单核细胞趋化蛋白-1在急性出血坏死性胰腺炎大鼠模型中的表达

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）发病机制中的作用。方法采用胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠建立大鼠AHNP模型。48只雄性SD大鼠随机分为牛磺胆酸钠组和手术对照组，半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测两组不同时间点胰腺组织和肺组织中MCP-1 mRNA表达的变化情况。结果牛磺胆酸钠组术后胰腺和肺组织MCP-1 mRNA的表达随着时间的延长逐渐增强，术后1、3h与手术对照组无明显差异，术后6、12h明显高于手术对照组（P〈0．05），且表达与胰腺组织的病理积分成正相关。结论MCP-1可能在AHNP发病过程及与AHNP相关的急性肺损伤中起了重要的作用。     

中性粒细胞趋化因子在轻、重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的表达变化

目的:探讨中性粒细胞趋化因子(cytokine-induced neutrophil chemoattractant, CINC)在轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis, MAP)向重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)演变过程中的作用. 方法:分别采用腹腔注射雨蛙肽和胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立大鼠轻症、重症急性胰腺炎模型.雄性SD大鼠随机分为雨蛙肽组(18只)、生理盐水组(18只)、牛磺胆酸钠组(24只)和手术对照组(24只),检测各组不同时间点血清淀粉酶并观察胰腺组织病理学改变,用免疫组织化学法和半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺组织中CINC蛋白和CINC mRNA表达的变化情况. 结果:雨蛙肽组6,12 h胰腺组织中CINC蛋白和CINC mRNA表达明显高于生理盐水组(P<0.05),且表达与胰腺组织的病理积分呈正相关;24 h与生理盐水组比较无明显差异.牛磺胆酸钠组与手术对照组相比,大鼠的血清淀粉酶明显增高、胰腺组织学改变明显;术后1 h胰腺腺泡细胞CINC蛋白和CINC mRNA的表达高于生理盐水组,随着时间的延长表达逐渐增强(P<0.05,P<0.01). 结论:CINC可能在MAP向SAP演变过程中起到重要作用.     

褪黑素对急性胰腺炎大鼠胰腺组织中趋化因子表达的影响

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）在急性胰腺炎（AP）早期发病中的作用,观察褪黑素（MT）对趋化因子MCP-1及MIP-2表达的影响。方法35只SD大鼠随机分为假手术（SO）组,AP 3、6、12 h组和MT 3、6、12 h干预组。采用4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制备AP动物模型,MT组在诱导AP前0.5 h给予腹腔注射MT 20 mg/kg。观察胰腺病理组织学改变,采用实时定量RT-PCR方法检测各组胰腺组织中MCP-1 mRNA、MIP-2 mRNA表达水平。结果AP大鼠胰腺组织中MCP-1 mRNA、MIP-2 mRNA表达显著高于SO组（P〈0.01）,且表达水平与胰腺病理严重程度成正相关（P〈0.05）。经MT干预后,胰腺组织中MCP-1 mRNA、MIP-2 mRNA表达下调（P〈0.05）,胰腺组织损伤得到改善。结论MCP-1及MIP-2在AP大鼠发病过程中具有重要作用,MT可能通过下调其在胰腺组织的表达,对AP具有一定的保护作用。     

甘氨酸对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤保护机制的研究

目的：探讨甘氨酸对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用机制。方法：将SD大鼠72只随机分成假手术组（A组）、重症急性胰腺炎组（B组）、甘氨酸组（C组）。重症急性胰腺炎模型通过胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠诱导,甘氨酸组（C组）于造模前3、6h分别从尾静脉内注入甘氨酸（3mmol/L,0.1mL/100g）预处理,各组在造模完成后分别于6、12、24h处死动物取其肺组织,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定肺组织高迁移率族蛋白B-1（HMGB-1）含量,采用RT-PCR法测定肺组织髓样细胞触发受体-1（TREM-1）mRNA水平。结果：与A组比较,B组肺组织HMGB-1水平、TREM-1mRNA的表达明显增高,差异均有统计学意义P〈0.05）;与B组相比,C组HMGB-1水平、TREM-1mRNA的表达呈下降趋势,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：甘氨酸可以抑制重症急性胰腺炎肺组织中TREM-1mRNA及HMGB-1的表达,从而对重症急性胰腺炎肺损伤起保护作用。     

急性胰腺炎肺组织中巨噬细胞移动抑制因子的表达及意义

目的：探讨急性胰腺炎（AP）肺组织中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的表达及其与核因子-κB（NF-κB）的关系。方法：30只SD大鼠随机分为正常对照组、急性水肿型胰腺炎（AEP）组和急性坏死性胰腺炎（ANP）组。以不同浓度牛磺胆酸钠液逆行胰胆管插管注射造成大鼠AEP和ANP两种模型。6 h后检测相关指标。应用免疫组化染色检测肺组织NF-κB的表达;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对肺组织MIF的表达水平进行半定量测定;生化法检测髓过氧化物酶（MPO）活性;行肺、胰腺组织病理学检查并评分。结果：正常对照大鼠肺组织中MIF mRNA和NF-κB呈低表达。AP模型组大鼠肺组织中MIF mRNA的表达显著增强,NF-κB、MPO活性和病理学评分也显著增高,且在ANP组增高尤为明显;两个模型组间各项指标具有显著性差异（P〈0.05）。MIF mR-NA的表达与NF-κB的活性密切相关。组织学评分显示,随着胰腺损伤的加重,肺损伤也加重。结论：MIF参与了AP肺损伤的发病过程,其机制可能与激活NF-κB有关。     

HMGB1在大鼠重症胰腺炎损伤器官中的表达研究

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）在牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎（SAP）损伤后各组织的表达情况。方法将36只SD大鼠分为假手术对照组（n=18）、SAP组（n=18）,分别于24h、48h、72h三个时间点处死,每时间点6只。动物经胆胰管逆行注射5%牛黄胆酸钠诱发SAP,对照组以生理盐水代替5%牛黄胆酸钠行假手术。链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法（S-P）检测大鼠不同组织（胰腺、肝脏、胃肠道、肺脏和肾脏）的HMGB1表达情况。结果 HMGB1在假手术组大鼠的胰腺、肝脏、胃肠道、肺脏和肾脏各组织中表达很弱甚至不表达。HMGB1在SAP大鼠上述组织中存在不同程度表达增高：①除胰导管外,胰腺腺泡和胰岛周围HMGB1表达增高;②胃肠道HMGB1在3个不同时间点均明显升高,主要表达的部位集中于黏膜深部;③在不同时间点肝细胞HMGB1轻度增高,但其它部位细胞未见表达异常;④肺支气管上皮HMGB1在24h时间点轻度增高,48h、72h达到表达高峰;⑤肾脏远曲小管HMGB1在SAP不同时间点表达增高。结论本研究结果表明HMGB1可能参与牛磺胆酸钠诱导的大鼠SAP的发病过程,而血清中增高的HMGB1可能由这些受损的器官组织产生和释放。     

重症急性胰腺炎大鼠TNF-α和ICAM-1的表达及其意义

目的通过重症急性胰腺炎大鼠探讨TNF-α和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）对本疾病的影响。方法20只SD雄性大鼠分2组，每组10只。普通SAP组以5％牛磺胆酸钠建立重症急性胰腺炎（SAP）；病因加重组以10％牛磺胆酸钠制模。制模10h后处死大鼠，检测其血液生化和细胞因子浓度，观察组织脏器的病理变化及组织TNF-α和ICAM-1的表达。结果病因加重组大鼠血清的谷丙转氨酶、肌酐和TNF-α与普通SAP组相比有明显升高。同时，该组大鼠的肝脏、肺和肾脏病理评分显著大于普通SAP组。并且其脏器组织中TNF-α表达和ICAM-1的表达也明显增加。结论TNF-α及ICAM-1可能在胰腺炎重症化及MODS发生发展过程中起重要作用。     

乌司他丁对急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织Toll样受体4表达的影响

目的 研究乌司他丁对急性坏死性胰腺炎肺组织Toll-样受体4(TLR4)表达的影响及其意义.方法 56只SD大鼠经逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(TAC)制作大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤动物模型,大鼠分为对照组(n=8)、急性坏死性胰腺炎组(n=24)和治疗组(n=24).对照组和急性坏死性胰腺炎组给予尾静脉注射生理盐水,治疗组给予尾静脉注射乌司他丁.分别测定各组血清淀粉酶和肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,计算肺组织学评分和肺损伤指数以评价肺损伤程度,荧光实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组不同时间点肺组织TLR4 mRNA表达.结果 与对照组比较,急性坏死性胰腺炎组大鼠各时点肺组织TLR4 mRNA表达明显增高(均P＜0.01),并在12 h达到峰值,同时肺组织MPO活性增高,肺损伤加重(P＜0.05或P<0.01).与急性坏死性胰腺炎组相比,治疗组肺组织TLR4 mRNA表达明显降低,肺损伤减轻,MPO活性降低(均P＜0.05).结论 急性坏死性胰腺炎时,肺组织内TLR4 mRNA表达明显上调,肺部炎症反应及肺损伤加重;乌司他丁可以降低急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织TLR4 mRNA表达,减轻肺部炎症和肺损伤.     

蛋白酶体抑制剂MG-132在大鼠重症急性胰腺炎及其肺损伤中的保护作用

目的观察蛋白酶体抑制剂MG-132在大鼠重症急性胰腺炎（SAP）中的保护作用,并探讨其可能机制。方法SD大鼠30只,5％牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射制作重症急性胰腺炎（SAP）模型,观察各组大鼠胰腺、肺组织形态学改变,并测定血清淀粉酶及胰腺、肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性。结果MG-132治疗组与胰腺炎组及假手术组比较,血清淀粉酶、胰腺及肺组织MPO活性下降（P〈0．05）,组织病理学改变均有不同程度的改善（P〈0．05）。结论制模前30min腹腔注射10mg／kg的MG-132可以明显减轻5％牛磺胆酸钠诱导的大鼠的肺损伤严重程度,并可减轻胰腺炎所致的肺损伤。     

大鼠重症急性胰腺炎胰腺蛋白组学的初步研究

目的观察牛磺胆酸钠诱导的重症急性胰腺炎（SAP）大鼠的胰腺组织在不同时间点蛋白组学的变化。方法 36只SD大鼠分为假手术组、SAP组,分别于24 h、48 h、72 h 3个时间点处死大鼠,每时间点6只。动物经胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠诱发SAP,对照组以生理盐水代替5%牛黄胆酸钠行假手术。通过双向电泳分离、硝酸银染色和图谱分析模型组与对照组蛋白点的差异。结果牛磺胆酸钠诱导出SAP典型组织病理学改变,伴随有胰外肺、肾、胃肠器官的损伤。通过图像分析软件分析胰腺组织蛋白组学变化：24 h时SAP组与假手术组有46个差异点,其中9个点蛋白上调,37个点下调;48 h时SAP组与假手术组有97个差异点,其中43个点蛋白上调,54个点下调;72 h时间点SAP组与假手术组有80个差异点,其中10个点蛋白上调,70个点下调。结论牛磺胆酸钠诱导的大鼠SAP模型胰腺组织在不同时间点蛋白组学的变化存在差异。     

实验性急性胰腺炎大鼠肺内趋化因子基因的表达及其意义

为探讨急性坏死性胰腺炎 (ANP)大鼠模型肺组织单核细胞趋化性蛋白 1 (MCP 1 )mRNA的表达情况及其与肺损伤的关系 ,将 3 3只Wistar大鼠随机分为正常对照组和胰腺炎不同时间点 ( 1、4、1 2和 2 4h)各组 ,应用 3 .5 %牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制备ANP模型。采用RT PCR法检测肺组织MCP 1mRNA表达 ,同时测定肺组织湿 /干质量比率及病理改变。结果 :造模ANP 1h后肺组织MCP 1mRNA表达水平为 0 .40± 0 .0 8,较正常对照组表达水平( 0 .0 3± 0 .0 2 )明显增高 (P <0 .0 5 ) ,并持续升高至 2 4h( 1 .1 3± 0 .0 7) ,同时伴有肺组织病理损害 ,其严重程度与MCP 1mRNA表达及肺湿 /干质量比率与MCP 1mRNA表达均明显相关 (P <0 .0 5 )。提示 :大鼠ANP早期肺组织MCP 1即过度表达 ,MCP 1mRNA过度表达是ANP肺损害发生的原因之一 ,肺损伤严重程度与MCP 1mRNA表达的高低有关     

水通道蛋白-1在急性肺损伤中的表达及意义

[目的]探讨水通道蛋白1(AQP-1)在脂多糖(LPS)所致的急性肺损伤(ALI)中的作用。[方法]根据是否腹腔注射脂多糖(LPS)将实验动物分为脂多糖组(LPS组)及生理盐水对照组(Con组),对比两组动物组织病理学改变、动脉血气、肺湿/干重比及AQP-1表达的差异。[结果]光镜下见LPS组肺组织水肿,大量炎性细胞浸润;LPS组PO2(55.07±17.02)mmHg明显低于Con组(97.35±9.37)mmHg,差异有显著性意义,P<0.05;LPS组肺湿/干重比(4.93±0.16)明显高于Con组(4.11±0.69),差异有显著性意义,P<0.05;免疫组化染色显示:LPS组的AQP-1蛋白表达减弱,荧光实时定量PCR证实LPS组的AQP-1 mRNA表达较对照组明显下降(P<0.01)。[结论]AQP-1参与了急性肺损伤的形成。     

急性胰腺炎肺组织中巨噬细胞移动抑制因子的表达及意义

目的:探讨急性胰腺炎(AP)肺组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达及其与核因子-κB(NF-κB)的关系。方法:30只SD大鼠随机分为正常对照组、急性水肿型胰腺炎(AEP)组和急性坏死性胰腺炎(ANP)组。以不同浓度牛磺胆酸钠液逆行胰胆管插管注射造成大鼠AEP和ANP两种模型。6 h后检测相关指标。应用免疫组化染色检测肺组织NF-κB的表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对肺组织MIF的表达水平进行半定量测定;生化法检测髓过氧化物酶(MPO)活性;行肺、胰腺组织病理学检查并评分。结果:正常对照大鼠肺组织中MIF mRNA和NF-κB呈低表达。AP模型组大鼠肺组织中MIF mRNA的表达显著增强,NF-κB、MPO活性和病理学评分也显著增高,且在ANP组增高尤为明显;两个模型组间各项指标具有显著性差异(P<0.05)。MIF mR-NA的表达与NF-κB的活性密切相关。组织学评分显示,随着胰腺损伤的加重,肺损伤也加重。结论:MIF参与了AP肺损伤的发病过程,其机制可能与激活NF-κB有关。     

胆红素对抗急性肺损伤大鼠的实验研究

目的 探讨胆红素对急性肺损伤（ALI）大鼠的抗氧化指标和肺血管内皮细胞间黏附分子1（ICAM-1）表达的影响。方法 雄性Wistar大鼠30只，随机分为对照组、ALI模型组、胆红素干预组。检测肺组织超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）含量变化；测定肺血管内皮ICAM-1 mRNA的表达。结果 ALI模型组MDA和ICAM-1 mRNA显著高于对照组（分别为P〈0．01和P〈0．001），而SOD和GSH-Px明显低于对照组（均为P〈0．01）。胆红素干预组MDA和ICAM-1 mRNA明显低于ALI模型组（均为P〈0．01），而SOD和GSH-Px显著高于ALI模型组（分别为P〈0．01和P〈0．05）。结论 胆红素通过抗氧化作用和抑制ICAM-1 mRNA的表达对抗ALI。     

清瘟败毒饮对急性肺损伤大鼠促炎症和抗炎症因子水平的影响

[目的]观察清瘟败毒饮对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（acute 1ung injury,ALI）大鼠血清炎症因子IL-1β、IL-13水平的影响.[方法]144只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,泼尼松组和清瘟败毒饮大、中、小剂量组（n＝24只）.造模后连续用药3d,2次/d.于末次给药后24h、48h每组各处死6只大鼠,72h处死余下所有大鼠,ELISA法检测血清炎症因子IL-lβ和IL-13的含量;HE染色观察肺组织病理变化.[结果]模型组各时相血清中IL-1β和IL-13水平明显高于空白对照组（P＜0.01）,但IL-1β增加的速度明显高于IL-13;与同时相模型组相比,清瘟败毒饮各剂量治疗组（除24h小剂量组外）大鼠血中IL-1β含量均下降,IL-13含量均升高（P＜0.05或P＜0.01）;LPS致ALI大鼠肺组织病理检查结果显示肺泡结构破坏或实变,肺泡隔增厚显著,毛细血管充血明显,肺泡腔内、细动脉周围和细支气管壁可见成堆炎症细胞浸润,而清瘟败毒饮干预组肺组织病理均有较大程度的改善.[结论]清瘟败毒饮可通过有效调节脂多糖致急性肺损伤大鼠血中炎症细胞因子IL-lβ和抗炎症细胞因子IL-13表达水平,促使炎症和抗炎症细胞因子趋于动态平衡,从而减轻肺部炎症细胞浸润,起到修复保护损伤肺组织的作用.     

盐酸多西环素对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

目的：研究盐酸多西环素对内毒素诱导大鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用．方法：将72只雄性SD大鼠随机分为对照组,损伤组（ALI组）,脂多糖治疗组（LPS组）,每组24只．每组按造模后不同观察时间点又分为1,2,4,8h4个亚组（n=6）．于0h时给予对照组气管内滴注生理盐水（NS）0．3mL,10min后股静脉注射NS1mL．ALI组气管内滴注LPS0．2mg／kg（溶于0．3mL NS）,10min后股静脉注射NS 1mL．LPS组气管内滴注LPS0．2mg／kg,10min后股静脉注射盐酸多西环素20mg／kg（溶于1 mL NS）．各组于1,2,4,8h4个时间点心脏抽血检测动脉血氧分压（PaO2）;取肺组织进行肺湿／干质量（W／D）比值测定,并采用HE染色观察肺组织形态学变化;免疫组织化学法检测肺组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）,基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达．结果：给予气管内滴注LPS后1～8h大鼠动脉血PaO2 ALI组,LPS组显著降低,4h时达最低点,各时间点动脉血PaO2 LPS组均显著高于AU组（P〈0．05,P〈0．01）．W／D比值1～8h时AU组,LPS组均显著增加,2组相比较LPS组较AU组降低（P〈0．05,P〈0．01）．病理形态学观察可见LPS组肺水肿、出血、炎性细胞浸润程度程度较AU组减轻．免疫组化结果显示ALI组肺组织MMP-2,MMP-9在气管内滴入LPS后1h后迅速升高,4h时达峰值,LPS组MMP-2,MMP-9表达在相同时间均较Au组显著降低（P〈0．05,P〈0．01）．而对照组肺组织MMP-2,MMP-9在不同时间点无明显变化．结论：盐酸多西环素可抑制内毒素性大鼠AU肺组织MMP-2,MMP-9表达,改善呼吸氧合功能,减轻肺损伤．     

大鼠油酸性急性肺损伤初期水通道蛋白4在肺水代谢的实验研究

目的 测定油酸造成急性肺损伤(ALI)初期损伤程度及肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)上水通道蛋白4(AQP-4)的表达量以评估病理状态下ATⅡ细胞水通道水转运能力的状况.方法 血气分析、观察肺组织病理学、用重力法测定血管外肺水(EVLW)含量检测早期肺损伤的程度;急性分离纯化大鼠油酸ALI模型的ATⅡ细胞,显微镜及电子显微镜观察形态病理变化:免疫组化了解肺组织AQP-4的表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-4的m-RNA表达的情况.结果 血气分析、光镜下肺损伤评分及EVLW油酸组严重程度显著高于对照组,显微镜下肺泡Ⅱ型上皮细胞的数量较对照组无明显减少,但电镜下细胞的超微结构改变,板层小体排空,线粒体损伤等改变;肺组织免疫组化观察到AQP-4明显表达增强,肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-4的m-RNA表达增多,AQP-4由胞浆向胞膜转运,胞膜的表达增多(P<0.05).结论 在肺损伤初期就有了肺损伤水肿的病理生理的改变,AQP-4在肺泡Ⅱ型上皮细胞上m-RNA及细胞膜的表达上调.很大程度调节肺泡腔及肺泡上皮细胞的水转运,在钠通道功能下降的情况下发挥了重要的代偿作用.