二胺氧化酶在乳腺肿瘤中表达的研究

目的:了解二胺氧化酶(DAO)在乳腺肿瘤中的表达及其对乳腺癌早期诊断的价值.方法:利用自制的小鼠抗人DAO单克隆抗体对60例乳腺肿瘤组织进行免疫组化染色,分析DAO在不同分型乳腺癌中的阳性结果及与临床病理的关系.结果:DAO在乳腺癌组织中有较高的阳性表达率,而在乳腺腺瘤组织表达较低,经统计学处理两者有显著差异(P＜0.01).结论:DAO是乳腺癌早期表达的标志酶,对早期诊断乳腺肿瘤的良恶性程度及预后具有一定的参考价值.     

二胺氧化酶在乳腺肿瘤中表达的研究

目的:了解二胺氧化酶(DAO)在乳腺肿瘤中的表达及其对乳腺癌早期诊断的价值.方法:利用自制的小鼠抗人DAO单克隆抗体对60例乳腺肿瘤组织进行免疫组化染色,分析DAO在不同分型乳腺癌中的阳性结果及与临床病理的关系.结果:DAO在乳腺癌组织中有较高的阳性表达率,而在乳腺腺瘤组织表达较低,经统计学处理两者有显著差异(P＜0.01).结论:DAO是乳腺癌早期表达的标志酶,对早期诊断乳腺肿瘤的良恶性程度及预后具有一定的参考价值.     

胰岛素酶联免疫测定法的研究快速制备高质量胰岛素抗血清(Ⅰ)

本文报告制备胰岛素抗血清的新方法。每只免疫动物的胰岛素用量为200～300μg.免疫时间60天。经放射免疫分析,10株抗血清的50%B/T稀释度均大于1:10万,最高者达1:26万。用计算机进行Scatchard分析,10株抗血清的Ka_1均大于1.5×10~(12)L/M,Ka_2均小于4×10~(?)L/M。[Ab~·]_1,在0.5～1.6×10~(-12)M/L之间,[Ab~°]_2均大于1×10~(-11)M/L。10株抗血清与前胰岛素、胰多肽和胰高血糖素进行放免分析,均无交叉反应。     

SD大鼠二胺氧化酶活力测定方法的研究

目的建立SD大鼠二胺氧化酶活力测定方法。方法采用分光光度法,酶反应体系包括底物戊二胺,催化酶二胺氧化酶和辣根过氧化物酶,邻联二茴香胺和磷酸盐缓冲盐溶液,反应体系pH为7．2,反应温度为37℃,检测波长460nm。结果二胺氧化酶在2．5—40mg／ml浓度范围内均呈良好的线性关系,r=0．9983（n=5）。血清二胺氧化酶平均回收率为97．74％,RSD为1．51％;小肠二胺氧化酶的平均回收率为97．49％,RSD为1．01％。稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0．9982。结论本方法简便、灵敏、稳定、可靠,作为特征酶可应用于肠缺血再灌注MODS疾病模型的研究。     

新生儿缺氧缺血性脑病血二胺氧化酶和胃泌素的测定及意义

目的:探讨血二胺氧化酶(DAO)和胃泌素(GAS)水平与新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)程度之间的关系。方法:设研究组HIE患儿45例和对照组15例,采用酶联免疫法检测新生儿第1天~第2天血清中的DAO和GAS的浓度,结合相关临床资料对比分析,并进行统计学处理。结果:HIE患儿血DAO和GAS的浓度高于正常新生儿,差异有统计学意义(P<0.05),且血DAO和GAS的水平与HIE患儿的严重程度存在相关性。结论:根据血DAO和GAS的水平可判断HIE患儿的严重程度,并可指导治疗及估计预后。     

双抗体夹心ELISA法定量检测左旋多巴

目的建立左旋多巴的酶联免疫定量分析方法。方法以左旋多巴与载体蛋白钥孔戚血蓝素偶联,制备免疫抗原Levodopa-KLH。采用杂交瘤技术制备的特异性抗左旋多巴单克隆抗体作为包被抗体,待测左旋多巴为夹心抗原,免疫抗原Levodopa-KLH免疫新西兰兔得到的多克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定左旋多巴的双抗体夹心ELISA方法。结果左旋多巴浓度在40～2 000 ng/mL范围内呈良好线性关系,Y=0.8367 X+0.3423,相关系数r2=0.993 3,检测限为20 ng/mL。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为9.53%和12.77%,平均回收率为87.86%,与卡比多巴、多巴胺、异丙肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺素、维生素C、5-羟色胺、金刚烷胺基本无交叉反应,健全性分析表明,人血清稀释倍数对该方法无影响,8 d连续检测标准曲线表明稳定性良好。结论这种定量检测左旋多巴的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为左旋多巴研究提供了定量检测的方法,并为药代动力学、临床血药浓度监测提供备选方法。     

二胺氧化酶在肝癌组织中的基因表达

目的:探讨二胺氧化酶(DAO)在人类原发性肝癌组织中基因表达。方法:应用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例人类正常肝脏组织、36例人原发性肝癌旁组织和36例人原发性肝癌组织新鲜标本中基因mRNA的表达情况。结果:在肝癌组织中DAO基因呈高表达。结论:肝脏中DAO基因表达随肿瘤的发展而变化。     

抗恩诺沙星抗血清的制备及其ELISA检测

目的:建立快速、灵敏的恩诺沙星残留酶联免疫检测方法(ELISA)。方法:采用混合酸酐法,将恩诺沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(Enrofloxac in-BSA)和包被抗原(Enrofloxac in-OVA)。通过背部多点免疫法免疫日本大白耳兔,制备抗恩诺沙星的特异性抗血清。结果:利用所获得的特异性抗血清,建立的恩诺沙星ELISA检测方法,其线性范围为5 ng.mL-1～2.5μg.mL-1(R2=0.9935),且与HPLC方法具有良好的相关性(R2=0.9892,n=9)。牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为98.4%～105.8%,91.7%～101.2%,97.0%～110.3%。运用所建立的方法,对大鼠体内血浆及药品中恩诺沙星的含量进行了测定。结论:本研究所建立的检测恩诺沙星的ELISA方法具有样品前处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,适合用于恩诺沙星的体内分析及动物性食品中恩诺沙星的残留分析。     

二胺氧化酶在乳腺肿瘤中的表达

二胺氧化酶是一种催化二胺氧化的酶,以前称为组胺酶。本文应用免疫组化LSA'法,对45例乳腺肿瘤进行了DAO检测,并结合其表达情况进行了分析,结果表明,DAO在乳腺癌中多数呈阳性反应,其阳性率为87.5％。癌旁组织和腺瘤组织仅少数表达阳性,阳性率分别为8.6％和10％。DAO在乳腺癌中含量较高,与癌旁组织和腺瘤有非常显著差异(P<0.01)。所以,DAO可以用来做为检测乳腺癌的标志酶。对乳腺癌的早期诊断和治疗可能有一定临床意义。     

血清二胺氧化酶和肠脂肪酸结合蛋白测定评价窒息新生儿胃肠功能障碍的临床研究

目的 研究血清二胺氧化酶(DAO)和肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)测定对窒息新生儿胃肠功能障碍临床意义。方法 入选本院收治的38例窒息新生儿作为试验组,将同期30例无窒息、感染、消化系统疾病的健康新生儿作为对照组。所有窒息新生儿接受标准的复苏方案,健康新生儿不采取额外的干预措施。用酶联免疫吸附法检测新生儿外周血血清DAO和I-FABP水平。分别比较试验组和对照组新生儿,试验组内轻度窒息和重度窒息的新生儿,试验组内肠道轻度损伤和重度损伤的新生儿外周血DAO、I-FABP水平差异,并分析新生儿外周血DAO、I-FABP水平与Apgar评分和急性肠道损伤(AGI)分级的相关性。结果 对照组和试验组新生儿的出生第1天DAO水平分别为(5.87±1.23)和(17.89±3.50)U·L^-1,I-FABP水平分别为(48.33±6.12)和(220.60±39.57) ng·L^-1;出生第5天DAO水平分别为(5.83±1.02)和(8.93±2.51)U·L^-1,I-FABP水平分别为(41.24±6.59)和(110.79±...     

电化学发光法和ELISA法检测HBsAb的结果分析

目的探讨电化学发光法（ECLIA）和酶联免疫吸附实验法（ELISA）检测乙肝表面抗体的结果差异。方法选取沈阳医学院奉天医院2011年8～11月门诊和住院部送检的HBsAb为阳性的血液标本536份,分别进行ECLIA法和ELISA法进行检测,并对结果进行分析。结果ECLIA检测HBsAb在10～50IU,L时,ELISA的阳性率只有6．62％,说明ELISA方法的灵敏度不如电化学发光法高。与电化学发光法比较,ELISA方法的敏感性为41．24％,特异性为98．04％,符合率为46．64％,阳性预测值为99．50％,阴性预测值为12．99％。结论在临床常规检测标本中,电化学发光法和ELISA法检测结果相似。但电化学发光法的灵敏度高于ELlSA法。电化学发光法检测HBsAb对乙肝疫苗接种是否成功是非常有意义的。     

人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用

目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗(HPV16 L2E6E7)酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性(R2>0.99)和回收率(90%~110%);特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。     

梅毒ELISA法检测RPR、TRUST试验比较及其在输血检测中的作用

目的 探讨梅毒ELISA法检测在输血检测中的应用。方法 以梅毒ELISA法检测技术与RPR,TRUST及TPPA法对若干样本例检测结果进行对比分析。结果 ELISA法与TRUST法检测结果差异有显性,而与TPPA法检测结果差异无显性。结论ELISA法优于TRUST,RPR法,可适用在输血检测工作中。     

间接ELISA测定血清中RI含量方法的建立

目的：建立检测血清中核糖核酸酶抑制因子（Ribonuclease Inhibitor，RI）含量的问：陵酶联免疫吸附法（EUSA），并分析该方法的特异性和敏感性。方法：用血清样品包被酶标板，兔抗人RI抗体为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体为二抗，建立血清RI定量检测的间接EUSA法。结果：所建立的用于血清中RI含量检测的间接ELISA方法特异性好．灵敏度高。结论：间接ELISA法可以用于测定血清中的RI抗原含量，具有良好的灵敏度和稳定性，能够有效的反映出人血清中的RI表达情况。     

用夹心酶联免疫法研究hGM-CSF在大鼠体内的药物代谢动力学

用灵敏的夹心酶联免疫法(ELISA)建立了检测重组人hGM-CSF药代动力学的方法。此方法hGM-CSF在12.5～0.39ngml^-1范围内,检测呈线性相关。最低检测灵敏度为0.4ngml^-1。本方法不受血清中潜在干扰因素的影响,检测具高度特异性。大鼠schGM-CSF50,100,200μgkg^-1后15min,血中即有较高浓度的hGM-CSF,1h左右达峰浓度,以后快速下降。皮下给药,尿中可检测到原型hGM-CSF,但累积排泄率较低。本研究为临床合理用药提供依据。     

用夹心酶联免疫法研究hGM－CSF在大鼠体内的药物代谢动力学

用灵敏的夹心酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）建立了检测重组人ｈＧＭ－ＣＳＦ药代动力学的方法。此方法ｈＧＭ～ＣＳＦ在１２．５～０．３９ｎｇ·ｍｌ￣（－１）范围内，检测呈线性相关。最低检测灵敏度为０．４ｎｇ·ｍｌ￣（－１）。本方法不受血清中潜在干扰因素的影响，检测具高度特异性。大鼠ｓｃｈＧＭ－ＣＳＦ５０，１００，２００μｇ·ｋｇ￣（－１）后１５ｍｉｎ，血中即有较高浓度的ｈＧＭ－ＣＳＦ，１ｈ左右达峰浓度，以后快速下降。皮下给药，尿中可检测到原型ｈＧＭ－ＣＳＦ，但累积排泄率较低。本研究为临床合理用药提供依据。     

Production of a monoclonal antibody against aflatoxin M1 and its application for detection of aflatoxin M1 in fortified milk

Aflatoxin M1 (AFM1) is a toxic metabolite of the fungal product aflatoxin found in milk. For food safety concern, maximum residual limits of AFM1 in milk and dairy products have been differently enforced in many countries. A suitable detection method is required to screen a large number of product samples for the AFM1 contamination. In this study, monoclonal antibodies (MAbs) against AFM1 were generated using a conventional somatic cell fusion technique. After screening, five MAbs (AFM1–1, AFM1–3, AFM1–9, AFM1–11, and AFM1–17) were obtained that showed cross-reactivity with aflatoxin B1 (AFB1) and aflatoxin G1 (AFG1) but with no other tested compounds. An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using a partially purified MAb and antigen-coated plates yielded the best sensitivity with the 50% inhibition concentration (IC₅₀) and the limit of detection (LOD) values of 0.13 ng/mL and 0.04 ng/mL, respectively. This indirect competitive ELISA was used to quantify the amount of fortified AFM1 in raw milk. The precision and accuracy in terms of % coefficient of variation (CV) and % recovery of the detection was investigated for both intra- (n = 6) and inter- (n = 12) variation assays. The % CV was found in the range of 3.50–15.8% and 1.32–7.98%, respectively, while the % recovery was in the range of 92–104% and 100–103%, respectively. In addition, the indirect ELISA was also used to detect AFM1 fortified in processed milk samples. The % CV and % recovery values were in the ranges of 0.1–33.0% and 91–109%, respectively. Comparison analysis between the indirect ELISA and high performance liquid chromatography was also performed and showed a good correlation with the R² of 0.992 for the concentration of 0.2–5.0 ng/mL. These results indicated that the developed MAb and ELISA could be used for detection of AFM1 in milk samples.     

酶联免疫吸附法检测幽门螺旋菌抗体对慢性胃炎诊断的价值

目的 探索胃部疾病患血清中的幽门螺旋菌（ＨＰ）抗体滴度的临床价值。方法 应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法检测ＨＰ抗体与ＨＰ培养,尿素酶试验和涂片革兰氏染色作镜下形态检查相比较,并同时与变形杆菌蛋白包被测定法作比较。结果 显示该法具有敏感特异性强的特点。结论 该法无需常规内镜检查,活检查ＨＰ而单纯用血清学检查,可广泛应用于临床诊断和流行病学人群普查。     

急性小肠梗阻时肠壁病理学及二胺氧化酶活性的变化

目的 探讨急性完全性小肠梗阻时血清和肠液中二胺氧化酶（DAO）活性改变机制及意义。方法 观察家兔小肠末端结扎梗阻模型在不同时相梗阻肠段的病理学改变,同时测定血清和肠液中DAO的浓度。结果 肠结扎后12小时家兔的肠壁出现充血、水肿、肠粘膜细胞凋亡等损伤性改变,肠液和血清中DAO浓度明显升高,肠结扎后24小时其粘膜部分坏死,DAO浓度继续升高,肠结扎48小时肠壁大部分坏死,肠液和血清中DAO浓度下降至肠结扎前水平。结论测定肠液和血清中DAO浓度的变化可能是诊断急性肠梗阻和选择手术时机的重要依据。     

Blood D-Amino Acid Oxidase Levels Increased With Cognitive Decline Among People With Mild Cognitive Impairment: A Two-Year Prospective Study

BackgroundDysregulation of N-methyl-D-aspartate receptor (NMDAR) neurotransmission has been reported to be implicated in the pathogenesis of Alzheimer’s disease (AD). D-amino acid oxidase (DAO), responsible for degradation of NMDAR-related D-amino acids such as D-serine, regulates NMDAR function. A cross-section study found that serum DAO levels were positively related with the severity of cognitive aging among elderly individuals. This 2-year prospective study aimed to explore the role of DAO levels in predicting the outcome of patients with very early-phase AD, such as mild cognitive impairment (MCI).MethodsFifty-one patients with MCI and 21 healthy individuals were recruited. Serum DAO levels and cognitive function, measured by the AD assessment scale-cognitive subscale and the Mini-Mental Status Examination, were monitored every 6 months. We employed multiple regressions to examine the role of DAO concentration in cognitive decline in the 2-year period.ResultsFrom baseline to endpoint (24 months), serum DAO levels increased significantly, and cognitive ability declined according to both cognitive tests in the MCI patients. Among the healthy individuals, DAO concentrations also increased and Mini-Mental Status Examination scores declined; however, AD assessment scale-cognitive subscale scores did not significantly change. Further, DAO levels at both months 12 and 18 were predictive of cognitive impairment at month 24 among the MCI patients.ConclusionsTo our knowledge, this is the first study to demonstrate that blood DAO levels increased with cognitive deterioration among the MCI patients in a prospective manner. If replicated by future studies, blood DAO concentration may be regarded as a biomarker for monitoring cognitive change in the patients with MCI.