentadec-8-enylbenzene (A) and 1′,2′-dihydroxy-3′-pentadeca-8,11-dienylbenzene (B). Their IC₅₀ values in an in vitro assay on AChE inhibition were determined as 12 and 34 μg/mL, respectively, while they were not active in the inhibition of butyrylcholinesterase (BChE). In silico docking experiments showed a similar bioactivity for compounds A and B. The concentration of compounds A and B in the fruits was 1.85% and 1.88%, respectively.

Conclusion

In the search for the active principle of the fruit resin of Semecarpus anacardium, compounds A and B were identified as two selective inhibitors for AChE versus BChE.     

药用植物中乙酰胆碱酯酶抑制活性和抗氧化活性的筛选

目的:对24种药用植物醇提物的乙酰胆碱酯酶抑制活性和抗氧化活性进行筛选研究。方法:70%乙醇回流提取植物粗提物;目标粗提物采用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取,得到氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水部位;乙酰胆碱酯酶抑制活性测定采用改良的Ellman法和薄层色谱(TLC)生物自显影法相结合的方法;抗氧化活性采用清除DPPH自由基能力进行评价。结果:结合改良Ellman法和TLC生物自显影法对24种植物的醇提物的抗乙酰胆碱酯酶抑制活性进行评价,结果表明红毛七、金不换、飞龙掌血、白花映山红和八角枫5种植物粗提物具有显著的抑制活性,在终浓度为1 g.L-1时,其抑制率分别为(88.72±1.47)%,(82.25±1.32)%,(77.71±1.61)%,(77.00±1.38)%,(75.22±1.28)%,其清除DPPH自由基IC50分别为153.75,74.95,50.00,10.87,24.40 mg.L-1。在这5种植物粗提物不同萃取部位中,红毛七和金不换氯仿部位对乙酰胆碱酯酶抑制活性最强,其IC50为33.97,38.79 mg.L-1,其清除DPPH自由基的IC50为302.95,79.45 mg.L-1。结论:金不换和红毛七粗提物氯仿部位具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性和抗氧化活性,可进行进一步的追踪分离研究。     

马桑内酯对大鼠脑突触膜Ca2+,Mg2+-ATP酶作用的研究

 目的:探讨致痫剂马桑内酯(coriaria lactone)对大鼠大脑皮层突触膜Cat²⁺ , Mg²⁺ -ATP酶的作用。方法:酶底 物动力学分析(Hanes作图法)。结果:马桑内酯对Ca²⁺ , Mg²⁺-ATP酶具有抑制作用，在1.2 x 10^-9～6.0 X 10^-7mol · L^-1范围内，随浓度增加其抑制作用增强。此作用有明显的时效关系，抑制作用随作用时间延长而增强。酶底物动力学分析表明，马桑内酯对该酶的抑制属非竞争性抑制。结论:马桑内酯是Ca²⁺ , Mg²⁺-ATP酶的强力抑制剂。本文对Ca²⁺ , Mg²⁺-ATP酶与胞内游离钙之间的关系及该酶抑制在癫痫发病机制中的意义进行了讨论。