实时荧光定量PCR检测ⅪAP mRNA在胃癌中的表达

目的:建立一种实时定量PCR方法枪测ⅪAP mRNA的表达水平,探讨其与胃癌发争发展的可能关系.方法:采用SYBR Green 1逆转录实时荧光定量PCR检测41例胃癌组织和癌旁组织ⅪAPmRNA的表达.结果:XIAP基因在胃癌组织中的表达水平明显高于其在癌旁组织的表达(P<0.01);表达水平与肿瘤的恶性程度及淋巴结转移显著相关(P<0.05).结论ⅪAP的高表达可能与胃癌的发生发展及预后有关.     

Expression of nm23-H1 mRNA in Non-small Cell Lung Cancer and Its Clinical Significance

目的 探讨肿瘤转移抑制基因(nm23-H1)mRNA 在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC临床病理特征间的关系.方法 采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time qRT-PCR)方法检测48例NSCLC癌组织、10例癌旁正常肺组织以及10例良性疾病肺组织中nm23-H1 mRNA的表达水平.结果 nm23-H1 mRNA在NSCLC组的表达水平为(0.599±0.566),明显低于癌旁组的(1.232±0.328)及良性疾病肺组的(1.443±0.427)(P＜0.01);NSCLC组中NM23-H1的低表达与肿瘤病理类型、癌细胞分化程度、淋巴结转移和临床分期有关(P＜0.05),而与患者年龄、性别以及吸烟情况无关(P均＞0.05).结论 NSCLC组织中nm23-H1低表达,其表达量降低与NSCLC的侵袭、转移和预后有关.     

转移抑制基因NM23-H1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因(nm23-H1)mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC临床病理特征间的关系。方法采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time qRT-PCR)方法检测48例NSCLC癌组织、10例癌旁正常肺组织以及10例良性疾病肺组织中nm23-H1 mRNA的表达水平。结果 nm23-H1 mRNA在NSCLC组的表达水平为(0.599±0.566),明显低于癌旁组的(1.232±0.328)及良性疾病肺组的(1.443±0.427)(P<0.01);NSCLC组中NM23-H1的低表达与肿瘤病理类型、癌细胞分化程度、淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05),而与患者年龄、性别以及吸烟情况无关(P均>0.05)。结论 NSCLC组织中nm23-H1低表达,其表达量降低与NSCLC的侵袭、转移和预后有关。     

SYBR荧光实时定量PCR检测非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平

目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平.方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin的mRNA进行检测.结果:标准曲线呈良好的线性关系.标准品的熔解曲线均呈单峰,特异性良好,说明基本无非特异性扩增.结论:所建SYBR荧光实时定量PCR方法操作简便,费用低,特异性好,准确度、灵敏度高,为后续研究构建了理想的平台.     

实时荧光定量 PCR检测野生型p53介导蛋白磷酸酶mRNA 在非小细胞肺癌中的表达

 【目的】 荧光染料Ⅰ(SYBR GreenⅠ)是一种较为常用的非探针类定量PCR的方法,其结果具有一定特异性&#65377;本研究的目的是建立检测野生型p53介导蛋白磷酸酶(Wip1)mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR的方法,了解肺癌组织及其远癌正常肺组织中Wip1的表达水平,研究肺癌组织中Wip1的表达水平与各种临床病理特征之间的关系&#65377; 【方法】 利用相对定量的方法检测44例肺癌及相应远癌正常肺组织中Wip1 mRNA相对于β-actin mRNA的表达量,进行相对定量分析&#65377; 【结果】 44例非小细胞肺癌(NSCLC)及相应远癌正常肺组织均有Wip1 mRNA的表达,其中17例非小细胞肺癌中Wip1 mRNA高表达,占38.6%,两者表达差异有统计学意义 (Ratio = 2.1644 ± 1.394,P < 0.05);分化程度低的肺癌组织中Wip1 mRNA表达量显著高于分化程度高者(F = 5.08,P = 0.013)&#65377; 【结论】 SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法可以成功地检测Wip1基因的表达量&#65377;初步检测结果显示Wip1可能是一种肺癌发生发展过程中的致癌因素&#65377;     

肺癌组织中Atrogin-1 mRNA的表达及患者生存分析

目的:检测人肺癌组织中Atrogin-1基因mRNA表达水平,了解对肺癌患者术后生存情况及其影响因素.方法:运用实时定量PCR技术测定60例肺癌患者的癌组织及配对的癌旁组织中Atrogin-1基因mRNA表达水平,采用Kaplan-Meier单因素与Cox多元回归进行生存分析.结果:肺癌组织中Atrogin-1 mRNA表达水平(-8.15±3.94)显著高于其配对的癌旁组织(-10.39±4.35)(t=3.873,P =0.000),其中71.67%(43/60)患者Atrogin-1 mRNA高表达,28.33%(17/60)患者低表达.Kaplan-Meier法生存分析结果显示:Atrogin-1的表达水平、淋巴结转移、家族史、病理分级与患者的生存率显著相关.Cox回归分析结果显示:Atrogin-1 mRNA表达水平、淋巴结转移、病理分级和吸烟是影响肺癌患者生存率的独立危险因素.结论:肺癌组织中Atrogin-1 的高表达可能影响肺癌患者术后的生存,其可作为肺癌患者预后的一个评价指标,并可能成为基因治疗的一个作用靶点.＃     

实时荧光定量PCR检测肾透明细胞癌hIRS-1和hIRS-2的表达及临床意义

[目的]本研究检测hIRS-1 mRNA和hIRS-2 mRNA在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中的表达,分析其与临床病理参数之间的关系,评价hIRS-1和hIRS-2的临床意义.[方法]应用实时荧光定量PCR法对hIRS-1及hIRS-2基因在43例肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中的表达进行检测,分析其与临床病理指标的关系.[结果]hIRS-1mRNA在肾透明细胞癌和癌旁组织中均存在表达,hIRS-1基因在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中比较无显著差异(0.612±0.127vs 0.645±0.116,P>0.05);而hIRS-2基因在肾透明细胞癌中存在高表达,hIRS-2基因在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中比较有显著差异(1.016±0.143 vs 0.792±0.136,P<0.05);hIRS-1 mRNA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分级及临床分期无关(P>0.05);hIRS-2 mRNA的表达与肿瘤大小及临床分期有关(P<0.05),与患者年龄、性别、及病理分级无关(P>0.05).[结论]hIRS-1 mRNA在肾透明细胞癌和癌旁组织中均存在表达,两者比较差异无统计学意义;MRS-2 mRNA在肾透明细胞癌中存在高表达,提示hIRS-2基因在肾透明细胞癌细胞癌变过程中可能发挥重要作用.     

非小细胞肺癌中E-cadherin基因的表达及意义

目的 探讨E-cadherin基因在人非小细胞肺癌组织(NSCLC)中的表达及其意义.方法 采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测41例NSCLC组织、9例癌旁组织、9例良性病变肺组织中E-cadherin mRNA表达的相对水平,分析其表达与临床、组织病理学特征的关系.结果 E-cadherin mRNA在NSCLC组织表达水平为(9.97±4.25),低于癌旁组织的(11.77±1.91)及良性疾病组织的(23.11±3.52),差异有统计学意义(P＜0.01).在NSCLC组织中E-cadherin mRNA的表达与淋巴结转移有关(P＜0.01),与患者年龄、性别、吸烟史、病理类型、分化程度及临床分期无关(P＞0.05).结论 E-cadherin mRNA表达下调与非小细胞肺癌的浸润和转移可能呈负相关,是评价NSCLC进展的一个潜在指标.     

UTX在肾癌中的高表达及其临床意义

目的:检测UTX(ubiquitously transcribed TPR gene on the X chromosome)在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义.方法:收集临床诊断明确肾透明细胞癌患者组织标本45例,提取组织mRNA,制作组织切片,采用实时定量PCR和免疫组织化学分析UTX在肾癌组织和癌旁组织表达的差异,并分析其表达改变与临床病理参数之间关系.结果:实时定量PCR结果显示,UTX mRNA在肾癌组织中的表达明显高于癌旁组织[(0.883 2±0.703 8vs.0.199 7 ±0.140 0,P＜0.05],免疫组织化学结果同样表明肾癌组织UTX表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05),UTX在肾癌组织中的蛋白评分高出癌旁组织4倍[12±4vs.3±3,P＜0.05].UTX在肾癌组织中的表达与性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期无明显关系,但与病理分级关系密切(P=0.004).结论:UTX在肾透明细胞癌中表达增高,并且与肾癌分级相关.     

miRNA-191在胃癌组织中的表达

目的 分析胃癌组织中miRNA-191的表达及预测其靶基因.方法选取胃癌及配对癌旁正常组织标本50例,应用基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miRNA-191的表达情况,后用2-ΔΔCT方法进行相对定量分析.利用生物信息学软件对miRNA-191进行靶基因预测.结果 miRNA-191在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P＜0.05),miRNA-191与临床病理参数(性别、年龄、病理分型、淋巴结转移和TNM分期)无明显关系(P＞0.05).对miRNA-191预测得到PLCD1、SOX4等9个靶基因.结论 miRNA-191在胃癌组织中高表达,可能在胃癌的发病中起重要作用.     

乳腺癌患者外周血Metadherin基因表达的检测及其初步应用价值探讨

目的 建立检测Metadherin（MTDH）mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR的方法,了解乳腺癌患者外周血中MTDH mRNA的表达水平及其与各临床病理特征之间的关系.方法 利用相对定量的方法检测80例乳腺癌患者及健康女性人群外周血中MTDH mRNA 相对于GAPDH mRNA的表达量.结果 61例乳腺癌患者外周血中均有MTDH mRNA的表达,19例健康女性外周血中未见MTDH mRNA的表达.乳腺癌病例组中34例患者MTDH mRNA高表达,占55.7%,27例低表达,占44.3%,两者间表达差异有统计学意义（Ratio=2.02±0.81,P＜0.05）;乳腺癌患者外周血MTDH对GAPDH的相对表达量为（1.15±0.36）.MTDH基因表达与年龄、雌孕激素受体及HER-2无关（P＞0.05）;淋巴结转移组的MTDH mRNA表达量与无淋巴结转移组差异有统计学意义（P〈0.05）;MTDH mRNA表达水平在临床病理分期Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ之间差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法可成功检测MTDH基因的表达量,MTDH可能与乳腺癌发生发展密切相关.     

PHLPP1在结直肠癌中的表达及意义

目的：探讨PHLPP1在结直肠癌中的表达规律及临床意义。方法采用免疫组织化学实验检测10例结直肠癌组织石蜡标本中PHLPP1蛋白水平的表达情况;同时运用western blot 实验和实时荧光定量PCR实验检测10对新鲜结直肠癌组织及配对的癌旁组织中PHLPP1蛋白和mRNA的表达情况;另外运用实时荧光定量PCR实验检测52例新鲜结直肠癌组织中PHLPP1 mRNA的表达水平,并分析PHLPP1的表达水平与临床病理参数之间的关系。结果 western blot实验、免疫组织化学实验及实时荧光定量PCR实验的结果显示PHLPP1在结直肠癌组织中的表达水平均明显低于配对的癌旁组织,并且PHLPP1在结直肠癌组织中mRNA的表达水平与结直肠癌的分化程度、Ducks分期、淋巴结转移和远处转移相关等临床病理参数之间呈负相关（ P＜0.05）。结论结直肠癌组织中PHLPP1的表达水平显著下调,并且其表达水平与分化程度、Dukes分期、淋巴结转移和远处转移等临床病理参数之间呈负相关, PHLPP1在结直肠癌的发生、发展和转移的过程中可能发挥类似抑癌基因的作用。     

肿瘤相关基因rassf1a在肾细胞癌及癌旁肾组织中的表达

目的:探讨肾癌、癌旁肾组织中肿瘤相关基因rassf1a的表达水平及差异及与临床分期的关系.方法:应用实时荧光定量PCR方法检测rassf1a基因在30例肾细胞癌组织及癌旁肾组织中的表达,并比较不同临床阶段其表达的差异.结果: rassf1a基因在肾癌组织中平均表达明显低于在癌旁肾组织中的平均表达.rassf1a基因在肾癌组织中的表达降低与临床分期无关.结论:肾癌的发生、发展可能与rassf1a基因有关.     

Survivin基因及其主要剪接变构体mRNA在大肠癌组织中的表达

目的:探讨大肠癌组织中Survivin基因及其主要剪接变构体与癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)CAM5 mRNA表达的临床意义.方法:39例大肠癌切除标本,采集肿瘤组织、癌旁2.5 cm组织和距离肿瘤10 cm以上的正常大肠组织各1块,采用RT-PCR方法检测总survivin、survivin-ΔEx3、survivin-2B、survivin-3B、survivin,2α和CEA CAM5 mRNA的表达.用凝胶图像分析系统或SYBR Green I实时荧光定量PCR检测上述基因mRNA的表达水平.结果:总survivin、survivin-ΔEx3、survivion-2B、survivin-3B、survivin 2α和CEA CAM5 mRNA在大肠癌组织中的阳性表达率分别为100.0%、92.3%、92.3%、79.5%、87.2%和97.4%,均高于癌旁2.5 cm组织中的38.5%、25.6%、28.2%、7.7%、12.8%和12.8%,差异均有统计学意义(P<0.01).正常肠壁组织中上述mRNA的阳性表达率分别为17.9%、5.1%、7.7%、0.0%、2.6%和11 10.3%,与癌旁2.5 cm组织比较,总survivin、survivin-△Ex3和surrvivin-2B差异有统计学意义(p<0.05).总 survivin及其剪接变构体和CEA CAM5 mRNA的表达水平,大肠癌组织高于癌旁2.5 cm组织(p<0.01);癌旁2.5 cm组织与正常组织的差异均无统计学意义(p>0.05).survivin剪接变构体mRNA的表达水平与-些临床病理参数有关(p<0.05).结论:survovin和其剪接变构体mRNA在大肠癌组织中呈高表达,表达水平与恶性临床病理参数有关.检测survivin和其剪接变构体mRNA表达对大肠癌前预报与早期诊断比cEA mRNA更有价值.     

非小细胞肺癌患者Hyal1基因的mRNA表达及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者肺癌组织和癌旁组织中Hyal1基因的mRNA表达及其临床意义。方法取40例原发性非小细胞肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织样本,采用实时定量PCR方法分析Hyal1mRNA在新鲜组织样本中的表达水平。结果非小细胞肺癌患者的癌组织Hyal1基因的mRNA表达与性别、年龄、组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期无明显相关（P〉0.05）。40例样本中18例（45%）癌组织的Hyal1基因的mRNA的表达量升高,22例（55%）癌组织的表达量降低。结论Hyal1基因在肺癌组织中的表达的异常下调可能与非小细胞肺癌的发生机制有关。     

非小细胞肺癌组织中ERCC1基因的表达及临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织ERCC1基因mRNA表达情况及其临床意义.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测82例肺癌组织、36例癌旁组织及15例良性组织中ERCC1基因mRNA的表达情况.结果 ERCC1基因在NSCLC患者癌、癌旁及良性组织中均有表达,分别为54.9%(45/82)、4...     

Claudin-1mRNA在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨肝细胞癌(HCC)中Claudin-1 mRNA的表达与临床病理因素的关系.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测35例HCC组织及相应癌旁组织和10例正常肝组织中Claudin-1 mRNA的表达水平,并结合相关指标进行分析.结果 Claudin-1 mRNA在HCC组织中的表达明显低于癌旁...     

p73基因在人非小细胞肺癌组织中的表达

目的　研究人非小细胞肺癌中p73基因的mRNA表达状况 ,并探讨其表达水平与肿瘤各项临床病理指标间的相关性。方法　应用半定量RT PCR方法检测人非小细胞肺癌组织、相应癌旁肺组织及远癌肺组织中p73的mRNA表达。结果　p73基因的表达水平及表达阳性率在肺癌组织中为 87.5 % (2 8/32 )明显高于相应的癌旁肺组织和远癌肺组织 (P <0 .0 1) ;不同临床病理学类型、分化程度及TNM分期的肺癌组织间p73mRNA的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　p73基因在人非小细胞肺癌组织中的表达显著上调。     

乳腺癌中AMFR基因的表达及意义

目的:分析自分泌运动因子受体(autocrine motility factor receptor)在乳腺浸润性癌组织及正常乳腺组织中的表达及其临床意义。方法:采用实时定量PCR技术检测51例乳腺癌组织和其对应的癌旁组织、正常乳腺组织中AMFR基因mRNA的相对表达水平与乳腺癌临床病理参数之间的关系。结果:AMFR mRNA基因在乳腺癌组织中表达水平最高为0.56±0.28,在癌旁组织和正常乳腺组织中表达分别为0.28±0.16、0.24±0.09。该基因在乳腺癌组织中表达要高于乳腺癌旁组织和正常乳腺组织,差异具有统计学意义(P<0.05);AMFR mRNA表达水平与年龄和肿块大小无关,而与TNM分期有关。结论:AMFR mRNA在乳腺浸润性癌中呈高表达状态,可能成为潜在的判断预后指标。     

宫颈癌p16基因甲基化研究新方法

目的建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测宫颈癌p16基因甲基化的方法，以期达到早期诊断宫颈癌。方法正常基因组DNA经修饰后进行PCR，构建含有DNA甲基化β-aetin的重组质粒，克隆阳性质粒作为标准品用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR进行检测，建立检测的标准曲线。利用建立好的方法进行检测临床60例宫颈癌组织中p16基因启动子区域5’CpG岛甲基化状态。结果结果显示正常对照组织及癌旁p16基因无甲基化，60例宫颈癌标本的甲基化率为28．33％（17／60）。结论SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR用于p16基因甲基化检测为宫颈癌的早期诊断提供了一种有效的方法。