转存活素基因树突状细胞抗消化道肿瘤的免疫效应

目的研究转染存活素基因对树突状细胞(DC)免疫功能的影响,观察修饰后的DC在体外诱导的抗消化道肿瘤免疫效应。方法脂质体介导存活素基因转染入DC,用蛋白印迹法检测培养上清存活素的表达,检测转存活素基因DC分泌细胞因子白细胞介素12(IL12)、肿瘤坏死因子α(TNFα)的功能,以及经流式细胞仪检测DC表面CD1a、CD83、MHCⅡ、CD80、CD86表达的高低,用噻唑蓝(MTT)法诱导人特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的能力。结果培养上清中均可以检测到存活素表达;转存活素基因DC的上清IL12、TNFα含量分别为(2652±327)pg/ml和(4371±835)pg/ml,比单纯DC组高(P<005);CD1a、CD83、MHCⅡ、CD80、CD86等在单纯DC表面低表达,在转基因DC表面高表达;MTT法检测,经转染存活素基因的DC提呈的细胞对胃癌细胞、结肠癌细胞、胆管癌细胞杀伤率分别为65%、77%、85%,而单纯DC杀伤作用较低。结论存活素基因转染修饰的DC能诱导细胞毒性T淋巴细胞的特异性,显著地提高DC的抗原提呈功能,体外能诱导高效而特异的抗癌免疫效应。     

转染RhoA基因对树突状细胞抗胃癌功能的影响

目的 研究转染RhoA基因对树突状细胞(DC)免疫功能的影响,观察修饰后的DC在体外诱导高效而特异的抗胃癌免疫效应.方法 用增强型绿色荧光蛋白标记的RhoA重组腺病毒载体作为介质,将RhoA基因转染入DC,用RT-PCR法检测培养上清RhoA基因的表达.检测这种DC分泌细胞因子IL-12、TNF-α的功能,以及表面分子CD1α、CD83、MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达,用MTT法诱导人特异的细胞毒性T淋巴细胞的能力. 结果培养上清中均可以检测到RhoA基因表达;在这种转基因DC的上清中IL-12、TNF-α 含量分别为(301±24)和(418±64)pg/ml,明显比非转染的DC组高,P＜0.05;转基因DC表面高表达CD1α(70.13±0.03)、CD83(68.10±0.03)、MHC-Ⅱ(69.73±0.13)、CD80(78.73±0.25)、CD86(74.20±0.05),而在非转染的DC中是低表达的;经转染RhoA基因的DC提呈的T细胞对胃癌细胞的杀伤率为87%,而未修饰的DC杀伤作用较低. 结论RhoA基因转染修饰的DC能诱导细胞毒性T淋巴细胞的特异性,显著地提高DC的抗原提呈功能,在体外能诱导高效而特异的抗胃癌免疫效应.     

胃癌抗原肽Hsp70复合物对转染全长野生型p53的树突状细胞免疫功能的影响

目的 应用联合修饰的树突状细胞(DC)在体外诱导高效而特异的抗胃癌免疫效应。方法 先将全长野生型p53导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC,然后用胃癌抗原肽-HSP70复合物等因素修饰已转染全长野生型 p53的 DC(wt-p53 DC),检测这种DC诱导小鼠脾脏淋巴细胞特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的能力,分泌细胞因子功能,以及表面分子表达的高低。结果Western blot检测转染小鼠 p53cDNA的 BMDC及其培养上清中均可以检测到 p53表达;细胞因子含量明显增加(P<0.05),而的其他组的细胞因子含量与对照相比,无显著变化;经流式细胞仪(FACS)检测 wt-p53DC表面高表达 B7-1、B7-2、MCH-Ⅰ、MCH-Ⅱ;脾淋巴细胞经刺激后,能够特异性地杀伤胃癌细胞,杀伤率为91.6％。结论 全长野生型p53基因转染+抗原肽联合修饰DC能诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞的特异性,显著提高DC的抗原提呈功能。     

胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞免疫功能的影响

目的研究胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞(wtp53DC)免疫功能的影响。方法先将全长野生型p53导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC,然后用胆管癌抗原肽修饰wtp53DC,检测这种树突状细胞的抗原提呈功能。结果抗原肽修饰的wtp53DC和单纯DC的上清3种细胞因子含量明显增加,分别为(545.2±12.1)ng/L,(511.1±13.3)ng/L,(537.1±11.1)ng/L(P<0.05);wtp53DC刺激小鼠脾脏T细胞增殖水平明显高于对照组(P<0.01);该细胞高表达B7-1、B7-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ(P<0.05);能够特异性地杀伤胆管癌细胞,杀伤率81.6%。结论全长野生型p53基因转染+胆管癌抗原肽联合修饰树突状细胞能诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞的特异性。     

重组腺病毒介导白细胞介素-18和甲胎蛋白基因修饰的树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫活性的研究

目的 探讨甲胎蛋白(AFP)、白细胞介素(IL)-18基冈修饰树突状细胞(DC)较以往AFP基因修饰DC作为肝癌免疫治疗瘤苗是否更具优势.方法 分离外周血单个核细胞定向诱导为DC,以Ad-IL-18和Ad-AFP共感染DC,感染后细胞通过噻唑蓝(MTT)比色法检测其激活的T细胞对HepG2的杀伤活性.结果 检测结果显示目的 基因能够表达于DC细胞中.流氏细胞仪(FCM)结果显示共感染的DC细胞均高表达CD1a(73.4%)、CD11c(84.3%)、CD80(89.5%)、CD86(87.9%)和HLA-DR(91.7%).CTL结果显示IL-18/AFP-DC-T对HepG2的杀伤率(67.49±3.24)%明显高于对SMMC7721细胞(27.32±1.75)%和K562细胞(17.31±1.56)%的杀伤率,另外共感染IL-18/AFP-DC-T组对HepG2的杀伤率与AFP-DC-T、IL-18-DC-T组比较,其差异有统计学意义.结论 AFP和IL-18基因修饰DC,能够在体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应,而_且对HepG2细胞杀伤率大于AFP转染DC组.     

胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞免疫功能的影响

目的　研究胆管癌抗原肽对转染全长野生型 p5 3的树突状细胞 (wtp5 3DC)免疫功能的影响。方法　将全长野生型 p5 3导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC ,然后用胆管癌抗原肽修饰wtp5 3DC ,检测这种树突状细胞的抗原提呈功能。结果　抗原肽修饰的wtp5 3DC和单纯DC这 4种上清 3种细胞因子含量明显增加为 :( 5 45 .2± 12 .1)ng/L ,( 5 11.1± 13 .3 )ng/L ,( 5 3 7.1±11.1)ng/L ;wtp5 3DC刺激小鼠脾脏T细胞增殖水平明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;该细胞高表达B7 1、B7 2、MCH Ⅰ、MCH Ⅱ (P <0 .0 5 ) ;能够特异性地杀伤胆管癌细胞 ,杀伤率为 81.6%。结论全长野生型 p5 3基因转染与胆管癌抗原肽联合修饰树突状细胞能诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞的特异性。     

树突状细胞与尤文肉瘤细胞融合诱导肿瘤免疫应答的体外研究

目的检测尤文肉瘤细胞A673和树突细胞(DC)融合构建的肿瘤疫苗对尤文肉瘤细胞株A673 的杀伤作用.方法应用促融合剂PEG对尤文肉瘤A673细胞和从外周血单个核细胞(PBMC)诱生的树突细胞进行融合.利用细胞因子hGM-CSF和hIL-4从 PBMC诱生DC,并对其表型进行流式细胞仪(FCM) 分析,红色荧光染料PKH-26标记A673细胞,绿色荧光染料PKH-67标记DC,应用促融合剂PEG融合后光镜及电镜观察DC细胞和融合细胞形态,FCM检测融合效率,通过同种混合淋巴细胞反应检测其免疫刺激活性.通过IFN-γ ELISA法产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的量,通过51Cr细胞杀伤试验检测融合细胞对A673 细胞的杀伤作用.结果 FCM检测出从PBMC 成功诱生出CD83、CD80、CD86 及HLA-DR 高表达的成熟DC.DCs/A673融合细胞的融合效率达到23%,同种混合淋巴细胞反应显示DCs/A673融合细胞有很强的免疫刺激活性.IFN-γ分泌检测显示DCs/A673融合细胞组较对照组产生CTL水平显著增高.51Cr释放法检测融合细胞体外诱导抗原特异的CTL, 融合细胞激活的CTL对肿瘤细胞系A673细胞的杀伤作用强于DC-A673混合组、DC组、A673组的CTL(P<0.05),作用较对照各组显著增强.结论 DC与A673细胞融合体外致敏自体T 淋巴细胞能生成抗原特异CTL 对尤文肉瘤细胞A673 有一定的杀伤作用.     

树突状细胞与尤文肉瘤细胞融合诱导抗肿瘤免疫应答的体外研究

目的检测尤文肉瘤细胞A673和树突细胞(DC)融合构建的肿瘤疫苗对尤文肉瘤细胞株A673的杀伤作用。方法应用促融合剂PEG对尤文肉瘤A673细胞和从外周血单个核细胞(PBMC)诱生的树突细胞进行融合。利用细胞因子hGMCSF和hIL4从PBMC诱生DC,并对其表型进行流式细胞仪(FCM)分析,红色荧光染料PKH26标记A673细胞,绿色荧光染料PKH67标记DC,应用促融合剂PEG融合后光镜及电镜观察DC细胞和融合细胞形态,FCM检测融合效率,通过同种混合淋巴细胞反应检测其免疫刺激活性。通过IFNγELISA法产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的量,通过51Cr细胞杀伤试验检测融合细胞对A673细胞的杀伤作用。结果FCM检测出从PBMC成功诱生出CD83、CD80、CD86及HLADR高表达的成熟DC。DCs/A673融合细胞的融合效率达到23%,同种混合淋巴细胞反应显示DCs/A673融合细胞有很强的免疫刺激活性。IFNγ分泌检测显示DCs/A673融合细胞组较对照组产生CTL水平显著增高。51Cr释放法检测融合细胞体外诱导抗原特异的CTL,融合细胞激活的CTL对肿瘤细胞系A673细胞的杀伤作用强于DCA673混合组、DC组、A673组的CTL(P<0.05),作用较对照各组显著增强。结论DC与A673细胞融合体外致敏自体T淋巴细胞能生成抗原特异CTL对尤文肉瘤细胞A673有一定的杀伤作用。     

逆转录病毒携带白细胞介素-12转染树突状细胞体外诱导特异免疫杀伤肝癌细胞

目的探讨逆转录病毒携带白细胞介素(IL)12转染树突状细胞(DC)体外诱导免疫杀伤肝癌细胞的效能及其机制。方法感染指数(MOI)为100,含IL12的重组逆转录病毒修饰肝癌患者外周血DC(DCIL12),酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测DCIL12(5×103个/ml)培养上清中IL12和γ干扰素(IFNγ)水平,以冻融肝癌细胞株HepG2(1×107个/ml)所获得的肿瘤相关抗原(TAA)刺激DCIL12,MTT法检测TAA负载的DCIL12刺激同源T淋巴细胞(1×105个/ml)增殖分化能力,细胞毒试验检测DCIL12诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其上清液对HepG2肝癌细胞株杀伤作用,ELISA法检测CTL上清液IFNγ水平。结果DC经IL12基因修饰后48h分泌高水平IL12(24.35±5.40)ng/L及IFNγ(725±30)ng/L,均显著高于未转染DC组(P<0.01及P<0.05)。DCIL12诱导的CTL及其上清液对HepG2均有显著杀伤作用,杀伤率显著高于未转染DC组,分别为(82.43±8.70)%vs(57.4±4.3)%(P<0.01)和(76.45±8.50)%vs(18.23±5.30)%(P<0.01),DCIL12诱导的CTL上清液IFNγ水平显著高于未转染DC组,分别为(1125.0±32.7)ng/Lvs(281.3±14.7)ng/L(P<0.01)。结论IL12基因修饰增强DC体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗肝癌免疫,其机制与IL12基因修饰促进DC分泌IL12、增强T淋巴细胞活化及分泌IFNγ密切相关。     

尤文肉瘤基因免疫治疗的研究

目的检测尤文肉瘤融合基因EWSFLI1和人粒单核细胞集落刺激因子(hGMCSF)基因修饰的树突细胞(DC)疫苗对尤文肉瘤细胞株A673的杀伤作用。方法利用hGMCSF腺病毒(AdhGMCSF),在1000U/mlIL4作用下,从外周血单个核细胞(PBMC)诱生树突细胞(DC)并对其表型进行流氏细胞仪(FCM)分析,通过同种混合淋巴细胞反应以检测其免疫刺激活性。在lipofectamine的介导下,将含有尤文肉瘤融合基因EWSFLI1的真核表达质粒pCA13/EWSFLI1转染DC,通过RTPCR检测EWSFLI1的表达,并通过乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测其对A673细胞的杀伤作用。结果应用AdhGMCSF从PBMC成功诱生出CD83、CD80、CD86及HLADR高表达,CD14低表达的DC,其对同种淋巴细胞有很强的免疫刺激活性。pCA13/EWSFLI1转染DC后,RTPCR检测DC中有EWSFLI1mRNA的表达。杀伤试验结果表明,AdhGMCSF诱生、EWSFLI1修饰的DC,体外诱导抗原特异的CTL,效靶比为20∶1时对A673细胞杀伤率为(29.9500±0.0117)%,高于对照组(P<0.01)。结论AdhGMCSF能够成功地从PBMC中诱生出有功能的DC。真核表达质粒pCA13/EWSFLI1在lipofectamine的介导下转染AdhGMCSF诱生的DC,能在DC中有效地表达。此EWSFLI1基因修饰的、AdhGMCSF诱生的DC体外致敏自体T淋巴细胞,生成抗原特异CTL,对尤文肉瘤细胞A673有一定的杀伤作用     

胚胎干细胞分化为软骨细胞的研究现状与展望

胚胎干细胞具有多向分化潜能,在组织修复治疗方面具有广阔的应用前景.近年研究表明,胚胎干细胞在细胞因子、激素、微环境等作用下能够分化为软骨细胞.本文对近年来胚胎干细胞向软骨细胞定向分化中的各种因素进行综述.     

Small cell squamous and mixed small cell squamous--small cell anaplastic carcinomas of the lung

Five patients are presented who had neoplasms which, by light microscopy and in two cases cytologically, appeared to be small cell anaplastic (polygonal and fusiform cell type) carcinomas of the lung. However, by electron microscopy, four of the carcinomas exhibited squamous characteristics including desmosomes and tonofilament bundles, and lacked demonstrable neurosecretory granules, suggesting that they were small cell squamous carcinomas. The fifth carcinoma contained cells with neurosecretory granules as well as cells demonstrating squamous differentiation. One patient died within 3 months of presentation. Three patients survived for approximately 18 months each; two received chemotherapy but one was treated by surgical resection alone. The fifth patient had a peripheral coin lesion which was treated by surgical resection only; he is alive without evidence of recurrent carcinoma 1 year after operation. We suggest that some carcinomas of the lung with the light-microscopic and cytologic appearance of small cell anaplastic carcinoma are actually small cell variants of squamous cell carcinoma and lack the characteristic neurosecretory granules of classic small cell carcinoma. The behavior of these tumors needs to be determined.     

体细胞核移植的研究进展——核移植供体细胞与受体细胞的选择

根据近年来国外的研究进展,对核移植研究中的有关内容,如供体核的获得、受体卵母细胞与去核、核卵重组进行了综述,望能对核移植研究有所帮助。     

Blockade of cell adhesion molecules enhances cell engraftment in a murine model of liver cell transplantation

AimOLT is the best alternative for patients with end-stage liver diseases. However, as the need for organs surpasses donor availability, alternatives to OLT are required. LCT could be a useful option versus OLT in several patients even though its low cell-engraftment hampers its efficiency. Endothelial cell barrier is the main obstacle for the implantation of cells into the parenchyma. Our study has focused on the modification of the endothelial barrier with monoclonal antibodies against adhesion molecules in order to increase cell engraftment in a mouse model of liver cell transplantation.MethodsAnti-mouse CD54 and anti-mouse CD61 antibodies were administered intrasplenically to healthy mice within 60 min prior to stem cell transplantation. Animals were sacrificed either short term at 2 h or middle term seven days after transplantation. Immunohistochemical techniques to detect alkaline phosphatase activity were used to identify the transplanted cells within the liver parenchyma.ResultsAnti-CD54 and anti-CD61 administration increases vascular patency and cell engraftment. This represents a 32% and 45% increase, respectively, of engrafted cells compared to the control (p < 0.05).ConclusionModification of the vascular wall with monoclonal antibodies against endothelial adhesion molecules before cell transplantation enhances cell engraftment into the mouse liver.     

弥散张量成像鉴别诊断肾透明细胞癌与肾盂移行细胞癌

目的评价MRI弥散张量成像(DTI)在肾透明细胞癌(ccRCC)与肾盂移行细胞癌(TCC)鉴别诊断中的价值。方法回顾性分析行腹部MR检查、经病理证实为ccRCC及TCC的患者38例(ccRCC 29例,TCC 9例)。患者均行MR T1W脂肪抑制和T2W脂肪抑制序列扫描、LAVA增强扫描、DTI序列扫描(b=0、600s/mm~2)。由2名放射科医师采用AW 4.4工作站采用Functool后处理软件进行图像分析和测量。采用组内相关系数(ICC)检验2名察者所测数据的一致性。ccRCC和TCC ADC值及FA值的比较采用独立样本t检验。采用ROC曲线分析ADC值、FA值对ccRCC与TCC的鉴别诊断效能。结果 2名观察者测量各参数一致性良好(ICC值均0.75)。ccRCC的ADC值[(2.03±0.49)×10~(-3) mm~2/s]高于TCC[(1.57±0.43)×10~(-3 )mm~2/s;P=0.015)],但ccRCC的FA值(0.24±0.10)低于TCC(0.42±0.22);P=0.002)。ADC值曲线下面积0.761(P0.05),敏感度和特异度分别为79.3%、77.8%,阈值为1.59×10~(-3) mm~2/s。FA值曲线下面积为0.762(P0.05),敏感度和特异度分别为66.7%、93.1%,阈值为0.326。结论 MR DTI可有效鉴别ccRCC和肾盂TCC,其中FA值对鉴别两者的特异度较高。