HBV-DNA在肝细胞癌血清和肝组织中的差异检测

利用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ方法联合检测ＨＢＶ在肝细胞癌肝组织中及血清标本中的感染情况。ＨＢＶ－ＤＮＡ在肝组织与血清标本中的检出率不同,分别为８１．３％和３７．５％,血清ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出与ＨＢｓＡｇ不一致。提示血清和肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ的差异检测结合ＥＬＩＳＡ可以初步显示ＨＢＶ在体内的感染情况。     

微板核酸杂交—ELISA方法对肝炎病人血清中HBV DNA的定量检？…

采用微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术测定肝炎病人血清中ＨＢＶＤＮＡ含量。方法用ＰＣＲ法将病人血清标本扩增后，与现任要特异性探针夹心杂交，然后通过酶联显色对６９例不同临床表现的肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ进行定量检测。结果２０例急性型肝炎血清中的ＤＮＡ含量超μｇ／Ｌ，８８．２４％的急性轻型肝炎患者和５４．５５％轻度慢性肝炎患者血清中的ＨＢＶＤＮＡ含量少于２μｇ／Ｌ，６６．６７％中度慢性肝炎患者血清ＨＢＶＤ     

PCR检测尿液中乙肝病毒DNA及意义

目的：比较乙型肝炎病人血清及尿液中乙肝病毒ＤＮＡ情况。方法：经ＥＩＡ法检测证实ＨＢＶ感染阳性病人血清及尿液用毛细管ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ并再用ＥＩＡ法检测尿液ＨＢＶ标志。结果：乙肝５项检查ＨＢｅＡｇ阳性组、ＨＢｅＡｂ阳性组、全阴性组血清中的ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为９２．５％、５０％、１４．３％；其对应尿液的ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为３３％、２５％、０。结论：血清ＨＢｅＡｇ阳性病人，血清和尿液     

定量PCR检测慢性HBV感染者血清HBV-DNA含量

目的 了解不同慢性乙型肝炎病毒感染者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量并探讨其临床意义 。方法 应用荧光能量转移定量聚合酶链反应检测２４５例不同临床类型慢性ＨＢＶ感染者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量。结果 ＨＢｅＡｇ阳性患者ＨＢＶ－ＤＮＡ含量显著高于ＨＢｅＡｇ阴性／抗－ＨＢｅ阳性患者的含量;     

非放射性HBV－DNA探针在乙型肝炎病毒检测中的应用

以地高辛甙元随机引物法标记ＨＢＶ－ＤＮＡ探针，以此探针检测慢性乙型肝炎患者的血清、肝组织，同时以ＥＬＩＳＡ法检测血清ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ。结果：血清ＮＢｅＡｇ阳性率２７％（１０／３７），血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率５７．１％（２０／３５），两者有显著性差异。血清ＨＢｃＡｂ阳性率７８．４％（２９／３７），肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率８３．８％（３１／３７），两者无显著性差异。血清与肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率有显著性差异。提示：血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检测是较ＨＢｅＡｇ更为准确客观反映血液带毒状况的指标。而准确反映肝脏带毒状况的指标是肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。当ＨＢｅＡｇ阴转，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性而肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性时，需注意肝硬化及肝癌的发生。     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV—DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传梁科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原－抗体更加灵敏、可靠。     

乙型肝炎患者和无症状HBVM携带者血清HBV—DNA与HBVM模式相？…

探讨乙型肘炎患者和无症状ＨＢＶＭ携带者血清ＨＢＶ－０ＤＮＡ与ＨＢＶＭ模式的相关性。方法应用ＰＣＲＥＢ法对１７８３例乙型肝炎血清学标志（ＨＢＶＭ）模式不同的乙型肝炎患者（包括急性乙型肝为８７例，慢性乙型肝炎８９１例，乙型肝炎后肝硬化１９３例）和无症状ＨＢＶＭ携带者（６１２）例，做了血清乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ－０ＤＮＡ）检测。结果（１）乙型炎患者和无症ＨＢＶＭ携带者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢＶＭ模式     

HBx—DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲ Ｉ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨ Ｉ、Ｂｇｌ Ⅱ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶ ＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘ ＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

有用聚合酶链反庆（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９例乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比为杂交高（Ｐ〈０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ一率为５７．１％；血清阳性率为６１．３％；两者总阳性率为８０．９％，说明ＰＣ     

非放射性分子杂交法检测HBV感染

用非放射性标记的ＨＢＶ－ＤＮＡ探针检测３７１份至少有一项ＨＢＶ免疫学标志阳性血清和５１０份对照血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明：５１０份对照血清和７９份仅抗－ＨＢｓ阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ均为阴性，８２份ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率为１００％，１０３份ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阴性血清的检出率为７９．６％，７６份ＨＢｓＡｇ阳性。ＨＢｅＡｇ阴性、但抗－ＨＢｅ阳性血清的检出率为８０．３％，２９２份ＨＢＶ不同感染阶段血清总检出率为７５％。非放射性分子杂交法可直接检测出ＨＢＶ的复制，由于该法亦可定量，故还可用于判断血清传染程度和血清病毒的含量。     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９份乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比斑点杂交高（Ｐ＜０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５７．１％（１２／２１）；血清阳性率为６１．３％（１３／２１）；两者总阳性率为８０．９％（１７／２１），说明用ＰＣＲ同时检测肝组织和血中ＨＢＶＤＮＡ，可明显提高ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的临床意义

目的检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的含量,了解其与免疫学指标的关系。方法采用荧光定量PCR技术和ELISA法,分别检测287例乙型肝炎患者血清中HBVDNA含量和免疫学指标。结果287例乙型肝炎患者血清中检出HBVDNA199例,阳性率为69.34%(199/287);144例HBsAg、HBeAg、抗HBc三项阳性的血清,其血清中HBVDNA也全部阳性;而HBsAg、抗HBe、抗HBc三项阳性和HBsAg、抗HBc二项阳性的标本,HBVDNA的检出率分别38.9%(42/108)和37.1%(13/35)。结论乙型肝炎患者血清中HBVDNA的拷贝数与HBeAg密切相关,但系统转换不能说明HBV停止复制,而只是复制水平的降低而已。     

慢性乙型肝炎患者体液病毒含量观察

目的 :观察慢性乙型肝炎患者血液、唾液、男性精液、女性阴道分泌物中乙型肝炎病毒含量。方法 :使用荧光免疫PCR法对乙肝患者血清、唾液、男性精液、女性阴道分泌物进行HBVDNA定量测定 ,同时用ELISA法测定患者血清HBeAg。结果 :乙肝患者HBVDNA的含量在血液中最高 ,其次是唾液。男性精液、女性阴道分泌物HBVDNA均为阴性。血清HBeAg阳性者和阴性者血清HBVDNA阳性率分别为 96 .4 %和2 3.7% (p <0 .0 1) ,血清HBeAg阳性者唾液可检出HBVDNA ,阴性者未检出。结论 :乙肝患者HBeAg阳性者血清和唾液HBVDNA阳性率高 ,传染力强     

恩施地区乙型肝炎患者HBV DNA YMDD变异的检测

目的了解恩施地区慢性乙型肝炎（乙肝）患者HBV DNA YMDD变异的情况。方法检测该地区100例乙肝患者ALT水平、HBV DNA载量、HBV YMDD变异,对其HBV DNA YMDD变异情况进行分析。结果 100例乙肝患者中检出HBV DNA YMDD变异共15例（阳性率15%）,已服用拉米夫定者60例,检出YMDD变异12例（阳性率20%）,未服用拉米夫定患者40例,检出YMDD变异3例（阳性率7.5%）。15例YMDD变异患者HBV DNA在5.21×10^4-1.34×10^8copies/ml,ALT水平在38-1100U/L。结论恩施地区乙肝患者YMDD变异可在拉米夫定治疗过程中出现,也可天然存在;尚未发现恩施地区乙肝患者性别、年龄、HBV DNA载量、ALT水平对YMDD变异检出率有显著影响     

生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的研究——各型肝病时HBV DNA的定位及形态

报告用生物素标记HBV DNA探针原位杂交技术,现察75例慢性肝病者肝石蜡切片上HBV DNA定位及形态。共检出HBV DNA阳性者25/75例(33.33％)。其中:CPH2/7例、CAH10/21例、肝硬化0/3例、SS4/11例、无症状HBsAg携带者4/21例和HCC5/12例。HBVDNA在肝切片上呈棕黄色粗颗粒状,主要分布于肝细胞浆内,个别核内亦可见少数浅染棕黄色颗粒。阳性肝细胞分布有三种形式:Ⅰ型(弥漫型):25例中有4例(16％),Ⅱ型(局灶型):20例(80％),Ⅲ型(散在型):仅1例(4％)。颗粒在胞浆内亦有a型(密集)和b型(稀疏)之分。各型乙型肝炎HBV DNA在肝切片上定位与分布不完全相同,可能表示不同的病毒感染状态和复制的活跃程度。HCC只在癌旁肝组织内查见HBV DNA。     

Pre-S_2、抗Pre-S_2和HBV DNA在乙型肝炎患者中的相关性分析

目的 :探讨Pre_S2 、抗Pre_S2 二对半和HBVDNA对乙型肝炎患者血清学的诊断意义。方法 :用ELISA法和PCR法分别检测 93例乙型肝炎患者和 2 8例健康人血清中的Pre_S2 ,抗Pre_S2 ,二对半和HBVDNA水平。结果 :93例乙肝患者HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性 32例 ,HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性 39例 ,HBsAg、HBcAb阳性 18例 ,HBcAb阳性 4例。Pre_S2 结果阳性率 6 6 .7% (6 2 / 93) ,Pre_S2 抗体结果阳性率 1.1% (1/ 93) ,HBVDNA结果阳性率40 .9% (38/ 93)。 2 8例健康人二对半 ,五项全阴 16例 ,HBsAb阳性 12例 ,Pre_S2 阳性 1例 ,HBVDNA阳性 1例 ,Pre_S2 抗体阳性 5例占HBsAb阳性 41.7% (5 / 12 ) ,Pre_S2 和HBVDNA相比有明显差异 (P <0 .0 1) ,非HBeAg阳性组中HBVDNA阳性率约低于Pre_S2 。结论 :Pre_S2 ,抗Pre_S2 ,HBVDNA和二对半在乙型肝炎血清学诊断中显示 ,Pre_S2 优于HBVDNA和二对半。Pre_S2 抗体出现早于抗HBs和抗HBe ,抗Pre_S2 阳性检出率较低 ,可能同乙型肝炎疫苗中抗Pre_S2 含量低有关。     

乙型肝炎患者HBV抗体阳性模式与HBV DNA含量的相关分析

目的:探讨乙型肝炎患者HBV抗体阳性模式与HBV DNA含量的相关关系。方法:采用乙肝患者入院时第一份血清,同步进行HBV标志物(HBVM)、HBV DNA含量和肝功能检测,对其中96例HBV抗体阳性的病例进行综合分析。结果:HBsAg/HBeAb/HBcAb组和HBsAg/HBcAb组的HBV DNA含量显著高于HBsAb/HBeAb/HBcAb组和HBcAb组(P<0.01)。按临床分型,HBV DNA阳性率为HLC(85.0%)>CH(76.5%)>AH(12.5％)。结论:乙肝患者血清HBV抗体阳性并不表示体内病毒复制停止而无传染性,多数患者体内HBV DNA呈低水平持续复制,部分患者仍保持较高的复制水平。本文结果提示,慢性持续感染者体内病毒复制活跃与机体免疫功能紊乱或功能低下,不能清除病毒有关。部分HBeAb阳性患者HBV DNA持续复制,可能与HBV基因变异有关。     

Hepatitis B e Antigen Negative Chronic Hepatitis in Indian Patients : A Reality

Background

Hepatitis B e antigen negative chronic hepatitis (e⁻ CHB) with detectable levels of hepatitis B virus DNA (HBV DNA) in serum has been reported in cases from Asia. This study was undertaken to find out prevalence e⁻CHB and to correlate its presence with the clinical status and severity of the illness in cases of chronic liver disease in India.

Methods

All patients of infective hepatitis, who were hepatitis B surface antigen (HBsAg) positive by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), were evaluated with liver function tests and HBeAg and antiHBe antibody studies. Polymerase chain reaction (PCR) test was carried out to detect HBV DNA qualitatively.

Result

Out of 2064 samples tested by ELISA, 429 (20.78 %) were HBsAg positive. HBV DNA (qualitative) was performed on all 429 patients and 74 (17.2%) were HBV DNA positive. Of these only 42 (56.75 %) tested positive for HBeAg. Overall, 8.3 % of HBeAg negative patients (32/384) were viraemic with evidence of chronic liver disease/clinical cirrhosis and alteration of transaminase levels, while three cases (0.84 %) HBeAg positive cases did not show presence of HBV DNA.

Conclusion

This study shows e⁻CHB prevalence rate of 8.3% in patients with HBV infection in India. Since HBeAg negative patients had detectable levels of HBV DNA as seen in HBeAg positive patients, benefit of antiviral therapy should be given to them. Population studies on e⁻ CHB cases are needed to determine its true prevalence, natural course and response to therapy.Key Words: Chronic hepatitis, Hepatitis B virus, Hepatitis B e antigen negative     

HDV阳性乙型病毒性肝炎血清和肝内HBV DNA状态的研究

本文报告15例HDV(+)乙型肝炎患者血清和肝内HBV DNA的状态和血清中HBVM的检测结果,并与13例HDV(-)者进行比较。结果发现:血清HBsAg在HDV(+)组有8例滴度≤1:4,其中5例短暂(-),1例住院2天内始终(-),HDV(-)组未见类似现象。HDV(+)和(-)组血清和肝内HBV DNA检出率分别为7/15例(46.7％)与3/12例(25.0％)和7/15(46.7％)与8/13例(61.5％),两者无差异。但HDV(+)组肝内HBV DNA在肝细胞胞浆内分布3例呈稀疏形式,2例着色浅淡,表明HBV复制受限,HDV对HBV可能有抑制现象。本文也具有部份HDV(+)患者肝内HBV DNA复制活跃,3例肝和血清HBV DNA同时阳性,这种结果的不一致可能与HDV感染处于不同阶段有关。     

聚合酶链反应结合生物素探针杂交检测HBV DNA的应用

本研究将聚合酶链反应和生物素探针点杂交相结合,可直接从5μl 血清中检测到10fgHBV DNA。应用此方法检测20例 HBsAg 和 HBeAg 阳性病例,HBVDNA 均阳性;20例 HBsAg 阳性、HBeAg 阴性病例中,有8例阳性;20例健康献血员中,亦有1例检出 HBV DNA。结果表明这是一种灵敏可靠,适合于基础及临床广泛使用的 HBV DNA 非同位素检测法。