藤茶双氢杨梅素对动脉粥样硬化大鼠的炎症因子及主动脉弓sPLA2-ⅡA表达的影响

目的:探讨藤茶双氢杨梅素对动脉粥样硬化(AS)大鼠血清炎症因子水平和ⅡA分泌型血小板型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2of groupⅡA,s PLA2-ⅡA)mRNA表达的影响,以了解藤茶双氢杨梅素对AS的作用机制。方法:取健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为5组,即正常组、模型组、辛伐他汀组(5 mg·kg-1·d-1)、及藤茶双氢杨梅素低、高剂量组(10,40 mg·kg-1·d-1),每组12只,除正常组大鼠喂以基础饲料外,其他组给大鼠饲养高脂饲料,并ip维生素D3,复制AS模型,给药组ig给予相应药物,正常组与模型组给予等体积的生理盐水,连续24周后,观察藤茶双氢杨梅素对模型大鼠血清C-反应蛋白(CRP),血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)的水平,RT-PCR观察主动脉弓s PLA2-ⅡA mRNA表达的变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠血管管壁增厚,内皮粗糙,中膜平滑肌纤维明显增生,大鼠血清CRP,TNF-α和IL-1水平明显增高(P<0.05,P<0.01),主动脉弓s PLA2-ⅡA mRNA的表达明显增强(P<0.01);与模型组比较,藤茶双氢杨梅素低剂量组大鼠血管病变范围及内膜增厚程度略有减轻,高剂量组大鼠血管仅见局部内皮粗糙,内膜光滑,中膜平滑肌纤维轻度增生,藤茶双氢杨梅素高剂量组可明显降低AS大鼠血清CRP和IL-1水平(P<0.05),能显著降低AS大鼠主动脉弓s PLA2-ⅡA mRNA的表达(P<0.05)。结论:藤茶双氢杨梅素对AS具有一定的防治作用,其作用机制是通过改善AS大鼠炎症因子水平,抑制s PLA2-ⅡA mRNA的表达。     

藤茶提取物抗慢性肝纤维化作用

目的:观察藤茶提取物(TF)抗慢性肝纤维化的作用及机制。方法:将Wistar大鼠随机分为TF高(200 mg.kg-1)、中(100 mg.kg-1)、低(50 mg.kg-1)剂量组,秋水仙碱(colchicine,Colc,0.1 mg.kg-1)组,模型组和正常组,ig给药。给药同时各组皮下注射(sc)四氯化碳(CCl4)造模,每周2次。于10周后,检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(AKP),白蛋白(ALB),球蛋白(GLB),肝组织羟脯氨酸(Hyp),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及苏木精-伊红(HE)染色后的肝组织病理变化。结果:与模型组比较,TF高、中、低剂量组均能明显降低肝纤维化大鼠血清中ALT,AST,AKP,GLB的含量(P<0.01)及肝组织中MDA和Hyp的含量(P<0.05),明显提高血清ALB水平(P<0.01)及肝组织GSH-Px活性(P<0.01);肝脏组织学检查表明,TF可明显改善肝组织病理损伤程度,其作用呈剂量依赖性。结论:TF对实验性慢性肝损伤具有保护肝细胞,减少肝损伤,抗肝纤维化作用。     

丹红化瘀口服液抗血栓形成作用

目的:从抗血栓形成作用初步探讨丹红化瘀口服液(Danhong Huayu Koufuye,DHK)抗糖尿病视网膜病变和糖尿病肾病的作用机制。方法:采用毛细管法检测新西兰兔凝血时间,断尾法检测昆明种小鼠出血时间,同时考察DHK对大鼠下腔静脉结扎诱导的静脉血栓、动-静脉旁路血栓和Fe Cl3诱导颈动脉血栓3种血栓形成的作用。凝血时间、出血时间、下腔静脉血栓和动静脉旁路血栓实验动物分为4组:溶剂组,DHK低剂量组(各实验剂量分别为0.60,2.25,1.60,1.60 g·kg-1·d-1),DHK高剂量组(各实验剂量分别为1.20,4.50,3.20,3.20 g·kg-1·d-1),阿司匹林组(各实验剂量分别为2.88,11.26,7.81,7.81 mg·kg-1·d-1);Fe Cl3诱导颈动脉血栓实验分为5组:假手术组,模型组,DHK低、高剂量组(1.60,3.20 g·kg-1·d-1),氯吡格雷组(30 mg·kg-1·d-1)。凝血时间实验采用单次及连续ig给药5 d后进行指标检测,其余实验均连续ig给药5 d后进行指标检测。结果:与溶剂组比较,DHK高剂量组显著延长新西兰兔凝血时间(P0.05)和小鼠出血时间(P0.05)。与模型组比较,DHK高、低剂量组抑制大鼠下腔静脉血栓、动-静脉旁路血栓和Fe Cl3诱导的大鼠动脉血栓的形成(P0.05)。结论:DHK有明显的活血化瘀和抗血栓形成作用。     

重组水蛭素Ⅲ乳化微粒口服的药效学

 目的探讨重组水蛭素Ⅲ乳化微粒(rHVⅢEP)口服的抗凝血、抗血栓作用。方法①将SD大鼠随机分为4组,分别为水蛭素大、小剂量组(65,130U·g^-1),华法林钠阳性对照组和生理盐水组。分别于给药前、后1h各取血1.5～2mL,测定凝血时间(CT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶凝固时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT);②采用大鼠弥散性血管内凝血模型,测定PT、TT、APTT;③动物分组如上,采用大鼠下腔静脉血栓模型,测定血栓湿重和干重,计算血栓抑制率;④动物分组如上,采用大鼠颈动静脉回路形成的血小板性动脉血栓模型,测定血栓湿重,计算血栓抑制率。结果①rHVⅢEP能延长CT、PT、TT、APTT,与空白对照组有显著差异(P<0.05或P<0.01);②rHVⅢEP能延长大鼠弥散性血管内凝血模型PT、TT、APTT,并与生理盐水组有显著差异;③rHVⅢEP口服可使大鼠下腔静脉血栓湿重、干重明显减少,血栓抑制率显著升高,与生理盐水组有显著差异;④rHVⅢEP口服可使大鼠颈动静脉回路形成的血小板性动脉血栓重量明显减少,显著升高血栓形成抑制率,与生理盐水组有显著差异。结论rHVⅢEP口服抗凝血、抗血栓作用显著,可用于防治实验性大鼠弥散性血管内凝血、大鼠颈动静脉回路形成的血小板性动脉血栓和大鼠下腔静脉血栓,具有良好的应用前景。     

水蛭免加热提取物抗凝血及抗血栓作用

目的观察水蛭免加热提取物的抗凝血、抗血栓作用,并与水蛭煎煮浓缩物进行比较.方法小鼠灌胃给水蛭两种提取物5.72g生药/kg,2.86g生药/kg,1.43g生药/kg,采用玻片法测定小鼠凝血时间;剪尾法测定小鼠出血时间.大鼠灌胃给水蛭两种提取物4g生药/kg,2g生药/kg,1g生药/kg,观察对大鼠下腔静脉结扎后静脉血栓湿重及干重的影响、对电刺激颈总动脉闭塞性血栓形成时间的影响、对大鼠动-静脉旁路血小板血栓湿重的影响.结果水蛭免加热提取物延长正常小鼠凝血时间和出血时间,减轻大鼠静脉血栓的湿重和干重,延长大鼠颈总动脉血栓形成时间、减轻大鼠血小板血栓的湿重.结论水蛭免加热提取物具有强大的抗凝血作用,抑制大鼠静脉血栓、动脉血栓及血小板血栓的形成.水蛭免加热提取物在抑制大鼠静脉血栓形成、延长小鼠凝血时间等方面优于传统的煎煮提取物.     

复方血栓通胶囊抗血栓作用的实验研究

目的：研究复方血栓通胶囊的抗血栓作用。方法：将大鼠随机分为模型对照组、复方血栓通胶囊低、中、高剂量组（0.375,0.75,1.5 g·kg^-1·d^-1）、阿司匹林肠溶片组（50 mg·kg^-1·d^-1）,灌胃给药,每天1次,连续7 d。末次给药1 h后,建立大鼠下腔静脉血栓模型和动-静脉旁路血栓模型,观察复方血栓通胶囊对血栓湿重、干重及血栓形成抑制率的影响;将大鼠按上述方法分组,建立颈总动脉血栓溶栓模型,从造模当天开始灌胃给药,每天1次,连续5 d,末次1 h后取大鼠血栓,观察复方血栓通胶囊对血栓湿重及溶栓率的影响;将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、复方血栓通胶囊低、中、高剂量组、阿司匹林肠溶片组,采用皮下注射盐酸肾上腺素联合冰浴、减少喂食的方法建立大鼠急性血瘀模型,造模期间同时灌胃给药,每天1次,连续7 d,第8 d造模成功,灌胃给药1 h后,观察复方血栓通胶囊对大鼠凝血时间（CT）、凝血酶时间（TT）及血小板聚集功能的影响。结果：与正常组比较,模型组CT,TT显著缩短（P<0.01）,血小板聚集能力显著提高（P<0.01）;与模型组比较,复方血栓通胶囊组大鼠下腔静脉、动-静脉旁路血栓的湿重和干重减轻（P<0.05~P<0.01）,颈总动脉血栓的湿重减轻（P<0.05）,CT和TT延长 （P<0.05~P<0.01）,血小板聚集能力降低（P<0.05）。结论：复方血栓通胶囊具有抗血栓作用,其机制可能与改善凝血功能、血小板聚集功能有关。     

二氢杨梅素对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察二氢杨梅素(dihydromyricetin，DMY) 对小鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)损伤的保护作用，并初步探讨其可能机制。方法 雄性昆明种小鼠随机分为4组，即假手术组、I/R模型组及DMY 高（500mg?kg-1）、低剂量（250mg?kg-1）组。改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞/再灌注（middle cerebral artery occlusion / reperfusion, MCAO/R）模型，缺血3h再灌注24h；术前10d开始灌胃给药，每天1次，并在缺血前1h及再灌注后12h各给药1次。再灌注24h后观察小鼠神经功能缺损评分，取脑测定脑梗死比（%）及脑含水量（%），HE染色观察脑组织病理学改变并计数皮层半暗带区神经元数目，同时测定脑组织MDA含量及SOD、GSH-Px活性。结果 与模型组比较，DMY 500mg?kg-1可减轻脑I/R损伤后神经功能缺损评分，降低脑梗死比和脑含水量，改善脑组织病理学变化及增加皮层半暗带区神经元数量（P <0.05 或 P <0.01））；此外，DMY 500mg?kg-1还能明显降低脑组织MDA含量及提高SOD、GSH-Px活性（与模型组比较，P <0.05 或 P <0.01））。DMY 250mg?kg-1可降低脑I/R损伤后脑梗死比（与模型组比较，P <0.05））。结论 DMY对局灶性脑I/R损伤有一定的保护作用，保护机制与其抗氧化作用有关。     

二氢杨梅素对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察二氢杨梅素(dihydromyricetin，DMY) 对小鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)损伤的保护作用，并初步探讨其可能机制。方法 雄性昆明种小鼠随机分为4组，即假手术组、I/R模型组及DMY 高（500mg?kg-1）、低剂量（250mg?kg-1）组。改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞/再灌注（middle cerebral artery occlusion / reperfusion, MCAO/R）模型，缺血3h再灌注24h；术前10d开始灌胃给药，每天1次，并在缺血前1h及再灌注后12h各给药1次。再灌注24h后观察小鼠神经功能缺损评分，取脑测定脑梗死比（%）及脑含水量（%），HE染色观察脑组织病理学改变并计数皮层半暗带区神经元数目，同时测定脑组织MDA含量及SOD、GSH-Px活性。结果 与模型组比较，DMY 500mg?kg-1可减轻脑I/R损伤后神经功能缺损评分，降低脑梗死比和脑含水量，改善脑组织病理学变化及增加皮层半暗带区神经元数量（P <0.05 或 P <0.01））；此外，DMY 500mg?kg-1还能明显降低脑组织MDA含量及提高SOD、GSH-Px活性（与模型组比较，P <0.05 或 P <0.01））。DMY 250mg?kg-1可降低脑I/R损伤后脑梗死比（与模型组比较，P <0.05））。结论 DMY对局灶性脑I/R损伤有一定的保护作用，保护机制与其抗氧化作用有关。     

藤茶总黄酮通过调控TGF-β1/p38MAPK通路对肝纤维化大鼠的作用及机制研究

目的 探讨藤茶总黄酮(TF)通过调控转化生长因子β1/p38-促分裂原活化蛋白激酶(TGF-β1/p38MAPK)通路对肝纤维化大鼠的作用及机制.方法 65只Wistar大鼠,随机分为5组,对照组(灌胃生理盐水)、模型组(灌胃生理盐水)、藤茶总黄酮低剂量组(灌胃75 mg/kg)、藤茶总黄酮高剂量组(灌胃300 mg/kg)、激动剂组(灌胃300 mg/kg藤茶总黄酮加腹腔注射2 mg/kg anisomycin),每组13只,除对照组外,余组采用皮下注射25％CCl4建立肺纤维化模型,给予相应药物干预5周.检测5组血清ALT、AST、肝组织ColI、ColⅢ水平,HE染色观察肝组织病理改变,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝组织中TGF-β1、p38MAPK、α 平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA相对表达量,Western blot法检测肝组织中TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、α-SMA、MMP-9蛋白相对表达量.结果 与模型组比较,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组及激动剂组血清ALT、AST及肝组织ColI、ColⅢ水平均降低,其中藤茶总黄酮高剂量组ALT、AST、ColI低于藤茶总黄酮低剂量组和激动剂组(P<0.05).HE染色结果显示模型组肝组织结缔严重,肝脏明显纤维化,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组、激动剂组肝纤维化程度明显减轻,其中藤茶总黄酮高剂量组肝脏恢复程度最佳.与模型组比较,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组及激动机组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白相对表达量均降低,p-p38MAPK蛋白相对表达量降低,MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),其中藤茶总黄酮高剂量组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白相对表达量及p-p38MAPK蛋白相对表达量均低于藤茶总黄酮低剂量组及激动剂组,MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量均高于藤茶总黄酮低剂量组及激动剂组(P<0.05).结论 藤茶总黄酮可显著抑制大鼠肝纤维化,其调控机制可能与TGF-β1/p38MAPK信号通路有关.     

川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的探讨川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法选取12只兔建立骨关节炎动物模型,体外分离培养软骨细胞,并分为模型组、川芎嗪低剂量组、川芎嗪中剂量组、川芎嗪高剂量组,另选取3只正常兔体外分离培养软骨细胞作为正常对照组。模型组和正常对照组给予10%DMEM培养液进行培养,而川芎嗪低、中、高剂量组分别给予含10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L川芎嗪注射液的培养液进行培养。采用流式细胞仪测定兔软骨细胞周期及增殖指数,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用MTT法检测软骨细胞活性,采用Western-blot法检测软骨细胞中bax、bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组G0/G1期细胞所占比例及PI均明显低于正常对照组(P均<0.05),S期及G2/M期细胞所占比例均明显高于正常对照组(P均<0.05);川芎嗪中、高剂量组G0/G1期细胞所占比例、PI均显著高于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05),而S期及G2/M期细胞所占比例均显著低于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05)。川芎嗪中、高剂量组软骨细胞凋亡率均明显低于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著低于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组与正常对照组比较差异无统计学意义;川芎嗪中、高剂量组软骨细胞活性均显著高于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组仍然低于正常对照组(P<0.05)。模型组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显高于正常对照组(P均<0.05),bcl-2表达量显著低于正常对照组(P<0.05);而川芎嗪各剂量组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显低于模型组(P均<0.05),bcl-2表达量均明显高于模型组(P均<0.05),且川芎嗪高剂量组各指标改善情况均显著优于低剂量组(P均<0.05)。结论川芎嗪能够促进软骨细胞的增殖,同时还能通过上调抗凋亡因子bcl-2表达,下调软骨细胞促凋亡因子bax以及Caspase-3表达而抑制软骨细胞的凋亡。