抑制HIV包膜蛋白亚基gp41六股螺旋形成的链霉菌多糖的分离与结构分析

目的从链霉菌发酵液中定向分离纯化抗HIV1包膜糖蛋白gp41六股α螺旋束形成作用的多糖成分,并进行结构分析。方法乙醇沉淀多糖类大分子物质、Sevage法去蛋白、DEAE纤维素离子交换层析法及SephadexG25凝胶过滤法纯化多糖。其结构经HPLC、UV、IR、1HNMR以及高碘酸氧化、Smith降解等方法进行测定。抗HIVgp41活性检测采用夹心ELISA方法。结果分离纯化出的目的多糖属于中性多糖,分子量约为4855ku;单糖组成以葡萄糖为主,含有少量果糖,二者的摩尔比约为22∶1(1096∶048);糖苷键的链接方式为(1→4)αD吡喃型,并含1→6位键合的支链;命名为SMP。SMP对HIVgp41六股α螺旋束的形成有明显抑制作用,其半效抑制浓度(IC50)为(14548±725)mg·L-1。结论从链霉菌发酵液中分离纯化出一种新的抑制HIV包膜糖蛋白gp41六股α螺旋束形成的链霉菌多糖。     

酸性天然凝胶电泳法研究HIV进入抑制剂ADS-J1的作用机制

目的ADS-J1是通过虚拟筛选从20000个化合物中获得的靶向HIVgp41的小分子HIV进入抑制剂。该研究探讨ADS-J1与gp41的结合位点和作用机制。方法采用酸性天然聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(AN-PAGE),研究ADS-J1与衍生于gp41不同功能区的多肽的结合。结果此前采用的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(N-PAGE)等方法,由于不能显示衍生于gp41的N-端多肽,未能确定ADS-J1的作用位点。该研究建立的AN-PAGE技术,能直接显示N-端多肽的条带,证实ADS-J1能与gp41的N-端螺旋重复序列(NHR)复合螺旋核中的深穴结合,从而抑制gp41六螺旋束结构的形成,而且深穴中第574位的赖氨酸残基(K574)与ADS-J1的抑制作用密切相关。结论ADS-J1通过与gp41 NHR靶穴中的K574结合,抑制gp41六螺旋束结构的形成,从而抑制HIV进入靶细胞。此外,该研究建立的AN-PAGE技术,为研究靶向Ⅰ型包膜病毒的病毒进入抑制剂的作用机制提供了一个简便有效的实验方法。     

HIV融合抑制剂的研究进展

人免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）进入靶细胞的过程是由病毒表面的包膜糖蛋白（Env）跨膜亚基gp41介导的。gp41中含有2个α-螺旋疏水重复序列，即N末端重复序列（HR1）和C末端重复序列（HR2）。在融合过程中，它们能寡聚化形成gp4l介导膜融合的功能性结构（6股α-螺旋束核心结构），该结构的形成使得病毒膜与细胞膜接近，继而发生融合。任何可有效阻止6股α-螺旋束核心结构形成的化合物，均有可能产生抗HIV融合活性。多肽类HIV融合抑制剂中C肽和N肽分别衍生于HR2和HR1，具有很好的抗HIV融合活性，C肽类中的新药enfuvirtide（T-20）已于2003年被美国FDA批准上市。现综述近几年HIV融合抑制剂的研究现状及发展方向。     

来源于马尾树树皮的化合物蜡果杨梅酸B抑制HIV进入的机制研究

目的利用假病毒技术,研究来源于马尾树树皮的化合物蜡果杨梅酸B抑制HIV-1进入的活性及作用机制。方法利用pHXB2和pVSV-G两个病毒包膜蛋白质粒,与pNL4-3.Luc.R-E-共转染,构建HIV-1Env假病毒和VSV-G假病毒,检测化合物抑制假病毒感染的活性。采用针对包膜蛋白亚基gp41的ELISA方法,结合分子对接,研究活性化合物抗HIV-1的作用机制。结果从马尾树树皮中来源的2个三萜类单体化合物蜡果杨梅酸B(myriceric acid B)和蜡果杨梅酸C(myriceric acid C)中,仅蜡果杨梅酸B能特异性地抑制HIV-1 Env假病毒感染,其半数抑制浓度(IC50)值为(8.3±0.2)mg·L-1。此外,蜡果杨梅酸B在C-28位羧基的酯化产物蜡果杨梅酸B甲酯(myriceric acid B methyl ester)没有抑制HIV-1进入的活性。蜡果杨梅酸B的进入抑制活性与其抑制gp41六螺旋束结构形成的机制有关。分子对接表明,蜡果杨梅酸B能靶向gp41上N-螺旋三聚体的靶穴位置。结论蜡果杨梅酸B是作用于gp41的HIV-1进入抑制剂,其分子结构中C-28位的羧基及C-3位羟基与抑制活性密切相关。蜡果杨梅酸B可作为先导化合物来研发新的HIV进入抑制剂类抗艾滋病药物。     

新型抗艾滋病药物——HIV进入抑制剂的研究进展

HIV与靶细胞融合的过程是药物干预的重要环节。融合过程主要由H IV包被蛋白表面亚基gp120和跨膜亚基gp41介导。H IV gp120与靶细胞上的CD4分子和辅助受体(趋化因子受体CCR5或CXCR4等)结合,导致gp41的构型发生改变,启动病毒包膜与靶细胞膜的融合。在融合过程中,病毒和靶细胞上的这些蛋白和受体均可作为药物的作用靶点,寻找抑制H IV进入靶细胞的药物用来治疗H IV感染和艾滋病。作用于gp41的肽类药物T-20已被美国FDA批准上市,表明继逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂后,H IV进入抑制剂作为第3类抗H IV药物开始在临床上应用。作为一种新机制的抗H IV药物,H IV进入抑制剂单独或与逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂联合应用,将有助于提高药物的疗效,降低毒副作用,并可望挽救对现有抗H IV药物耐药的艾滋病病人的生命。该文综述了近年来H IV进入抑制剂的研究进展。     

作用于HIV包膜蛋白亚基gp41的多肽类融合抑制剂

HIVgp4 1是病毒包膜上介导HIV与靶细胞膜融合的跨膜糖蛋白 ,其包膜外区包括位于N末端的融合多肽和下游的N末端重复序列 (NHR) ,以及C末端的重复序列(CHR)。衍生于gp4 1NHR和CHR的N 多肽和C 多肽具有抑制HIV与靶细胞融合的活性 ,其中C 多肽T 2 0已获得美国FDA批准 ,成为继逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂后的第三类抗艾滋病药物 ,即HIV融合抑制剂。由于T 2 0等为多肽类药物 ,容易被体内蛋白酶降解 ,临床剂量大 ,用基因工程手段难以满足需要 ,因此只能采用多肽合成技术进行生产 ,成本高昂。为此 ,人们希望寻找到具有相似机制的活性短肽 ,或通过多肽设计使活性多肽适合用基因工程进行大规模生产。近年来 ,对N 多肽和C 多肽进行结构改造已成为研究的热点 ,出现了许多相对分子质量较小 ,不容易被内源性蛋白酶降解 ,或者能用基因工程手段生产的活性多肽 ,同时多肽药物抑制HIV感染的作用机制也因此而逐渐清晰起来     

作用于HIV gp120的进入抑制剂研究进展

HIV-1病毒为包膜病毒,其感染靶细胞的第一步是由HIV包膜蛋白表面亚基gp120与靶细胞上的CD4分子和辅助受体（趋化因子受体CCR5或CXCR4等）结合,导致gp41的构型发生改变,启动病毒包膜与靶细胞膜的融合。与gp120相结合的一些抗体、蛋白、多糖、多肽和小分子化合物,都可能影响HIV-1病毒包膜和靶细胞膜融合的过程,从而起到抗HIV-1病毒的作用。该文对近年来以HIV gp120为靶点的HIV进入抑制剂的研究进展进行综述。     

EGCG乙酸酯的HIV融合抑制活性及其作用机制研究

 目的：研究EGCG乙酸酯的HIV融合抑制活性,并探讨其作用靶点。方法：采用HPLC分析pH对于EGCG乙酸酯稳定性的影响以及EGCG乙酸酯在细胞中的水解产物;采用酶联免疫测定法、细胞-细胞融合方法以及假病毒实验检测EGCG乙酸酯抑制HIV与靶细胞融合的活性;应用分子对接软件研究EGCG与gp41的结合位点。结果：EGCG通过其苯环结构和羟基分别与gp41 NHR区域的疏水残基和正电荷残基结合从而抑制病毒的进入。用乙酰基保护EGCG活性酚羟基形成EGCG乙酸酯,稳定性明显增强。EGCG乙酸酯在酶联免疫反应中无活性,但在细胞实验中能有效抑制HIV介导的细胞融合及HIV假病毒感染,其半数抑制浓度IC50分别为（4.93±0.57）和（1.45±0.32） μg?mL-1。EGCG乙酸酯在细胞中的水解产物被证明为EGCG。结论：EGCG乙酸酯在细胞中能转化为母体药物,从而具有HIV融合抑制活性,且靶向作用于HIV gp41。该前药有望研发为稳定、高效的抗HIV药物,用于HIV的治疗。     

抗HIV药物的筛选评价方法

随着对艾滋病致病机制的深入研究，越来越多新的抗艾滋病病毒（HIV）药物进入临床试验，但大量抗HW药物的应用也导致了耐药性问题的出现。因此，建立高通量快速的抗HW药物筛选平台对研究新的抗HW药物非常重要。本文综述了目前抗HIV药物研究中常用的体外和体内筛选模型，重点阐述了体外以病毒复制特异性功能活动或特定结构作为靶点的筛选系统及其评价方法。     

新霉素A、B及其衍生物抗HIV作用的研究

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficieney virus,HIV)自20世纪80年代被发现以来在全世界范围内迅速蔓延,严重地威胁到人类的健康,故研制高效、低毒的抗HIV药物迫在眉睫.本文综述了新霉素A、B及其衍生物作用于HIV的3个不同途径,包括:(1)与HIV RNA上的TAR和RRE结合;(2)与gp120-gp41竞争性地和CD4,CXCR4\CCR5结合;(3)作用于HIV的171-met ψ-RNA.此外,还针对这3个不同途径分别阐述了其相应的作用机制.新霉素及其衍生物抗HIV作用的研究结果为抗HIV药物的研究提供了更多的研究方向及可借鉴的研究方法.     

P450 aromatase inhibition assay using a competitive ELISA

P450 aromatase (P450arom) is a well known target by anti-cancer drugs and toxic chemicals and efficient and convenient analytical tools are desired for. We established a convenient assay for P450arom inhibition based on an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The first step of the assay consists of a P450arom reaction, which converts a testosterone to a 17beta-estradiol using a recombinant human P450arom and a NADPH regenerating system. The second step of the assay consists of an ELISA system using a highly specific and sensitive anti-estradiol monoclonal antibody in conjunction with estradiol-3-CMO-horseradish peroxidase (E2-3-CMO-HRP). This system has advantages over other P450arom assays because it does not use radioactive ligands and because it is not subject to interference from self-fluorescing test compounds. We could successfully estimate some types of P450arom inhibitors reported before. This assay should be very useful for high throughput screening of drug candidates and endocrine disrupting chemicals via P450arom.     

Screening for potential inhibitors of influenza neuraminidase

AIM: Applying the assay method of neuraminidase(NA) activity established for high throughput screening to find novel inhibitors of influenza virus NA. METHODS: Firstly, a virtual screening strategy was applied to our compound database to select drug-like compounds, and then a high throughput screening model of NA inhibitor was applied to test these compounds. RESULTS:     

Small molecule HIV entry inhibitors: Part II. Attachment and fusion inhibitors: 2004 – 2010

Introduction: The first US FDA approved HIV entry inhibitor drug Enfuvirdine belongs to the fusion inhibitor category. Earlier efforts in this area were focused on peptides and monoclonal antibodies; recently, the focus has shifted towards the development of small molecule HIV attachment and fusion inhibitors. They can be used for prophylactic purposes and also hold potential for the development of HIV microbicides.

Areas covered: In a previous paper (‘Small molecule HIV entry inhibitors: Part I’), we reviewed patents and patent applications for small molecule chemokine receptor antagonists from major pharmaceutical companies. In this paper, the development of small molecule HIV attachment and fusion inhibitors is discussed in detail. It covers patents and patent applications for small molecule HIV attachment and fusion inhibitors published between 2004 and 2010 and related literature with a focus on recent developments based on lead generation and lead modification.

Expert opinion: To augment the potency of currently available antiretroviral drug combinations and to fight drug-resistant virus variants, more effective drugs which target additional steps in the viral replication cycle are urgently needed. HIV attachment and fusion processes are such targets. Inhibitors of these targets will provide additional options for the treatment of HIV drug-resistant strains. Small molecule HIV attachment inhibitors such as BMS-378806 and analogs from Bristol Myers Squibb, N-aryl piperidine derivatives from Propharmacon, and NBD-556 and NBD-557 from New York Blood Center may have potential as vaginal microbicidal agents and can be an economical alternative to monoclonal antibodies.     

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂高通量筛选模型

目的建立体外聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[Poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]抑制剂的高通量筛选模型,筛选潜在的PARP-1抑制剂。方法将PARP-1、裸DNA与底物NAD+反应,再将剩余底物NAD+转化为荧光物质,通过测定其荧光强度来决定PARP-1的活性,并以此筛选PARP-1的抑制剂。建立384孔板的高通量筛选模型,对9280个化合物(包括合成化合物、天然产物、微生物发酵提取物)组成的随机库进行体外筛选。结果筛选出148个活性化合物对PARP-1的抑制作用大于70%,最终确定3个化合物具有较高的抑制活性。结论建立的PARP-1抑制剂高通量筛选模型具有灵敏度高、快速、微量、准确的特点。     

Characterization of a trypsin-dependent avian influenza H5N1-pseudotyped HIV vector system for high throughput screening of inhibitory molecules

In this study, we have generated and characterized an avian influenza H5N1 hemagglutinin (HA), neuraminidase (NA) and M2 ion channel pseudotyped HIV-based vector system (HaNaM-pseudotyped HIV vector). The cleavage site of the HA protein was modified to necessitate trypsin-dependent maturation of the glycoprotein. HA, NA and M2 were efficiently incorporated in HIV vector particles which could transduce different cell lines in a trypsin-dependent manner. Results also showed that the presence of avian influenza M2 and NA proteins maximized both vector production and transduction and that transduction was highly sensitive to the specific NA inhibitor oseltamivir (Tamiflu). H5N1 HaNaM-pseudotyped HIV vector system was also adapted for cell-based high throughput screening of drug candidates against influenza virus infection, and its high sensitivity to the specific oseltamivir validates its potential utility in the identification of new influenza inhibitors. Overall, the trypsin-dependent H5N1-pseudotyped HIV vector can mimic avian influenza virus infection processes with sufficient precision to allow for the identification of new antivirals and to study avian influenza virus biology in a lower biosafety level laboratory environment.     

不同试剂检测艾滋病抗体结果分析

目的研究不同试剂检测HIV抗体的实验结果。方法本样本回顾分析2009年6月—2010年3月对艾滋病标准质控血清采用不同试剂进行60次抗-HIV检测的临床资料。结果北京华大吉比爱与上海科华试剂检测HIV抗体S/CO值及cv%比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;5组S/CO值两种试剂检测HIV抗体均匀性对比及每组试剂HIV抗体检测结果与第1次检测结果均匀性对比差异均无统计学意义（P〉0.05）。1、6、12月三个不同时间HIV抗体S/CO值比较,两组试剂第6、12月份与第1个月检测结果HIV抗体稳定性及两组间不同存储时间HIV抗体S/CO平均值稳定性比较均无差异性（P〉0.05）。结论两种试剂筛检HIV抗体临床检测灵敏度、准确度和稳定性均较高,可相互校正,无明显差异性,这对于筛检HIV抗体阳性者是很有利的。