Ras同源类似物小干扰RNA对乳腺癌细胞恶性表型的影响

目的观察下调Ras同源类似物E(RhoE)表达对人乳腺癌细胞231生物学行为的影响。方法蛋白质印迹技术检测小干扰RNA(siRNA)转染前后RhoE在乳腺癌细胞231中的表达;RhoE siRNA的细胞转染用lipofectamine 2000脂质体法;Cell Counting Kit-8检测转染细胞及对照细胞的增殖变化;损伤刮擦试验和体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测转染细胞及对照细胞的迁移与侵袭能力。结果 RhoE在乳腺癌细胞231中的表达较高;成功转染RhoE siRNA的乳腺癌细胞,蛋白质印迹显示RhoE的表达被明显的抑制;RhoE的表达被抑制后对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有着明显的促进作用。结论下调RhoE表达能够明显促进乳腺癌细胞的增殖﹑迁移和侵袭,RhoE可能在乳腺癌的发生发展中起着重要作用。     

问：何谓RNA干扰和小干扰RNA？

答：RNA干扰（RN Ainterference，RNAi）是一种新的基因沉默技术，由于这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默（PTGS）。这种机制广泛存在于从酵母到哺乳动物的细胞中。由于其具有高特异性和高效性，已经广泛应用于植物、真菌、蠕虫和低等脊椎动物以及哺乳动物的基因功能研究，并且在人类基因组功能研究、基因药物研制及基因治疗等方面有很好的应用前景。     

小干扰RNA在哺乳动物脑组织中的递送

背景:作为一种能够下调基因表达的新的基因治疗方法,RNA干扰在神经科学疾病的治疗中有很大的潜能.通过引入与内源靶基因具有相同序列的小干扰RNA,可以人为地诱导序列特异性的mRNA降解,达到阻止该基因表达的目的.目的:针对RNA干扰在神经科学疾病治疗方面的应用,探讨小干扰RNA在哺乳动物脑组织中的递送情况.方法:以"siRNA,delivery,brain"和"siRNA,delivery,vivo"为检索词,计算机检索PubMed home,按纳入和排除标准对文献进行筛选和质量评价,共纳入27篇文章.从小干扰RNA合成、脑组织中的递送及其抑制效率和不良反应3方面进行总结.结果与结论:近来RNA干扰研究中,高精度预测小干扰RNA的方法能合成出高特异性的小干扰RNA;小干扰RNA在脑组织中的递送主要采用局部注射的方式,并且在递送载体的帮助下,抑制效率在不断地提高:随着RNA干扰技术研究的深入,其不良反应也逐渐受到人们重视.总之,作为一种新的治疗策略,RNA干扰在神经科学疾病的治疗中有着很大的潜能,并可能给药物研发带来新的变革.     

小干扰RNA:抗病毒、抗肿瘤的新途径

小干扰RNA是一种依赖Dicer酶的长度为21~23nt的双链RNA,它具有很强的基因关闭功能,能够介导RNA干扰作用,降解特定的靶mRNA,在基因功能分析领域发挥了重要的作用,近年在抗病毒、抗肿瘤方面又成为国内、外研究的一大热点,为临床病毒感染和肿瘤疾病的防治提供了新途径。     

针对c-myc基因的小干扰RNA对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的c-myc、h-tert表达的影响

本研究探讨针对c-myc的小干扰RNA对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞c-myc,h-tert基因和蛋白表达的影响,为白血病的基因治疗提供新方法和靶点。针对c-myc mRNA的第1545-1565靶位点用化学合成法合成siRNA,经转染剂转染入Jurkat细胞。应用RT-PCR及Western blot分别检测c-myc siRNA作用前后c-myc、h-tert基因的mRNA及蛋白表达的变化。结果表明:c-myc siRNA能明显抑制Jurkat细胞的增殖,作用48小时的半数抑制浓度(IC50)约为75nmol/L。c-myc siRNA可引起Jurkat细胞的c-myc、h-tert mRNA和C-MYC、hTERT蛋白表达水平降低。结论:c-myc siRNA明显降低Jurkat细胞c-myc、h-tert基因的mRNA及蛋白表达水平。c-myc siRNA可能是通过抑制c-myc mRNA表达而降低胞内C-MYC蛋白水平。     

化学修饰小干扰RNA研究进展

采用胆固醇、二硝基苯酚、锁核酸等化学基团对双链小干扰RNA(siRNA)的正义或反义链进行化学修饰,可增强siRNA在体内及体外的稳定性,并提高RNA干扰活性,克服传统siRNA载体(病毒、质粒等)对机体的潜在风险性,在多种肿瘤及病毒感染性疾病的基础研究和临床治疗方面具有广阔的应用前景。     

小干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的影响

目的构建Survivin基因特异性小干扰RNA(siRNA),检测siRNA-Survivin对Survivin基因表达的抑制,在人肝癌细胞株HepG2中研究survivin和survivin siRNA对细胞凋亡的影响。方法设计survivin siRNA序列,构建靶向Survivin siRNA真核载体。利用脂质体转染人肝癌HepG2细胞,通过相差显微镜下观察、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察转染后survivin的表达,以及HepG2细胞的凋亡。结果成功构建了survivin siRNA表达载体,并且si-survivin对survivin有明显抑制效应,可显著抑制HepG2细胞的发生凋亡。转染Survivin-siRNA细胞活性受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,DNA电泳出现典型的凋亡"梯状"带。RT-PCR结果显示细胞转染24 h、48 h和72 h后HepG2 Survivin mRNA分别减少了56%、78%和50%,而siR-NA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论转染的Survivin-siRNA可特异性抑制肝癌细胞株HepG2凋亡抑制基因的表达,从而为肿瘤的基因治疗提供新的实验基础。     

TLR4基因小干扰RNA对缺氧复氧诱导BV-2细胞炎症因子分泌的影响

目的 研究Toll样受体4(TLR4)基因小干扰RNA(siRNA)对体外缺氧复氧条件下诱导BV-2细胞分泌TNF-α的抑制作用.方法 小鼠小胶质细胞株BV-2置于六扎培养板培养,随机分为N组(正常培养组)、H组(缺氧复氧组)、T组(缺氧复氧+TLR4-siRNA转染组,转染质粒pEGFP-H1/TLR4-siRNA)、C组(缺氧复氧+对照siRNA转染组,转染含对照序列的质粒pEGFP-H1/对照-siR-NA)和B组(缺氧复氧+空白质粒转染组,转染pEGFP-H1空质粒)共5组.其中H组、T组、C组和B组细胞缺氧培养3 h后复氧培养24 h,运用脂质体转染技术介导质粒转染,流式细胞术检测转染后BV-2细胞EGFP的表达率,RT-PCR方法检测各组BV-2细胞TLR4 mRNA和NF-кB p65 mRNA的表达水平,Western blot方法检测各组BV-2细胞TLR4蛋白表达变化,ELISA方法检测各组上清液中TNF-α含量.采用方差分析进行统计分析.结果 转染后BV-2细胞EGFP的表达率为(67.58±7.16)%;经缺氧复氧处理后,H组、T组、C组和B绀的TLR4 mRNA、NF-кB p65 mRNA、TLR4蛋白水平较N组均明显上调(P＜0.01),各组卜清液TNF-α含量较N组也明显升高(P＜0.01);而T组TLP4 mRNA、NF-кBp65 mRNA、TLR4蛋白表达量和上清液TNF-α含量较H组、C组和B组均明显下凋(P＜0.01);C组和B组分别与H组相比,各项检测指标表达均无明显变化(P＞0.05).结论 针对TLR4 mRNA的小干扰RNA可以有效的抑制缺氧复氧诱导的BV-2细胞的炎症反应.     

RNA干扰的研究进展及其应用

RNA干扰(RNAi)是利用同源性双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默(PTGS)现象，它可以通过使mRNA发生降解而抑制蛋白表达。在RNAi过程中，外源的双链RNA在体内会被切割成小片段，合成新的小干扰RNA(siRNA)。近年来RNAi的作用机制假说正被逐步修正。从利用体外合成双链RNA，到通过质粒稳定表达siRNA诱发RNAi现象，这项技术正不断完善，并被广泛应用。由于RNAi技术的高效性和特异性，它已经成为基因功能研究的一种新方法，并展现出广阔的前景。     

靶向β-catenin的siRNA对宫颈癌细胞恶性表型的影响

目的探讨靶向β-链蛋白（β-eatenin）的小干扰RNA（siRNA）对宫颈癌细胞Hela细胞功能的影响以及相关作用机制。方法脂质体介导转染β-catenin小干扰RNA（β-cateninsiRNA）敲低Hela细胞β-catenln的表达。MTT法检测转染后细胞增殖水平,流式法评价转染后细胞周期分布及凋亡变化,并结合Western印迹研究β-catenin在Hela细胞中的作用机制。结果体外转染β-catenin小干扰RNA能明显抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,并且能够明显下调Bcl-2及CyclinD1蛋白水平表达,上调Bax蛋白表达水平。结论β-cateninsiRNA能明品柳制Hela绅晌毕长．β-catPnin可作为宫颈癌基因治疗的靶点。     

RNA干扰的研究进展及其应用

RNA干扰(RNAi)是利用同源性双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默(PTGS)现象,它可以通过使mRNA发生降解而抑制蛋白表达。在RNAi过程中,外源的双链RNA在体内会被切割成小片段,合成新的小干扰RNA(si RNA)。近年来RNAi的作用机制假说正被逐步修正。从利用体外合成双链RNA,到通过质粒稳定表达si RNA诱发RNAi现象,这项技术正不断完善,并被广泛应用。由于RNAi技术的高效性和特异性,它已经成为基因功能研究的一种新方法,并展现出广阔的前景。     

RNA干扰SOCS1对线粒体M2蛋白作用树突状细胞功能的影响

目的探讨细胞因子信号转导抑制分子1(SOCS1)干扰后,线粒体M2蛋白对外周血单个核细胞(PB-MC)来源的树突状细胞(DC)功能的影响。方法诱导和培养健康人PBMC来源DC,小干扰RNA(siRNA)抑制SOCS1的表达,用不同浓度的M2蛋白刺激DC,用流式细胞术(FCM)分析DC表型CD83、CD86的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DC培养上清液中白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素12(IL-12)的变化。结果DC在M2蛋白浓度为70μg/mL刺激24 h,35μg/mL刺激24、48和72 h时,与对照组比较,CD83和CD86的表达率以及IL-10和IL-12的水平均明显升高(P<0.05)。M2蛋白刺激SOCS1干扰后的DC,在不同刺激浓度和作用时间,CD83和CD86表达率以及IL-12水平与单纯M2蛋白刺激组相比均明显升高(P<0.05),而IL-10水平在两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DC在接受高浓度的M2蛋白刺激后,其成熟度、抗原递呈和Th1的极化能力增强;抑制SOCS1的表达,M2蛋白可进一步促进DC功能的增强,可能导致自身耐受的破坏。     

小干扰RNA：抗病毒、抗肿瘤的新途径

小干扰RNA是一种依赖Dicer酶的长度为2l～23nt的双链RNA。它具有很强的基因关闭功能．能够介导RNA干扰作用。降解特定的靶mRNA．在基因功能分析领域发挥了重要的作用。近年在抗病毒、抗肿瘤方面又成为国内、外研究的一大热点，为临床病毒感染和肿瘤疾病的防治提供了新途径。     

c-myc小干扰RNA诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡

本研究探讨c-myc小干扰RNA对白血病细胞系HL-60诱导凋亡的作用。将体外合成的siRNA转染HL-60细胞,观察形态学变化,应用MTT法绘制细胞生长曲线,用细胞集落培养观察c-mycsiRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用DNA片段化分析细胞的凋亡,RT—PCR及Western blot检测c-mycsiRNA作用前后Comyc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果表明：ComycsiRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度（IC50）约为150nmol／L;DNA片段化的检出证实C-mycsiRNA能有效诱导HL-60细胞调亡,凋亡率与药物作用时间呈正相关。C-mycsiRNA与HL-60细胞作用后C-myc基因和蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论：C-mycsiRNA能有效抑制HL-60细胞增殖,降低C-myc基因和蛋白的表达,诱导其凋亡。     

化学合成小干扰RNA对PC12细胞NgR表达的影响

目的 Nogo及Nogo-66受体(Ng R)对抑制中枢神经系统再生有重要的作用。本文主要观察化学合成Ng R特异性小干扰RNA(si RNA)对具有神经元分化潜能的克隆细胞系PC12细胞Ng R m RNA和蛋白表达的影响。方法培养大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12细胞,神经生长因子(NGF)诱导使其分化为类神经细胞,化学合成一段针对大鼠Ng R基因编码区的si RNA,用阳离子脂质体使之转染类神经细胞,转染后48 h,采用实时荧光定量PCR检测m RNA水平;并采用蛋白免疫印迹检测Ng R蛋白表达的变化,检测干扰的效果。结果荧光定量PCR结果显示:转染后48 h Ng R m RNA水平明显下降,差异具有显著性(P<0.05);同时蛋白免疫印迹结果显示,Ng R蛋白表达水平与对照组比较也降低,差异同样具有显著性(P<0.05)。结论化学合成Ng R特异性si RNA可以实现大鼠神经细胞内源性Ng R基因沉默。     

微小RNA在乳腺癌干细胞中的表达

微小RNA作为生物体正常生长发育的调控分子,不仅在多种恶性肿瘤中表达异常,而且在维持胚胎干细胞以及成体干细胞自我更新及多向分化潜能中起重要作用.因此,筛选乳腺癌干细胞相关微小RNA表达谱,探讨微小RNA参与肿瘤干细胞形成的分子机制,具有重要的理论意义.文章综合分析相关文献,对乳腺癌干细胞和微小RNA方面的研究情况予以综述分析和展望.乳腺癌叶干细胞具有自身特征性微小RNA,随着微小RNA在乳腺癌干细胞研究的不断进展,对乳腺癌干细胞的生物学特征会不断得以揭示,为进一步从干细胞层面研究乳腺癌发病机制及靶向治疗打下基础.     

RNA干扰技术的研究进展

RNA干扰(RNAi)指由ds RNA或si RNA诱发的转录后基因沉默现象,其机制是通过与靶序列特定位点互补配对,通过阻碍靶基因的翻译或者诱导m RNA降解来抑制基因表达,是一项高效率、强特异性的基因沉默技术。RNAi技术不仅在基础研究方面成为基因功能和蛋白功能研究的工具,也广泛的应用于临床研究,在肿瘤、病毒性疾病以及其他疾病的治疗方面显示了广阔的前景。     

RNA干扰的研究方法

ＲＮＡ干扰 (ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ,ＲＮＡｉ)现象是由与靶基因序列同源的双链ＲＮＡ (ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｅｄＲＮＡ ,ｄｓＲＮＡ)引发的广泛存在于生物体中的序列特异性基因转录后的沉默过程。细胞中的核糖核酸酶Ⅲ家族成员之一的ｄｓＲＮＡ特异性的核酸酶Ｄｉｃｅｒ将ｄｓＲＮＡ裂解成 2 1～ 2 5个核苷酸组成的小的干涉ＲＮＡ(ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ ,ｓｉＲ ＮＡ)作为介导子 ,引起相同序列特异性的ｍＲＮＡ降解。ＲＮＡｉ现象是细胞中固有的消除大量的异常ｍＲＮＡ和抵御分子“寄生虫”(如病毒、转…     

HER2基因RNA干扰质粒对SK-BR-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨HER2基因高效RNA干扰质粒转染到SK-BR-3乳腺癌细胞后,对细胞的增殖及其凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将针对HER2基因的高效RNA干扰质粒转染至乳腺癌细胞SK-BR-3中,通过细胞计数、MTT比色法、流式细胞术和Western blot检测PCNA增殖细胞核抗原,分析检测其对SK-BR-3细胞增殖、凋亡的影响。结果 MTT比色测定显示,HER2-shRNA2干扰质粒转染到SK-BR-3细胞后在48 h后现抑制,与空白对照组比抑制率分别为48 h 16.53%7、2h 39.03%9、6h 65.47%。流式细胞分析HER2-shRNA组细胞在96 h凋亡率达17.36%,明显高于阴性对照组的1.41%和空白对照组的1.25%（P〈0.05）。结论将RNA干扰质粒HER2-shRNA2转染至SK-BR-3细胞中,可特异性地抑制SK-BR-3细胞的增殖并诱导其凋亡,为乳腺癌的靶向治疗奠定了基础。