罗米地辛对卵巢癌细胞顺铂耐药及PD-L1表达的影响

目的 探究组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛调控卵巢癌细胞顺铂耐药及PD-L1表达的作用。方法 体外培养顺铂耐药卵巢癌细胞系COC1/DDP,用CCK-8实验检测细胞活力和顺铂半数抑制质量浓度(IC_(50)),用流式细胞术检测细胞凋亡和PD-L1的表达水平,用实时荧光PCR实验检测细胞PD-L1和STAT3的表达水平,用Western blot检测组蛋白乙酰化水平。结果 与Control组相比,Romidepsin组的卵巢癌细胞活力显著下降(P<0.05),IC_(50)值降低,细胞早期凋亡率和晚期凋亡率显著升高(P=0.004、P=0.003),PD-L1 mRNA的表达水平和蛋白表达水平显著升高(P=0.012 7),组蛋白H3乙酰化水平显著升高(P<0.000 1),STAT3的表达水平显著降低(P=0.027 4)。结论 Romidepsin可能通过调控组蛋白乙酰化水平和STAT3的表达水平逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性,促进顺铂诱导细胞凋亡,提高PD-L1的表达水平。     

miR-218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的实验研究

目的研究miR-218抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂耐药性的影响及可能机制。方法实时定量PCR检测A2780及顺铂耐药细胞株A2780/DDP中miR-218的表达,转染miR-218 inhibitors和mimics改变A2780及A2780/DDP细胞中miR-218的表达,MTT法检测转染前后细胞对顺铂的敏感性,并分析Wnt2B蛋白表达的改变。结果与A2780细胞相比,miR-218在A2780/DDP中的表达明显降低。A2780细胞转染miR-218 inhibitors后,细胞对顺铂的敏感性降低,Wnt2B蛋白表达明显增强;而A2780/DDP细胞转染miR-218mimics后,细胞对顺铂的敏感性增强,Wnt2B蛋白表达明显减少。结论 miR-218可能通过靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞A2780对顺铂的耐药性。     

姜黄素增加HepG2细胞对顺铂敏感性的作用及机制研究

目的　探讨姜黄素对肝癌细胞株HepG2 对顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法　采用不同浓度姜黄素（0、2.5、5、7.5、10 μM）及顺铂（10、20、40、80 μM）单用或联用处理HepG2 细胞株后,通过MTT 检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Real-time PCR 技术检测Survivin、Cyto-C、Bcl2、Bax 的基因表达情况;western blot 检测Survivin、Cyto-C、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax 的蛋白表达。结果　姜黄素以浓度依赖性方式抑制HepG2细胞株Survivin 的mRNA 表达和蛋白表达（P<0.05）;姜黄素联合顺铂处理的HepG2 细胞增殖抑制率及细胞凋亡率较单用顺铂处理均明显增加（P<0.05）;姜黄素联合顺铂可显著抑制Survivin 的蛋白表达,降低Bcl-2/Bax 比例,增加Cyto-C、cleaved caspase-3 蛋白表达（P<0.05）。结论　姜黄素可增加HepG2 细胞对顺铂的敏感性,可能与其抑制Survivin 的表达,降低Bcl-2/Bax 比例,增加cleaved caspase-3、Cyto-C 蛋白的表达有关。     

Survivin蛋白在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:运用组织芯片技术结合免疫组化的方法分析Survivin蛋白在正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢癌组织中的表达情况,探讨Survivin蛋白在卵巢癌的发生发展、浸润转移和化疗耐药中的作用,为以Survivin作为分子治疗靶点的抗肿瘤基因治疗提供理论依据。方法:运用组织芯片技术联合免疫组化法检测27例卵巢癌、20例正常卵巢组织、30例卵巢良性肿瘤中凋亡抑制基因Survivin的表达情况,分析其与卵巢癌临床病理特征的关系,并进行临床随访分析Survivin基因与卵巢癌化疗耐药的关系。结果:①Survivin蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达显著高于卵巢良性肿瘤和正常卵巢,两两比较,Survivin在卵巢癌中的表达率与在正常卵巢组织及卵巢良性肿瘤中的表达率比较有差别,且差别有统计学意义(P<0.05);Survivin蛋白与卵巢癌的临床分期有显著相关性(P<0.05);Survivin蛋白表达与卵巢癌的组织类型、病理学分级、患者年龄、是否绝经、有无腹水形成无关(P>0.05)。②Survivin蛋白在卵巢癌化疗耐药组中高表达。结论:Survivin蛋白高表达在卵巢癌的发生发展中起重要作用,Survivin蛋白在卵巢癌以顺铂和紫杉醇为基础的化疗耐药中起重要作用。     

腺苷酸活化蛋白激酶激活与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的：研究腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激活与卵巢癌细胞对顺铂耐药的关系。方法：以不同浓度的顺铂（0,3.125,6.25,12.5,25,50 μmol·L^-1）分别作用人卵巢癌细胞SKOV3及其顺铂耐药株SKOV3/DDP 24 h,MTT法检测顺铂的抑制率;透射电镜检测SKOV3和SKOV3/DDP中的自噬体;流式细胞术检测顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP的凋亡率;Western blot法测定基础状态下及顺铂单独或联合AMPK抑制剂compound C作用时,SKOV3和SKOV3/DDP中p-AMPK、自噬微管相关蛋白轻链3（LC3-Ⅱ）和凋亡蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）的表达差异;并测定compound C联合顺铂作用SKOV3和SKOV3/DDP时的细胞活性。结果：与SKOV3比较,SKOV3/DDP对顺铂耐药（RI=6.8）;SKOV3/DDP中自噬体明显增多（P<0.01）;顺铂对SKOV3/DDP早期凋亡率（7.0±0.55）%远低于SKOV3早期凋亡率（30.5±0.34）%（P<0.01）;SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达量均增加,顺铂作用时Cleaved-PARP表达不明显;compound C与顺铂同时作用时,SKOV3/DDP中p-AMPK、LC3-Ⅱ表达减少,Cleaved-PARP表达水平显著升高,且SKOV3/DDP对顺铂敏感性增加。结论：SKOV3/DDP中p-AMPK的激活诱导卵巢癌细胞自噬可能导致其对顺铂耐药,compound C抑制p-AMPK的激活,与顺铂同时作用促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡,且增加其对顺铂的敏感性。     

天花粉蛋白、米非司酮和顺铂对卵巢癌细胞HLA-G表达的影响

目的检测HLA-G在卵巢癌细胞中表达情况,探讨天花粉蛋白、米非司酮、顺铂是否能够通过下调HLA-G的表达,达到抑制肿瘤生长的目的。方法采用RT-PCR技术检测卵巢癌卵巢浆液性囊腺癌（SKOV3）、卵巢粘液性囊腺癌（3AO）、卵巢腺癌细胞株（OVCAR3）细胞中HLA-G表达情况,选择出表达HLA-G阳性的细胞株。MTT技术观察不同浓度天花粉蛋白、米非司酮、顺铂对该细胞体外生长增殖能力的影响及对细胞中HLA-GmRNA表达水平的影响。结果卵巢癌OVCAR3细胞株表达HLA-G为阳性,SKOV3和3AO细胞表达均为阴性;天花粉蛋白、米非司酮、顺铂均能抑制OVCAR3细胞生长,并呈浓度依赖性;天花粉蛋白、米非司酮均能明显下调OVCAR3细胞中HLA-GmRNA表达水平（P〈0.05）,而顺铂对OVCAR3细胞中HLA-GmRNA表达无明显影响（P〉0.05）。结论天花粉蛋白、米非司酮和顺铂都具有抑制卵巢癌细胞生长的作用,前二者治疗卵巢癌的作用机制同顺铂有所不同,与顺铂联合应用,可能会取得更好的治疗效果。     

miR-96-5p通过下调肌动蛋白结合蛋白1促进卵巢癌干细胞顺铂耐药性

目的 探索微小核糖核酸(miRNA)miR-96-5p通过调控肌动蛋白结合蛋白1(profilin 1,PFN1)对卵巢癌干细胞(SiHa细胞)顺铂耐药的分子机制。方法 采用RT-qPCR检测miR-96-5p表达水平；将SiHa细胞置于不同浓度顺铂的培养基中，构建顺铂耐药细胞SiHa/DDP;采用Western blot检测蛋白的表达水平；双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p与PFN1的靶向关系；MTT、Transwell和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡；成球实验检测细胞的成球能力。结果 miR-96-5p在SiHa细胞中高表达，且在SiHa/DDP细胞中的表达最高；敲降miR-96-5p可抑制SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球能力并促进细胞凋亡；PFN1是miR-96-5p的潜在靶基因，过表达miR-96-5p通过下调PFN1促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球，抑制细胞凋亡。结论 miR-96-5p通过靶向调控PFN1,促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭及其干细胞成球并抑制凋亡，从而增强SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

Survivin在顺铂诱导Panc-1细胞凋亡中的作用

的 :体外观察顺铂是否具有诱导胰腺癌细胞株 (Panc-1)凋亡的作用 ,同时观察在此过程中凋亡抑制蛋白 Survivin的表达变化 ,为探讨胰腺癌的化疗耐药机制提供理论基础。方法 :用人 Panc-1株进行培养传代 ;MTT试验检测顺铂以不同浓度和不同时间对 Panc-1株生长的抑制作用 ;用 RT-PCR检测凋亡过程中 Survivin基因表达的动态变化。结果 :顺铂可明显抑制 Panc-1细胞增殖 ,其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性 ;DNA电泳可以观察到凋亡的发生 ,而且呈药物浓度、作用时间依赖关系 ;Survivin表达水平随着顺铂作用浓度的增加而下降 ,当顺铂浓度为 5 0μg/ml时下降最明显 (61% ) ;Survivin c DNA/β-actin c DNA比值与细胞增殖抑制率和细胞凋亡率呈负相关 (P<0 .0 1)。结论 :顺铂可以有效诱导 Panc-1株的细胞凋亡 ,而且 Survivin基因的抑制在顺铂诱导 Panc-1株的细胞凋亡中起重要作用。     

ERCC1基因表达与磁性Fe_3O_4纳米颗粒逆转卵巢癌细胞耐药性的关系

目的探讨磁性Fe3O4纳米颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)的耐药性的可能性及其机理。方法将SKOV3/DDP分为对照组、顺铂组、Fe3O4-MNPs组、顺铂+Fe3O4-MNPs组等4个组,流式细胞技术测定细胞凋亡、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测细胞内顺铂的含量,及RT-PCR检测切除DNA修复基因ERCC1 mRNA在SKOV3/DDP中的表达。结果在顺铂+Fe3O4-MNPs组中,细胞凋亡率及细胞内铂含量均高于顺铂组(P<0.05);ERCC1 mRNA的表达明显低于顺铂组(P<0.05)。结论Fe3O4-MNPs可以逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性,其作用可能是通过提高细胞内铂浓度、下调ERCC1表达来逆转SKOV3/DDP对顺铂的耐药。     

维生素D_3、顺铂对人卵巢癌细胞株的作用及Ki-67,Bax蛋白表达的影响

目的:观察1,25(OH)2VitD3、顺铂对人卵巢癌细胞株增殖及凋亡的作用及Ki-67,Bax蛋白表达情况。方法:MTT法检测1,25(OH)2VitD3单独及其与顺铂合用后卵巢癌细胞的抑制率、流式细胞术测定细胞周期及凋亡率、免疫组化法检测Ki-67,Bax蛋白表达情况。结果:1,25(OH)2VitD3、顺铂均可抑制HO-8910细胞的生长(P<0.01),阻滞细胞于G0/G1期并诱导HO-8910细胞凋亡(P<0.01),当两者合用时Ki-67几乎不表达,而Bax蛋白表达增强(P<0.01)。结论:1,25(OH)2VitD3与顺铂合用有协同抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

survivin基因在化疗药物诱导的肺癌细胞凋亡中的作用

目的　探讨survivin基因在化疗药物顺铂 (DDP)和足叶乙苷 (VP16 )诱导的肺癌细胞凋亡中的作用。方法　用肺腺癌A5 4 9细胞株进行培养传代 ,MTT试验检测DDP和VP16不同药物浓度对肺癌细胞生长的抑制作用 ,实验分为 :DDP、VP16和对照组。DDP和VP16组的肺癌细胞又分为高浓度和低浓度化疗药物处理组。用逆转率PCR检测sur vivin基因的表达。同时利用流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果　不同浓度VP16和DDP对肺癌细胞生长均有明显的抑制作用 ,并有浓度和时间的依赖性。化疗药物组细胞凋亡率和survivin基因表达抑制率高于对照组 ,也有时间依赖性。结论　survivin基因的抑制在DDP和VP16诱导肺癌细胞凋亡中起重要作用     

复方苦参注射液对肝癌细胞survivin表达的影响

目的:探讨经复方苦参注射液处理肝癌细胞(HepG2)后survivin mRNA表达。方法:采用MTT比色法测定肝癌细胞对氧化苦参碱的敏感性。RT-PCR检测survivin mRNA的表达。Western-blot检测survivin蛋白表达的变化。结果:复方苦参注射液处理后的第1天,3组肝癌细胞的survivin mRNA表达水平均降低;其中0.1 g.mL-1复方苦参注射液组下降了5%,0.2 g.mL-1复方苦参注射液组下降8%,0.3 g.mL-1组下降了28%。第3天,0.1 g.mL-1组和0.2 g.mL-1组HepG2细胞的survivin mRNA表达与第1天比较,分别下降10%和36%,0.3 g.mL-1组仍持续降低,为第1天的66%。0.1 g.mL-1组和0.2 g.mL-1组作用3 d后的HepG2细胞中survivin蛋白含量分别下降了3%和15%,0.3 g.mL-1组则下降到了55%。结论:复方苦参通过调控survivin mRNA在肝癌细胞的表达,可能是其抗肿瘤作用的机制。     

东北岩高兰提取物对上皮性卵巢癌细胞的凋亡作用及机制探讨

目的　探讨东北岩高兰提取物二氢查耳酮类化合物对上皮性卵巢癌细胞抗肿瘤作用,并初步探讨其作用机制。方法　选取2019年1月至2020年9月于聊城市人民医院行妇科手术治疗的上皮性卵巢癌患者10例新鲜肿瘤组织,检测上皮性卵巢癌组织中的Bcl-2、Beclin-1基因表达情况,培养上皮性卵巢癌细胞SKOV3、A2780、OVCAR3及正常卵巢细胞IOSE80,将不同浓度的东北岩高兰提取物与细胞共培养,采用CCK-8（cell counting kit-8）法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）及Western blot检测药物反应后细胞中Bcl-2、Beclin-1 mRNA及蛋白表达情况。使用统计软件SPSS 22.0、GraphPad Prism进行统计学分析,单因素方差分析进行细胞IC₅₀值测定,GraphPad Prism进行作图分析,计量资料组间比较采用独立样本t检验。结果　Bcl-2在上皮性卵巢癌组织中相对表达量为（0.759±0.110）,Beclin-1表达量为（0.537±0.150）,正常卵巢组织中分别为（0.294±0.160）、（1.612±0.130）,相比正常卵巢组织,上皮性卵巢癌组织Bcl-2表达明显升高、Beclin-1表达显著降低（均P<0.01）。东北岩高兰提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ对上皮性卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3、A2780增殖抑制作用显著,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,呈剂量-时间依赖性,按抑制作用排序为：提取物Ⅴ>Ⅳ>Ⅱ>Ⅲ,岩高兰提取物Ⅰ对于肿瘤细胞无增殖抑制作用。经东北岩高兰提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ处理的上皮性卵巢癌细胞SKOV3、A2780、OVCAR3组Bcl-2 mRNA相对表达量降低（P<0.01）,Beclin-1 mRNA相对表达量升高（P<0.01）。经东北岩高兰提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ处理的上皮性卵巢癌细胞SKOV3中Beclin-1蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达明显减少（P<0.01）。结论　东北岩高兰提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ对上皮性卵巢癌细胞SKOV3、A2780、OVCAR3增殖有显著抑制作用,细胞凋亡率明显升高,说明东北岩高兰提取物对于卵巢癌有抗肿瘤特性;经提取物处理后,肿瘤细胞Beclin-1 mRNA及蛋白相对表达量显著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白相对表达量明显降低,提示东北岩高兰提取物可能通过调节自噬基因的表达来诱导细凋亡。     

姜黄素固体脂质纳米粒单用或与顺铂联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究姜黄素固体脂质纳米粒(Cur-SLN)单用或与顺铂(DDP)联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法:单用试验,分组为空白对照组、Cur组、Cur-SLN组(均以Cur计,终浓度为10、20、40、60、80μmo·lL-1);联用试验,分组为空白对照组、DDP组、DDP+Cur组及DDP+Cur-SLN组,各组DDP终浓度为1、2、3、4、5μmo·lL-1,Cur终浓度均为10μmo·lL-1,检测上述各组分别对SKOV3细胞作用24、48、72h后细胞的生长抑制率。另设立空白对照组、DDP组、Cur组、Cur-SLN组、DDP+Cur组及DDP+Cur-SLN组(DDP终浓度均为2.5μmo·lL-1,Cur终浓度均为10μmo·lL-1),检测各组对SKOV3细胞作用24h后细胞凋亡率及细胞周期调控因子Cyclin E、CDK2的表达。结果:相同浓度下,与Cur组比较,Cur-SLN组作用不同时间后细胞生长抑制率均明显升高(P<0.05);与DDP组比较,DDP+Cur组和DDP+Cur-SLN组细胞生长抑制率均明显升高(P<0.05),且DDP+Cur-SLN组明显高于DDP+Cur组(P<0.05);与空白对照组比较,5个药物组细胞阻滞主要发生在G2期,细胞凋亡率和Cyclin E、CDK2表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),且DDP+Cur-SLN组明显高于其他组(P<0.05)。结论:Cur-SLN对人卵巢癌SKOV3细胞有明显的生长抑制及促凋亡作用,且与DDP联用有协同效果。     

忧遁草中黄酮苷的分离纯化以及对上皮性卵巢癌抗肿瘤作用的研究

目的　对忧遁草中的黄酮苷成分进行分离与纯化,研究其对上皮性卵巢癌的抗肿瘤作用,为开发其药用价值提供理论依据。方法　研究时间：2019年10月至2022年3月。通过大孔吸附树脂结合半制备型高效液相色谱对忧遁草中的黄酮苷进行分离纯化,核磁共振波谱鉴定化合物的结构;采用CCK-8（cell counting kit-8）法测定忧遁草黄酮苷提取物对上皮性卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3、A2780细胞活性的影响,流式细胞学技术检测细胞凋亡情况;采用荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术检测忧遁草黄酮苷提取物对上皮性卵巢癌细胞中Beclin-1、Bcl-2 mRNA表达的影响;采用蛋白印迹（Western blot）技术检测其对上皮性卵巢癌细胞中Beclin-1、Bcl-2蛋白表达的影响。使用统计软件SPSS 22.0、GraphPad Prism对实验结果进行统计学分析,单因素方差分析进行细胞半抑制浓度（IC₅₀）值的测定,采用t检验。结果　自忧遁草中分离纯化得到3种黄酮苷化合物,分别为肥皂草苷、夏佛塔苷和牡荆苷;CCK-8实验结果显示,牡荆苷对上皮性卵巢癌细胞具有明显增殖抑制作用（P<0.05）,对上皮性卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3、A2780的半抑制浓度IC₅₀值分别为33.777 μg/μl、34.114 μg/μl、31.968 μg/μl。荧光定量PCR检测结果表明,和空白组相比,经牡荆苷处理后,上皮性卵巢癌细胞SKOV3、A2780、OVCAR 3组Beclin-1 mRNA相对表达量增加,Bcl-2 mRNA相对表达量降低,差异均有统计学意义（均P<0.01）。以上皮性卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,细胞凋亡检测结果显示,随着牡荆苷浓度的增加,其对上皮性卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用越显著（P<0.01）;Western bolt结果显示,经牡荆苷处理后,上皮性卵巢癌细胞SKOV3中Beclin-1蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达明显减少（P<0.01）。结论　牡荆苷可以抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖,并诱导其凋亡,具有明显的抗肿瘤作用,可能是通过调节Bcl-2与Beclin-1的交互作用发挥抗癌活性,控制肿瘤细胞自噬水平,促进自噬基因依赖性细胞死亡。     

The blockage of survivin and securin expression increases the cytochalasin B-induced cell death and growth inhibition in human cancer cells

Survivin and securin proteins are overexpressed in most cancer cells that have been shown to regulate mitotic progression. In this study, we investigated the roles of survivin and securin on cytochalasin B, a cytokinesis blocker mediating the cytotoxicity and cell growth inhibition in human cancer cells. The human lung carcinoma cell lines A549 and H1299 highly expressed survivin proteins in mitosis and concentrated on the midbodies during cytokinesis. Cytochalasin B significantly decreased cell survival, inhibited cell growth, increased the levels of G(2)/M fractions, and induced binuclei formation in lung carcinoma cells; however, the survivin proteins were concentration-dependently increased by 1 to 5 mug/ml cytochalasin B for 24 h. It is noteworthy that the expression of securin proteins was decreased in cytochalasin B-treated lung carcinoma cells. Transfection of 20 to 40 nM survivin siRNA for 48 h significantly induced the formation of multiple nuclei and apoptosis but decreased the levels of survivin and securin proteins in A549 cells. Cotreatment with survivin small interfering RNA (siRNA) and cytochalasin B increased the cytotoxicity and cell growth inhibition. In addition, the securin-null colorectal carcinoma cells were more susceptible to the cytotoxicity after cytochalasin B and survivin siRNA treatments than the securin-wild-type cells. As a whole, our results indicate that the inhibition of survivin and securin protein expression may increase the cell death and growth inhibition after cytochalasin B treatment in human cancer cells.     

白英水提物诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察白英水提物诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其分子机制。方法:常规方法制备白英水提物,体外培养人宫颈癌HeLa细胞。实验组设白英水提物12.5、25.0、50.0mg/mL3种浓度,以顺铂(25.0mg/L)为阳性对照组。采用细胞毒试验(MTT法)检测HeLa细胞抑制率,荧光显微镜观察HeLa细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯形泳带,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因survivin mRNA和caspase-3mRNA表达的变化。结果:白英水提物对HeLa细胞增殖有抑制作用,且呈明显的时效和量效关系,并诱导其发生凋亡,表现为细胞核固缩、染色质凝集、边聚等。琼脂糖凝胶电泳显示DNA梯形泳带,半定量RT-PCR法检测显示survivin mRNA表达下调、caspase-3mRNA表达上调。结论:白英水提物对HeLa细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导HeLa细胞凋亡的分子机制可能与上调caspase-3基因表达、下调survivin基因表达有关。     

顺铂和依托泊苷下调肺癌细胞端粒酶量及端粒酶逆转录酶的表达

目的　观察肺癌化疗的一线药物顺铂 (DDP)和依托泊苷 (VP16 )对肺癌细胞端粒酶量和端粒酶逆转录酶基因表达和蛋白质表达的影响 ,从而进一步探讨这些药物在肺癌治疗中的作用机理。方法用不同浓度的化疗药物处理肺腺癌A5 49细胞 ,用噻唑蓝 (MTT)和流式细胞术观察化疗药物 (DDP和VP16 )对肺癌细胞的生长抑制和细胞凋亡情况 ,分别用端粒重复扩增 (TRAP)法、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法和Western印迹杂交检测处理后端粒酶量 ,以及其催化亚基端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因和蛋白质的变化。结果　DDP和VP16明显抑制肺癌细胞生长 ,并诱导细胞凋亡 ,有剂量和时间依赖性 .DDP和VP16明显抑制端粒酶量和hTERT基因及蛋白表达 ,尤其以高剂量 (VP16 2 0 0mg·L- 1,DDP5 0mg·L- 1)和低剂量 (VP16 2 0mg·L- 1,DDP 5mg·L- 1)作用的d 5更为明显。结论　VP16和DDP可以抑制肺癌细胞端粒酶量 ,这种作用可能是通过抑制端粒酶的催化亚基hTERT的表达来实现的。端粒酶量测定可能有助于作为判断肺癌化疗时VP16和DDP疗效的观察指标