内毒素肝损伤中FADD mRNA表达及凉血化瘀方的影响

目的研究凋亡调节基因相关死亡区蛋白(FADD)mRNA在内毒素肝损伤中的表达与肝细胞凋亡的关系,以及凉血化瘀方对其的影响.方法腹腔注射内毒素脂多糖于D-氨基半乳糖致敏小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用逆转录-聚合酶链反应半定量分析FADD mRNA表达情况,同时观察药物的影响作用.结果造模3h模型组和治疗组肝组织中FADD mRNA表达分别为110%、100%,至6h模型组的表达增加(124%),治疗组表达下调(81%).结论凉血化瘀方抑制肝细胞凋亡的作用,可能与其下调FADD mRNA表达有关.     

抗痫灵对戊四氮诱导癫痫大鼠海马区Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响。方法:观察大鼠痫性发作行为;采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马Bcl-2蛋白的表达;采用实时荧光定量(Real timePCR)方法检测大鼠海马组织Bcl-2mRNA的相对表达。结果:经过中药复方抗痫灵治疗6周后,大鼠痫性发作行为明显减少;海马区抑制凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达均升高。结论:抗痫灵能减少癫痫发作次数,上调海马区抑凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达。     

bax mRNA和蛋白产物与常见舌苔舌上皮细胞凋亡关系的研究

目的：检测常见舌苔舌上皮细胞凋亡情况及凋亡相关基因bax mRNA和蛋白产物，探讨舌苔厚度变化与舌上皮细胞凋亡、bax基因表达的关系。方法：运用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记)技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术。结果：与正常薄苔比较，剥苔bax基因过度表达伴随细胞凋亡增多，而厚苔bax基因低表达伴随细胞凋亡减少。bax基因表达水平变化趋势与细胞凋亡水平变化趋势一致。结论：bax基因表达水平的变化可能是影响舌苔上皮细胞凋亡并导致舌苔厚度变化的重要原因。     

生化止血饮对药物流产后大鼠子宫蜕膜细胞Fas mRNA及bcl-2 mRNA的影响

目的探讨生化止血饮对药物流产(药流)后大鼠子宫蜕膜凋亡基因Fas mR-NA及凋亡抑制基因bcl-2 mRNA的影响及作用机制。方法建立正常对照组、模型组、益母草组、生化止血饮组,用原位杂交的方法检测凋亡基因Fas mRNA及凋亡抑制基因bcl-2mRNA的表达。结果生化止血饮可显著增加子宫蜕膜细胞凋亡基因Fasm RNA的表达,减低凋亡抑制基因bcl-2 mRNA的表达,与益母草组和模型组比较均有显著性差异(P均<0.05)。结论生化止血饮能通过增加蜕膜组织中凋亡基因Fas的表达和降低凋亡抑制基因bcl-2的表达而加速残留蜕膜从子宫壁剥脱来达到止血的目的。     

参麦注射液对加入IL-1β诱导下软骨细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的:观察参麦注射液(SMI)对加入IL-1β诱导下软骨细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的影响,探讨其防治软骨退变的作用机制。方法:分离培养体外软骨细胞,随机分成3组:空白组、IL-1β诱导组和参麦组,空白组采用含10%胎牛血清的培养基培养,IL-1β诱导组采用含浓度为10ng/mL IL-1β的培养基培养,参麦组采用含浓度为10ng/mL IL-1β和10%参麦注射液的培养基培养,采用反转录/聚合酶链反应(RT-PCR)法检测参麦注射液对软骨细胞Bax和Bcl-2 mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,IL-1β诱导组Bcl-2 mRNA表达明显减少(P0.01),Bax mRNA表达增多(P0.01),均有统计学意义;与IL-1β诱导组比较,参麦组Bcl-2 mR-NA表达明显增多(P0.01),Bax mRNA表达减少(P0.01)。结论:参麦注射液可能通过降低促凋亡基因BaxmRNA表达,增加凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的表达,从而调节Bcl-2/Bax mRNA的比例,抑制软骨细胞凋亡。     

补肾方对自然衰老大鼠海马CA1区凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的:从自然衰老大鼠海马神经元凋亡角度探索补肾方的作用机制。方法:以自然衰老SD雄性大鼠(24月龄)为肾虚衰老模型,大鼠随机分老年组(模型)、左归组和右归组,另设青年组,共四组。大鼠自20月龄始,左归组和右归组分别给予左、右归丸,均按相当于生药7.5g/kg(成人临床用量的15倍)自由饮用稀释药液,每周停药2天,连续4个月;原位杂交检测海马区神经元Bax、Bcl-2 mRNA表达。结果:与青年组比较,老年组大鼠海马CA1区Bcl-2基因mRNA表达水平显著下降(P<0.05),Bax基因mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与老年组比较,左归组和右归组大鼠海马CA1区Bax、Bcl-2基因mRNA表达水平均有显著变化(P<0.05)。结论:自然衰老大鼠的海马CA1区神经细胞凋亡相关基因表达异常,补肾方可通过调节海马CA1区神经细胞Bax、Bcl-2基因mRNA的表达,降低海马神经细胞凋亡,进而改善海马功能、延缓衰老。     

消癖汤对肝郁型乳腺增生病大鼠乳腺组织PCNAmRNA、BcL-2mRNA、VEGFmRNA表达的影响

目的：建立病证结合大鼠乳腺增生模型,研究中药干预治疗作用。方法：采用病证结合造模方法,建立肝郁型乳腺增生病的大鼠模型,观察中药消癖汤对大鼠模型的影响,以逍遥散、三苯氧胺作为阳性对照药物,采用原位杂交法检测各组乳腺组织的增殖细胞核抗原信使核糖核酸（PCNAmRNA）、抑凋亡基因BcL-2信使核糖核酸（BcL-2mRNA）、血管内皮细胞生长因子信使核糖核酸（VEGFmRNA）的阳性表达水平。结果：中药消癖汤能够降低实验大鼠乳腺组织PCNAmRNA、BcL-2mRNA、VEGFmRNA的阳性表达水平,其作用与逍遥散、三苯氧胺相似。结论：消癖汤能够通过抑制大鼠乳腺组织细胞增殖,诱导凋亡和抑制腺体新生血管的形成来实现抑制大鼠乳腺增生的作用。     

女贞子对大鼠肝组织DAPK基因mRNA表达量的影响

目的:探讨寒凉性中药女贞子对大鼠肝脏DAPK基因mRNA表达量的影响。方法:寒性中药水提取物女贞子低剂量2.16g/kg高剂量6.48g/kg灌胃大鼠30d,运用RT-PCR半定量法分析大鼠肝组织DAPK基因mRNA表达水平的变化。结果 :灌胃30天后,女贞子低剂量组DAPK基因mRNA表达增加了6.4%;女贞子高剂量组增加了91.8%,且达到了显著水平(P0.05)。结论:女贞子高剂量组能显著增加DAPK基因mRNA表达水平。     

芪黄煎剂对缺血-再灌注大鼠肠黏膜上皮细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3、9 mRNA表达的影响

目的 观察中药芪黄煎剂对缺血-再灌注(ischemia-reperfusion, I/R)损伤大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡基因Bcl-2、Bax mRNA表达和信号转导分子Caspase-3、9 mRNA表达的影响。     

动脉粥样硬化闭塞症兔动脉TNF-α mRNA、NF-κB mRNA表达的变化

目的:探讨动脉粥样硬化闭塞症(ASO)兔模型TNF-α mRNA、NF-κB mRNA表达的变化,部分阐明ASO炎症反应机制。方法:建立动脉粥样硬化闭塞症动物模型,观察主动脉内皮组织TNF-α mRNA,NF-κB mRNA表达情况,采用SPSS 11.0统计软件进行单因素方差检验。结果:通过以目的基因的相对转录量为参数进行统计分析可知,模型组兔子动脉内皮组织TNF-α mRNA、NF-κB mRNA的表达与对照组比较均显著升高,有统计学差异(P<0.01)。结论:ASO形成过程中,动脉内皮组织TNF-α mRNA、NF-κB mRNA的表达显著升高,提示抑制TNF-α mRNA表达,阻断NF-κB的激活,或抑制NF-κB mRNA,对于拮抗ASO的发生发展都有着极其重要的临床意义。     

土荆皮酸诱导宫颈癌细胞系HeLa凋亡的实验研究

目的研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的HeLa细胞的生物学效应和作用机制。方法用MTT法、流式细胞术、透射电镜检测体外培养的HeLa细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测p53/bcl-2/bax的表达水平。结果(1)PAB对HeLa细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC_(50)约10μmol/L。(2)流式细胞术证实10μmol/L PAB呈时间依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G_0/G_1期的细胞比例,另一方面增高G_2/M期细胞的比例。(3)RT-PCR法显示HeLa细胞在10μmol/L PAB作用12、24、48 h均显示bax上调和bcl-2的下调,p53则未检测到表达。结论在体外PAB能抑制HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与bax的上调和bcl-2的下调相关。     

苦参碱抑制人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1体外增殖的研究

目的探讨苦参碱(matrine,MAT)对人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1体外增殖的影响。方法体外培养人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1,分组予不同浓度苦参碱作用。MTT法检测0.25、0.50、1.0 mg/mL不同浓度苦参碱对细胞增殖的抑制作用以及药物作用的量效和时效关系;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;半定量RT-PCR检测bcl-2/bax mRNA表达水平的变化。结果MTT法显示药物作用后,细胞有明显的抑制增殖作用,且呈时间依赖性和剂量依赖性;流式细胞仪检测不同浓度的苦参碱作用后PA-1细胞的凋亡率依次上升,并与作用时间正相关;细胞周期结果显示苦参碱对PA-1细胞具有明显的G_1期阻滞作用,且具有剂量依赖性。结论苦参碱能使PA-1细胞bcl-2 mRNA和bax mRNA的比值下调,产生G_1期阻滞,从而调节细胞周期,最终导致PA-1细胞在体外的增殖受到明显抑制。     

丹参诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞bcl-2、bax基因表达研究

目的探讨丹参作用类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞bcl-2和bax基因mRNA水平的表达。方法关节液原代培养获取成纤维样滑膜细胞,分别用终浓度为0,0.195和0.39 g/L的丹参作用24 h后,提取总RNA并逆转录成cDNA保存,采用rt-PCR方法检测bcl-2和bax在mRNA水平的表达。结果以丹参浓度为0(bcl-2的相对表达量为0.55±0.27)作为溶剂对照组,bcl-2的表达在丹参浓度为0.195 g/L时(bcl-2的相对表达量为0.53±0.35)没有显著性差异(P=0.468),当丹参浓度达到0.39 g/L时,bcl-2的表达(相对表达量为0.25±0.17)显著性降低(P<0.05);bax的表达在2种丹参浓度条件下均无显著性差异(P均>0.05)。结论丹参可抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞bcl-2的表达,从而通过降低bcl-2/bax的值促进成纤维样滑膜细胞凋亡。     

康泉方对大鼠前列腺组织凋亡调控基因bax、bcl-2mRNA表达的影响

目的 探讨康泉方对实验性大鼠前列腺组织凋亡调控基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的影响.方法 采用大鼠去势后注射丙酸睾丸酮致前列腺增生法造模,同时灌胃给药30天后,处死大鼠取前列腺组织并测量湿重,RT-PCR法检测各组前列腺腹叶组织bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达.结果 与模型组比较,康泉各剂量组前列腺湿重显著下降（P＜0.05或P＜0.01）;康泉高剂量组前列腺湿重与正常组比较,差异无显著性（P＞0.05）;与模型组比较,康泉各剂量组bax mRNA及bax/bcl-2显著升高（P＜0.01）,bcl-2 mRNA显著下降（P＜0.01）;康泉高剂量组bax mRNA、bcl-2 mRNA及bax/bcl-2与正常组比较,差异无显著性（P＞0.05）.结论 康泉方对大鼠良性前列腺增生有明显的治疗作用,其作用机理可能通过调节前列腺组织bax mRNA、bcl-2 mRNA表达,促进前列腺细胞凋亡,并呈明显量效关系.     

黄芪甲甙保护阿霉素心肌损伤大鼠抗凋亡作用的机制研究

目的 探讨黄芪甲甙（简称黄芪）抗阿霉素所致心肌细胞凋亡的可能机制。方法 取SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪3个剂量（低、中、高）组。空白组腹腔注射生理盐水,余4组分别给予阿霉素造模（15mg／kg,隔日腹腔注射1次,共6次）。黄芪3个剂量组同时用不同剂量黄芪甲甙灌胃治疗,空白组和模型组同时给予羧甲基纤维素钠。采用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡。细胞免疫组织化学检测bcl-2、bax蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测bcl-2、bax基因的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡发生率增高（P〈0．01）,抑制凋亡因子bcl-2基因及蛋白表达下降（P〈0．01）,而促进凋亡因子bax基因及蛋白表达增强（P〈0．01）,bcl-2／baxmRNA比值降低（P〈0．05）。与模型组比较,黄芪高剂量组大鼠心肌细胞的凋亡率显著下降（P〈0．05）,bcl-2基因及蛋白水平表达增强（P〈0．05）,bax基因及蛋白水平表达下降（P〈0．05）,bcl-2／baxmRNA比值明显上升（P〈0．05）。结论 高剂量黄芪甲甙治疗可以抑制阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与凋亡基因bcl-2表达有关。     

复方中药紫龙金对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用

目的 探讨复方中药紫龙金(简称紫龙金)对雄激素依赖型人前列腺癌细胞系LNcaP的体外作用机制。方法 应用MTT法、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP的增殖、细胞周期分布和诱导凋亡的影响,应用RT-PCR方法检测前列腺特异性抗原基因(PSA)和雄激素受体(AR),凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响;应用western blot方法测定对bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果紫龙金对LNCaP细胞具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G1/G1期阻滞和诱导凋亡作用,作用72h时IC50为0．79mg／ml;紫龙金可以下调前列腺特异性标志基因PSA、AR和凋亡相关基因bcl-2的表达,降低bcl～2蛋白表达,对bax蛋白表达无明显作用。结论紫龙金可以通过抑制LNCaP细胞增殖、G0／G1期阻滞、诱导凋亡、下调PSA、AR和bcl-2基因表达,降低bcl-2蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用。     

血虚证患者凋亡相关基因的表达及中药的影响

目的:探讨血虚证患者凋亡相关基因的表达及地甘口服液治疗血虚证的作用机理.方法:用原位杂交法检测30例服用地甘口服液后的血虚证患者及10例正常人骨髓单核细胞周期素(CyclinD1)及凋亡相关基因(bax/bcl-2)mRNA和细胞凋亡的表达.结果:血虚证患者细胞周期明显受阻,CyclinD1 mRNA表达下降,凋亡抑制基因bcl-2 mRNA的表达降低,促凋亡基因bax mRNA的表达增加,细胞凋亡率升高;经地甘口服液治疗后,骨髓细胞周期素基因转录的表达增加,细胞成熟过程中的分化增殖加速,从而减少了骨髓细胞的凋亡,降低了细胞凋亡率.结论:血虚证的发生可能与细胞周期素及凋亡相关基因有关,地甘口服液能减少造血细胞凋亡,加速细胞分化成熟,使外周血不断得到更新,从而达到治疗血虚证的目的.     

葡萄籽原花青素对大鼠C6胶质瘤细胞活性氧线粒体去极化和STAT3、Bcl-2、P53P21表达的影响

目的:探讨葡萄籽原花青素(GSP)对大鼠C6胶质瘤细胞活性氧、线粒体去极化和STAT3、P53、P21、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法:采用水溶性四唑盐-1(WST-1)法测定GSP干预后C6胶质瘤细胞系的细胞活力,采用ROS指示剂荧光二氯荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)测定干预后C6胶质瘤细胞内ROS水平,采用线粒体膜电位指示剂5,50,6,60-四氯-1,10,3,30-四甲基苯并咪唑碳氰化物碘化物(JC-1)测定干预后C6细胞的线粒体去极化,采用定量PCR法检测GSP干预后C6细胞的STAT3、P53、P21、Bcl-2 mRNA表达。结果:GSP各浓度处理C6胶质瘤细胞去极化细胞百分比、STAT3、P53、P21mRNAbiaoda水平均高于空白组(0 mg/L)(P <0.05),WST-1检测OD值、DCF-MFI和Bcl-2 mRNA水平均低于空白组(0 mg/L)(P <0.05);50 mg/LGSP处理C6胶质瘤细胞去极化细胞百分比、STAT3、P53、P21 mRNA水平均高于25 mg/L(P <0.05),WST-1检测OD值、DCF-MFI和Bcl-2 mRNA水平均低于25 mg/L;75 mg/LGSP处理C6胶质瘤细胞去极化细胞百分比、STAT3、P53、P21 mRNA水平均高于25、50 mg/L(P <0.05),OD值、DCF-MFI和Bcl-2 mRNA水平均低于25、50 mg/L。结论:GSP可以降低C6胶质瘤细胞内ROS水平,诱导线粒体去极化,抑制Bcl-2表达,诱导P21、STAT3和P53表达,抑制胶质瘤细胞增殖效呈剂量依赖趋势。     

电针对脊髓损伤大鼠早期bax mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨电针对脊髓损伤后 bax mRNA 及蛋白表达的影响。方法成年雄性 SD 大鼠,随机分为模型组、电针治疗组、甲基强的松龙治疗组及假手术组。采用改良的 Allen’s 锤击法致大鼠 T_(10)脊髓损伤,应用原位杂交和免疫组织化学方法及图像定量分析法观察脊髓损伤早期 bax mRNA 和蛋白的表达。结果假手术组有中等量的 bax mRNA 及蛋白表达。模型组脊髓损伤后6h 及24h bax mRNA 及蛋白表达均增高,电针治疗组 bax mRNA 及蛋白表达均低于模型组,与甲基强的松龙组比较差异无显著性。结论电针可下调bax mRNA 及蛋白的表达,从而抑制细胞凋亡,保护神经细胞。     

大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度大蒜素(12.5、25、50μg/mL)和顺铂(40μg/mL)分别干预对数生长期Ishikawa细胞,采用MTT法检测Ishikawa细胞增值抑制;通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting法检测Ishikawa细胞中caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测Ishikawa细胞中Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果:大蒜素能够显著提高子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖抑制率,阻滞Ishikawa细胞周期于G2/M期,提高细胞凋亡率,上调caspase-3蛋白和Bax mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达,提高Bax/bcl-2表达比值,且上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖具有抑制作用以及促其凋亡的作用,机制可能与大蒜素能够改变Ishikawa细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。