p-gp、bcl-2和bax蛋白在人脑胶质瘤中的表达

 本组收集 1997年 3月～ 1998年 3月 6 3例脑胶质瘤石蜡标本 ,利用Ｓ Ｐ免疫组化方法 ,检测其 ｐ ｇｐ、ｂｃｌ 2、ｂａｘ蛋白表达 ,并探讨临床意义。     

bcl-2蛋白表达在脑胶质瘤中的意义

目的:研究人脑胶质瘤中bcl-2蛋白表达强度与胶质瘤的临床病理分级及患者预后间的关系。方法:应用免疫组化技术检测58例脑胶质瘤患者手术切除标本中bcl-2蛋白表达强度、HE染色确定肿瘤病理分级、门诊及电话随访,掌握患者术后生存时间。结果:bcl-2蛋白表达强度与肿瘤病理分级相关(P<0.01)、与患者术后生存时间相关(P<0.01)。bcl-2蛋白表达愈强,胶质瘤临床病理分级愈高、患者术后生存时间也愈短。结论:bcl-2蛋白表达水平与胶质瘤恶性程度成正比、与胶质瘤患者术后生存时间成反比,是评价胶质瘤恶性程度和预后的客观指标之一。     

PTEN在正常脑组织及脑胶质瘤中的表达与细胞凋亡的关系

0引言胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤,在国内胶质瘤的发病率居颅内肿瘤之首,虽然脑肿瘤的手术技巧以及放疗和化疗等综合治疗己经取得了很大的进展,但恶性胶质瘤患者的预后仍然很差。随着分子生物学和分子遗传学的发展,人类对胶质瘤的产     

PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响

目的 通过增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与PTEN融合蛋白真核表达载体的构建和表达,观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响。方法 （1）以RT—PCR方法扩增人的PTEN基因,经T—A亚克隆筛选后连入真核表达载体pEGFP—N1,构建融合蛋白表达载体。采用阳离子聚合物转染试剂,将重组质粒DNA瞬时转染至SHG-44细胞,检测融合蛋白的表达。（2）G418筛选出稳定转染的细胞（SHG-44-Z）,并扩增培养,通过细胞形态学、生长曲线观察PTEN基因对细胞形态和增殖的影响,免疫组织化学法检测对胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。结果 （1）重组质粒阳性克隆的测序结果与GenBank报告序列一致。瞬时转染的SHG-44细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光,流式细胞仪可检测到荧光表达量为17．8％,免疫细胞化学法检测到外源PTEN蛋白表达。证实pEGFP—PTEN融合蛋白表达载体构建成功,并在胶质瘤细胞得以正确表达。（2）转染组SHG-44-Z细胞株的生长增殖受到明显抑制,第7天细胞计数为未转染组细胞数的27．8％,且GFAP表达上调。结论携带绿色荧光蛋白的PTEN基因真核表达载体的构建,为进一步研究PTEN的作用机理及抑癌效应奠定了基础。     

bcl-2基因与肿瘤相关性及在细胞凋亡中的作用

ｂｃｌ 2基因是Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ等 (1984 )从Ｂ细胞滤泡性淋巴瘤染色体断裂点发现的凋亡抑制基因 ,它可以使细胞寿命延长 ,生长失去平衡 ,造成细胞数目的积累。 1988年实验研究发现ｂｃｌ 2基因可以使细胞存活时间延长 ,而对细胞的增殖没有明显影响。后来又有人发现ｂｃｌ 2基因可以抑制多种组织的细胞凋亡 ,从而使人们认识到ｂｃｌ 2基因是一种新的抗癌基因。 1990年进一步确证ｂｃｌ 2基因有抗细胞凋亡功能后 ,ｂｃｌ 2基因作为重要的凋亡抑制基因在多种肿瘤中得到研究。目前认为ｂｃｌ 2基因是通过抑制许多细胞凋亡的因素 ,而抑制细胞…     

脑胶质瘤中bcl-2 基因表达水平及临床意义

 目的 探讨bcl-2基因在胶质瘤细胞中的表达水平与肿瘤恶性程度和临床预后的关系. 方法 用免疫组化染色和原位杂交检测61例人胶质瘤组织和20例正常人脑组织中bcl-2蛋白和bcl-2 mRNA的表达. 结果 免疫组化染色55例（87.0%）表达bcl-2蛋白,原位杂交显示58例（92.8%）表达bcl-2 mRNA,两者的表达水平呈正相关,bcl-2在转录水平的表达明显高于蛋白质水平,且bcl-2表达水平与胶质瘤病理分级呈显著正相关系,而20例正常人脑组织中仅4例表达bcl-2蛋白,6例表达bcl-2 mRNA（均P〈0.01）. 结论 恶性胶质瘤细胞中普遍存在bcl-2基因的高表达,表达水平与胶质瘤的恶性程度、临床预后存在密切关系,bcl-2基因可能成为恶性胶质瘤基因治疗的靶点.     

宫颈癌组织中凋亡相关基因bcl-2蛋白表达及临床意义

目的　研究bcl-2蛋白在宫颈癌中的表达。方法　采用免疫组化SP法对 6例慢性宫颈炎组织、8例宫颈上皮内瘤变 (CIN)、2 4例宫颈癌组织、6例湿疣组织进行了bcl-2基因蛋白表达测定。结果　宫颈鳞癌中bcl-2阳性表达 (5 4.17% ) ,显著高于炎症组织 (16 .6 7% )及CIN(2 5 % ) (P <0 .0 1)。bcl-2蛋白表达与宫颈癌组织分化程度呈正相关。结论　bcl -2基因变化在宫颈癌的发生和发展中起重要作用 ,其过度表达多见于宫颈癌早期 ,且提示肿瘤较好的预后。     

榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及对端粒酶活性和hTERT表达影响的研究

目的:探讨榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及其影响端粒酶活性及其催化亚单位人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的机制。方法:将榄香烯处理人脑胶质瘤U251细胞株后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,并求出半数抑制浓度(IC50),倒置显微镜和电镜观察经榄香烯处理的U251细胞形态,流式细胞仪和原位末端标记技术检测细胞周期及细胞凋亡率的变化,免疫荧光技术观察凋亡小体,流式细胞仪测定bcl-2表达水平,端粒重复扩增(TRAP)法测定端粒酶活性的变化,RT-PCR检测bcl-2和hTERT的表达。结果:榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性,IC50为0.062mg/ml,倒置显微镜下可见榄香烯组细胞皱缩、变小,电镜下可见具有典型新月形核的凋亡细胞和凋亡小体,流式细胞仪检测榄香烯阻滞U251细胞周期中S期向G2/M期的转变过程,减少有丝分裂,并引起细胞凋亡,免疫荧光技术观察凋亡小体,TRAP法发现榄香烯可以降低端粒酶活性的变化,呈时间和剂量依赖型。RT-PCR分别证实榄香烯降低bcl-2和hTERT基因表达水平。结论:榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,并抑制U251细胞端粒酶的活性,榄香烯作用于胶质瘤的分子生物学机制可能通过抑制bcl-2表达,下调hTERT基因,降低端粒酶的活性,从而诱导细胞调亡。     

白血病细胞凋亡与bcl-2和bax-alpha表达的研究

目的　研究白血病细胞细胞凋亡率与 bcl- 2和bax- alpha阳性率及表达水平关系。方法　选择难治或复发的化疗耐药白血病患者和初治化疗敏感白血病患者各 10例 ,分离白血病细胞 ,柔红霉素 (5 0 0 ng/ ml)诱导凋亡 ,应用流式细胞术比较分析耐药组和敏感组白血病细胞的凋亡率与 bcl- 2和 bax- alpha阳性率和表达水平的关系。结果　化疗耐药组和化疗敏感组对柔红霉素诱导的凋亡率有显著差异 ,敏感组 (2 3.2 6 %± 12 .94% )显著高于耐药组 (2 .2 6 %± 1.44 % ) ,(P=0 .0 0 1) ;耐药组白血病细胞凋亡率与 bcl- 2阳性率呈负相关 (r=- 0 .6 47,P=0 .0 43) ,与 bax- alpha阳性率和相对荧光强度呈正相关 (r=0 .883,P=0 .0 0 1;r=0 .814,P=0 .0 0 4)及 bcl- 2 :bax- alpha比率呈负相关 (r=-0 .893,P=0 .0 0 1) ;敏感组凋亡率 bax- alpha的阳性率和荧光强度呈正相关 (r=0 .6 5 3,P=0 .0 41,r=0 .76 2 ,P=0 .0 10 ) ,与 bcl- 2 :bax- alpha比率呈负相关 (r=- 0 .741,P=0 .0 14)。结论　白血病细胞耐药性与细胞的凋亡抗性有关 ,这种凋亡抗性与 bcl- 2和 bax- alpha的表达比例增高有关 ,特别是 bax- alpha的表达水平     

鼻咽癌细胞凋亡及凋亡相关基因的表达

目的　探讨细胞凋亡在鼻咽癌 (NPC)中的作用。方法　采用TdT酶介导的生物素化dutp缺口末端标记技术 (Tunel)和免疫组化S P法 ,分别检测 2 0例正常鼻咽粘膜组织及 73例NPC组织的细胞凋亡率和p16、bcl 2基因的表达。结果　正常鼻咽粘膜细胞凋亡率显著高于NPC(P <0 .0 1) ,p16、bcl 2在NPC组织中的表达分别为 2 8.8% (2 1/73)、81.2 % (5 9/73) ,在正常粘膜的表达分别为 90 0 % (18/2 0 )、15 0 % (3/2 0 )。NPC中bcl 2表达与癌细胞凋亡率呈负相关 ,而p16则与凋亡率呈正相关 (P <0 .0 1)。NPC的 3年生存率资料表明 ,细胞凋亡率 >2 0、bcl 2表达阴性、p16表达阳性的患者预后较佳。结论　在NPC中 ,癌细胞凋亡明显受到抑制 ,其发生可能与bcl 2及p16基因调控障碍有关。NPC细胞凋亡与患者的预后相关。     

PTEN在人脑胶质瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

背景与目的:PTEN基因的缺失及突变与多种肿瘤有关,而脑胶质瘤是与PTEN基因变异关系最为密切的恶性肿瘤之一.本研究旨在观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响,为PTEN用于胶质瘤基因治疗提供科学的实验依据.方法:(1)应用RT-PCR方法扩增人脑胶质瘤细胞U251、SHG-44中PTEN基因,序列测定分析.(2)采用阳离子聚合物转染试剂,将携带野生型PTEN基因的重组真核表达载体质粒转染至胶质瘤细胞,G418筛选出稳定转染的细胞并扩增培养.通过细胞形态学、细胞生长曲线观察PTEN基因表达对细胞形态和增殖的影响,应用Western blot、免疫细胞化学法检测相关蛋白的表达.结果:(1)胶质瘤细胞U251和SHG-44的PTEN mRNA分别存在着突变型、缺失型两种表达方式.(2)稳定转染的U251和SHG-44细胞株的生长曲线显示细胞增殖明显受抑制,第7天细胞计数分别为未转染对照组细胞数的39.1%、27.8%;Westem blot显示稳定转染细胞株有外源性PTEN蛋白的表达;细胞免疫化学法显示胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达量增加,从而表现出对细胞形态影响的差异,稳定转染的U251细胞出现向星形细胞分化的特征,SHG-44细胞形态转染前后无明显改变.结论:恢复野生型PTEN基因表达对胶质瘤细胞存在差异性的诱导分化作用.     

miR-122通过靶向RUNX2诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA122（miR-122）对神经胶质瘤细胞凋亡的影响及可能分子机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常星形胶质细胞系HA1800和胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44、MO59K中miR-122的表达情况。双荧光素酶报告实验评价miR-122对RUNX2的靶向调控作用。向U251细胞转染miR-122 mimics（miR-122组）和阴性对照NC（NC组），流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。向U251细胞同时转染miR-122 mimics和siRUNX2（miR-122+siRUNX2组），流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U251、U87、SHG44、MO59K细胞系中miR-122表达水平分别为0.34±0.052、0.65±0.061、0.59±0.071和0.69±0.098，显著低于正常星形胶质细胞系HA1800的1.17±0.173，差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-122可抑制野生型RUNX2 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型RUNX2 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。miR-122组U251细胞凋亡率为（23.77±0.83）％，高于NC组的（6.17±0.12）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）；低于miR-122+siRUNX2组的（70.85±0.35）％（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示，miR-122组RUNX2蛋白表达量为0.57±0.048，低于NC组的1.21±0.19（P＜0.05）。与NC组比较，miR-122组Bax（3.47±0.077）、 cleaved caspase-3（4.38±0.121）表达均明显上调，而Bcl-2（0.39±0.104）明显下调（P＜0.05）。结论 miR-122可以通过靶向RUNX2促进线粒体凋亡通路的激活，促进神经胶质瘤细胞凋亡。     

人脑胶质瘤细胞SHG-44照射后COX-2表达与放射敏感性的关系

目的:探讨人脑胶质瘤细胞SHG-44照射存活后代细胞对放射敏感性的变化,以及环氧合酶-2(COX-2)的表达情况,为临床使用COX-2抑制剂提供理论依据。方法:采用克隆形成率研究SHG-44及SHG-44照射存活后代细胞的放射敏感性;并分别用RT-PCR方法及免疫组化的方法检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达情况。结果:与SHG-44细胞相比,SHG-44照射后代细胞对放射的敏感性下降,COX-2 mRNA及蛋白表达均升高。COX-2表达水平与SHG-44照射后代细胞放射敏感性呈负相关。结论:辐射诱导了SHG-44细胞COX-2表达的升高,使SHG-44照射后代细胞对放射敏感性下降,COX-2表达的升高可能是导致其辐射耐受的原因之一。     

Curcumin induces apoptosis involving bax/bcl-2 in human hepatoma SMMC-7721 cells

Curcumin is a major active component of Curcuma aromatica salisb, which has been shown to inhibit proliferation of a wide variety of tumor cells. In this study, the molecular mechanisms of curcumin inducing apoptosis in human hepatoma SMMC-7721 cells were examined. We find that curcumin inhibits the growth of SMMC-7721 cells significantly in a concentration-depenent manner, with typical apoptotic morphological changes of cellular nuclei. Annexin-V/PI double staining detected by flow cytometry and expression of the relative apoptotic proteins (Bax, Bcl-2 and caspase-3) revealed a strong apoptosis-inducing competent of curcumin in SMMC-7721 cells. Curcumin increased the expression of bax protein while decreasing that of bc1-2 protein significantly. The results suggest that curcumin induction of apoptosis involves modulation of bax/bcl-2 in SMMC-7721 cells and provide a molecular basis for the development of naturally compounds as novel anticancer agents for human hepatomas.     

二氟甲基鸟氨酸及反义bcl-2协同诱导HL60细胞凋亡

目的　观察二氟甲基鸟氨酸 (DFMO)及反义bcl 2调控bcl 2基因表达对HL6 0细胞凋亡的诱导作用。方法　构建反义bcl 2逆转录病毒重组体 ,建立产病毒细胞系 ,转染HL6 0细胞 ,用形态观察、生长曲线、FCM分析、集落形成、DNA电泳图谱、分子杂交及免疫组化等方法研究细胞生长特性及细胞凋亡诱导。结果　成功地构建了反义bcl 2逆转录病毒重组体及产病毒细胞系。以此转染HL6 0细胞 ,引起了bcl 2mRNA及蛋白表达下降 ,但生长速率、细胞周期分布及鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因表达水平与亲本细胞比较差别不大 ;无明显的细胞凋亡 ,仅集落形成能力有所减弱。用小剂量DFMO处理反义bcl 2转染的细胞 ,不仅生长受到明显抑制 ,而且可诱导细胞凋亡。结论　DFMO与反义bcl 2对HL6 0细胞增殖抑制及凋亡诱导有协同作用。抑制bcl 2表达能提高肿瘤细胞对DFMO作用的敏感性。     

建立人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱

目的：建立人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱。方法：用微阵列技术对同一胶质瘤患者初发(WHOⅡ级)、复发(WHOⅢ级)和再发(WHOⅣ级)的3次手术标本中基因差异表达情况进行检测,并以第3次手术时切取的正常脑组织作为对照。结果：全组共获取16363个数据。3份肿瘤标本中,表达差异≥3倍的基因共197条。将含正常脑组织在内的4份标本进行两两比较,表达差异≥3倍的基因共489条(上调193,下调296)。再将已知功能的109条基因按出现频率排列,由高到低依次为发育、代谢、分化、信号传导、DNA结合转录、细胞受体、免疫、DNA合成修复重组、离子通道运输、蛋白翻译合成、细胞骨架运动、应激、原癌和抑癌、细胞凋亡、细胞周期相关基因。结论：从处于恶性进展不同阶段的人脑胶质瘤手术标本中发现了197条表达差异≥3倍的基因,同时经生物信息学分析,发现17条候选新基因,它们在胶质瘤发生与发展的分子机制中起重要作用。     

榄香烯诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：榄香烯是从姜科植物莪术中提取的抗肿瘤药物,我们应用榄香烯治疗神经胶质瘤取得了较为显著的疗效,本研究探讨榄香烯的抗胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡作用。方法：^3H-TdR掺入法检测榄香烯对鼠源性C6胶质瘤细胞及人源性SHG-44胶质瘤细胞的体外增殖抑制效应,Hoechst33258／PI荧光染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：榄香烯能有效抑制C6／SHG-44胶质瘤细胞的恶性增殖,^3H-TdR掺入法检测榄香烯处理不同时间(1～4天)的IC50,C6细胞为7．33--11．02mg／L,SHC-44细胞为13．29～27．16mg／L。在相同药物浓度下,C6细胞较SHG-44细胞敏感。经榄香烯作用后,C6／SHG-44胶质瘤细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成,DNA直方图观察到特征性亚倍体峰(Ap峰),DNA凝胶电泳出现有明显的梯状条带。结论：榄香烯有显著的抗胶质瘤细胞增殖作用,并能诱导胶质瘤细胞凋亡。     

Simultaneous phosphorylation of p53 at serine 15 and 20 induces apoptosis in human glioma cells by increasing expression of pro-apoptotic genes

Understanding the mechanism underlying p53’s ability to induce cell cycle arrest versus apoptosis is critical to treating human gliomas, 70% of which contain wild-type p53. Although N-terminal phosphorylation results in activation of p53, the role of N-terminal phosphorylation, particularly at serines 15 and 20, in p53’s ability to induce cell cycle arrest versus apoptosis remains controversial. Here we test the hypothesis that phosphorylation of serine 15 and/or 20 is causally related to p53-mediated apoptosis in human gliomas. Introduction of p53 plasmids containing alanine mutations at serine 15 or/and serine 20 (which block phosphorylation) or aspartate mutations (which mimic phosphorylation) at the same sites, implicated simultaneous phosphorylation of both sites in the induction of apoptosis. When a double phosphorylation-mimicking adenoviral p53 vector (Ad-p53-15D20D) was compared with an unphosphorylated p53 vector (Ad-p53), treatment with Ad-p53 resulted in G1-arrest, whereas Ad-p53-15D20D induced apoptosis. These effects occurred independent of phosphorylation of other N-terminal serine (i.e., serines 6, 9, 33, 37, 46) indicating that phosphorylation of S15 and S20 is sufficient for inducing apoptosis. Mechanistically, Ad-p53 was capable only of increasing the expression of p21/CIP, whereas Ad-p53-15D20D increased the binding to and expression of the pro-apoptotic genes Fas, Puma and PIG3. However, Ad-p53-15D20D did not alter the expression of Noxa, Bid, IGFBP3, PERP and Killer/DR5, suggesting that phosphorylation of S15 and S20 resulted in the expression of specific pro-apoptotic gene. In conclusion, simultaneous phosphorylation of S15 and S20 is causally associated with apoptosis, resulting in increased expression of specific p53-responsive pro-apoptotic genes.