CCR7在肿瘤转移机制中的地位

CCR7主要表达于淋巴细胞、树突状细胞和各种树突状细胞表面,在促进肿瘤侵袭和淋巴转移过程中发挥着不容忽视的作用。CCR7在多种肿瘤中如乳腺癌、宫颈癌、非小细胞肺癌、结肠癌、甲状腺癌等中表达,而其引起肿瘤转移的机制主要是与DC的相互作用及与NF-k B调控作用。通过对肿瘤细胞表面CCR7表达的研究,明确CCR7介导肿瘤淋巴转移的机制以及以CCR7为靶点的肿瘤转移治疗提供新的思路。     

Age‐Related Changes in CCR9+ Circulating Lymphocytes: Are CCR9+ Naive T Cells Recent Thymic Emigrants?

The chemokine receptor CCR9 is reported to be predominantly expressed by thymocytes as well as by circulating gut-homing and resident T cells in the small intestinal mucosa. Its ligand thymus-expressed chemokine (TECK) is produced by thymic and small intestinal epithelium. Here we report that the proportion of circulating CCR9+ naive T cells (mostly CD4+) declines with age, from approximately 15% of all T cells at birth to around 1% in adults. The proportion of CCR9+ T cells lacking the classical gut-homing receptor alpha4beta7, was much higher in children than in adults. Therefore, circulating CD3+CCR9+CD45RA+ cells have most likely left the thymus quite recently. This notion was supported by the small number of CCR9+ naive T cells which was present shortly after thymectomy. Establishing a phenotypic marker for recent thymic emigrants might provide a powerful tool in the clinical assessment and follow-up after cancer chemotherapy, hematopoietic stem cell transplantation, and during antiretroviral treatment of human immunodeficiency virus (HIV)-infected patients.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞活化对CCR4/CCR5膜表达及功能的影响

目的探讨CD3/CD28抗体包被磁珠刺激活化的小鼠CD4+CD25+调节T细胞(Treg)表面趋化因子受体CCR4/CCR5表达及免疫抑制功能变化。方法采用磁性激活细胞分离器(MACS)纯化C57BL/6小鼠脾细胞中的CD4+CD25+T细胞,采用CD3/CD28抗体包被磁珠与鼠重组白细胞介素2刺激0、2、4 d后,流式细胞仪检测CCR4与CCR5的表达,3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性。结果活化的CD4+CD25+T细胞CCR4的表达率明显高于CD4+CD25-T细胞对照组,CCR5的表达率明显低于对照组细胞。CD4+CD25+调节T细胞CCR4、CCR5的表达随活化时间延长持续增强,CD4+CD25-T细胞CCR5表达则逐渐减弱、CCR4表达无显著变化。活化的CD4+CD25+T细胞可明显抑制CD4+CD25-T细胞增殖,当比值为1∶1时抑制率达88.4%。结论 CD3/CD28抗体包被磁珠刺激可以增强CD4+CD25+T细胞膜表面CCR4、CCR5表达;活化CD4+CD25+T细胞免疫抑制功能强于新鲜分离的CD4+CD25+T细胞。     

CCR7和VEGF-C蛋白与乳腺癌预后之间的关系

目的:探讨趋化因子受体7(CCR7)及血管内皮生长因子C(VEGF-C)蛋白在乳腺癌组织中的表达水平,并分析二者与乳腺癌预后的关系。方法:采用免疫组织化学技术,联合检测CCR7和VEGF-C蛋白分别在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达差异情况,并分析二者与乳腺癌各相关临床病理特征之间的关系。采用Kaplan-Meier法来评估CCR7及VEGF-C蛋白的异常表达与乳腺癌患者生存期之间的关系。结果:CCR7蛋白在乳腺癌组织(68%)中的阳性表达率高于正常乳腺组织(30%),差异有统计学显著性(P0.01);而VEGF-C蛋白在乳腺癌组织(71%)中的阳性表达率也明显高于正常乳腺组织(24%),差异也有统计学显著性(P0.01)。且在乳腺癌组织中,CCR7与VEGF-C蛋白的表达呈正相关关系(r=0.613,P0.01)。CCR7和VEGF-C蛋白的高表达均与淋巴结转移和TNM分期有关(P0.05),而与年龄、肿瘤大小、雌激素受体和孕激素受体均无关。CCR7及VEGFC蛋白阳性表达者的生存期低于阴性表达者,两组比较差异有统计学显著性(P0.05)。结论:CCR7与VEGF-C的异常高表达可能与乳腺癌预后关系密切,二者可作为判断乳腺癌预后不良的重要指标之一。     

CCR2− and CCR2+ corneal macrophages exhibit distinct characteristics and balance inflammatory responses after epithelial abrasion

Macrophages are distributed throughout the body and are crucial for the restoration of damaged tissues. However, their characteristics in the cornea and roles in the repair of corneal injures are unclear. Here we show that corneal macrophages can be classified as CCR2⁻ macrophages, which already exist in the cornea at embryonic day 12.5 (E12.5) and are similar to yolk sac-derived macrophages, microglia, in phenotype and gene expression, and CCR2⁺ macrophages, which do not appear in the cornea until E17.5. At a steady state, CCR2⁻ corneal macrophages have local proliferation capacity and are rarely affected by monocytes; however, following corneal epithelial abrasion, most CCR2⁻ corneal macrophages are replaced by monocytes. In contrast, CCR2⁺ macrophages are repopulated by monocytes under both a steady-state condition and following corneal wounding. Depletion of CCR2⁺ macrophages decreases corneal inflammation after epithelial abrasion, whereas depletion of CCR2⁻ macrophages increases inflammation of the injured cornea. Loss of either cell type results in a delay in corneal healing. These data indicate that there are two unique macrophage populations present in the cornea, both of which participate in corneal wound healing by balancing the inflammatory response.     

Depletion of Host CCR7+ Dendritic Cells Prevented Donor T Cell Tissue Tropism in Anti-CD3–Conditioned Recipients

We reported previously that anti-CD3 mAb treatment before hematopoietic cell transplantation (HCT) prevented graft-versus-host disease (GVHD) and preserved graft-versus-leukemia (GVL) effects in mice. These effects were associated with downregulated donor T cell expression of tissue-specific homing and chemokine receptors, marked reduction of donor T cell migration into GVHD target tissues, and deletion of CD103⁺ dendritic cells (DCs) in mesenteric lymph nodes (MLN). MLN CD103⁺ DCs and peripheral lymph node (PLN) DCs include CCR7⁺ and CCR7⁻ subsets, but the role of these DC subsets in regulating donor T cell expression of homing and chemokine receptors remain unclear. Here, we show that recipient CCR7⁺, but not CCR7⁻, DCs in MLN induced donor T cell expression of gut-specific homing and chemokine receptors in a retinoid acid-dependent manner. CCR7 regulated activated DC migration from tissue to draining lymph node, but it was not required for the ability of DCs to induce donor T cell expression of tissue-specific homing and chemokine receptors. Finally, anti-CD3 treatment depleted CCR7⁺ but not CCR7⁻ DCs by inducing sequential expansion and apoptosis of CCR7⁺ DCs in MLN and PLN. Apoptosis of CCR7⁺ DCs was associated with DC upregulation of Fas expression and natural killer cell but not T, B, or dendritic cell upregulation of FasL expression in the lymph nodes. These results suggest that depletion of CCR7⁺ host-type DCs, with subsequent inhibition of donor T cell migration into GVHD target tissues, can be an effective approach in prevention of acute GVHD and preservation of GVL effects.     

趋化因子受体CCR5、CCR7、CXCR3和CXCR6在丙肝患者肝内及外周血CD4+ T淋巴细胞上的表达及其意义

目的比较趋化因子受体CCR5、CCR7、CXCR3和CXCR6在丙肝患者肝内和外周血CD4^＋T淋巴细胞表面表达水平及其意义,同时进一步了解其与肝脏组织学炎症反应的关系.方法采用荧光标记抗趋化因子受体的单克隆抗体对肝内及外周血中CD4^＋T淋巴细胞表面的趋化因子受体进行染色后,采用9色11参数流式细胞仪LSRⅡ进行检测分析.结果（1）肝内CCR5^＋、CXCR3^＋或/和CXCR6^＋的CD4^＋T淋巴细胞频数高于外周血（P＜0.001）,而CCR7^＋CD4^＋T淋巴细胞频数低于外周血（P＜0.001）;（2）肝内CCR5^＋或CXCR6^＋的活性（CD38^＋）CD4^＋T淋巴细胞频数高于外周血（P＜0.05）;（3）肝内表达2种或2种以上趋化因子受体CCR5、CXCR3和CXCR6的CD4^＋T淋巴细胞频数明显高于外周血（P＜0.001）,而不表达或仅表达一种上述趋化因子受体CD4^＋T淋巴细胞频数明显低于外周血（P＜0.001）;（3）CCR5和CXCR6在肝内CD4^＋T淋巴细胞表面的表达有中等度相关;（4）肝内组织学炎症明显组表达趋化因子受体CCR5、CXCR3或CXCR6的CD4^＋T淋巴细胞频数高于炎症轻微组.结论趋化因子受体CCR5、CXCR3和CXCR6可能介导CD4^＋T淋巴细胞向肝内迁徙定植,并参与肝脏炎症的病理免疫学反应过程.     

ConA刺激对CD4+CD25+调节性T细胞趋化特性及其表面趋化因子受体CCR4/CCR6表达的影响

目的：体外动态观察ConA激活的调节性T细胞表面趋化因子受体的表达变化及其趋化特性，为利用调节性T细胞诱导免疫耐受提供线索。方法：①流式细胞仪分选出CD4hiCD12710CD25 hiint细胞。②纯化的调节性T细胞与CD4^＋CD25一T细胞分别用ConA（10Fg／m1）刺激0、24和48小时后，用趋化因子CCL1、CCI5、CCL20、CCI_22做趋化实验，观察各趋化因子作用下调节性T细胞与CD4^＋CD25-T细胞的趋化特性。同时，流式细胞仪检测CCR4与CCR6的表达。结果：①分离得到的调节性T细胞纯度为97．4％，活细胞率为95％，得率：4．1％。②CCL1、CCL20、CCL22均可趋化调节性T细胞，且在ConA激活后趋化效率随时间而改变。CCL1与CCL22对调节性T细胞的趋化指数显著高于CD4^＋CD25^-T细胞；CCL20对调节性T细胞和CD4^＋CD25-T细胞趋化指数都很高；CCL5对调节性T细胞趋化性则显著弱于CD4^＋CD25^-T细胞。③ConA刺激后，调节性T细胞趋化因子受体CCR4、CCR6的表达均明显高于对照组细胞（CD4^＋CD25^-细胞）。随着ConA刺激时间延长，两组细胞CCR4的表达均持续增强；两组细胞CCR6的表达均在刺激24小时后表达明显增强，48小时后CCR6的表达略有减弱，呈下降趋势。结论：①磁珠阴性分选结合流式细胞仪技术可分选出较高纯度及活率的调节性T细胞。②调节性T细胞与CD4^＋CD25^-T细胞相比，二者具有不同的趋化特性。CCL1对调节性T细胞的趋化作用较特异，CCL-22趋化作用较强，CCL5趋化作用较弱。而CCL20对CD4^＋CD25-T细胞和调节性T细胞趋化作用都强。③ConA刺激后48小时内趋化因子CCLl、CCL20、CCL-22对调节性T细胞的趋化作用随刺激时间而增强。④ConA刺激可以增强受体CCR4、CCR6表达。⑤提示趋化因子受体的表达与细胞活化状态有关，且不同受体表达变化趋势不同。     

趋化因子受体CCR7依赖的树突状细胞迁移的调控机制

树突状细胞(DC)是机体功能最为强大的抗原提呈细胞,不仅能够活化获得性免疫以促进机体对病原的清除,还能够诱导免疫耐受,维持免疫稳态。树突状细胞在不同免疫器官的定位及迁移是其发挥免疫功能和维持机体稳态的基础。外周的未成熟DC摄取病原体后成熟活化,上调趋化因子受体CCR7的表达。由淋巴结基质细胞所分泌的趋化因子CCL19/CCL21作用于DC表达的CCR7,促进DC向次级淋巴器官的T细胞区迁移,启动并调控T细胞介导的获得性免疫应答。CCR7信号触发一系列胞内信号通路,并受到胞内骨架系统、代谢通路及表观修饰等多种层面的调控。越来越多的研究表明DC迁移的紊乱可能导致DC在炎症部位的过度聚集及活化,引起组织过度炎症,甚至引发自身免疫性疾病。在这篇综述中,我们将讨论DC迁移过程的调控机制及其在炎症性疾病、自身免疫性疾病等免疫相关疾病中作用的研究进展。     

ConA刺激对CD4~+CD25~+调节性T细胞趋化特性及其表面趋化因子受体CCR4/CCR6表达的影响

目的体外动态观察ConA激活的调节性T细胞表面趋化因子受体的表达变化及其趋化特性,为利用调节性T细胞诱导免疫耐受提供线索。方法常规分离正常健康人外周血单个核细胞,免疫磁珠阴性分选CD4+T细胞;加FITC-An-tiCD4抗体,APC-AntiCD25抗体,PE-AntiCD127抗体上流式细胞仪分选出CD4hiCD127loCD25hi-int细胞。纯化的调节性T细胞与CD4+CD25-T分别用ConA(10μg/mL)刺激0、24、48h后,用趋化因子CCL1、CCL5、CCL20、CCL22做趋化实验,观察各趋化因子作用下调节性T细胞与CD4+CD25-T细胞的趋化特性。同时,流式细胞仪检测CCR4与CCR6的表达。结果分离得到的调节性T细胞纯度为97.4%,活细胞率为95%,得率:4.1%。CCL1、CCL20、CCL22均可趋化调节性T细胞,且在ConA激活后趋化效率随时间而改变。CCL1与CCL22对调节性T细胞的趋化指数显著高于CD4+CD25-T细胞;CCL20对调节性T细胞和CD4+CD25-T细胞趋化指数都很高;CCL5对调节性T细胞趋化性则显著弱于CD4+CD25-T细胞。ConA刺激后...     

趋化因子受体CCR7及其配体在肿瘤侵袭和转移中的研究进展

趋化因子是一组由组织细胞和炎性细胞产生的、能够趋化细胞定向移动的小分子分泌蛋白,由70至100个氨基酸组成.迄今已发现50余种人的趋化因子,且在趋化因子中都有4个保守的半胱氨酸(C).     

靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸对树突状细胞凋亡的影响

目的研究靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸（PNA）对树突状细胞（DC）CCR7蛋白表达及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法体外培养大鼠骨髓来源的Dc，脂多糖（LPS）诱导成熟。设计靶向CCR7mRNA翻译起始区的反义PNA，以随机PNA和空白组为对照处理体外培养7d的未成熟Dc，脂多糖诱导48h后收集成熟Dc，免疫细胞化学染色法检测CCR7蛋白表达，流式细胞术检测细胞凋亡率，Westernblot检测磷酸化Akt和Akt蛋白表达。应用渥曼青霉素（wortmannin）抑制磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，P13K）／Akt信号通路进一步观察磷酸化Akt蛋白表达和细胞凋亡率的变化。结果反义PNA组DCCCR7蛋白表达明显低于随机PNA组和空白组，而细胞凋亡率却明显增高，差异有统计学意义（P〈0．05），Westernblot检测显示反义PNA组Akt蛋白磷酸化水平明显低于随机PNA组和空白组，差异有统计学意义（P〈0．05）。DC经P13K抑制剂预处理后，CCR7介导的Akt蛋白磷酸化及抗凋亡作用被阻断。结论CCR7反义PNA能够有效抑制体外培养的大鼠DC趋化因子受体CCR7的表达并导致其发生凋亡，其机制可能是阻断了CCR7介导P13K／Akt信号转导通路的活化。     

次级淋巴组织趋化因子及其受体CCR7在胰腺癌中的表达及临床意义

目的 研究胰腺癌中次级淋巴组织趋化因子(SLC)及其受体CCR7的表达情况,探讨其与胰腺癌临床病理关系.方法 应用免疫组化、RT-PCR和实时荧光定量PCR技术检测30例胰腺癌组织、癌旁组织、正常胰腺组织和胰周淋巴结组织中SLC和CCR7的表达情况.结果 SLC蛋白在胰腺癌组织中呈低表达状态、在癌旁组织和胰周淋巴结均呈中等表达状态、在正常胰腺组织中高表达,阳性率分别为16.7%(5/30)、43.3%(13/30)、46.6%(14/30)和76.7%(23/30).RT-PCR和实时荧光定量PCR也证实SIC mRNA表达与SIC蛋白相同.CCR7蛋白在胰腺癌组织、癌旁组织和胰周淋巴结均呈高表达状态、在正常胰腺组织中呈低表达状态,阳性率分别为76.7%(23/30)、66.7%(23/30)、70.0%(/30)和30.0%;同时还发现CCR7蛋白在胰腺静脉平滑肌和淋巴结外脂肪组织也有阳性表达情况.RT-PCR和实时荧光定量PCR结果 也证实CCR7 mRNA表达与CCR7蛋白相同.结论 SLC在胰腺癌进展和淋巴结转移过程中起双重作用,既发挥抗肿瘤作用,又通过趋化CCR7表达阳性的肿瘤细胞促进胰腺癌的淋巴结转移.CCR7与胰腺癌淋巴结转移和TNM分期密切相关,并可能参与胰腺癌的淋巴管生成和淋巴结转移的调控.     

小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建及其在DC2.4的表达

目的构建含有小鼠趋化因子受体-7(CCR7)基因的重组腺病毒(AdCCR7),观察其体外感染DC2.4细胞效率。方法将小鼠CCR7基因克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5l83菌内和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆;经线性化后转染HEK293细胞,获得含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7;TCID50方法检测病毒滴度,PCR法鉴定病毒DNA。带绿色荧光蛋白腺病毒(AdGFP)和AdCCR7分别感染DC2.4(GFP-DC2.4和CCR7-DC2.4),同时设未处理DC2.4为空白对照。流式细胞术(FCM)检测各组细胞表面分子CD11c,MHCⅡ,CD86及CCR7表达,趋化实验检测CCR7的功能。结果获得滴度约为l.4×1010pfu/ml重组腺病毒AdCCR7。AdCCR7感染DC2.4后,CCR7-DC2.4组与另外两组细胞比较CD11c、MHCⅡ及CD86的表达均无明显差异,但CCR7表达升高;其对趋化因子CCL19的趋化率可达44.7%~60.0%,明显高于其它两组。结论成功构建含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7,该病毒可感染细胞株DC2.4,增加细胞表面CCR7表达以及细胞对CCL19的趋化性,为进一步体内实验研究携带CCR7基因的未成熟DCs功能提供了工作基础。     

趋化因子受体CCR7的表达与卵巢癌淋巴管入侵及淋巴结转移的关系

目的 观察趋化因子受体CCR7在卵巢癌组织内的表达情况,分析CCR7的表达与肿瘤淋巴管入侵和淋巴结转移之间的关系。方法 取临床资料完整的卵巢癌病例64例,其中,淋巴结转移组40例,无淋巴结转移组24例。应用免疫组化法和Western blot技术观察CCR7在卵巢癌组织内的表达。以D2-40作为淋巴管内皮特异性标记物,观察卵巢癌组织内肿瘤淋巴管入侵的情况。结果 免疫组化法和Western blot检测结果表明,CCR7表达于卵巢癌细胞浆和胞膜内,有淋巴结转移组的表达量明显高于无淋巴结转移组(p<0.05)。D2-40表达于卵巢癌组织内淋巴管内皮细胞,肿瘤淋巴管入侵在CCR7阳性组的发生率明显高于CCR7阴性组的发生率,CCR7表达与肿瘤淋巴管入侵发生率有显著相关性(p<0.05)。结论 CCR7的表达与卵巢癌发生肿瘤淋巴管入侵和淋巴结转移密切相关,提示CCR7在卵巢癌淋巴结转移中可能起重要作用。     

肿瘤细胞分泌的VEGF-C和CCR7在恶黑淋巴道转移中的作用

目的研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)和C-C家族趋化因子受体7(CCR7)与恶性黑色素瘤(恶黑)淋巴管浸润、淋巴结转移的关系及其预后价值。方法免疫组化方法检测56例恶黑组织中VEGF-C和CCR7的表达,淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)标记肿瘤的淋巴管,Kaplan-Meier法进行生存检验,应用Cox比例危险度模型筛选与恶黑预后有关的指标。结果肿瘤细胞胞浆中可检测到VEGF-C和CCR7的表达。CCR7表达与VEGF-C表达和淋巴管浸润有关,CCR7和VEGF-C协同增加淋巴管浸润,CCR7表达与淋巴结转移及预后无关。结论在恶黑组织中VEGF-C和CCR7诱导肿瘤细胞侵入到淋巴管,但CCR7和淋巴管浸润不能作为恶黑的预后指标。     

人CCR7真核表达载体构建及对HeLa细胞HLA-I表达的影响

目的: 构建人CCR7真核表达载体, 建立稳定转染CCR7的HeLa细胞株, 初步探讨肿瘤细胞表达HLA-I类分子表达改变及相关机制.方法: 从人脾脏cDNA扩增出CCR7, 装入pDsRed2-N1, 脂质体转染HeLa细胞.CCR7配体CCL21作用后, 流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞表达HLA-I的表达, 萤虫素酶报告基因系统检测NF-κB活化.结果: 经PCR、酶切和测序证实, 含CCR7真核表达载体成功构建.G418筛选后获得稳定表达CCR7蛋白的HeLa细胞.FCM证实HeLa细胞表达HLA-I类分子水平增高, 萤虫素酶报告基因系统证实NF-κB活化明显.结论: 成功构建人CCR7真核表达载体, CCR7促进肿瘤细胞表达HLA-I类分子, 诱导肿瘤细胞NF-κB活化.     

CCR7在多器官功能障碍综合征小鼠脾脏树突状细胞迁移变化中的作用

目的:探讨CCR7在多器官功能障碍综合征(MODS)脾脏中的表达变化及其对树突状细胞(DC)迁移的影响.方法:用酵母多糖腹腔注射复制小鼠MODS模型,分为正常对照组和实验3～6小时组、24～48小时组、5～7天组及10～12天组.运用免疫组化方法检测CD11c和CD205标记阳性DC在各组小鼠脾脏中分布的变化,用流式细胞术检测CD86/CD11c和CCR7/CD11c标记阳性细胞在脾脏中含量的变化.结果:正常小鼠脾脏DC含量较少,主要分布在脾脏边缘区;在3～6小时组CCR7表达率较正常对照组显著增加,DC含量显著增加、活性增高,并向白髓T细胞区大量迁移;24～48小时组T细胞区中DC含量开始减少,而CCR7表达率升高达到峰值;5～7天组DC与CCR7含量接近正常对照组,边缘区和T细胞区均可见DC分布;10～12天组DC含量再次升高,但多呈不成熟状态,且以边缘区分布为主,CCR7表达率下降.结论:在MODS病程中脾脏DC的含量和分布变化与CCR7的表达率密切相关,CCR7可以作为评估脾脏DC迁移能力及功能活性的重要指标.