大鼠肝癌自发肺转移裸鼠模型的建立

目的　建立大鼠肝癌细胞系自发性肺转移裸鼠模型。方法　大鼠肝癌细胞系C5F皮下接种 4周龄雄性和 7周龄雌性BALB/CA裸鼠 ,观察皮下成瘤及肺部和腹腔脏器的大体转移灶形成情况 ,取可能转移的器官作组织学检查 ,肺组织连续切片并计数镜下转移灶。结果　裸鼠皮下成瘤率 10 /10 ,雌性裸鼠中肺表面肉眼可见明显转移灶 ,转移率为 6/6,肺表面大体转移灶中位数45 ,镜下转移灶中位数 75 5个 /裸鼠 ,腹腔及其脏器均未见转移灶。雄性裸鼠未见大体和镜下转移灶。结论　该细胞系在雌性BALB/cA裸鼠中能充分表达自发转移潜能 ,肺脏是其优势转移器官。成功建立的大鼠肝癌细胞自发肺转移裸鼠模型为肝癌转移抑制基因的染色体功能定位研究提供了适宜的动物模型。     

与高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽对人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响

目的 研究与高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽(AWYPLPP肽)对不同转移潜能人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响.方法 采用侵袭实验探讨AWYPLPP肽对不同转移潜能的人肝癌细胞株体外侵袭表型的影响;利用迁移实验、黏附实验和明胶酶谱实验研究其可能的作用机制,采用单因素方差分析检测结果.结果 在AWYPLPP肽浓度为0.10～100.00 μmol/L时,其能显著促进高转移潜能人肝癌细胞株HCCLM3的侵袭能力,呈剂量效应关系;在浓度为100.00μmoL/L时,其能促进其他高转移潜能人肝癌细胞株MHCC97、MHCC97H和HCCL,M6的侵袭能力(F=4.84,8.19,25.42,P<0.05),对低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L、PLC/PRE/5和Hep3B的侵袭能力无明显影响.迁移实验和黏附实验表明,AWYPLPP肽对HCCLM3的迁移和黏附能力无影响;明胶酶谱实验发现,AWYPLPP肽作用后HCCLM3细胞分泌活性型基质金属蛋白酶9(MMP-9)明显增加.结论 AWYPLPP肽能促进高转移潜能人肝癌细胞株体外侵袭能力,其作用的机制可能与活性型MMP-9分泌增加有关.     

保持人肝癌生物学特性的人肝癌组织裸鼠肝内种植模型的建立

目的建立保持人肝癌特性的裸鼠肝内种植模型。方法用新鲜的人肝癌组织种植于裸鼠肝脏 ;B型超声观察种植瘤的体积变化 ;解剖及显微镜下观察种植瘤的转移情况及组织细胞病理特征 ;免疫组化和RT PCR法测定其MDR1和LRP ;SPECT检测荷瘤鼠骨转移情况。结果第 1代种植 8只裸鼠 ,2w后种植瘤 10 0 %存活 ,并分泌AFP ;8～ 10w内有肝内转移的占 75 0 % ,骨转移占37 5 % ,10w末处死模型鼠 ,有肺转移的占 37 5 % ;种植瘤的病理特征与瘤源患者肝癌一致 ;种植瘤与原肿瘤源组织MDR1、LRP蛋白及其mRNA表达差异均无显著性 (P >0 0 5 )。第 2和第 3代模型鼠各 8只 ,种植后 2w 10 0 %存活 ;10～ 14w裸鼠出现衰竭症状后其肝内、肺和骨均有转移。结论该模型保持了人肝癌生物学特性 ,可用于体内研究人肝癌的模型。     

KLF8在不同肝癌细胞株及肝癌组织中的表达及其意义

目的 观察不同肝癌细胞株及肝癌组织中Krappel样因子8(KLF8)的表达,并探讨其意义.方法 用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、免疫化学方法分别检测不同肝癌细胞株及肝(癌)组织中KLF8的mRNA和蛋白质水平.结果 KLF8的mRNA及蛋白质水平随肝癌细胞株侵袭转移潜能的增强而明显升高(P<0.05);正常肝组织(6例)、无转移肝癌组织(17例)、有转移肝癌组织(6例)中KLF8 mRNA的相对表达量分别为0.2377±0.0658、0.4683±0.2073、0.6669±0.0239(P<0.05);在正常肝组织和肝硬化组织中KLF8蛋白表达的阳性率分别为16.7%(1/6)和33.3%(2/6),均为弱阳性,在肝癌组织中强阳性率为81.8%(27/33),肝癌转移灶中强阳性率为83.3%(5/6)(P<0.01).结论 KLF8可能参与肝癌的发生和侵袭转移.     

大鼠高转移肝癌模型的研究进展

肝细胞癌(简称肝癌)是亚、非最常见的恶性肿瘤之一。手术治疗仍然是肝癌的最有效治疗方法,但肝癌切除或肝癌肝移植术后肿瘤的复发和转移是肝癌病人预后差的主要原因,为此,建立大鼠高转移性肝癌模型对于进一步研究肝癌的复发、转移和治疗是非常重要的。     

大鼠肝癌肝移植模型的建立

目的　建立肝癌肝移植动物模型并观察术后肝癌复发的生物学特点。方法　 130只近交系SD雄性大鼠 ,10 0ppm二乙基亚硝胺饲喂诱癌。共 98只大鼠据Kamada袖套技术行原位肝移植 ,术中根据肿瘤大小分为三组 :1组有明确肝癌结节但直径 <1 0cm (n =2 5 ) ,2组肝癌结节直径1 0～ 1 5cm(n =4 1) ,3组肝癌结节直径 >1 5cm(n =32 )。不行肝移植术的 10只大鼠作对照组。结果　三组大鼠肝移植术中死亡率 2 6 5 % (2 6 / 98) ,术后 30d累计死亡率 71 5 % (70 / 98)。术后存活 30d后计算平均生存期 ,1组 (81 3± 33 2 )d ,2组 (6 7 6± 2 4 9)d ,3组 (5 4 4± 2 4 9)d。对照组从诱癌开始 15 0d后计算 ,平均生存期为 (2 9 4± 12 9)d。术后肝癌复发率 35 7% (10 / 2 8) ,单纯移植肝内复发7 1% (2 / 2 8) ,肝和肺同时复发 10 7% (3/ 2 8) ,肝和腹腔同时复发 3 6 % (1/ 2 8) ,单纯腹腔肿瘤 7 1% (2 /2 8) ,单纯肺部肿瘤 7 1% (2 / 2 8)。结论　大鼠肝癌肝移植良好地模仿了临床过程 ,但诱癌大鼠体质差导致术中和术后短期死亡率高。大鼠术后长时间存活是观察到肿瘤复发的重要条件 ,肝癌复发的形式多样。该模型为肝癌肝移植术后抗复发和复发机制研究提供了极好的平台。     

不同转移潜能人肝癌单克隆细胞株的分离和建立

目的 从高转移潜能的人肝癌细胞系中分离出不同转移潜能的单克隆细胞株。方法 采用有限稀释法,对高转移潜能人肝细胞癌细胞系MHCC97进行单克隆培养,筛选不同转移潜能的克隆细胞株,测定目标克隆株的生长速度、核型、AFP分泌情况,体外侵袭能力、裸鼠接种肺转移率。结果 筛选出高、低两个不同转移潜能的单克隆细胞株,分别命名为MHCC97-H和MHCC97-L,前者肺转移率为100%,后者为40%;MHCC97-H的细胞倍增时间为34.2h,MHCC97-L为60.0h;流式细胞分析显示,MHCC97-H与MHCC97-L相比,前者G0-G1期细胞比例低,S期、G2-M期细胞比例高;人工基底膜穿透能力前者明显强于后者。结论 本实验证实了MHCC97癌细胞系的异质性。这两个单克隆细胞株对于肝癌生物学行为的比较研究有一定的使用价值。     

肝素酶与肝细胞癌侵袭转移的关系

我们应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 33例原发性肝细胞肝癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)标本中肝素酶 (heparanase,HPA)的基因表达 ,并结合病人的临床病理学和随访资料 ,以探讨HPA可否作为HCC转移潜能的可靠标志。对象与方法1.研究对象 :新鲜冷冻的标本取自 2 0 0 0年 8月至 2 0 0 1年 4月浙江大学医学院附属第二医院普外科、肿瘤外科手术切除并经病理学检查证实的 33例HCC(包括癌和癌旁肝组织 )和 9例肝脏良性肿瘤 (取瘤旁肝组织作正常对照 )。收集病人临床病理学检查资料 ,HCC组中 ,男 2 8例 ,女 5例 ;年龄2 9～ …     

肝癌肝移植术后肝癌复发大鼠模型的建立

目的通过在大鼠肝癌肝移植后免疫抑制状态下接种肿瘤组织块来模拟临床中同种异体肝移植后肝癌复发的进程,建立稳定的肝移植后肝癌复发模型。方法应用Wistar大鼠肝癌细胞系CBRH-7919经过培养传代、皮下成瘤、肝内接种等过程建立大鼠的种植性肝癌模型。行SD→Wistar的大鼠移植,免疫抑制状态下肝内植入瘤块。A组(n=15),以免疫抑制状态下的未行肝移植的Wistar大鼠肝内植瘤,作为对照组;B组(n=15),为肝移植术中植瘤组;C组(n=15),为术后1周植瘤组。观察各组大鼠的成瘤率,在B超下观察肿瘤生长情况,绘制生长曲线。结果肝移植术中植瘤组(B组)大鼠仅6只成瘤,成瘤率为40.0%,而对照组(A组)和术后植瘤组(C组)大鼠各有13只成瘤,成瘤率为86.7%。术中植瘤组大鼠肿瘤生长速度明显降低。结论肝移植术后1周在免疫抑制状态下肝内接种瘤块成瘤,建立了安全、可靠的肝移植术后肝癌复发的大鼠模型。     

肝细胞肝癌侵袭性及门静脉癌栓形成与ezrin

目的探讨细胞骨架连接蛋白ezrin在肝癌组织以及肝癌细胞系中的表达，及其与肿瘤侵袭性的关系。方法手术切除肝细胞肝癌标本及其相应癌旁肝组织41例以及同期良性肝病肝组织9例，按照肿瘤大小、有无播散灶及远处转移、有无包膜、有无门静脉癌栓等将肿瘤分为高侵袭和低侵袭两组，分别采用RTPCR、Western和免疫组化技术检测ezrin的表达。并检测MHCC97L、MHCC97H和LM3三株细胞系的ezrin表达。结果高侵袭肝细胞肝癌组织ezrin表达强度显著高于低侵袭肝细胞肝癌组织（P〈0．05），癌栓组织ezrin表达强度更高（P〈0．05）。三株细胞系均表达ezrin，其强度随侵袭性增高依次增强。结论Ezrin在肝癌组织中的表达增加与肿瘤侵袭及门静脉癌栓的形成相关。Ezrin在MHCC97L、MHCC97H和LM3三株细胞系均表达，其表达强度随侵袭性增强而依次增加。     

自分泌运动因子受体和RhoC基因在肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的　探讨自分泌运动因子受体 (AMF R)基因和RhoC基因的表达在肝细胞癌(HCC)侵袭转移的作用。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)在半定量水平检测 2 5例HCC及其相对应的癌旁肝组织中AMF R和RhoCmRNA的表达。将 2 5例HCC分为AMF R过表达组和高表达组或RhoC过表达组和高表达组 ,比较两组在临床病理特征方面的差异 ;同时对HCC中AMF R和RhoC基因的表达进行相关性分析。结果　 2 5例HCC中AMF R和RhoCmRNA的表达量均较癌旁肝组织高 (P <0 0 1) ;过表达AMF RmRNA组的HCC更易出现静脉浸润 ,且以结节性HCC居多 (P <0 0 5 ) ;而过表达RhoCmRNA组的HCC分化较差 ,静脉浸润严重 ,以结节性HCC居多且多伴有肝外转移灶 (P <0 0 5 )。HCC中AMF R和RhoCmRNA的表达呈正相关。结论　AMF R和RhoCmRNA的过表达促进HCC的侵袭和转移 ,两者在HCC中的表达具有相关性     

放射后肝癌细胞MMP-2表达、活性的变化及其对侵袭性的影响

目的 探讨放射后肝癌细胞侵袭潜能的变化及其机制.方法 以不同剂量(0、4、8Gy)高能X线照射人肝癌低转移潜能细胞株MHCC97L.明胶酶谱法检测放射后24、48、72、96 h细胞培养上清液金属蛋白酶(MMP)-2活性,细胞免疫荧光法检测放射后24、48和72 h细胞内MMP-2蛋白表达,Transwell法测定放射后48和96 h细胞的侵袭能力.结果 放射后细胞MMP-2蛋白分泌及活性增强并与放射剂量及时间相关,8 Gy放射后48 h MMP-2蛋白活性最高,达到对照组的2倍.0、4、8 Gy放射后48 h穿过transwell小室的细胞数分别为7.2±1.9、13.2±2.7和31.2±7.2(P＜0.05),放射后96 h组间差异无统计学意义.结论 放射后肝癌细胞侵袭潜能短暂增强,放射诱导细胞MMP-2分泌及活性增强是侵袭性增强的原因之一.     

联合检测血清甲胎蛋白、γ-谷氨酰转肽酶和 a-L-岩藻糖苷酶对肝细胞癌根治术后转移复发的预测价值

目的 探讨血清甲胎蛋白(AFP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)和a-L-岩藻糖苷酶(AFU)对肝细胞癌(HCC)根治术后转移复发的预测价值.方法 收集我院2005年12月至2007年12月80例 HCC根治术后患者的术前术后血清AFP、GGT、AFU检测结果及随访资料,对比分析AFP、GGT、AFU与转移复发及1年无瘤生存率(DES)的关系.结果 80例肝癌患者术后AFP、GGT、AFU阳性率分别为25.0%、51.2%和28.6%,术后发生复发转移者在AFP、GGT和AFU阳性组分别为75.0%、73.2%和87.0%,1年DFS分别为45.0%、36.6%和13.0%.而阴性组分别为38.3%、20.5%和31.6%,1年DFS分别为75.0%、94.9%和89.5%.术后AFP、GGT和AFU三者均为阳性组患者均有复发转移,其1年DFS为0.而三者均为阴性组患者复发转移率为17.6%,其1年DFS为97.1%.结论 联合检测AFP、GGT、AFU可明显提高对转移复发预测的阳性率,且对于术后转移复发的预测价值优于单项检测.     

特异结合唾液酸化LewisX抗原DNA适配子抑制肝癌细胞株HepG2体外侵袭转移

目的 观察特异结合唾液酸化LewisX (SLeX)抗原DNA适配子抑制HepG2细胞与E-选择素黏附能力及其体外抑制HepG2细胞浸润转移能力.方法 采用黏附实验、Transwell体外侵袭实验,检测该适配子对HepG2细胞与E选择素黏附及对HepG2细胞体外侵袭的影响.结果 该DNA适配子可有效抑制HepG2细胞与E-选择素黏附,黏附细胞数随适配子浓度的增加而减少(P＜0.01),20 nmol浓度的适配子与单克隆抗体CSLEX-1效果相似;Transwell侵袭实验中,5、10、20nmol适配子组的侵袭细胞数分别为159.00±3.27、142.00±5.50、115.00±5.07,与对照组(178.00±4.64)比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 特异结合唾液酸化LewisX抗原DNA适配子可以抑制HepG2细胞与E-选择素黏附,阻断Lewis-selectin途径,抑制HepG2细胞体外侵袭转移.     

三结构域蛋白28通过上皮-间充质转化对肝癌细胞侵袭迁移的影响

目的观察沉默三结构域蛋白28(TRIM28)表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法通过RNA干扰技术(RNAi)构建干扰TRIM28表达的短发卡RNA(shRNA)质粒,对高表达TRIM28的肝癌细胞株HepG2和人高转移肝癌细胞(HCCLM3细胞)对照组及实验组转染shRNA 48 h后,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TRIM28基因沉默效率。应用划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测TRIM28基因沉默对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达。使用SPSS 19.0软件进行统计学分析,组间比较采用t检验。结果RT-qPCR结果显示实验组TRIM28表达(HepG20.84±0.02,HCCLM30.69±0.02)在两组肝癌细胞中均低于对照组(HepG21.00±0.05,HCCLM31.00±0.07,t=5.488、7.240,P<0.01),差异有统计学意义。划痕实验结果显示,48 h实验组HepG2和HCCLM3细胞迁移率[(57.83±0.02)%、(21.52±0.05)%]均明显低于对照组[(94.96±0.02)%、(38.10±0.03)%],差异有统计学意义(t=22.971、5.780,P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示,相应实验组穿膜细胞数分别为(57.88±5.24)、(3.33±1.36)个,明显低于对照组(265.52±9.31)、(26.03±3.13)个,差异有统计学意义(t=23.050、13.242,P<0.01)。Western blot结果显示,HepG2和HCCLM3细胞N-cadherin蛋白表达量(0.31±0.06,0.63±0.08,t=4.822、2.951,P<0.05)、Vimentin(0.41±0.03,0.32±0.02,t=2.909、7.944,P<0.05)及β-catenin(0.10±0.03,0.12±0.02,t=2.970、4.157,P<0.05)低于对照组,E-cadherin表达升高(0.25±0.05,0.27±0.07,t=3.242、5.021,P<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR结果显示,实验组E-cadherin表达高于对照组(1.80±0.30,1.40±0.17,t=4.571、3.095,P<0.01),差异有统计学意义,N-cadherin(0.42±0.01,0.84±0.03,t=22.460、8.441,P<0.01)、Vimentin(0.18±0.00,0.84±0.02,t=52.230、6.194,P<0.01)及β-catenin表达低于对照组(0.72±0.07,0.34±0.07,t=2.972、4.174,P<0.01),差异均有统计学意义。结论降低TRIM28表达能抑制肝癌细胞HepG2和HCCLM3的侵袭和迁移能力。     

固生蛋白tenascin对肝细胞癌血管生成及浸润转移的影响

目的　探讨固生蛋白(tenascin ,TN)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma ,HCC)中的表达和与HCC血管生成及浸润转移的关系。方法　应用免疫组织化学法检测4 2例HCC、10例肝硬化和7例正常肝组织内TN的表达情况,观察与HCC病理学特点及微血管密度(microvesseldensity ,MVD)之间的关系。结果　①TN在HCC中的阳性表达率和强度显著高于肝硬化和正常肝脏组织( χ2 =4 15 ,P <0 0 5 ;t=2 4 73,P <0 0 5 ) ;②TN在有包膜侵犯组、病理分级Ⅲ～Ⅳ组及有转移HCC中的阳性表达率及强度明显高于无包膜侵犯组( χ2 =5 4 7,P <0 0 5 ;t=2 138,P <0 0 5 )、病理分级Ⅰ～Ⅱ级组( χ2 =6 87,P <0 0 1;t=2 4 79,P <0 0 5 )以及无转移组( χ2 =10 6 ,P <0 0 1;t=2 6 93,P <0 0 1) ;③肝癌>5cm、有包膜侵犯、有转移、病理分级Ⅲ～Ⅳ级组的MVD值明显高于肝癌≤5cm(t=2 0 36 ,P <0 0 5 )、无包膜侵犯(t =2 32 8,P <0 0 5 )、无转移(t =2 4 94 ,P <0 0 5 )及病理分级Ⅰ～Ⅱ级组(t =2 2 71,P <0 0 5 )。④TN阳性表达HCC中的MVD值明显高于TN阴性表达HCC中的MVD值(t =2 4 87,P <0 0 5 )。结论　TN在HCC组织中的表达上调与其血管生成和浸润转移有关     

上皮间质转化与肝细胞癌肺转移的相关性研究

目的 研究上皮间质转化和肝细胞癌肺转移的关系.方法 2000年1月至2004年3月于中山医院肝外科手术病理诊断为肝细胞癌的患者中,根据术后随访期内有无肺转移分为有肺转移组和无远处转移组,每组随机选择50例患者的原位肝癌组织制成组织芯片.用免疫组织化学染色(二步法)方法检测组织芯片上肺转移组和无远处转移组患者的肝痛组织的上皮间质转化的标志(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin),单因素和多因素分析这些标志和肝细胞癌肺转移的关系.结果 单因素分析了性别、年龄、HbsAg、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤大小、数目、癌栓、包膜、肝门淋巴结、肿瘤分化程度、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(Fibroneetin)的表达与肺转移的相关性,结果显示:患者AFP水平>400 ng/ml、肿瘤直径>10 cm、门静脉癌栓、分化程度低、E-cadherin的低表达、Fibronectin的高表达、Vimentin的高表达与肝细胞癌肺转移相关;多因素分析显示肿瘤直径>10 cm、门静脉癌栓、分化程度低、Fibronectin高表达是肝细胞癌肺转移的危险因素.结论 肝细胞癌患者肝癌组织的上皮间质转化与其发生肺转移有密切关系.     

Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及其与侵袭、转移的关系

目的 研究Survivin基因在原发性肝细胞癌中的表达水平及其与肝癌侵袭转移的相关性.方法 收集4种肝细胞癌细胞株,35例原发性肝癌组织标本及相应的癌旁组织,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Survivin mRNA转录情况;Western blot法检测Survivin蛋白表达.结果 在mRNA水平4株肝癌细胞株随侵袭转移能力升高Survivin表达依次升高(P＜0.01),HC-CLM6细胞株中Survivin表达水平最高.肝癌组织Survivin mRNA表达均为阳性,而癌旁组织内无一例阳性表达,Survivin mRNA的表达水平在肝内转移组(1.082±0.213)显著高于肝内无转移组(0.799±0.324,P＜0.05).Western blot的结果与RT-PCR结果一致,肝内转移组Survivin蛋白表达(0.892±0.198)显著高于肝内无转移组(0.342±0.237,P＜0.05).结论 Survivin在原发性肝细胞癌中表达,且与侵袭转移等肿瘤的恶性生物学行为有关,Survivin基因高表达可作为判断HCC侵袭性和进展的一个潜在重要指标.     

骨桥蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系及肝癌组织中表达意义

目的 研究不同转移潜能人肝癌细胞系及其肝癌组织中骨桥蛋白(OPN)表达情况,分析OPN表达与肝癌细胞侵袭转移潜能、肝癌术后复发转移的关系.方法 应用细胞免疫组化、半定量RT-PCR、Western Blot和ELISA检测不同转移潜能人肝癌细胞系SMMC-7721、MHCC97-L和HCCLM6 OPN表达情况.应用组织芯片、免疫组化检测200例肝癌组织中OPN表达.结果 OPN表达水平随着肝癌细胞侵袭转移潜能增加逐渐升高.肝癌组织中OPN表达与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、有无包膜、细胞分化以及肝门淋巴结转移无明显相关性.而与肝癌TNM分期、门静脉癌栓和术后复发转移发生有明显相关(P<0.05).术后有复发转移病人的肝癌组织中66%表达OPN,而术后无复发转移病人的肝癌组织中仅37%表达OPN,两者比较差异具有显著性(P<0.05).结论 OPN表达与肝癌细胞细胞系侵袭转移潜能密切相关.肝癌组织中OPN表达可能是预测肝癌术后是否发生复发转移指标.     

消炎痛抑制肝细胞肝癌生长转移的研究

目的 观察消炎痛(Indomethacin)对有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖侵袭的影响和对裸鼠肝癌生长和转移的抑制作用.方法 (1)体外实验:采用0.2 mmol/L的消炎痛分别作用于MHCC97L细胞,观察细胞增殖、侵袭实验、运动实验和血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达[酶联免疫吸附试验(ELISA)].(2)体内实验:建立转移性人肝癌裸鼠原位模型后,将裸鼠随机分为对照组和消炎痛组.6周后处死动物,测量肿瘤体积,计算抑瘤率、肺转移灶数目及肺转移率.免疫组织化学方法检测VEGF、MMP-2、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达.结果 (1)体外实验:0.2mmol/L消炎痛明显抑制MHCC97L细胞增殖(P值均＜0.01),消炎痛组穿过人工基底膜(侵袭实验)和上室底膜(运动实验)的细胞数分别为2.2±1.3和4.4±1.1,明显低于对照组(11.4±1.9和12.8±1.8,P值均＜0.01);ELISA法检测发现,消炎痛组VEGF蛋白和MMP-2蛋白含量和对照组比较明显降低(P值均＜0.01).(2)体内实验:对照组、消炎痛组肿瘤体积分别为(1700 ±422)mm3 和(1170±585)mm3(P＜0.05),肺转移率分别为75%和50%(P＞0.05),平均肺转移灶数目分别为2.92±2.07和1.33±1.56(P＜0.05);与对照组比较,消炎痛组的抑瘤率为31.2%.免疫组织化学染色显示,消炎痛组VEGF、MMP-2、COX-2蛋白的表达和对照组比较均有降低(P值均＜0.01).结论 在一定条件下,消炎痛可抑制肝细胞肝癌的生长转移,其作用和抑制VEGF蛋白和MMP-2蛋白的表达有关.

Abstract：

Objective To study the effects of indomethacin on proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97L with metastatic potential and the effect of indomethacin on the growth and metastasis of HCC. Methods (1) In vitro; Proliferation, Transwell invasion assay, cell motility assay, vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) protein activity were evaluated after cells were treated with 0. 2 mmol/L indomethacin. (2)In vivo: Mice bearing xenografts in the liver were randomly divided into control and indomethacin groups. At the end of sixth week, the mice were killed and tumor volume, inhibitory rate, immunohistochemistry assay (IHA) and metastasis were evaluated. Results (1)In vitro; 0. 2 mmol/L indomethacin could inhibit the proliferation of MHCC97L cells markedly (P ＜0. 01). The average amount of invading cells per field in cell invasion assay and motility assay was 2. 2 ± 1. 3 and 4.4 ± 1. 1 respectively in indomethacin group, significantly less than in control group ( 11. 4 ± 1. 9 and 12. 8 ± 1. 8 respectively, P ＜0. 01). The expression of VEGF and MMP-2 in cells treated with indomethacin was significantly lower than in control group (P ＜0. 01). (2)In vivo; Tumor volume, incidence and number of lung metastases in control and indomethacin groups were (1700 ±422) mm3 and (1170 ± 585) mm3 (P ＜ 0. 05), 75% and 50% ( P ＞ 0.05), 2. 92 ± 2. 07 and 1.33 ±1.56 (P＜0. 05) , respectively. Inhibition rate in indomethacin group was 31.2%. IHA showed that the expression of VEGF, MMP-2, and cyclooxygenase-2 ( COX-2) was down-regulated in indomethacin group (P ＜0.01). Conclusion Indomethacin could inhibit the growth and metastasis of HCC, which was in part mediated by down-regulation of VEGF and MMP-2.