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目的:观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的作用。方法:用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与肝癌细胞株共同孵育一定时间后,观察细胞形态变化,观察细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性。结果:端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚2倍体凋亡峰;端粒酶活性抑制。结论:端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,抑制端粒合成,从而抑制肝癌细胞的生长。 相似文献
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降低端粒酶表达对人喉癌细胞系Hep-2生长的影晌 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:用表达端粒酶反义RNA的方法研究端粒酶在喉癌细胞生长中的作用。方法:将端粒酶反义RNA真核表达载体,pBBS212-hTR转染入人喉癌Hep-2细胞系中,采用端粒重复扩增法测定端粒酶活性,用MTT法及流式细胞仪检测细胞周期,并用电镜观察细胞生长状况。结果:端粒酶反义RNA表达后能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性,抑制细胞增殖并促进其凋亡.结论:以端粒酶反义RNA降低端粒酶的方法对人喉癌细胞系Hep-2的生长有明显抑制作用。 相似文献
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目的:观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine介导,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS212Rz及空载质粒pBBS212转染肝癌SMMC-7721细胞,采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果:重组质粒pBBS212Rz转染的肝癌SMMC-7721细胞的端粒酶活性明显下降,细胞生长速度明显变慢,凋亡加速。结论:端粒酶核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用,可望成为肝癌基因治疗的方法。 相似文献
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目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附(ELISA)法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。 相似文献
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目的:阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力。结果:三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系。在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。错义序列对照组则无明显变化。结论:端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的。 相似文献
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目的研究抑制端粒酶活性对HeLa细胞在体内外生长和对顺铂敏感性的影响。方法将野生型端粒酶逆转录酶、端粒酶逆转录酶显性负突变体和对照质粒电转染于HeLa细胞中,绘制细胞生长曲线,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞对顺铂的敏感性,磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V)法检测细胞凋亡情况;接种裸鼠观察其致瘤性及对顺铂敏感性的影响。结果端粒酶逆转录酶显性负突变体转染于HeLa细胞后,端粒酶活性显著下降,细胞生长速度延缓,显著增强顺铂诱导的凋亡,端粒酶活性抑制后对裸鼠致瘤性丧失,而端粒酶活性增强后顺铂对肿瘤的抑制作用下降。结论端粒酶活性下降能抑制HeLa细胞生长,增强顺铂的杀伤作用,反之端粒酶活性升高将导致对顺铂耐药。 相似文献
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反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用,研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中,转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒,感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性,光镜观察细胞形态,DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制,并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用,使肺癌细胞A549生长抑制,促进细胞凋亡。 相似文献
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目的阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性. 方法运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力.结果三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系.在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制.错义序列对照组则无明显变化.结论端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性.端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的. 相似文献
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反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制 总被引:9,自引:3,他引:6
目的:观察反义端粒酶RNA对SMMC-7721肝癌细胞系的作用,探讨抗端粒端治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法:采用脂质体介导的方式将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTP转入SMMC7721细胞中,经潮霉素筛选,克隆细胞株扩增鉴定后,采用TRAP-PCR-ELISA,FCM及电镜检测反义端粒酶RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察。结果:TRAP-PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性的结果为:实验组吸光度值为0.980,对照组吸光度值为2.861;FCM检测细胞凋亡结果为:实验组13.8%,对照组未见有凋亡峰形成,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态。裸鼠移植瘤生长实验发现,转染细胞生长明显受到抑制作用,说明反义端粒酶RNA显抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性,并且对其有显的促凋亡作用。结论:反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性,同时显促进癌细胞凋亡。 相似文献
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【目的】探讨人骨肉瘤细胞分化与端粒酶活性调节之间的关系。【方法】用维甲酸和地塞米松诱导人骨肉瘤细胞分化 ,用端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测端粒酶活性及用Northern印迹法检测人端粒酶RNA(RNA ,hTR)表达水平的改变。【结果】经维甲酸和地塞米松处理后 ,骨肉瘤细胞生长受到抑制 ,碱性磷酸酶活性升高 ,端粒酶活性明显下降 ,且与剂量 作用时间成负相关 ,但hTR表达水平并无改变。【结论】维甲酸和地塞米松有抑制骨肉瘤细胞增殖和诱导分化的作用 ,端粒酶活性下调可作为细胞分化指标 ,但与hTR表达水平不平行。 相似文献
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目的研究诱导分化治疗中端粒酶活性的变化规律。方法对白血病细胞株、正常骨髓和急性白血病的骨髓单个核细胞的端粒酶活性进行了检测,观察了全反式维甲酸(ATRA)在体外和体内分化诱导过程中端粒酶活性的改变。结果发现端粒酶表达下调是诱导分化的早期效应之一。诱导分化治疗可使急性白血病M3早幼粒细胞端粒酶活性水平降至正常。结论在体内和体外实验中,ATRA诱导分化过程中伴随着端粒酶活性下调。 相似文献
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目的 探讨HL-60细胞端粒酶活性的调控因素。方法 用脂质体介导法将LXSN-wt-p53逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系HL-60中,用c-myc,bcl-2基因反义脱氧寡核苷酸作用HL-60细胞,用全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞分化后,采用TRAP-ELISA-PAGE法测定端粒酶活性,观察野生型p53基因、c-myc,bcl-2,全反式维甲酸(ATRA)对HL-60细胞端粒酶活性的影响。结果 野生型p53基因不影响HL-60细胞的端粒酶活性;bcl-2及c-myc反义寡核苷酸可下调HL-60细胞的端粒酶活性;ATRA在诱导HL-60细胞分化的同时,可使HL-60细胞的端粒酶活性降低。结论 HL-60细胞端粒酶活性受到c-myc,bcl-2,全反式维甲酸(ATRA)的调节。 相似文献
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目的探讨外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)对人视网膜血管内皮细胞(hRCEC)端粒酶活性、相关基因表达和体外生存时间的影响。方法阳离子脂质体介导hRCEC转染;RT-PCR法检测人类端粒酶RNA组份(hTR)、端粒酶相关蛋白1(TEP1)及hTERT基因的表达;TRAP法检测端粒酶活性;细胞计数法绘制生长曲线。结果hTR、TEP1基因在hTERT转染hRCEC前后都表达,hTERT基因在转染前不表达,转染后24h及稳定转染克隆形成时表达,细胞停止分裂时又失去表达;转染前无端粒酶活性,转染后24h及稳定转染克隆形成时可检测到端粒酶活性,细胞停止分裂时端粒酶活性消失;稳定转染了hTERT基因后hRCEC的生存时间没有延长。结论hTERT转染可显著提高hRCEC中hTERT基因表达水平,hTERT基因表达与端粒酶活性一致,但只用hTERT转染的方法不能使hRCEC细胞生存时间延长。 相似文献
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目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(AODN)抗恶性胶质瘤细胞系的作用。方法采用脂质体包裹AODN转染恶性胶质瘤细胞系U251-MG细胞。用四唑盐MTT法测定细胞生长曲线,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性变化;用流式细胞术检测凋亡细胞。结果2~8μmol/L AODN转染恶性胶质瘤细胞系,培养1~4 d,恶性胶质瘤细胞系端粒酶活性下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。AODN转染的恶性胶质瘤细胞培养后细胞增生速度减慢,发生了细胞凋亡。而无义寡核苷酸则无此效应。结论AODN能特异性抑制恶性胶质瘤细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。 相似文献
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目的:研究人类端粒酶逆转录酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法:采用PCR-ELISA法检测Hela细胞在反义寡核甘酸处理前后端粒酶活性的变化。结果:经反义寡核苷酸处理后,HeLa细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低。结论:hTR的反义寡核苷酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。 相似文献
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乳香提取物对HL60细胞端粒酶活性影响的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
为研究乳香提取物对HL60细胞端粒酶活性影响,应用端粒酶重复序列扩增技术及聚丙烯胺凝胶电泳对HL60细胞端粒酶活性的表达进行检测,并应用乳香提取物及全反式维甲酸下调HL60细胞端粒酶活性。结果:乳香提取物能降低HL60细胞端粒酶活性。其降低HL60细胞端粒酶活性作用与全反式维甲酸相似。 相似文献
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蛋白激酶C对鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
为进一步探讨蛋白激酶C(PKC)调控入低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的机制,观察了PKC对CNE-2Z酶粒酶活性的影响。结果显示:CNE-2Z细胞有较高的端粒酶活性;PKC的抑制剂Staurosporine显著降低细胞端粒酶活性(P<0.001)。提示抑制PKC可以抑制CNE-2Z细胞的端粒酶活性,PKC可通过调控端粒酶活性从而影响CNE-2Z细胞的生长。 相似文献
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端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌端粒酶活性及细胞增殖的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 :探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,不同剂量的序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)作为实验组 ( A、B、C) ,以硫代磷酸修饰 1 3个核苷酸的随机引物作为对照组 ( D) ,仅加入培养基作为空白对照组 ( E) ,与人膀胱癌细胞株 BIU87细胞共同孵育 ,TRAP- ELISA方法检测端粒酶活性变化 ,计数1~ 30 d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,MTT法测定 ASON对细胞的抑制率。结果 :2 5例膀胱癌组织中 ,2 4例 ( 96% )表达端粒酶活性 ,4例癌旁组织无端粒酶活性表达。与随机引物及空白对照组比较 ,实验组的 ASON能明显降低端粒酶活性 ,减少细胞增殖数目 ,增加抑制率及延长倍增时间 ,并显示剂量的依赖性 ( P<0 .0 1 )。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌 BIU87细胞端粒酶活性下降 ,增殖抑制 ,引起细胞退化 ,对膀胱癌的治疗有潜在的意义。 相似文献