羧胺三唑联合小剂量地塞米松抗肿瘤作用研究

目的 研究羧胺三唑（CAI）对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用及其作用机制.初步探索CAI与小剂量地塞米松（DEX）合用是否有抑瘤增效作用.方法 建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,评估CAI、DEX及其合用组的抗肿瘤疗效.ELISA法检测肿瘤匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平.免疫荧光法对提取的肿瘤内巨噬细胞进行鉴定.RT-PCR法检测肿瘤内巨噬细胞中TNF-α mRNA表达水平.结果 CAI抑制移植瘤的生长.同时CAI能降低肿瘤内巨噬细胞中TNF-α的水平（P＜0.01）.CAI与小剂量DEX联合应用,其抑瘤作用及抑制TNF-α水平与单用组相比明显增强（P＜0.05）.结论 CAI能够抑制移植瘤生长,其作用机制可能与抑制肿瘤中巨噬细胞的TNF-α水平有关.通过与地塞米松联合应用,可起到抗肿瘤增效作用.     

羧胺三唑对TNF-α诱导的成纤维样滑膜细胞增殖及MMP-1、MMP-3表达的影响

目的 研究羧胺三唑（CAI）对TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖以及MMP-1、MMP-3表达的影响.方法 用弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎模型,并分离培养佐剂性关节炎大鼠的FLS.实验分为对照组,20 ng/ml TNF-α组,同时加入TNF-α和溶剂DMSO组,以及同时加入NF-α和不同浓度CAI（10、20、40 μmoL/L）组.CCK-8法检测FLS的增殖反应,Western blot法检测MMP-1和MMP-3的蛋白表达.结果 20 ng/mlNF-α能明显增加佐剂性关节炎大鼠FLS的增殖反应,增加MMP-1和MMP-3的蛋白表达（P＜0.01）.CAI（20、40 μmol/L）能够显著抑制TNF-α对佐剂性关节炎大鼠FLS的促增殖反应（P＜0.01）,抑制率分别为（31.13±7.07）％和（42.48±5.84）％,且CAI能够降低TNF-α诱导的MMP-1和MMP-3产生（P＜0.01）.结论 CAI体外给药能够抑制TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠FLS增殖以及产生MMP-1和MMP-3,这可能是其抗关节炎作用的机制之一.     

羧胺三唑对TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞中细胞因子分泌和NF-κB活化的影响

目的 探讨羧胺三唑对TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞分泌促炎细胞因子的影响及部分机制.方法 用弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎模型,分离培养的佐剂性关节炎成纤维样滑膜细胞用20 ng/ml TNF-α刺激并用不同浓度羧胺三唑（10、20、40 μmol/L）处理.ELISA法检测成纤维样滑膜细胞上清中IL-1β和IL-6含量,Western blot法检测NF-KB p65的蛋白表达.结果 经20 ng/mlTNF-α刺激后,成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β和IL-6水平,以及细胞核中NF-KB p65的表达显著增加（P＜0.01）.羧胺三唑（20、40 μmol/L）能够显著抑制TNF-α诱导的IL-1β[（417.39 ＋29.80） pg/mlvs.（264.63±9.35） pg/ml,（186.13±25.71）pg/ml,P ＜0.01]和IL-6[（383.45±32.13） pg/ml vs.（248.39±30.51） pg/ml,（189.64±27.86） pg/ml,P＜0.01]分泌,且明显减少细胞核中NF-κB p65的表达（P＜0.01）.结论 羧胺三唑可能通过抑制NF-KB活化来减少TNF-α诱导的佐剂性关节炎成纤维样滑膜细胞中促炎细胞因子IL-1β、IL-6的产生.     

羧胺三唑抑制肺癌Lewis细胞生长的机制及抑瘤作用优化探索

目的研究羧胺三唑(CAI)对小鼠肺癌Lewis细胞(LLC)中环腺苷酸(c AMP)相关磷酸二酯酶(PDE)活性的影响;研究腺苷酸环化酶激动剂Forskolin是否能增强CAI的抑瘤作用。方法通过改良的Thompson和Appleman两步同位素法对LLC细胞中c AMP相关PDE的活性进行检测,以PDE4特异性抑制剂洛利普兰(Rol)作为CAI的阳性对照;通过台盼蓝斥染实验对LLC活细胞进行计数,检测Forskolin对CAI抑瘤作用的影响,以双丁酰环腺苷酸(db-c AMP)验证LLC细胞对c AMP含量增加的敏感性。结果 CAI可剂量依赖性地抑制LLC细胞中c AMP相关PDE的活性,CAI与Rol的IC50分别为5.62×10-6 mol/L和1.88×10-8 mol/L。Forskolin和db-c AMP均可剂量依赖性地抑制LLC细胞的活性。CAI与Forskolin合用的抑瘤作用显著优于CAI单用,CAI5μmol/L单用时的抑制率为(32.9±10.3)%,与Forskolin 10μmol/L合用后抑制率可达(67.4±3.76)%(P<0.05)。结论抑制c AMP相关PDE的活性可能是CAI抑制LLC细胞活力的机制之一。通过与升高c AMP的药物如Forskolin合用,可进一步优化CAI的抗肿瘤作用。     

羧胺三唑对脂多糖诱导的RAW264．7细胞分泌炎症因子的影响’

目的研究羧胺三唑对脂多糖诱导的RAW264．7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法脂多糖（1μg／ml）刺激生长良好的RAW264．7细胞,建立细胞炎症模型,并用不同浓度羧胺三唑处理。CCK-8法检测羧胺三唑对RAW264．7细胞的毒性作用,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,分光光度法检测一氧化氮（NO）含量。结果羧胺三唑在2．5～40μmol／L的浓度范围内对RAW264．7细胞无毒性作用（P〉0．05）。脂多糖可以明显诱导RAW264．7细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和NO（P〈0．01）,10、20、40μmol／L的羧胺三唑能够显著抑制脂多糖诱导的RAW264．7细胞释放TNF-α、IL-6和NO的水平（P〈0．05和P〈0．01）,20、40μmol／L的羧胺三唑能够抑制脂多糖诱导的IL-1β的释放（P〈0．01）。结论羧胺三唑可以抑制脂多糖诱导的RAW264．7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎症因子TNF—α,、IL-1β、IL-6和NO有关。     

肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤转移的机制

浸入肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞在不同因子的刺激下,可分化为具有抗肿瘤功能的M1型巨噬细胞和具有促肿瘤功能的M2型巨噬细胞。在大多数肿瘤中肿瘤相关巨噬细胞以M2型为主,它参与肿瘤新血管形成、基底膜破坏、细胞外基质重塑、肿瘤细胞上皮间质转化等与肿瘤细胞侵袭转移相关的过程,由此肿瘤相关巨噬细胞已经成为肿瘤靶向治疗的重要靶点。本文主要探讨肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤细胞的相互作用,以及其在促进肿瘤转移的各个环节中的分子机制。     

肿瘤相关巨噬细胞调节肿瘤免疫治疗作用的研究进展

<正>2018年最新的全球肿瘤统计结果显示,我国每天约有1万人确诊肿瘤,我国肿瘤患病率在全球处于中等偏上水平~([1])。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是肿瘤微环境的重要组成部分,并在肿瘤微环境中发挥重要的免疫调节作用,成为肿瘤靶向免疫治疗的研究热点。TAM主要分为经典活化的巨噬细胞(M1型)和替代性活化的巨噬细胞(M2型),两种细胞使TAM可能同时具有抗肿瘤和促肿瘤作用:M1型巨噬细胞     

束缚应激状态下大鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮及肿瘤坏死因子α和H2O2的变化

目的：检测牙龈卟啉菌内毒素（Pg-LPS）刺激大鼠腹腔巨噬细胞所释放的NO、肿瘤坏死因子α和H2O2是否受到束缚应激的影响。 方法：实验于2005-09／2006-02在福建医科医科大学口腔医学院和福建中西医结合研究院实验室进行。①分组：取14只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组及应激组，每组7只。②造模：正常组不加刺激，应激组大鼠置于特制的圆柱形筒内，于实验开始最初3d每日9：00～15：00被置于束缚筒6h，3d后于每日9：00至次日9：00被置于束缚筒24h，正常饲养24h后再应激24h，如此循环直至实验结束。③观察指标：观察造模12d后两组大鼠体质量变化，并及时处死，收集腹腔液，计数巨噬细胞总量。贴壁后的巨噬细胞分成2组分别继续用RPMI-1640培养液和RPMI-1640培养液＋1mg／L Pg-LPS继续培养，24h后分别收集上清，观察无刺激组、单纯Pg-LPS组、单纯应激组和应激＋Pg-LPS组上清液中NO，H2O2和肿瘤坏死因子③水平。 结果：14只大鼠全部进入结果分析。①实验完成时应激组大鼠体质量低于正常组[（162．14&;#177;17．53），（263．57&;#177;19．94）g，P〈0．05]。②应激组大鼠腹腔巨噬细胞总量低于正常组[（9．49&;#177;2．75）&;#215;10^6，（31．47&;#177;8．00）&;#215;10^6，P〈0．01]。③NO浓度：单纯Pg-LPS组显著高于无刺激组[（265．69&;#177;10．86），（239．40&;#177;12．07）μmol／L，P〈0．05]；应激＋Pg-LPS组显著高于无刺激组和单纯应激组[（257．57&;#177;12．43），（239．40&;#177;12．07），（243．32&;#177;13．94）μmol／L，P〈0．05]。（4）H2O2浓度：单纯应激组和应激＋Pg-LPS组显著高于无刺激组[（7．14&;#177;1．04），（7．54&;#177;1．15），（5．27&;#177;1．02）μmol／L，P〈0．05]。⑤肿瘤坏死因子α水平：应激＋Pg-LPS组显著高于无刺激组[（16．81&;#177;4．76），（8．38&;#177;0．93）ng／L，P〈0．05]。 结论：①束缚应激可改变巨噬细胞对牙龈卟啉菌内毒素刺激的反应，引起大鼠腹腔巨噬细胞功能紊乱。②应激作为一种不良刺激因素，可以和牙龈卟啉菌内毒素一起发生协同作用，引起炎症反应发生。     

耗竭巨噬细胞抑制脂多糖诱导小鼠肾脏及全身炎症损伤的作用研究

目的:采用选择性集落刺激因子1受体抑制剂GW2580耗竭小鼠体内巨噬细胞,观察该作用对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠肾脏及全身炎症损伤的影响.方法:将9只雄性小鼠分为3组(每组3只),在GW2580(160 mg/kg)给药第0、4、7天分别处死1组小鼠,制备脾脏单细胞悬液后,采用流式...     

脓毒症大鼠血清巨噬细胞移动抑制因子和肿瘤坏死因子-α表达的相关性及肝素对其水平的影响

目的:观察脓毒症大鼠血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其相关性;并观察小剂量肝素对两者的影响。方法:雌性Wistar大鼠49只,随机分为假手术组(7只)、脓毒症组(21只)、肝素干预组(21只),以CLP法复制大鼠脓毒症模型,于不同时间点测定大鼠血清MIF及TNF-α水平。结果:脓毒症组及肝素干预组大鼠血清MIF和TNF-α水平显著高于假手术组(均P<0.05),肝素干预组各时间点大鼠血清MIF及12、24h时间点TNF-α水平显著低于相应脓毒症组(均P<0.05),两组血清MIF与TNF-α水平变化呈正相关(脓毒症组r=0.859,肝素干预组r=0.711)。结论:脓毒症大鼠血清MIF及TNF-α水平均显著升高,早期应用小剂量肝素可减轻炎症反应,两种炎性因子的变化呈正相关。     

血管内皮细胞生长因子-A及肿瘤相关巨噬细胞在多发性骨髓瘤中的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是一类浆细胞恶性克隆性疾病,发病机制复杂.MM的发生、发展与新生血管形成及骨髓微环境密切相关.新生血管形成受血管内皮细胞生长因子(VEGF)等血管形成调节因子调节,可促进MM细胞增殖、迁移.肿瘤相关巨噬细胞(TAM)活化后,亦可产生VEGF等促血管生成因子,从而促进骨髓新生血管形成,促进MM发展.笔者拟就VEGF-A、TAM在MM发病中的研究进展进行综述.     

青藤碱对肾移植大鼠静脉血肿瘤坏死因子-α的影响

目的:通过检测青藤碱(alkaloidsinomenine,SIN)对肾移植受体鼠静脉血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,探讨SIN对大鼠肾移植术后急性排斥反应的抑制作用及效应以及与环孢菌素A(cyclosprinA,CsA)是否存在协同效应。方法:建立近交系大鼠F344→Wistar模式的肾移植受体实验动物模型48只,术后按施加的处理因素不同将48只肾移植急性排斥反应动物模型分为4组[生理盐水(NS)组,SIN组,CsA组和SIN+CsA组],应用ELISA法检测静脉血TNF-alpha的表达水平;完整留取移植肾行病理切片,观察病理改变。结果:TNF-alpha的表达水平在SIN组低于NS组,差异存在显著性(P<0.05);SIN组与CsA组差异无显著性(P=0.530>0.05);SIN+CsA组低于SIN组及CsA组,差异存在显著性(P<0.05)。病理切片按移植肾排斥反应组织学分级标准,分级结果为,NS组3～4级;SIN组1～2级;CsA组1～2级;SIN+CsA组0～1级。结论:SIN对同种异体大鼠肾移植的急性排斥反应起到较为确切的免疫抑制作用,能明显下调TNF-alpha的表达水平,...     

Let-7a mimic attenuates CCL18 induced breast cancer cell metastasis through Lin 28 pathway

BackgroundMicroRNAs are believed to influence breast cancer cell tumorgenicity by interacting with the production of tumor associated macrophages. At this stage, this hypothesis lacks sufficient empirical evidence. Our study is an investigation of the effects of let-7a on the function of human breast cancer cell lines that had undergone chemokine ligand 18 (CCL18) stimulation.MethodsTwo breast cancer cell lines MDA-MB-231 and MCF-7 were transfected with let-7a mimics with or without CCL18 simulation. The expression level of let-7a was evaluated with qRT-PCR. Our study examined cell proliferation, migration and cell cycles following let-7a treatment. The predicted target of let-7a was identified and confirmed in vitro by a dual luciferase reporter system. The associations between let-7a, CCL18 and target gene expression were evaluated using RT-PCR and the Western blotting method.ResultsThe downregulated expression level of let-7a was observed in both breast cancer cell lines. When compared to the control and CCL18 stimulation groups, cell proliferation and migration in MDA-MB-231 and MCF-7 cells were significantly inhibited by let-7a. Furthermore, the cell cycle was dramatically blocked at the G2/M phase. The luciferase reporter identified Lin28 as the direct binding target of let-7a in both breast cancer cell lines.ConclusionUpregulation of let-7a carries the potential to reverse CCL18 induced cell proliferation and migration alteration in breast cancer cells by regulating Lin28 expression. Our results provided evidence which suggests the use of let-7a as a therapeutic agent in the treatment of breast cancer.     

肿瘤坏死因子-α在缓激肽开放血肿瘤屏障过程中的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在缓激肽(BK)开放血肿瘤屏障(BTB)过程中的作用。方法:缓激肽处理C6细胞和胶质瘤大鼠后,放射免疫法动态监测培养液和脑胶质瘤组织内TNF-α浓度。利用伊文思蓝连续监测缓激肽/TNF-α处理后的C6恶性胶质瘤大鼠血肿瘤屏障的通透性,同时电镜观察血肿瘤屏障的病理学改变。结果:缓激肽可增加C6细胞培养液和胶质瘤大鼠肿瘤组织内的TNF-α含量,且两者均于给予缓激肽后15min时达高峰(与对照组相比有显著统计学意义,P<0.01)。TNF-α与缓激肽单独作用于C6动物后,均可引起胶质瘤大鼠的血肿瘤屏障紧密连接开放及通透性增加。且肿瘤坏死因子-α对肿瘤模型动物血肿瘤屏障通透性的影响与C6细胞培养液中TNF-α含量相一致。结论:缓激肽开放血肿瘤屏障过程中,可能是通过某种机制引起肿瘤组织内TNF-α增加,增加的TNF-α进而引起了血肿瘤屏障的开放。     

核因子-κB对急性胰腺炎时肿瘤坏死因子-αmRNA表达的调控

目的观察急性胰腺炎(acutepancreatitis,AP)发生时胰腺组织中核因子κB(NFκB)对肿瘤坏死因子αmRNA表达的调控作用。方法Wistar大鼠64只,随机均分为AP组和对照组,AP组以蛙皮素(Caerulein)腹腔内注射制成AP模型。分别于12h、24h、36h、72h后处死实验动物,用流式细胞术(FCM)检测NFκB激活水平,用半定量RTPCR检测TNFαmRNA的表达水平,并分析二者之间的相关性。结果AP组的NFκB激活及TNFαmRNA表达水平在各时间点均显著高于同时段对照组的水平(P<0.01),二者之间具有相关性(P<0.05)。结论AP发生时,胰腺组织中NFκB高度活化,促进了TNFαmRNA的表达,从而加重了胰腺的损伤。     

肿瘤坏死因子TNF-α基因多态性与精神分裂症易感性关系的Meta分析

目的有越来越多的证据表明精神分裂症和肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因的多态性存在关联,但是许多研究的结果常常是相互矛盾的,因此,我们通过M eta分析的方法来评价TNF-α位点（-308-、238-、857和-1031）多态性和精神分裂症易感性之间的关系。方法检索PubM ed和中国学术期刊网数据库,使用的关键词包括sch izophren ia、TNF a、tumor necrosis factor a、tumor necrosis factor alpha、TNF alpha、多态性、肿瘤坏死因子和精神分裂症。检索时间为1989至2010年公开发表的期刊论文。以比数比（OR）及其95%可信区间（95%CI）为效应尺度。结果按照纳入标准,共有13篇文献最终进入系统。M eta分析结果表明,-308多态性和精神分裂症不存在明显关联（G/A等位基因：合并OR=1.06,95%CI为0.79～1.42,P=0.71）,-308的基因型分布在病例与对照之间亦无明显差异,亚组分析显示,无论是在高加索人种还是亚洲人种中,-308多态性与精神分裂症之间并无明显相关性。对于-238-、857和-1031几个多态性位点的M eta分析,亦未发现与精神分裂症易感性之间存在相关性。结论 TNF-α位点（-308、-238-、857和-1031）的多态性和精神分裂症不存在明显关联。     

CCL5 secreted by tumor associated macrophages may be a new target in treatment of gastric cancer

AimTo investigate the role of CCL5 secreted by tumor associated macrophages (TAMs) in gastric cancer, and to explore how CCL5/CCR5 axis modulates phenotypes of gastric cancer cells.MethodsExpression of CCL5 and TAM surface marker CD68 in gastric cancer tissues was examined using SP immunohistochemistry. Serum CCL5 levels of patients were assessed using ELISA. Cross-analyses of CCL5 and CD68 expression with clinicopathological data were done. Correlation between CCL5 and CD68 in gastric cancer tissues was also studied. In vitro functional characterization of CCL5 in gastric cancer was done in co-culture of AGS and THP-1 derived macrophages using MTS assay, plate clone formation assay, and transwell experiment. Expression of chemokines and its receptors were detected by RT-PCR, while Stat3 phosphorylation and downstream target proteins were studied using western blot.ResultsCCL5 and CD68 were both highly expressed in tissues gastric cancer, of which the expressions were positively correlated with each other, and of clinical importance, were associated with the depth of invasion, lymph node metastasis, TNM staging and tumor differentiation. Serum CCL5 was also elevated in patients with gastric cancer comparing to healthy volunteers. Co-culture of AGS cells with THP-1 derived macrophages increased cell proliferation, clone forming ability as well as migration of AGS cells. Migration of AGS cells across transwell membrane was also enhanced by increasing exogenous CCL5. Meanwhile, mRNA expression of CCL5, MMP2, MMP9, and CCR5 was also highly expressed in the cells. Stat3 signaling as reflected by its phosphorylation was also increased in AGS cells upon co-culture with THP-1 derived macrophages.ConclusionCCL5 secreted by TAMs may promote the proliferation, invasion and metastasis of gastric cancer cells, in which Stat3 signaling pathway is likely to play an important role. The correlation of CCL5 with clinicopathological parameters suggested CCL5 holds promise as important molecular marker of gastric cancer staging and disease progression.