多药耐药基因在膀胱移行细胞癌中的表达

应用RT－PCR技术检测多药耐药基因（mdr1）在16例膀优移行细胞癌（TCC）和8例正常膀优粘膜中的表达。68．75％（11／16）TCC和50％（4／8）正常膀脱粘膜在167hp处显示mdr1基因持异性扩增片段，mdr1基因表达与TCC病理分期、分级明显相关。结果表明：正常膀胱粘膜存在着一定的抗药性，TCC是mdr1基因较高表达的肿瘤之一，mdr1基因高表达可能在TCC耐药中起重要作用。mdr1mRNA水平的检测有助于临床上化疗方案的选择及可作为预测TCC进展的一项指标。     

大肠癌耐药基因的表达及临床意义

目的：为研究大肠癌多药耐药基因（MDR-1）表达与临床耐药的关系。方法：应用逆转录-多聚酶链式反应技术（RT-PCR）和免疫细胞化学染色法检测了31例大肠癌患（初治原发癌19例；复治转移癌12例）的MDR-1mRNA水平和多药耐药蛋白（P-170）的表达，并对两种方法进行了比较。结果：初治原发性大肠癌19例中MDR-1mRNA基因阳性表达15.79%,P-170阳性为15.7%；而复发转移癌12例中，MDR-1mRNA基因阳性表达66.67%。而P-170阳性为58.33%。结论：复发性转移癌比初治原发癌具有更普遍的抗药性，且主要是获得性抗药，MDR-1的基因和蛋白质两种检测方法具有一定的一致性。以RT-PCR方法具有更强的敏感性 ，MDR-1基因表达可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标。     

影响巢式RT-PCR反应效果的因素分析

目的 :探讨癌基因研究中影响巢式反转录聚合酶链式反应 (巢式 RT- PCR)扩增效果的因素。方法 :以巢式RT- PCR法检测 5 5例大肠癌患者门静脉血和 5 4例卵巢癌患者及 10例妇科良性肿瘤患者骨髓中细胞角化蛋白基因 - 19(CK- 19) m RNA的表达 ,并对实验方法进行了改良和优化。结果 :大肠癌中有 5 4.5 %检得 CK- 19阳性 ,卵巢癌中有 6 3.0 %检得 CK- 19阳性 ,10例妇科良性肿瘤无 CK- 19表达。结论 :经过上述三方面措施改良后的巢式 RT- PCR能够用来检测恶性肿瘤患者 CK- 19m RNA的表达 ,因而成为监测这类肿瘤患者造血及血液循环系中癌细胞分布情况的一种有效的分子生物学手段     

GCS和MDR-1基因在CML中的表达及意义

目的 观察慢性粒细胞白血病(CML)患者葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)和多药耐药1(MDR-1)基因的表达变化及其意义.方法 建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测0CS、MDR-1和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的方法,检测CML初发组25例和急变组25例患者外周血GCS、MDR-1基因表达水平,以GAPDH为内参基因,两组基因表达水平的差异采用△△CT相对定量法.结果 外周血GCS水平CML急变组较初发组显著增高(4.84倍,P＜0.01),MDR-1表达CML急变组9例阳性(36%),CML初发组均为阴性.结论 GCS和MDR-1基因高表达在CML急变患者的多药耐药中起着重要作用,其水平检测可为CML急变预后判断的新指标.     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在肝癌细胞7721中对多药耐药的调节作用

目的采用2种方法构建人肝癌多药耐药细胞模型,封闭其细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)(CD147)的表达,研究其生物学特性。探讨EMMPRIN在肝癌细胞中对多药耐药的作用。方法应用人肝癌细胞株7721,采用浓度梯度诱导法和高浓度阿霉素间接诱导法构建人肝癌多药耐药细胞模型(7721/Adm1和7721/Adm2细胞),应用RNAi技术封闭7721/Adm1和7721/Adm2细胞EMMPRIN的表达,构建封闭EMMPRIN的人肝癌多药耐药细胞7721/Adm1/RNAi和7721/Adm2/RNAi细胞。用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞技术检测EMMPRIN、细胞表面多药耐药基因(MDR-1)mRNA及其表达产物的表达水平。噻唑蓝(MTT)法检测上述各细胞的多药耐药性。结果 2种多药耐药模型可用于肝癌多药耐药研究。多药耐药细胞7721/Adm1和7721/Adm2中EMMPRIN,MDR-1的表达水平较7721细胞均升高,且增加了其对多种化疗药物的耐药性。而利用RNAi封闭EMMPRIN的7721/Adm1和7721/Adm2细胞可致MDR-1表达降低,增加了其对化疗药物的敏感性。结论 EMMPRIN是参与肝癌细胞7721多药耐药且为调节多药耐药的重要分子。     

S6K1和4EBP-1蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的探讨S6K1和4EBP-1蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义。方法使用免疫印迹法(Western-blot)检测S6K1和4EBP-1蛋白在80例膀胱尿路上皮癌及20例正常膀胱黏膜中的表达。结果膀胱尿路上皮癌中S6K1蛋白表达率(64%)高于正常膀胱黏膜(10%),4EBP-1蛋白表达率(71%)高于正常膀胱黏膜(15%)。S6K1和4EBP-1蛋白在低分级膀胱癌中的表达率显著高于高分级膀胱癌中的表达率。复发肿瘤的S6K1和4EBP-1蛋白表达率高于初发肿瘤。而S6K1和4EBP-1蛋白表达率在不同性别患者、不同肿瘤分期和是否吸烟患者中差异无统计学意义。结论膀胱尿路上皮癌中S6K1和4EBP-1蛋白与膀胱癌的分级和复发相关,可能成为肿瘤诊断治疗的新靶点。     

MDRI的siRNA干扰口腔Tca8ll3/DDP细胞表达的研究

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)对口腔鳞癌多药耐药基因mdr1(MDRI)及其表达产物P-糖蛋白(permeability-glyco-protein,P-gp)的干扰作用。方法体外构建针对MDR1的小干扰RNA,将其转染至人舌癌耐药细胞系Tca8113/DDP,采用RT-PCR法检测转染前后MDR1 m RNA的表达;采用免疫细胞化学技术比较转染前后P-gp的表达;采用MTT法检测转染前后肿瘤耐药细胞对顺铂的敏感性。结果 Tca8113/DDP细胞经MDR1-si RNA转染后48 h的转染率达最高,为71.3%;转染后mdr1 m RNA表达较对照组显著降低,降低率为68.32%,转染48 h后P-gp的表达较对照组明显降低;si RNA可显著提高Tca8113/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转其耐药性,耐药倍数为2.05。结论 si RNA可以明显干扰口腔鳞癌MDR1及相应蛋白P-gp的表达。     

膀胱移行细胞癌P-糖蛋白与Survivin、Fas表达及其相关性研究

目的：探讨膀胱移行细胞癌中P-糖蛋白（P-GP）与Survivin、Fas表达的相互关系及其与膀胱癌生物学行为之间的相关性。方法：应用免疫组织化学方法检测64例膀胱移行细胞癌和12例正常膀胱黏膜中P-GP、Survivin、Fas的表达。结果：膀胱移行细胞癌中P-GP、Survivin的表达阳性率高于正常黏膜，与膀胱癌的分级有关（P〈0．01）；而Fas在膀胱正常黏膜中表达高于移行细胞癌，差异有统计学意义（P〈0．01）。复发性膀胱癌P—GP的阳性表达率高于初发膀胱癌（P〈0．01）。膀胱移行细胞癌P—GP、Survivin的表达与Fas呈负相关，而P—GP与Survivin表达无关。结论：膀胱移行细胞癌的多药耐药P-GP与Fas的表达密切相关，与Survivin的表达无关。本研究为采用MDR逆转剂或Fas干扰剂以增加膀胱移行细胞癌的化疗敏感性提供实验依据。     

MDR-1与GST-π在柔红霉素诱导Kasumi-1细胞耐药中的作用

目的探讨柔红霉素诱导M2型急性髓系白血病(AML-M2)细胞株Kasumi-1耐药性与多药耐药基因-1(MDR-1)和谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)表达的相关性。方法长期间歇性小剂量递增法诱导Kasumi-1对柔红霉素耐药,四氮唑蓝(MTT)法检测细胞耐药程度;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测MDR-1和GST-π基因表达变化情况;Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)和GST-π蛋白表达的变化情况。结果诱导后Kasumi-1对柔红霉素耐药倍数为(3.9±0.6)倍,耐药细胞与非耐药细胞MDR-1表达无明显差别,耐药细胞GST-π表达明显高于非耐药细胞(P<0.01)。Western blot检测结果与RT-RCR一致,两种细胞P-gp表达情况无明显差异,耐药株GST-π蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论 AML-M2细胞株Kasumi-1对柔红霉素耐药与MDR-1表达无关,与GST-π表达有关,抑制GST-π在Kasumi-1细胞中的表达可能成为逆转柔红霉素耐药的靶点。     

多药耐药基因1和CD_(34)在急性白血病的表达及相关性的临床研究

目的 :初步探讨多药耐药基因 1(mdr1)和 CD34 在急性白血病 (AL)中的表达及二者在多药耐药 (MDR)中的相关性。方法 :对 5 9例初发 AL患者治疗前及完全缓解 (CR)后 ,应用流式细胞仪 (FCM)测定 CD34 表达情况及半定量多聚酶链反应 (RT- PCR)测定 mdr1m RNA水平。结果 :m dr1、CD34 分别在急性髓性白血病 (AML)与急性淋巴细胞性白血病 (AL L)的表达无差异。mdr1+与 CD+ 34 呈正相关。COX回归分析 :AL 患者 CD34 、m dr1过度表达均对疗效有影响 ,而 m dr1表达更具判断预后价值。经 L og rank检验 ,mdr1+组与 mdrl-组、CD+ 34 组与 CD34 -组 CR率有显著性差异。结论 :mdrl和 CD34 均为 CR率低、疗效差、预后不良的重要因素。     

The role of the MDR1 (P-glycoprotein) gene in multidrug resistance in vitro and in vivo.

This review describes the studies that address the role of the MDR1 (P-glycoprotein) gene in multidrug resistance in cell lines selected in vitro and in clinical cancer. Molecular genetic studies have demonstrated that expression of P-glycoprotein, an efflux pump acting at diverse lipophilic compounds, is sufficient to provide resistance to a large number of lipophilic drugs in tissue culture. The MDR1 gene is expressed in several normal human tissues associated with secretory or barrier functions and in some bone marrow and blood cells, including hematopoietic progenitor cells. MDR1 expression in clinical cancer is often found in untreated tumors of different types. Several studies showed a correlation between MDR1 expression and tumor resistance to combination chemotherapy. MDR1 expression in untreated tumors may reflect their origin from MDR1-positive normal cells or cellular changes associated with neoplastic transformation or progression. MDR1 expression in some types of cancer may be a marker of a more aggressive subpopulation of tumor cells, possessing multiple mechanisms for resistance to treatment.     

Inhibitory effect of curcumin onMDR1 gene expression in patient leukemic cells

When patients with cancers are treated with chemotherapeutic agents a long time, some of the cancer cells develop the multidrug resistance (MDR) phenotype. MDR cancer cells are characterized by the overexpression of multidrug resistance1(MDR1) gene which encodes P-glycoprotein (Pgp), a surface protein of tumor cells that functions to produce an excessive efflux and thereby an insufficient intracellular concentration of chemotherapeutic agents. A variety of studies have sought potent MDR modulators to decrease MDR1 gene expression in cancer cells. Our previous study has shown that curcumin exhibits characteristics of a MDR modulator in KB-V1 multidrug-resistant cells. The aim of this study was to further investigate the effect of curcumin on MDR1 gene expression in patient leukemic cells. The leukemic cells were collected from 78 childhood leukemia patients admitted at Maharaj Nakorn Chiang Mai Hospital, Chiang Mai, Thailand, in the period from July 2003 to February 2005. There were 61 cases of acute lymphoblastic leukemia (ALL), 14 cases of acute myeloblastic leukemia (AML), and 3 cases of chronic myelocytic leukemia (CML). There were 47 males and 31 females ranging from 1 to 15 years old. Bone marrows were collected. The leukemic cells were separated and cultured in the presence or absence of 10 microM curcumin for 48 hours. MDR1 mRNA levels were determined by RT-PCR. It was found that curcumin reduced MDR1 gene expression in the cells from 33 patients (42%). Curcumin affected the MDR1 gene expression in 5 of 11 relapsed cases (45%), 10 of 26 cases of drug maintenance (38%), 7 of 18 cases of completed treatment (39%), and 11 of 23 cases of new patients (48%). The expression levels of MDR1 gene in leukemic patient cells as compared to that of KB-V1 cells were classified as low level (1-20%) in 5 of 20 cases (25%), medium level (21-60%) in 14 of 32 cases (44%), and high level (61-100%) in 14 of 20 cases (70%). In summary, curcumin decreased MDR1 mRNA level in patient leukemic cells, especially in high level of MDR1 gene groups. Thus, curcumin treatment may provide a lead for clinical treatment of leukemia patients in the future.     

膀胱癌ras,MDR1基因表达及其相互关系的实验研究

应用免疫组化技术对３２例膀胱癌ｒａｓ基因，ＭＤＲ１基因的表达及其相互关系进行了研究。结果表明：３２例膀胱癌ｒａｓ基因，ＭＤＲ１基因的阳性表达率分别为３７．５％，６２．５％，初发膀胱癌ｒａｓ基因，ＭＤＲ１基因的阳性表达率分别为３５％，５０％，而化疗后复发的膀胱癌ｒａｓ基因、ＭＤＲ１基因的阳性表达率为４１．６％、８３．３％。随着肿瘤病理分级的升高，ｒａｓ基因及ＭＤＲ１基因的阳性表达率也随之增高，结果证     

贲门癌组织中多药耐药基因和多药耐药相关蛋白基因表达的临床研究

目的 了解多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)在贲门癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)。观察46侧贲门癌及癌旁组织中MDR1和MRP的表达。结果 癌组织中MDR1和MRP表达的阳性率分别为63%和50%,均高于癌旁组织(P<0.05);贲门癌术前化疗者MDR1 mRNA和MRP mRNA表达水平显著高于未化疗者(P<0.05);中低分化肿瘤MDR1和MRP两基因mRNA表达水平高于高分化肿瘤(P<0.05)。结论 贲门癌组织中具有内源和获得性耐药性;MDR1和MRP表达与肿瘤的TNM分期无关,其高表达状态可预示肿瘤组织的分化不良。     

急性白血病多药耐药性检测的临床应用

目的 探讨急性白血病（急白）患者多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达的临床意义放应用。方法 对３５例初治急白患者采用Ｓ－Ｐ免疫组化染以法检测ＭＤＲ１表达产物,地部分患者进行动态观察并配合药敏测定,了解急白患者化疗前后耐药情况的变化。结果 本组３５例ＭＤＲ,表达阳性者１４例（４０％）,其中急性淋巴细胞白血病（急淋）９便,急性晨淋巴细胞白血病（急非淋）５例,两者无显著差异,１４例ＭＤＲ１表达阳性者,达完全缓解     

小细胞肺癌多药耐药基因的检测及临床应用研究

目的：探讨多药耐药集团（MDR1）在小细胞肺癌化疗中的作用和地位，方法：采用逆转录－多聚酶链式反应技术（RT／PCR）和免疫细胞化学染色法，检测了32例（初治原发癌21例和复治转移癌11例）小细胞肺癌患者血液中的MDR1mRNA水平和多药耐药蛋白（P－170）的表达，并对两种方法进行了比较。结果：初治的原发癌MDR1基因阳性表达率为14．29％，P－170蛋白阳性表达为14．27％，复治转移癌的MDR1基因阳性表达率为72．73％，P－170蛋白阳性表达为63．64％（P＜0．01），有显著性差异。MDR1的基因和蛋白两种而检测方法具有一定的一致性，以RT／PTR方法具有更强的敏感性，结论：复治转移癌组比初治组具有更普遍的抗药性，且主要是获得性抗药，MDR1基因表达可作为临床合理地制定化疗方案，预测化疗效果的重要参考指标。     

急性髓性白血病肺耐药相关蛋白(LRP)的表达和临床意义

目的 :探讨肺耐药相关蛋白 (LRP)基因在急性髓性白血病细胞中的表达及其在临床耐药、预后判断方面的意义。方法 :应用半定量RT PCR技术 ,检测了 6 2例AML患者和 10例正常对照者LRP基因的表达 ,并随访了 10例患者治疗前后LRP基因的表达情况。结果 :M3的LRP基因表达水平和阳性率明显低于M4 、M5(P <0 .0 5 )。难治复发组LRP基因表达水平与正常对照组相比较明显增高 (P <0 .0 1)。初治组中LRP- 患者的完全缓解率明显高于LRP+患者(P <0 .0 5 )。 10例随访患者中LRP阴性者治疗效果和生存期均优于LRP阳性者。结论 :LRP过度表达与临床耐药及临床疗效相关     

胃癌细胞的体外药敏试验与多药耐药基因表达的关系

目的:分析胃癌细胞的体外药敏试验与多药耐药基因的表达之间的相关性。方法:采用MTT法测定化疗药物对胃癌肿瘤细胞的敏感性;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定胃癌组织中多药耐药基因(MDR1,MRP1,ABCG2,Topo-2mRNA)的表达水平。结果:单药组抑制率最高为5-FU(36.51%),联合用药组抑制率最高为DCF(56.80%);多药耐药基因(MDR1,MRP1,ABCG2,Topo-2mRNA在胃癌组织中的阳性率分别为33.3%,42.9%,52.4%,66.7%。结论:体外药敏试验测定并结合多药耐药基因表达的相关性可提高预测肿瘤的敏感性或发现其耐药性,为临床实现个体化治疗提供参考依据。     

Independent regulation of apical and basolateral drug transporter expression and function in placental trophoblasts by cytokines, steroids, and growth factors.

Placental ATP binding cassette (ABC) transporters protect placental and fetal tissues by effluxing xenobiotics and endogenous metabolites. We have investigated the effects of cytokines and survival/growth factors, implicated in various placental pathologies, on ABC transporter expression and function in primary placental trophoblast cells. Treatment of primary term trophoblasts in vitro with tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) or interleukin (IL)-1beta decreased mRNA and protein expression of apical transporters ABCB1/multidrug resistance gene product 1 (MDR1) and ABCG2/breast cancer resistance protein (BCRP) protein by 40 to 50% (P < 0.05). In contrast, IL-6 increased mRNA and protein expression of the basolateral transporter ABCB4/MDR3 (P < 0.05), whereas ABCC1/MRP1 expression was unaltered. Pretreatment of trophoblasts with TNF-alpha over 48 h resulted in significantly decreased BCRP efflux activity (increased mitoxantrone accumulation) with minimal changes in MDR1/3 activity. Epidermal growth factor (EGF) and insulin-like growth factor II, on the other hand, significantly increased BCRP expression at the mRNA and protein level (P < 0.05); EGF treatment also increased BCRP functional activity. Estradiol stimulated BCRP, MDR1, and MDR3 mRNA and protein expression by 40 to 60% and increased MDR1/3 functional activity (P < 0.05). Progesterone had modest positive effects on MRP1 mRNA and MDR1 protein expression (P < 0.05). In conclusion, this study shows that proinflammatory cytokines, sex steroids, and growth factors exert independent effects on expression of apical and basolateral placental ABC transporters in primary trophoblast. Such changes could alter placental drug disposition, increase fetal susceptibility to toxic xenobiotics, and impact on placental viability and function.