不同氧浓度暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤及CGRP的保护效应

目的 观察不同氧浓度对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞( AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用. 方法 将原代分离培养的孕19天早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,随机分为空气组、40％氧组、60％氧组、80％氧组及相关浓度氧CGRP组与相关浓度氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21％的空气或40％、60％、80％的氧气中暴露24 h;CGRP组在暴露前加入CGRP;CGRP拮抗剂组在CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37).培养24h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SP-C)的mRNA表达. 结果 与空气组比较,40％、60％、80％氧组MDA、ROS及细胞调亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均显著降低(P均＜0.01).与氧气组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞调亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均明显增高(P＜0.01).高氧CGRP拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无显著性. 结论 高于40％氧暴露24h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SP-C mRNA表达下降;随着氧浓度增加,损伤加重;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SP-C mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.     

神经肽P物质对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及其对信号分子Gli1的调控

目的探讨神经肽P物质(SP)对高氧暴露下早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响及其对SHH信号通路下游信号分子Gli1的调控作用。方法分离纯化原代早产鼠AECⅡ,随机分为空气组、高氧组、高氧+SP组。空气组和高氧组分别在21%和95%氧浓度中暴露24h,高氧+SP组于高氧暴露前加入SP 1×10-8 mol/L。电子显微镜下观察AECⅡ的形态变化,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR和Western blot法检测Gli1信号分子基因和蛋白表达水平。结果与空气组比较,高氧暴露24hAECⅡ出现明显的损伤和凋亡改变,凋亡率明显增加,细胞存活率明显降低。神经肽SP干预后可明显降低AECⅡ凋亡,细胞存活率明显升高。高氧刺激可促进SHH信号通路激活Gli1基因和蛋白表达在高氧损伤的AECⅡ表达增加,SP干预后,进一步促进Gli1的表达,其基因和蛋白表达明显增加。结论 SP是一个保护性的调控因子,可以降低高氧诱导细胞损伤和凋亡,促进细胞的存活,可能与激活SHH信号通路有关。     

肝细胞生长因子对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对高氧暴露体外培养的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Type Ⅱ alveolar epithelial cells,AEC Ⅱ)增殖、凋亡及功能的影响,探讨HGF对高氧肺损伤保护作用的机制.方法:原代培养早产鼠AEC Ⅱ,纯化后随机分为4组:空气组(Air)、高氧组(HO)、空气 HGF组(Air HGF)、高氧 HGF组(HO HGF).采用流式细胞术及免疫印迹(Western blot)法观察AEC Ⅱ的增殖和凋亡情况,RT-PCR分析各组肺泡表面活性物质蛋白(surfactant associated protein,SP)SPA,SPB,SPC mRNA表达.结果:(1)各组细胞周期比例及细胞凋亡显示,与Air组比,HO组Sub G1(代表凋亡细胞比例),G0期/G1期细胞比例明显增高(P＜0.01),G2期/M期细胞比例明显降低(P＜0.01);Air HGF组S期细胞比例明显增高(P＜0.01).与HO组比,HO HGF组G0期/G1期细胞比例显著降低(P＜0.01),S期和G2期/M期细胞比例明显增高(P＜0.01).(2)各组增殖细胞核抗原表达显示,HO组显著低于Air组(P＜0.01),Air HGF组明显高于Air组(P＜0.05);HO HGF明显高于HO组(P＜0.05).(3)各组SPA,SPB,SPC mRNA表达显示,HO组强度较Air组弱(P＜0.01),而HO HGF组较HO组明显增加(P＜0.05).结论:高氧导致早产鼠AEC Ⅱ增殖抑制,凋亡增加,SPA,SPB,SPC mRNA表达降低,HGF可部分抑制这种变化,提示HGF对高氧肺损伤起一定的保护作用.     

高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及神经肽P物质的保护作用

目的 探讨高氧对离体培养的早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cells,AECⅡ)的影响及感觉神经肽P物质(substance P,SP)的保护作用.方法 ①分离纯化原代早产鼠AECⅡ18只,随机分为:空气暴露组、高氧暴露组、SP干预空气暴露组、SP干预高氧暴露组(n=36).空气暴露组氧体积分数为0.21(21%),高氧暴露组氧体积分数为0.95(95%),SP干预组于暴露前加入SP 1×10-6 mol/L,在置于氧体积分数为0.21(21%)和0.95(95%)中各组分别暴露12、24、48 h,电镜观察AECⅡ的形态变化.XTT法及流式细胞仪测定其增殖率和凋亡率.②剖宫取出SD大鼠孕21 d(足月为22 d)早产鼠(n=36),随机分为空气暴露组和高氧暴露组(n=18).空气暴露组氧体积分数为0.21(21%),高氧暴露组氧体积分数为0.95(95%),分别于暴露3、7、14 d后,取肺组织测定其SP含量.结果 与空气暴露组比较,高氧组暴露12、24、48 h后AECⅡ增殖率明显降低,凋亡率明显增加,而SP干预后其增殖率明显增加,凋亡率明显下降,AECⅡ形态学也有明显的改善.高氧暴露3、7、14 d与空气暴露组比较肺组织SP含量显著降低,且随高氧暴露的延长,SP含量降低明显.结论 P物质可促进AECⅡ的增殖并抑制AECⅡ的凋亡,在高氧暴露下对AECⅡ可起到保护作用,高氧暴露可导致肺组织SP含量的变化.     

降钙素基因相关肽对高氧暴露胎鼠原代肺泡Ⅱ型细胞的保护作用及其Wnt信号机制

目的探讨降钙素基因相关肽(calcitonin generelated peptide,CGRP)是否可促进高氧损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AECⅡ)的存活及其可能涉及的Wnt信号机制。方法 SD胎鼠原代AECⅡ分为空气组、高氧组、高氧+CGRP组、高氧+CGRP+hCGRP8-37组,采用MTT测定各组细胞增殖,流式细胞仪检测细胞死亡,Western blot检测Wnt7b、β-catenin及p-β-catenin表达。结果与空气组对照比较,高氧暴露24 h后死亡细胞数显著升高(P<0.01),细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.01),CGRP干预可明显下调高氧暴露后死亡细胞数(P<0.01),减弱高氧对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。高氧暴露后Wnt7b及β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-β-catenin表达水平显著增加(P<0.01),CGRP干预后,与单纯高氧暴露组相比Wnt7b、β-catenin蛋白表达水平增加,而p-β-catenin表达水平降低,具统计学差异(P<0.01)。结论 CGRP可减少高氧诱导的细胞死亡、减弱高氧对细胞增殖的抑制效应,改善AECⅡ存活,Wnt7b/β-catenin通路可能参与了CGRP这一调控过程。     

Calcitonin gene-related peptide protects premature rat primary type Ⅱ alveolar epithelial cells against damage induced by hyperoxia

目的 探讨降钙素基因相关肽(calcitonin generelated peptide,CGRP)是否可促进高氧损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞( typeⅡalveolar epithelial cells,AECⅡ)的存活及其可能涉及的Wnt信号机制.方法 SD胎鼠原代AECⅡ分为空气组、高氧组、高氧+CGRP组、高氧+CGRP+ hCGRP8-37组,采用MTT测定各组细胞增殖,流式细胞仪检测细胞死亡,Western blot检测Wnt7b、β-catenin及p-β-catenin表达.结果 与空气组对照比较,高氧暴露24h后死亡细胞数显著升高(P＜0.01),细胞增殖活性明显受到抑制(P＜0.01),CGRP干预可明显下调高氧暴露后死亡细胞数(P＜0.01),减弱高氧对细胞增殖的抑制作用(P＜0.01).高氧暴露后Wnt7b及β-catenin蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),p-β-catenin表达水平显著增加(P＜0.01),CGRP干预后,与单纯高氧暴露组相比Wnt7b、β-catenin蛋白表达水平增加,而p-β-catenin表达水平降低,具统计学差异(P＜0.01).结论 CGRP可减少高氧诱导的细胞死亡、减弱高氧对细胞增殖的抑制效应,改善AECⅡ存活,Wnt7 b/B-catenin通路可能参与了CGRP这一调控过程.     

氢气对高氧致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨氢气对高浓度氧导致的早产大鼠肺泡型Ⅱ上皮细胞（AECⅡ）氧化应激性损伤的影响。方法将分离培养的原
代AECⅡ随机分为空气对照组、高氧对照组、空气+氢气组、高氧+氢气组。空气组和高氧组分别暴露在21%和95%氧气中,空
气+氢气组和高氧+氢气组细胞置于富氢培养基中。各组均于24 h后光镜观察细胞形态改变,采用四甲基偶唑氮蓝（MTT）法检
测各组细胞增殖能力,JC-1荧光探针法检测各组细胞线粒体膜电位（△Ψ）变化,化学比色法测定细胞上清丙二醛（MDA）含量
和超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果与空气对照组比较,空气+氢气组各项指标均无显著差异,高氧对照组细胞的增殖活性明
显受到抑制,细胞的△Ψ明显降低,MDA含量显著增高,SOD活性明显降低。氢气干预后,与高氧对照组相比,细胞的增殖活性
和SOD活性均有所升高,△Ψ有所恢复,MDA含量显著下降（P<0.05）。结论氢气可显著减轻高氧导致的早产鼠AECⅡ的氧化
损伤,提高细胞抗氧化能力,稳定细胞△Ψ,减弱高氧对细胞的增殖抑制效应。
     

砷暴露及雌激素受体拮抗剂对雌、雄胎鼠AECⅡ内ERβ表达的影响

目的 观察砷暴露及雌激素受体拮抗剂（ICI182,780）对雌、雄胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）内雌激素受体β（ERβ）表达的影响。方法 孕19~20 d ICR小鼠剖腹取胎鼠,分离、纯化雌性组和雄性组胎鼠AECⅡ。四甲基亚唑蓝（MTT）法确定亚砷酸钠(NaAsO₂）染毒AECⅡ细胞的剂量。将AECⅡ细胞分为以不同剂量（低、中、高）NaAsO₂染毒的砷暴露组,培养24 h;另取AECⅡ细胞为联合暴露组,分别加入二甲基亚砜（DMSO）（溶剂对照组）、NaAsO₂ 5 μmol/L（单独砷染毒组）、NaAsO₂（5 μmol/L）+ICI182,780（1×10-4 mol/L）（砷+拮抗剂组）,培养24 h;均设空白对照组（不加任何试剂）。24 h后,砷暴露组行流式细胞术测凋亡率,砷暴露组、联合暴露组行实时荧光定量PCR法和Western blot检测胎鼠AECⅡ内ERβ mRNA和蛋白的表达水平。结果 AECⅡ纯度达（87.0±2.5）%。MTT法将0.5（低）、1.25（中）、5（高） μmol/L的浓度设置为染毒剂量。砷暴露组中:雌、雄中、高剂量组细胞凋亡率均高于空白对照组（P<0.05）,而雌、雄各剂量组间比较差异无统计学意义。雌性中、高剂量组ERβ mRNA和蛋白表达水平高于空白对照组（P<0.05）和同剂量组雄性（P<0.05）;雄性各剂量组ERβ mRNA和蛋白表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义。联合暴露组中:雌性单独砷染毒组ERβ mRNA和蛋白表达水平高于砷+拮抗剂组（P<0.01）及同剂量组雄性（P<0.05）,且高于空白对照组和溶剂对照组（P<0.05）,雄性各组间比较差异无统计学意义;雌、雄其余各组间比较差异无统计学意义。结论 砷暴露可使雌性胎鼠AECⅡ内ERβ表达上调且高于雄性,此过程可被雌激素受体拮抗剂阻断。     

降钙素基因相关肽对高氧肺损伤的Notch通路调控

目的 研究降钙素基因相关肽(CGRP)对早产鼠高氧肺损伤的Notch通路调控作用.方法 将SD早产鼠分为空气组、高氧组、高氧联合CGRP组、高氧联合CGRP和CGRP8-37组及高氧联合CGRP和MW167组.CGRP8-37为CGRP拮抗剂,MW167为Notch信号通路阻断剂.分别于第3、7、14天观察和比较5组早...     

降钙素基因相关肽在高氧致幼年鼠肺损伤中的动态变化及意义

目的：探讨降钙素基因相关肽（CGRP）在高氧肺损伤形成过程中的作用．方法：SD大鼠64只按随机数字表法分为8组,每组8只,分别为空气对照组和高氧暴露1d组、3d组、7d组、14d组．通过肺组织形态学及肺组织湿／干质量,了解高氧肺损伤炎症水肿的病理改变、放射免疫法检测肺组织匀浆中CGRP含量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定肺组织内CGRP的两个亚型（α-CGRP,β-CGRP）的mRNA表达．结果：高氧暴露组3～7d肺组织充血水肿,大量炎性细胞侵润;14d肺泡腔扩大,肺纤维细胞增生;高氧暴露7～14d组肺湿／干质量明显高于空气对照组;随高氧暴露时间延长,肺组织匀浆中CGRP浓度逐渐增高,于第3日达峰值,之后逐渐下降,第14日降至正常水平;肺组织中CGRP两个亚型mRNA表达不同,α—CGRPmRNA在高氧刺激24h内表达开始增高,高表达持续至高氧暴露7d,7d后表达明显降低;β-CGRPmRNA表达晚于α-CGRPmRNA,在高氧刺激3d时表达开始增高,高氧暴露14d仍处于高表达状态．结论：CGRP参与高氧肺损伤的形成过程,并在减轻高氧致肺损伤方面可能起着重要的作用．     

高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NADH脱氢酶亚单位4、5表达的影响

目的 探讨高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC Ⅱ）还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）脱氢酶亚单位4、5表达的影响.方法 原代培养Sprague-Dawley（SD）胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至接近汇合状态时随机分为高氧组和正常对照组,高氧组持续暴露于常压高浓度氧中（氧浓度〉90%.CO2浓度5%）,正常对照组仍置于5%CO2培养箱中,两组均继续分别培养6、12、24h;采用免疫细胞化学染色SP法检测NADH脱氢酶亚单位4（DN4）蛋白的表达.采取半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ND4、NADH脱氢酶亚单位5（ND5）mRNA的表达.结果 （1）SP法结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达增强,12h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达减弱,但差异均无统计学意义（均P〉0.05）,24hAEC Ⅱ ND4蛋白的表达显著减弱（P〈0.05）;（2）RT-PCR检测结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA表达增强,差异均无统计学意义（均P〉0.05）.12、24h AECⅡ ND4、ND5 mRNA表达显著减弱（P〈0.05）.结论 持续高氧下调胎鼠AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA和AEC Ⅱ ND4蛋白的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程.     

E2F1蛋白在高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织的动态表达及意义

目的:通过检测E2F1 蛋白在高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织中的动态表达, 初步探讨E2F1 蛋白与慢性肺疾病肺间质纤维化发生发展的关系。方法:剖宫术取出孕21 d Wistar 大鼠作为早产鼠, 生后12 h 随机分为高氧组和对照组, 高氧组持续暴露于90% 氧气中, 空气组置于同一室内常压空气中。分别于暴露3, 7, 14 d 时, 每组取动物10 只, 留取其肺组织标本。应用HE 染色观察不同时间点其肺组织病理改变, 在光镜下进行肺组织纤维化评分, 并采用免疫组织化学法及Western 印迹检测不同时间点肺组织E2F1 蛋白的表达。结果:早产鼠高氧暴露3 d 后未出现纤维化改变, 7 d 后出现少许纤维化改变, 14 d 后纤维化改变明显;E2F1 在高氧暴露3 d 在肺组织中E1F1 蛋白表达虽较同时间点空气组有所升高, 但差异无统计学意义(P>0.05), 高氧暴露7 d 及14 d E2F1 蛋白表达明显高于同时间点空气组(P<0.05, P<0.01)。结论:高氧导致早产鼠肺组织E2F1 表达持续性增高, 其异常表达可能是导致肺成纤维细胞过度增殖, 最终发生肺间质纤维化的重要原因。     

中性粒细胞数在高氧肺损伤早产鼠肺泡内的变化

目的：探讨早产鼠吸入高浓度氧所致肺损伤时肺泡内中性粒细胞（PMN）数量的变化。方法：生后6 h的SD早产鼠120只,随机分为空气组和高氧组,每组60只。空气组常规饲养,高氧组置常压高氧箱内,吸入氧体积分数〉900 mL/L,两组分别于实验进行24 h、3、5、10、14 d取肺组织观察病理变化,肺泡灌洗获取肺泡灌洗液（BALF）,离心,取沉淀做PMN计数。结果：①空气组随着日龄增加肺泡结构逐渐分化;高氧组3 d起可见小血管扩张、充血,肺泡及间隔内有炎性细胞浸润,肺泡腔内有红细胞渗出;随着吸氧时间延长,肺间隔增厚,大量PMN浸润,肺发育受阻,肺泡简化。②从第3天起,高氧组BALF中PMN增多,与相应同日龄空气组比较,差异有统计学意义（均P〈0.01）。结论：PMN参与了高氧肺损伤的发生发展过程,是导致高氧肺损伤的重要炎症细胞。     

不同体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞体外生长状态的影响

目的:探讨不同氧体积分数状态下,胎鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar typeⅡepithelial cell,AECⅡ)体外生长状态的变化.方法:原代培养胎鼠AECⅡ并用电镜鉴定;建立氧体积分数0.95组(95%O2)、氧体积分数0.4组(40%O2)和空气组(21%O2)3种氧化损伤性细胞模型,各自暴露12、...     

高氧对人肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的影响

目的 研究高浓度氧暴露对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2 (thioredoxin-2,Trx-2)表达的影响,探讨Trx-2 对高氧肺损伤线粒体的保护作用.方法 体外传代培养 A549细胞系,待其在37 ℃、5% CO2培养箱中生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组.高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧浓度 > 90%,CO2浓度为 5%;空气组仍置于含5% CO2培养箱中.两组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h 提取A549 细胞总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx-2 mRNA的表达;采用 Western blot 检测A549 细胞Trx-2 蛋白的表达变化.结果 ①与空气组相比,A549 细胞高氧暴露24 h Trx-2 mRNA 表达显著增强(P<0.05);48 h 后Trx-2 mRNA呈下降趋势,其表达较空气组减弱,但两者差异无显著性意义(P>0.05).②与空气组相比,A549 细胞高氧暴露后 12 h Trx-2 蛋白表达水平显著增强(P<0.05),随后逐渐减弱,至48 h 显著减弱(P<0.05).结论 高浓度氧暴露诱导A549 细胞中Trx-2 动态表达的变化,这种变化表明Trx-2 对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用.     

角质细胞生长因子对高氧暴露下新生大鼠SP-A表达的影响

目的研究角质细胞生长因子(KGF)对高氧暴露下新生大鼠肺组织SP-A表达的影响。方法将生后3d的54只SD大鼠随机分为三组。A组:空气组,B组:高氧组,C组:KGF干预组。B、C组大鼠持续暴露于95%氧气中,C组于吸氧同时于背部皮下注射htKGF1mg/kg/d,连用3d后改为0.5mg/kg/d直至实验结束。A组和B组给予等量生理盐水。A组大鼠呼吸空气。于高氧暴露后3d、7d、14d取肺组织,采用免疫组化方法观察肺组织中SP-A表达的变化。结果B组高氧暴露3d时SP-A表达强度较A组增强(P0.05);高氧暴露7d时SP-A表达强度与A组相比较,差异无统计学意义(P0.05),高氧暴露14d时SP-A表达强度较A组和KGF组减弱,差异有统计学意义(P0.01)。SP-A在C组与A组在3d、7d、14d的表达无显著性差异。结论长时间暴露于高氧环境,使肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)受损,SP-A分泌随之减少,导致PS功能丧失,阻碍肺发育,KGF促进AECⅡ增殖和分化,增加肺表面活性物质合成与分泌,对胎肺的发育和分化具有重要作用。     

丹参酮ⅡA对大鼠原代软骨细胞增殖的影响

目的：研究丹参酮ⅡA对体外培养的原代大鼠软骨细胞增殖的影响。方弦：取24h新生sD大鼠肱骨头处软骨,用Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。对照组软骨细胞用含10％FBS的H—DMEM的培养基培养;实验组分4个浓度组,在培养基内分别加入终浓度为6．25μmol／L、12．5μmol／L、25μmol／L、50μmol／L的丹参酮ⅡA。培养24h后,MTT法检测各组细胞的增殖情况,WesternBlot法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期。结果：丹参酮ⅡA可明显抑制软骨细胞的增殖,且抑制程度与丹参酮ⅡA的浓度呈正相关;丹参酮IIA可抑制软骨细胞PCNA的表达;随着丹参酮HA浓度的增加,G0／G1期的软骨细胞比例明显增高,而S期的比例明显降低。结论：丹参酮HA可诱导软骨细胞发生G0／G1期阻滞,抑制软骨细胞增殖。     

高浓度氧对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌岭二核苷酸脱氢酶亚单位1（ND1）表达的影响。方法早产SD新生大鼠生后1d随机分为高氧组和空气组，高氧组持续暴露于≥85％氧气中，空气组置于同一室内常压空气中。分别取两组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d肺组织标本，采用免疫组织化学和Western blot方法检测ND1蛋白的表达，半定量逆转录聚合酶链反应（RT-peR）检测ND1 mRNA的表达。结果①高氧组和空气组各时间点均有ND1蛋白表达；与空气组相比，高氧组在1、4和7dND1蛋白表达增高，随后其表达下降。②与同时间点空气组相比，高氧暴露后1、4和7dND1 mRNA表达显著增高（P〈0．05），其后ND1 mRNA表达逐渐下降，10d和14d时低于空气组，但两者相比差异无显著性意义（P〉0．05）。③ND1蛋白的表达变化趋势与ND1 mRNA的表达变化趋势一致。结论高氧导致早产大鼠肺组织ND1表达改变，提示ND1可能参与了高氧肺损伤的病理生理过程。     

降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞脂质代谢及AMPK的影响

目的观察降钙素基因相关肽（CGRP）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖过程中细胞脂代谢的影响,探索影响脂代谢的腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号蛋白在该作用中的变化。方法贴块法体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMC）,取第3-10代用于实验。分别用CGRP或／和AngⅡ处理细胞。细胞计数法观察CGRP对AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖的影响;油红O染色检测细胞内脂质含量;Western blot检测细胞p-AMPK、p-ERK1／2的表达。结果CGRP预处理能减少AngⅡ诱导的大鼠VSMC数目（P〈0．05）和细胞内脂质聚集的作用,在此过程中伴随细胞内p-AMPK、p-ERK1／2表达下调（P〈0．05）;CGRP8—37（CGRP受体拮抗剂）能拮抗CGRP对AngⅡ促增殖和脂代谢作用（P〈0．05）;PD98059（ERK1／2抑制剂）能部分拮抗CGRP对p—AMPK的抑制作用（P〈0．05）。结论CGRP能显著降低AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖过程中的脂质代谢,其细胞内信号通路可能涉及到p—ERK1／2和p—AMPK信号蛋白。     

普伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察普伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响,以探讨他汀类药可能的非调脂抗动脉粥样硬化作用。方法：组织贴块法培养的大鼠VSMCs随机分为对照（正常VSMCs）组、AngⅡ（10^-6moL／L）模型组、普伐他汀高剂量（10^-5mol／L＋AngⅡ10^-6mol／L）、中剂量（10^-6mol／L＋AxeⅡ10^-6mol／L）、低剂量（10^-7mol／L＋AngⅡ10-6mol／L）组、溶剂（体积分数0．1％的DMSO＋AngⅡ10^-6moL／L）组,分别测定活细胞数量和细胞周期中各期细胞构成比。观察普伐他汀对VSMCs增殖和迁移的影响。结果：AngⅡ（10^-6mol／L）作用24h能使活细胞数量明显增加,并使VSMCs的G0／G1期细胞减少。细胞增殖指数增大。与AngⅡ模型组比,普伐他汀组活细胞数减少,G0／G1期的细胞构成比增加,细胞增殖指数减少。结论：AngⅡ对VSMCs有促增殖作用,能被普伐他汀所拮抗。