多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白突变检测

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因的表达,为临床治疗肺炎克雷伯菌致呼吸机相关性肺炎(VAP)提供理论依据和指导。方法收集医院2011年7月-2012年6月入住儿童重症监护病房(PICU)20例呼吸机相关性肺炎患儿下呼吸道痰液标本,通过药敏试验检测耐药率,PCR法及基因测序检测β-内酰胺酶和膜孔蛋白的表达。结果共20株肺炎克雷伯菌对头孢类抗菌药物均存在耐药,对头孢唑林、头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢西丁耐药率分别为100.0%、95.0%、70.0%、70.0%、55.0%、30.0%;共检出6种β-内酰胺酶基因,分别为A类SHV、TEM、CTX-M-1、LAP,C类DHA-1和D类OXA-1,ompK35膜孔蛋白基因检测10株为基因缺失和8株为基因突变,ompK36膜孔蛋白基因7株缺失和2株突变;6株非产ESBLs株均同时存在ompK35/36的突变或缺失,且伴有β-内酰胺酶基因的表达。结论 20株肺炎克雷伯菌均检出1³种β-内酰胺酶基因;ompK35/36膜孔蛋白基因检测结果显示,该蛋白几乎均有缺陷;提示该组耐β-内酰胺类药物为产β-内酰胺酶和ompK膜孔蛋白缺陷的双重作用,特别是非产ESBLs菌株。     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及ompK36膜孔蛋白基因突变研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKPN)所携带的β-内酰胺类药物耐药基因的状况。方法对20株MDRKPN进行了22种耐药基因的PCR法检测,包括A类β-内酰胺酶基因TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-8群、CTX-M-9群、CTX-M-25群、PER、GES、VEB、CARB、LAP、KPC;B类β-内酰胺酶基因IMP、VIM、NDM;C类β-内酰胺酶基因LEN、OKP、DHA群;D类β-内酰胺酶基因OXA-10群、OXA-48群和膜孔蛋白基因ompK36。结果 20株MDRKPN检出4种β-内酰胺酶基因,分别为A类TEM、CTX-M-1、LAP和C类DHA,其ompK36膜孔蛋白基因检测出4株为基因缺失和16株为基因突变。结论 20株MDRKPN除1株外均检出1~3种β-内酰胺酶基因;ompK36膜孔蛋白基因检测结果显示,该蛋白均有缺陷;提示该组MDR-KPN耐β-内酰胺类药物为产β-内酰胺酶和ompK36膜孔蛋白缺陷的双重作用。     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因研究

目的 了解医院多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因分布.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法检测20株MDRKP 28种β-内酰胺酶基因与膜孔蛋白编码基因ompK36,并对ompK36-PCR产物进行全自动荧光法测序分析比对.结果 20株MDRKP中17株均检出β-内酰胺酶基因,分别为A类β内酰胺酶中的TEM、CTX-M-1群和LAP基因,阳性率分别为55.0％、20.0％、15.0％,C类β-内酰胺酶中的LEN、DHA基因,阳性率分别为20.0％ 、30.0％;20株MDRKP均存在突变,4株为缺失性突变,16株检测到膜孔蛋白编码基因ompK36,序列比对分析该16株与敏感株序列均有差异.结论 TEM、CTX-M-1、LAP、LEN、DHA基因是MDRKP主要的β-内酰胺酶基因,医院MDRKP耐β-内酰胺类药物与产β-内酰胺酶和同时伴有膜孔蛋白ompK36基因突变均相关.     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因研究

目的探讨多耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)β-内酰胺酶基因存在状况及其膜孔蛋白编码基因ompK36在其耐药中的作用。方法应用PCR检测20种β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白编码基因ompK36,并用MEGA4.1对ompK36进行分子进化分析。结果 15株MDR-KPN共检出TEM、SHV、CTX-M-1群、LAP、KPC、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为66.7%、60.0%、6.7%、13.3%、13.3%、20.0%;而膜孔蛋白编码基因ompK36均检测到,经测序比对均存在突变。结论 15株MDR-KPN耐β-内酰胺类药物至少与产β-内酰胺酶和同时伴有膜孔蛋白ompK36突变相关。     

肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的:了解20株肺炎克雷伯菌(KPN)耐药性及β-内酰胺酶产生状况.方法:对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1)检测.结果:20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为85%、25%、25%、20%、25%、70%.20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,最多同时检出6种β-内酰胺酶基因.并在国内首次发现CTX-M-55型.结论:该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关.     

1株携带6种β-内酰胺酶基因的肺炎克雷伯菌

目的了解对亚胺培南敏感的肺炎克雷伯菌（KPN）β-内酰胺酶产生状况。方法对1株KPN用PCR法进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、LEN、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1）检测。结果检测显示TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种阳性。结论该株KPN同时携带6种β-内酰胺酶基因。     

医院感染肺炎克雷伯菌耐药趋势及β-内酰胺酶基因型分析

目的 了解医院重症监护病房2009-2013年医院感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势以及10种β-内酰胺酶耐药基因的分布,为临床正确选择抗菌药物提供依据。方法 K-B法检测165株肺炎克雷伯菌对20种抗菌药物的耐药性,PCR方法检测:CTX-M、TEM、SHV、GES、KPC、IMI、IMP、VIM、NDM、GIM耐药基因。结果 ICU 5年共分离165株肺炎克雷伯菌,产ESBLs菌株88株,KPN对三代头孢菌素的耐药率逐年升高;自2011年出现碳青霉烯耐药的菌株,耐药率约10.0%;114株扩增到耐药基因片段,检测出CTX-M、TEM、SHV、KPC共4种耐药基因,165个基因片段;最主要的耐药基因型为SHV型,占46.5%。结论 产ESBLs菌株的增加和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的出现,应引起高度重视,关注细菌的变迁和耐药性变化,并合理选用抗菌药物治疗。     

产金属β-内酰胺酶IMP-4肺炎克雷伯菌调查分析

目的对1株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌(KPN)进行产金属β-内酰胺酶(MBLs)和产碳青霉烯酶(KPC)分析。方法 2010年4月2株KPN分别分离自天津市红桥医院1例住院患者的尿标本和痰标本,MIC法对分离菌株进行药物敏感试验,ESBLs确证试验检测其是否产ESBLs,PCR扩增blaI MP、blaVI M和KPC基因,扩增产物进行测序和分析。结果 2株KPN均为多药耐药菌,其中从尿中分离的KPN(HQU)对亚胺培南耐药,从痰中分离的KPN对亚胺培南敏感,均产ESBLs;从尿中分离的KPN携带MBLs基因blaI MP-4,且定位于质粒上;未检出blaVI M和KPC基因。结论产blaI MP-4型MBLs KPN的出现提示耐药性传播广泛,临床应加强耐药监测和严格药物使用。     

耐药大肠埃希菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因研究

目的 调查大肠埃希菌中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白ompC基因的存在及变异情况.方法 收集医院2009年6月-2010年6月临床分离的耐药大肠埃希菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR),分析A、B、C、D等4类β-内酰胺酶24种基因和膜孔蛋白ompC基因.结果 20株耐药大肠埃希菌共检出TEM、CTX-M-1群和OXA-1群等3种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为45.0％、40.0％和10.0％,其余21种基因均未检出;20株耐药大肠埃希菌共检测到19株占95.0％,膜孔蛋白编码基因ompC,经测序比对除11号株外,其余18株占90.0％均存在突变.结论 20株耐药大肠埃希菌对β-内酰胺类药物耐药为产β-内酰胺酶和膜孔蛋白变异的共同结果.     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶表型及β-内酰胺酶基因型检测

目的 了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)产超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)及β-内酰胺酶(BLA)基因型存在状况.方法 在2005年9月-2006年4月从住院患者中分离25株KPN,采用美国CLSI推荐的表型确证试验方法检测ESBLs,用PCR及序列分析的方法分析21种(群、簇)BLA基因bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(LEN)、bla_(OKP)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(CTX-M-2)群、bla(CTX_M_9)群、bla_(OXA-1)群、bla_(OXA-2)群、bla_(CARB)、bla_(PER)、bla_(VEB)、bla_(GES)、bla_(LAP)、bla_(DHA)、bla_(ACT/MIR)、bla_(CMY/MOX)、bla_(FOX)、bla_(CMY/LAT)、bla_(ACC).结果 25株KPN中,ESBLs阳性14株(56.0%)、阴性5株(20.0%)、"不确定"6株(24.0%);bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(OXA-10)群、bla_(LAP)和bla_(DHA)基因阳性株数(%)分别为20株(80.0%)、1株(4.0%)、1株(4.0%)、20株(80.0%)、1株(4.0%)、8株(32.0%),而其余15种(群、簇)基因均阴性;21种(群、簇)BLA基因总阳性率为92.0%;其中HZ12593号菌株bla_(LAP-2)基因序列已登录GenBank,注册号为EU529981.结论 临床分离的KPN产ESBIs比例较高,至少存在6种BLA基因,BLA基因型以bla_(TEM)和bla_(OXA-10)群为主,KPN携带bla_(DHA)基因可以影响ESBLs表型确证试验结果.     

多耐药肺炎克雷伯菌获得性耐药基因及ompK36突变研究

目的了解1株多耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)获得性耐药基因和膜孔蛋白基因ompK36存在及突变状况。方法将1株对16种抗菌药物均耐药的MDRKP进行了β-内酰胺类、氨基糖苷类获得性耐药相关基因及其载体(整合子、转座子)的遗传标记检测和膜孔蛋白基因ompK36的检测。结果该株MDRKP耐β-内酰胺类药物获得性耐药基因检出TEM-1、SHV-11、KPC-2型(均经测序比对证实),耐氨基糖苷类药物获得性耐药基因检出aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ,无16S rRNA甲基化酶基因检出;Ⅰ类整合子遗传标记intⅠ1、qacE△1-sul1阳性、转座子遗传标记merA阳性;检出膜孔蛋白基因ompK36,且存在变异(GGCGAC小片段插入)。结论该株MDRKP耐β-内酰胺类、基糖苷类等抗氨菌药物与该菌携带获得性耐药基因TEM-1、SHV-11、KPC-2型、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ基因相关;另外,该菌膜孔蛋白基因ompK36发生了变异,这可能与β-内酰胺类药物耐药有关联。     

多药耐药肺炎克雷伯菌GyrA突变及超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的研究多药耐药肺炎克雷伯菌GyrA突变及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型。方法对2008年分离的46株肺炎克雷伯菌〔(30株分离自零售食品(凉拌菜),16株分离自医务人员鼻腔拭子)〕采用K-B法进行药敏试验,检测多药耐药菌是否产ESBLs,PCR法扩增多药耐药菌环丙沙星耐药相关基因gyrA,ESBLs基因bla-TEM、blaSHV和blaCTX-M,3类整合酶基因(intⅠ1,intⅠ2,intⅠ3)及第1类整合子可变序列;对PCR产物进行测序分析,脉冲场凝胶电泳(PFGE)对多药耐药菌进行分子分型。结果 9株菌为多药耐药菌,3株菌在GyrA的QRDR区83位Ser→Ile,1株菌在GyrA的QRDR区83位Ser→Thr,8株菌产ESBLs,6株菌携带SHV型ESBL,其中3株菌同时携带TEM型ESBL;2株菌携带OKP型ESBLs;未检测到CTX-M型ESBLs,1株菌intⅠ1基因阳性,携带有第1类整合子和耐药基因盒aacA7,PFGE将9株菌分为8个PFGE型,2株菌为同一个PFGE型。结论耐药基因的获得如gyrA基因突变和携带ESBLs基因是肺炎克雷伯菌产生多药耐药的主要机制。     

肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的：了解20株肺炎克雷伯菌（KPN）耐药性及β-内酰胺酶产生状况。方法：对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、CTX—M—1群、CTX—M-2群、CTX—M-9群、OXA—1群、OXA-2群、OXA—10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT—1）检测。结果：20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M—1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因，阳性率分别为85％、25％、25％、20％、25％、70％。20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因，最多同时检出6种β-内酰胺酶基因。并在国内首次发现CTX-M-55型。结论：该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。     

医院感染肺炎克雷伯菌耐药趋势及β-内酰胺酶基因型分析北大核心CSCD

目的了解医院重症监护病房2009-2013年医院感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势以及10种β-内酰胺酶耐药基因的分布,为临床正确选择抗菌药物提供依据。方法 K-B法检测165株肺炎克雷伯菌对20种抗菌药物的耐药性,PCR方法检测:CTX-M、TEM、SHV、GES、KPC、IMI、IMP、VIM、NDM、GIM耐药基因。结果 ICU 5年共分离165株肺炎克雷伯菌,产ESBLs菌株88株,KPN对三代头孢菌素的耐药率逐年升高;自2011年出现碳青霉烯耐药的菌株,耐药率约10.0%;114株扩增到耐药基因片段,检测出CTX-M、TEM、SHV、KPC共4种耐药基因,165个基因片段;最主要的耐药基因型为SHV型,占46.5%。结论产ESBLs菌株的增加和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的出现,应引起高度重视,关注细菌的变迁和耐药性变化,并合理选用抗菌药物治疗。     

植生克雷伯菌与肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因研究

目的调查一组耐药克雷伯菌属β-内酰胺酶编码基因表达状况以及KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列的关系,为临床治疗提供参考依据。方法收集医院2009年10月-2011年3月分离出的20株克雷伯菌属,采用K-B纸片扩散法进行抗菌药物敏感性判断;采用聚合酶链反应(PCR)法检测A、B、C、D等4类40种β-内酰胺酶基因,PCR法连锁检测KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列,采用Chromas软件对PCR阳性产物测序结果进行读序,并对测序结果用Chromas直接作BLAST Search比对。结果 20株克雷伯菌属共检出5种A类β-内酰胺酶编码基因TEM、SHV、CTX-M-1群、LAP、KPC,1种C类β-内酰胺酶编码基因DHA,1种D类β-内酰胺酶编码基因OXA-1群,阳性检出率依次为SHV100.0%、TEM8 5.0%、DHA85.0%、CTX-M-1群55.0%、KPC45.0%、LAP10.0%和OXA-1群5%;9株KPC阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论产β-内酰胺酶是克雷伯菌属耐β-内酰胺类药物的重要成因之一,KPC型β-内酰胺酶编码基因由插入序列ISKpn6介导。     

老年患者肺炎克雷伯菌分离株β-内酰胺酶基因分型研究

目的了解肺炎克雷伯菌(KPN)老年患者分离株β-内酰胺酶产生状况。方法对20株KPN进行了15种β-内酰胺酶基因(blaTEM、blaSHV、blaLEN、blaOKP、blaCTX-M-1群、blaCTX-M-2群、blaCTX-M-9群、blaOXA-1群、blaOXA-2群、blaOXA-10群、blaPER、blaGES、blaVEB、blaDHA、blaACT-1)检测。结果20株KPN检出blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-1群、blaCTX-M-9群、blaOXA-1群、blaDHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为95%、30%、50%、5%、5%、15%;20株KPN中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,15株同时检出>2种β-内酰胺酶基因,最多同时检出4种β-内酰胺酶基因。结论该20株KPNβ-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。     

老年人肺炎克雷伯菌耐药性和β-内酰胺酶基因分析

目的分析老年人肺炎克雷伯菌的耐药谱及其携带的β-内酰胺酶基因。方法抗菌药物敏感试验采用微量肉汤稀释法测定临床分离的肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药性，采用PCR法检测pβ-内酰胺酶耐药基因型。结果20株肺炎克雷伯菌对阿莫西林、替卡西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢他啶、头孢吡肟的耐药率均为100％，复方阿莫西林60％、头孢西丁40％、复方哌拉西林30％。PCR扩增后有19株均发现有产酶基因，阳性率为95％，最多的一株有4种基因。基因型主要是TEM型，20株中有19株为TEM型，少数为CTX—M型。结论肺炎克雷伯菌株大多携带β-内酰胺酶耐药基因，其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有关。     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因与插入序列连锁检测分析

目的调查肺炎克雷伯菌的耐药性以及插入序列与β-内酰胺酶基因可能存在的关系。方法收集医院2011年1月-2012年3月19株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,采用16SrDNA扩增与测序后确认菌种,采用聚合酶链反应(PCR)法分析A^D类等4类共22种β-内酰胺酶基因与插入序列(ISKpn6、ISKpn7),并作了β-内酰胺酶基因与插入序列连锁检测。结果 19株肺炎克雷伯菌均检出blaTEM和blaKPC型β-内酰胺酶基因,并且blaKPC与ISKpn6连锁检测均呈阳性。结论检出blaKPC型β-内酰胺酶基因并有可能高表达,是该组菌株对β-内酰胺类药物耐药的主要原因。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌多重β-内酰胺酶基因型研究

目的:研究医院感染碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和质粒介导的AmpC酶基因型的分布。方法:筛选出产KPC酶肺炎克雷伯菌,采用改良的Hodge试验、接合试验、聚合酶链反应(PCR)等方法确定多重β-内酰胺酶基因型。结果:收集并证实产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌26株,其中CTX-M型ESBL检出率最高;3株细菌同时编码ESBL和AmpC基因,其中2株细菌同时携带blaCTX-M-3、blaSHV-12和blaDHA-1三种β-内酰胺酶基因。结论:产KPC酶肺炎克雷伯菌同时携带有其他β-内酰胺酶耐药基因,CTX-M型ESBL最为常见,使细菌耐药性更为严重。     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药分析

为了指导临床合理使用抗菌药物,防止高耐药菌株的流行和传播,尤其是控制产ESBLs菌株的流行,我们对来自不同标本中分离的178株肺炎克雷伯菌产ESBLs的情况及药敏进行分析,现报道如下.