白藜芦醇诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用机制

目的 探讨白藜芦醇对人卵巢癌SKOV3细胞的诱导凋亡作用,并探讨该凋亡的发生机制.方法 对人卵巢癌SKOV3细胞采用不同浓度的白藜芦醇（400、200、100、50、25 μmol/L）处理24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞存活率,透射电镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞周期的改变,RT-PCR法、Western blot法检测细胞mRNA、蛋白表达.结果 白藜芦醇对人卵巢癌SKOV3细胞抑制作用明显,并且呈时间和浓度依赖性关系（P＜0.05或＜0.01）;白藜芦醇作用后SKOV3细胞出现典型的凋亡超微结构改变;SKOV3细胞凋亡并阻滞于S期;细胞中Bcl-2 mRNA、蛋白表达下调,Bax mRNA、蛋白表达上调.结论 白藜芦醇能有效地抑制SKOV3细胞生长,其机制可能与抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达、增强凋亡促进因子Bax的表达有关.     

蒺藜皂苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响

目的 探讨蒺藜皂苷(STT)对体外培养的卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及机制.方法 选择对数生长的卵巢癌细胞株SKOV3分为空白对照组,实验组加STr.采用MTr法检测细胞活性,流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3肿瘤细胞凋亡率及细胞周期变化;应用免疫组化检测SKOV3 Bcl-2和Bax蛋白表达变化.结果 与对照组相比,实验组对卵巢癌细胞的增殖具有明显的抑制作用(P＜0.05).细胞周期分析显示,实验组使卵巢癌细胞的S期细胞比例减小,G1期细胞比例增大(P＜0.05).STr能够降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),增加Bax蛋白表达(P＜0.01).结论 STT能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,其机制可能与细胞周期发生停滞有关,并通过影响细胞周期及下调Bcl-2蛋白和增加Bax蛋白的表达而诱导细胞凋亡.     

抗HER-2嵌合抗体chA21对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的 探讨抗HER-2嵌合抗体chA21在体外对高表达HER-2的人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡诱导作用及其分子机制。方法 chA21处理体外培养的SKOV3细胞，采用透射电镜和原位末端标记技术观察和检测细胞凋亡情况，采用免疫细胞化学技术检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase-3）表达情况。结果 chA21作用72h，可见SKOV3细胞凋亡，其作用呈剂量依赖性；SKOV3细胞Bax、Fas和caspase-3表达升高、Bcl-2表达下调、Bcl-2／Bax降低，并呈剂量依赖性。结论 chA21在体外可诱导SKOV3细胞凋亡，其分子机制与调节凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas及caspase-3的表达有关。     

恒定及波动高糖下牛视网膜血管周细胞凋亡的线粒体机制

目的 研究恒定及波动高糖培养对牛视网膜血管周细胞凋亡的影响,并探讨其线粒体调控机制.方法 体外培养接近融合的视网膜血管周细胞在恒定及波动高糖中孵育6 d后,采用电镜观察周细胞超微结构改变;TUNEL法检测周细胞凋亡;激光共聚焦显微镜检测周细胞线粒体跨膜电位的改变;分光光度计检测周细胞胞质细胞色素c的变化;免疫组化和RT-PCR测定Bax、Bel-2基因的表达.结果 (1)恒定及波动高糖卜周细胞呈现出典型的细胞凋亡改,变,恒定高糖作用强于波动高糖组;(2)恒定及波动高糖培养使用细胞线粒体跨膜电位降低,周细胞线粒体跨膜电位与周细胞凋亡率负相关(r=-0.89,P<0.01);(3)恒定及波动高糖促使周细胞线粒体细胞色素c转移到胞质,胞质细胞色素c浓度增加,与细胞凋亡率正相关(P<0.01);(4)恒定及波动高糖能诱导凋亡基因Bax表达增加,抑制Bcl-2的表达,Bax/Bcl-2比值增加.Bax/Bcl-2比值与线粒体跨膜电位负相关,与胞质细胞色素c浓度正相关,与周细胞凋亡率正相关(均P<0.01).结论 恒定及波动高糖均可诱导培养的周细胞线粒体跨膜电位降低,细胞色素c释放,细胞发生凋亡,且恒定高糖作用强于波动高糖;线粒体凋亡途径在周细胞凋亡中起重要作用,凋亡基因Bax、Bcl-2可能参与其调控.     

黄芩素通过线粒体凋亡途径诱导体外培养喉癌细胞凋亡的机制

目的探索中药黄芩有效成分——黄芩素(BAI)通过线粒体凋亡途径诱导体外培养喉癌细胞凋亡的分子机制。方法体外培养的人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,暴露于浓度递增的BAI培养液中,分别培养24、48 h,流式细胞术(FCM)检测诱导细胞凋亡作用;分光光度法检测对半胱天冬酶(caspase)-3及caspase-9的激活作用;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测对Bcl-2、Bax mRNA表达的影响;Western印迹检测对酶原蛋白(procaspase)-9、caspase-9,procaspase-3、caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果 BAI可诱导细胞凋亡,凋亡率增加;分光光度法表明BAI可以激活caspase-3、caspase-9活性;BAI可下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达;印迹BAI可上调Bax、caspase-9、caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论 BAI通过上调Bax在mRNA和蛋白水平的表达,下调Bcl-2在mRNA和蛋白水平的表达及Bcl-2/Bax比,促进Bax在线粒体外膜处聚集成簇,降低线粒体跨膜电位,促进细胞色素(Cyt)C释放到胞质,进而与激活的caspase-9及Apaf-1形成凋亡小体,从而激活caspase-3及后续线粒体凋亡途径,诱导喉癌Hep-2细胞凋亡。     

tBHQ对无机砷诱导HaCaT细胞凋亡中的保护作用

目的观察tBHQ对内源性线粒体凋亡通路和凋亡相关蛋白Bel-2等蛋白表达的影响,探讨tBHQ在无机砷诱导HaCaT细胞凋亡过程中的作用。方法采用分光光度法检测Caspase-3蛋白活力;Westernblot法分析细胞内Caspase-3、CytC、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果NaAsO2单独作用于HaCaT细胞24h,线粒体中CytC蛋白表达降低,而胞浆中CytC蛋白表达则随染砷剂量的增加而明显升高。tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,线粒体中CytC蛋白表达明显恢复,胞浆中CytC蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而明显回落。此外,NaAsO。单独作用于HaCaT细胞24h,Procaspase-3蛋白表达降低,而Caspase-3活化程度均显著高于对照组（P〈0．01）,tBHQ预处理12h后再暴露于NaAsO2,Procaspase-3蛋白表达均明显高于相同浓度砷单独作用组,而且Caspase-3酶活力得到明显抑制,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。NaAsO：单独作用于HaCaT细胞24h,与对照组相比Bcl-2蛋白表达降低,而Bax蛋白表达明显升高。tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,Bcl-2蛋白表达明显恢复,而Bax蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而减少。结论tBHQ能够影响线粒体凋亡途径拮抗NaAsO2诱导的人皮肤角质细胞凋亡;tBHQ能够诱导调控凋亡相关蛋白Bcl-2／Bax从而发挥抗凋亡作用。     

沙库巴曲缬沙坦调节线粒体动力系统改善缺氧心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦（Sacubitril Valsartan,S/V）通过调节线粒体动力系统对缺氧H9c2心肌细胞凋亡保护作用。方法 实验分为3组: 对照组、造模组、造模 S/V组。流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（Reactive oxygen species,ROS）,JC-1检测线粒体膜电位,蛋白质免疫印迹法（Western blot,WB）检测线粒体融合蛋白1（Mfn1）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）、动力相关蛋白 1 (Drp1)、线粒体分裂蛋白1（Fis1）、细胞色素C（CytC）、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白（Bax）及含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)表达情况。采用 GraphPad Prism 8统计软件进行数据分析,多组间比较采用单因素方差分析。结果 H9c2心肌细胞建立糖氧剥夺模型,经S/V处理光镜下心肌细胞形态学明显改善;流式细胞技术分析S/V明显降低细胞内ROS水平,抑制心肌细胞凋亡（P＜0.05）;荧光显微镜分析提示S/V明显改善线粒体膜电位水平（P＜0.05）;WB显示S/V可明显提升Mfn2、Mfn1、Bcl2蛋白表达水平,降低Drp1、Fis1、CytC、Bax及Caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 S/V可能通过促进线粒体融合、抑制线粒体分裂调节线粒体稳态,减少ROS生成,减轻心肌细胞凋亡。     

二氮嗪联合环孢菌素A减轻突触核蛋白片段对PC12细胞凋亡的作用机制

目的探讨线粒体ATP敏感钾离子通道开放剂二氮嗪、线粒体膜渗透性转换孔抑制剂环孢菌素A,以及两者协同对α-突触核蛋白片段的非淀粉样成分(NAC)致PC12多巴胺能细胞凋亡的分子机制。方法采用25μmol/L的NAC对PC12细胞进行诱导建立帕金森病细胞模型,分为对照组、NAC处理组(NAC组)、NAC+二氮嗪干预组(干预1组)、NAC+环孢菌素A干预组(干预2组)、NAC+二氮嗪+环孢菌素A干预组(干预3组)。二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对其干预48h,用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞色素C、Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax比值情况。结果与对照组比较,NAC组细胞凋亡率、细胞色素C明显升高,Bcl-2、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01),Bax未见明显变化(P>0.05);与NAC组比较,干预1组、干预2组、干预3组细胞凋亡率、细胞色素C明显降低,Bcl-2、Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.01),Bax未见明显变化(P>0.05)。结论二氮嗪、环孢菌素A及两者协同作用通过抑制线粒体凋亡通路相关蛋白的表达来拮抗NAC的细胞凋亡作用。     

Fe-NTA诱导的氧应激通过调节Bcl-2家族蛋白及线粒体膜电位影响人肝星状细胞和肝细胞的凋亡

目的研究Fe-NTA诱导的氧应激对人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)和人肝细胞凋亡的影响,并明确其机制与Bcl-2家族蛋白及细胞线粒体膜电位变化的关系.方法采用人肝星状细胞株及人肝细胞株张氏肝,取不同浓度的次氮基三乙酸铁(FeNTA)处理产生氧应激,测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA);用Annexin V-FITC+PI双染色法测定Fe-NTA作用后两种细胞的凋亡率;用比色法检测细胞内Caspase 3活性的改变;用阳离子荧光染料JC-1染色,检测细胞内线粒体膜电位的改变;用RT-PCR检测抗凋亡基因Bcl-2和凋亡基因Bax的mRNA表达情况;用免疫印迹技术检测Bcl-2和Bax的蛋白表达情况.结果铁负载产生氧应激后,两种细胞中SOD水平均下降,MDA含量均升高,与对照组比较有显著差异;Fe-NTa诱导的氧应激不能使HSC发生凋亡,亦未能使HSC线粒体膜电位下降,反而使细胞内Caspase 3活性逐渐降低,抗凋亡基因Bcl-2的mRNA与蛋白表达水平升高,Bax的mRNA与蛋白表达水平降低;Fe-NTa诱导的氧应激使肝细胞发生凋亡增多,肝细胞内Caspase 3活性逐渐升高,同时线粒体膜电位下降,抗凋亡基因Bcl-2的mRNA与蛋白表达水平降低;Bax的mRNA与蛋白表达水平升高.结论 Fe-NTA诱导的氧应激通过调节Bcl-2家族蛋白及线粒体膜电位影响人肝星状细胞和肝细胞的凋亡,通过上调Bcl-2表达及下调Bax表达、维持线粒体膜电位不致崩溃、降低Caspase 3活性而抑制肝星状细胞的凋亡,而对人肝细胞起到相反的作用,诱导肝细胞凋亡.     

莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的机制

目的研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)在体外诱导人胃癌SGC7901细胞的凋亡作用,并探讨其作用机制。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,MTT比色法观察SFN对其增殖的影响。流式细胞术检测早期凋亡率、线粒体跨膜电位;免疫细胞化学法检测细胞Bax、Bcl-2、Bcl-X/L及Fas蛋白的表达;RT-PCR检测细胞Survivin基因mRNA表达。结果 SFN对SGC7901细胞的增殖具有明显抑制作用,SFN浓度在6.25～50μmmol/L之间时诱导SGC7901细胞凋亡的作用呈剂量依赖性(P0.01)。经SFN作用的SGC7901细胞线粒体跨膜电位降低,Bax及Fas蛋白表达水平上调,Bcl-X/L及Bcl-2/Bax表达水平降低;Survivin基因的mRNA表达降低(P0.01)。结论SFN可能通过下调Bcl-2/Bax及抑制Bcl-X/L蛋白的表达,活化Bax蛋白,诱导SGC7901进入内源性途径凋亡,外源性途径也可能起一定作用。SFN对SGC7901细胞的诱导凋亡作用还可能与抑制Survivin基因表达有关。