红花注射液对脊髓损伤早期自由基影响的实验研究

目的:通过观察对大鼠脊髓损伤模型早期使用红花注射液后自由基的变化探讨红花注射液防止脊髓继发性损伤的作用机制。方法:选择成年雄性SD大鼠48只,分为正常对照组、损伤组、红花治疗组,每组大鼠16只。采用Allen’s撞击法建立脊髓损伤模型,其中红花治疗组分别于打击后30 min、2、4 h腹腔注射红花注射液。术后6 h测定脊髓组织和血液中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,并在光镜下观察组织形态的变化。结果:损伤组血液标本和脊髓标本中MDA升高、SOD降低,红花组血液和脊髓标本所测定的各个指标与损伤组比较有显著性差别(P<0.01),红花组与对照组各指标无明显差别(P>0.05)。组织学形态上,红花治疗组脊髓损伤程度小,神经元细胞破坏少。结论:脊髓损伤后血液和脊髓组织中自由基含量升高,红花注射液能有效清除自由基,在一定程度上能防止脊髓继发性损伤。注射红花注射液后,MDA降低,SOD升高。     

脊髓损伤后脊髓自由基和超氧化物岐化酶的动态变化

目的：研究脊髓损伤后脊髓内自由基丙二醛(MDA)含量及超氧化物岐化酶(SOD)的活性变化，以探讨自由基在脊髓继发性损伤中的作用机制。方法：42只健康家兔采用改良式Allen氏法造成脊髓损伤模型，测定其损伤后12h、48h、3d、7d、14d及21d脊髓组织内自由基含量和超氧化物岐化酶的活性。结果：脊髓损伤后，MDA在24h内显著升高，7d达最高峰，升幅达90％，并随之逐渐下降；伤后SOD活性显著下降，3d时达最低，降幅达54％，随后并逐渐回升。结论：自由基和超氧化物歧化酶参与了脊髓继发性损伤的病理过程。     

丹参注射液椎管内局部灌注对急性脊髓损伤的保护作用

目的 探讨丹参对急性脊髓损伤的防治作用。方法 以改良Allen's法造成兔不完全性脊髓损伤的模型,硬膜下插管。随机分成丹参治疗组和对照组。术后按每天0.3ml/kg体重的总量分4次从硬膜下导管推入丹参注射液,对照组推入生理盐水。损伤后8、72h对脊髓损伤区进行过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、组织形态学观察、神经元凋亡、bcl-2等进行评价。结果 丹参组SOD含量高于对照组(P<0.01),MDA含量低于对照组(P<0.01)。细胞凋亡数目TUNEL法丹参组低于对照组(P<0.01),流式细胞术检测凋亡丹参组低于对照组(P<0.05)。bcl-2的表达丹参组高于对照组(P<0.05)。神经元及神经纤维变性、坏死轻于对照组。结论 丹参能改善损伤脊髓微循环,抑制和减轻脊髓损伤后的两种死亡方式坏死和凋亡。     

甲泼尼龙对急性脊髓爆震伤后脊髓继发性损伤的影响

目的探讨甲泼尼龙（MP）对脊髓爆震性损伤早期救治的效果及其机制。方法家兔36只，随机分为三组：对照组、损伤组和MP组，每组12只。除对照组外，其他两组建立局限性脊髓爆震性损伤模型，损伤组仅给予生理盐水注射，MP组致伤后立即给予MP治疗。于伤后6、12、24h取血液标本和损伤段脊髓标本，测定血液和脊髓组织中SOD、MDA和Ca^＋的含量变化情况，同时观察损伤段脊髓组织的病理变化。结果损伤组血液标本和脊髓组织中MDA、Ca^＋升高，SOD浓度下降，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。与损伤组比较，MP组能明显降低脊髓爆震伤后血液标本和损伤脊髓中MDA、Ca^＋含量，防止SOD损失，差异有统计学意义（P〈0．01）。组织学观察可见损伤组伤后6h脊髓组织出现轻微坏死，24h出现不可逆性损伤，MP组脊髓组织坏死性改变较轻。结论急性脊髓爆震伤后立即应用MP冲击治疗，能够明显降低血清和脊髓组织中MDA、Ca^＋含量，提高SOD浓度，在一定程度上阻止继发性损伤的进一步发展。     

眼镜蛇毒因子对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角神经元的保护效应

目的 观察眼镜蛇毒因子(CVF)对慢性坐骨神经损伤(CCI)后大鼠脊髓背角神经元的保护效应.方法 36只SD大鼠随机均分成三组,CCI+生理盐水(CS组)、CCI+CVF 50μg/kg(CC组)和尾静脉注射生理盐水(SS组).于术前和术后1、3、5、7 d测定大鼠的热痛阈值和机械痛阈值,并于术后7 d处死大鼠取脊髓组织,在电镜下观察脊髓背角神经元的内部结构变化,并测定脊髓匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)吸光度.结果 与SS组相比,CS组大鼠热痛阈值和机械痛阈值降低,脊髓匀浆中SOD活力明显降低,而MDA显著升高(P＜0.05);与CS组相比,CC组大鼠热痛阈值和机械痛阈值升高,脊髓匀浆中SOD活力明显升高,而MDA却迅速下降(P＜0.01).给予CVF后,CCI大鼠脊髓背角神经元线粒体的肿胀程度减轻.结论 CVF能减轻CCI后脊髓背角神经元的损伤程度,可能与其减少自由基和脂质过氧化的损伤有关.     

丹参对高能冲击波致肾损伤保护的实验研究

目的 :探讨丹参对高能冲击波致肾损伤的保护作用。方法 :将 30只家兔随机分为丹参组和生理盐水对照组 ,体外冲击波碎石 (ESWL)前 3d分别静脉注射丹参和生理盐水 ,测定ESWL前后不同时间血浆中内皮素 (ET 1)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)水平 ,并观察肾组织病理变化。结果 :对照组ESWL在血浆中ET 1、MDA值较冲击前显著升高 (P <0 .0 5 ) ,SOD显著性降低 (P <0 .0 5 ) ;丹参组ESWL后血浆中ET 1、MDA显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,SOD值则显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且病理检查较对照组损伤轻。结论 :丹参对高能冲击波致肾损伤具有保护作用。     

富甲烷生理盐水对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用及剂量效应研究

目的研究富甲烷生理盐水(MS)腹腔注射对大鼠脊髓损伤的治疗作用及剂量效应关系。方法 50只雌性SD大鼠,随机取40只采用改良Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,其余10只纳入假手术组。40只脊髓损伤大鼠随机分为脊髓损伤组、0.5 ml/kg MS组、5 ml/kg MS组、20 ml/kg MS组,每组10只。0.5 ml/kg MS组、5 ml/kg MS组、20 ml/kg MS组大鼠每12 h腹腔内注射相应剂量的MS。造模72 h后处死大鼠,迅速取出以脊髓损伤部位为中心、周围6 mm内组织,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、TNF-α、IL-1β和IL-6含量。结果与假手术组比较,脊髓损伤组大鼠脊髓组织中MDA含量显著升高,而SOD活性显著降低,IL-1β、TNF-α、IL-6含量显著升高,差异有统计学意义(P 0.05)。与脊髓损伤组比较,0.5 ml/kg MS组、5 ml/kg MS组、20 ml/kg MS组MDA含量逐渐降低,SOD活性逐渐升高,IL-1β、TNF-α、IL-6含量逐渐降低,差异有统计学意义(P 0.05)。结论大鼠腹腔注射MS可以通过抑制脊髓受损节段的炎症反应、氧化应激,起到治疗脊髓损伤的作用,剂量与效应呈正相关。     

中药黄芪对实验性脊髓损伤的神经保护作用

目的探讨黄芪(AR)对脊髓继发性损伤的保护作用,并与甲基强地松龙(MP)进行对照.方法 Wistar大鼠60只,以改良Allen氏法制备脊髓打击伤模型,随机分为三组.测定不同药物处理后4 h、8 h、24 h脊髓组织线粒体SOD活性和MDA浓度以及血液流变学改变;光镜观察用药后1、2周黄芪对病理学改变的影响,同时进行联合行为学评分(CBS).结果黄芪处理后脊髓组织MDA浓度明显低于各时相点对照组,SOD活性显著升高(P＜0.01),与MP治疗组无明显差异(P＞0.05).血液流变学指标也有所改善.病理检查发现黄芪治疗组髓鞘受损轻微,组织赦免范围增大.结论黄芪治疗可以缓解脊髓损伤后的脂质过氧化反应,改善微循环,从而发挥脊髓保护作用.     

黄芪对高能冲击波致肾损伤保护性作用的实验研究

目的　探讨黄芪对高能冲击波致肾损伤的保护作用及可能机理。　方法　将 4 5只家兔随机分为 3组 :黄芪组、异搏定对照组和生理盐水假治疗组 ,行高能冲击波前 3d分别静脉注射黄芪注射液 2 .4g/kg、异搏定 0 .4mg/kg、生理盐水 2 0ml,观察家兔血、肾组织匀浆中损伤相关因子 (ET 1、MDA)和损伤保护相关因子 (SOD)及肾组织细胞情况。　结果　冲击后异搏定组和黄芪组血和组织匀浆中ET 1、MDA升高幅度均显著低于假治疗组 (P均 <0 .0 5 ) ,且 1周恢复正常水平 ;黄芪组血和组织匀浆中MDA值冲击后并无明显升高 (P >0 .0 5 ) ,肾组织匀浆ET 1值亦无明显升高 (P =0 .132 )。冲击后异搏定组和黄芪组SOD值降低幅度显著小于假治疗组 (P均 <0 .0 5 ) ,且黄芪组血中该低谷值提前至 2 4h。肾组织细胞学观察异搏定组损伤明显轻于假治疗组 ,而黄芪组较异搏定组更轻、恢复更快。　结论　黄芪对高能冲击波致肾损伤具有保护作用。     

黄连素在脊髓损伤中对线粒体的保护作用及机制

目的探讨黄连素对脊髓损伤(SCI)后线粒体氧化损伤的作用和可能机制。方法将36只C57小鼠随机分为假手术组、SCI组(伤后立即腹腔注射10 mg/kg生理盐水)和黄连素组(SCI后立即腹腔注射10 mg/kg黄连素),每组12只。使用PSI-IH脊髓打击器建立小鼠SCI模型,于损伤后24 h处死小鼠,取脊髓组织。使用全自动酶标仪检测各组小鼠脊髓组织线粒体内丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化;用蛋白质印迹法检测脊髓组织caspase-3、cleaved caspase-3的表达及细胞质内和线粒体内细胞色素C(Cyt C)的表达;用免疫荧光双标染色法检测脊髓组织中神经细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,SCI组小鼠脊髓组织线粒体内MDA水平升高,GSH、SOD水平降低;细胞质内Cyt C和脊髓组织中caspase-3、cleaved caspase-3表达水平增高,线粒体内Cyt C表达水平降低;脊髓组织中神经元凋亡比例增高;差异均有统计学意义(P 0.05)。与SCI组相比,黄连素组小鼠脊髓组织线粒体内MDA水平降低,SOD和GSH水平增高;细胞质内Cyt C和脊髓组织中caspase-3、cleaved caspase-3表达水平降低,线粒体内Cyt C表达水平增高;脊髓组织中神经细胞凋亡比例减少;差异均有统计学意义(P 0.05)。结论黄连素可减轻SCI小鼠脊髓组织中神经细胞凋亡,这可能与其抑制线粒体氧化损伤、减少Cyt C释放、降低凋亡蛋白表达有关。     

丹参注射液对造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的：研究丹参注射液对造影剂碘海醇诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用并对其作用机制进行探讨。方法：体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）,分为正常对照组、甘露醇对照组（与碘海醇渗透压相当）、造影剂对照组（碘海醇100mg/ml）、丹参防治组（碘海醇100mg/ml＋丹参注射液15mg/ml）。比色法测定细胞培养上清液LDH水平,MTT法测定细胞增殖活力,DCFH-DA荧光探针测定细胞内活性氧（ROS）,硫代巴比妥酸法测定细胞内MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,RT-PCR测定细胞内血红素加氧酶-1（HO-1）mRNA表达,Westernblot检测细胞内HO-1蛋白表达。结果：碘海醇100mg/ml可明显抑制HK-2细胞增殖、引起培养液中LDH水平上升、促使细胞内ROS和MDA含量增高而细胞内SOD活性下降,同时碘海醇可诱导HO-1mRNA和蛋白表达上调。加入丹参可明显降低培养液中LDH水平,促进细胞增殖,同时抑制细胞内ROS的产生,降低细胞内MDA含量,保护细胞内SOD活性,并使HO-1mRNA和蛋白表达进一步增强。结论：丹参对造影剂碘海醇所致肾小管上皮细胞具有明显的保护作用,其作用机制与其抗氧化能力及诱导HO-1表达有关。     

Protective effect of deferoxamine on experimental spinal cord injury in rat

Objective

To observe the protective effect of deferoxamine on experimental spinal cord injury (SCI) in rats.

Methods

Sprague-Dawley rats were randomly divided into the following four groups. Control group: rats were performed laminectomy only; SCI group: rats were performed laminectomy with SCI; DFO group: rats were injected intraperitoneally a bolus of 100 mg/kg deferoxamine after SCI; vehicle group: rats were injected intraperitoneally 0.9% saline after SCI. The SCI of animal model was made by using a modified Allen's method on T₁₀. Six rats of each group were sacrificed at 4 h after injured, and the levels of free iron and malondialdehyde (MDA) of involved spinal cord segments were measured by bleomycin assay and the thiobarbituric acid (TBA) separately. The recovery of function was assessed by Modified Tarlov's scale and inclined plane method at 7, 14, 21 d after SCI. The histologic changes of the damaged spinal cord were also examined at 7 d after SCI.

Results

Following SCI, the levels of free iron and MDA were increased significantly and the Modified Tarlov's score and inclined plane angles decreased in SCI group and vehicle group. In DFO group, the levels of free iron and MDA were not increased, but the Modified Tarlov's score and inclined plane angles decreased, the histological findings were improved as well.

Conclusion

Deferoxamine can reduce the levels of free iron and lipid peroxidation, and improve the hind limb functional status of rats with spinal cord injury.     

慢病毒介导的脑红蛋白体内基因转染对兔损伤脊髓的作用

【摘要】　目的：观察慢病毒介导脑红蛋白（Ngb）体内基因转染兔损伤的脊髓组织后对后肢运动功能的影响,探讨其作用机制。方法：用球囊压迫法制成兔脊髓损伤（ＳＣＩ）模型96只,随机分为对照组（A组）、生理盐水组（B组）、空载体组（C组）和Ngb慢病毒组（D组）,每组动物24只,A组SCI后无治疗;B组SCI后向脊髓内注射生理盐水;C组SCI后向脊髓内注射空病毒;D组SCI后向脊髓内注射Ngb重组慢病毒。各组分别在1、3、7、14、21d采用BBB运动功能评分系统检测兔后肢运动功能情况;观察损伤脊髓组织内标记荧光的表达;Real-time PCR和Western blot检测Ngb mRNA及其相应蛋白的表达情况,生化方法检测丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）水平。结果：损伤后14d和21d,D组BBB评分明显高于其他3组（P<0.05）,但A、B及C组之间比较无差异（P＞0.05）;C组和D组兔损伤部位脊髓组织均有GFP表达的绿色荧光信号;损伤后7d、14d和21d,D组的Ngb表达与其他3组比较明显增强（P<0.05）;损伤后7d、14d和21d,D组损伤脊髓组织中MDA、NO含量明显低于其他3组（P<0.05）。结论：慢病毒介导脑红蛋白（Ngb）体内基因转染可使Ngb高表达,可能是通过减轻继发性SCI,从而促进SCI后后肢运动功能的恢复。     

硬膜内局部灌注甲强龙对兔急性脊髓损伤后血清SOD、MDA的影响

目的探讨硬膜内局部灌注甲强龙(MP)对兔脊髓损伤(SCI)后血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的浓度的影响。方法将54只白兔随机分为3组,每组18只,Ⅰ组为不完全SCI+局部灌注MP,Ⅱ组为不完全SCI+局部灌注生理盐水(NS),Ⅲ组为对照组。用改良Allen法造成Ⅰ、Ⅱ组不完全SCI模型,硬膜内置管,检测血清中SOD、MDA的变化情况,同时进行改良Tarlov评分测评及病理组织学观察。结果Ⅱ组血清中的MDA升高,SOD浓度下降,与Ⅲ组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与Ⅱ组比较,Ⅰ组能明显降低SCI后血清中MDA含量,提高SOD浓度,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SCI后硬膜内局部灌注MP能够降低血清MDA含量,提高SOD浓度,在一定程度上阻止继发性损伤的发展。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后氧化应激的影响

目的研究骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后氧化应激的影响。方法取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BMSCs并传代。参照Taoka方法制作30只大鼠脊髓压迫损伤模型,随机分为3组,损伤组（SCI）、假移植组（SCI＋生理盐水）、移植组（SCI＋BMSCs）。脊髓损伤30 min时,假移植组和移植组于损伤周围相应注射生理盐水和BMSCs。在损伤后第3天、7天、14天和28天,进行BBB（Basso-Beattie-Bresnahan,BBB）行为学评价。应用MTT方法检测血清中超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平。结果脊髓损伤后,BMSCs移植第14天即可观察到大鼠后肢运动功能明显改善,第28天BBB评分有明显提高。与损伤组和假移植组大鼠相比,第7天、14天和28天移植组血中MDA水平降低（P〈0.05）;血中SOD水平较高（P〈0.05）。结论 BMSCs移植对SCI神经功能恢复有促进作用,其机制可能与其抑制氧化应激有关。     

深低温停循环逆行脑灌注脑组织自由基变化的实验研究

研究深低温停循环（ＤＨＣＡ）与逆行脑灌注（ＲＣＰ）时脑组织自由基的变化。健康杂种犬１４只，随机等分为ＤＨＣＡ组和ＲＣＰ组，在停循环前（Ａ点）、ＤＨＣＡ／ＲＣＰ３０分（Ｂ点）、ＤＨＣＡ／ＲＣＰ６０分（Ｃ点）ＤＨＣＡ／ＲＣＰ９０分（Ｄ眯）和复温再灌注３０分（Ｅ点）取脑皮层ｌｇ，检测丙二醛（ＭＤＡ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）水平。结果见两组在Ａ点ＭＤＡ和ＳＯＤ无差别。在Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ点，ＤＨＣＡ组ＭＤＡ     

山莨菪碱对牵张性脊髓损伤的防治作用

目的：探讨山莨菪碱（６５４２）对牵张性脊髓损伤的防治效果。方法：日本大耳白兔４８只,随机分为对照组、实验组。实验组于伤前１２、８、４ｈ各肌注６５４２１ｍｇ／ｋｇ;伤后１５ｍｉｎ开始每１ｈ静脉滴注６５４２０３ｍｇ／ｋｇ,持续５ｈ,此后每间隔４ｈ肌注６５４２１ｍｇ／ｋｇ到２ｄ。对照组用等量体积的生理盐水替代６５４２。采用脊髓功能监护、形态学、脊髓组织生化测定、运动功能评定等方法评定６５４２对牵张性脊髓损伤的防治作用。结果：实验组动物伤后８ｈ运动功能障碍率低于对照组,丙二醛（ＭＤＡ）含量低于对照组,过氧化物岐化酶（ＳＯＤ）含量高于对照组（Ｐ＜００５）;神经元及神经纤维变性、坏死,灰质出血范围轻于对照组。结论：伤前应用６５４２能保护脊髓微血管,抑制脊髓继发病理损害,促进脊髓功能恢复。     

促红细胞生成素在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的:观察促红细胞生成素(EPO)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)中的表达和重组人促红细胞生成素(rhuEPO)预处理对再灌注损伤脊髓神经细胞的作用。方法:将W ister大鼠分为正常组、假手术组、rhuEPO处理组和生理盐水对照组;rhuEPO处理组和生理盐水对照组于术前3h腹腔注射rhuEPO和生理盐水,制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。以免疫组化和W estern blot法检测脊髓组织中EPO的表达变化;以原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记法(TUNEL法)检测细胞的凋亡情况。结果:EPO在无损伤脊髓中即有少量的表达,SCII后8h表达显著上调,于12、24h(12h与24h组比较差异无显著性意义,P>0.05)达高峰,伤后3d表达逐渐下调,5d仍保持较高水平。rhuEPO处理组SCII后8h、12h及24h时神经细胞凋亡水平明显低于生理盐水对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在脊髓缺血再灌注损伤中EPO呈现时序性表达变化,可能是机体内源性神经保护的机制之一;EPO预处理能明显抑制SCII后神经细胞的凋亡。     

丹菟注射液对治疗创伤性关节炎患者关节液自由基水平的影响

目的：研究丹菟注射液对治疗创伤性关节液中自由基水平的影响及肿痛改善情况。方法：选择54例创伤性膝关节炎患者，随机分为治疗组36例，对照组18例，用膝关节镜对患侧膝关节进行林格氏液冲洗，治疗组关节腔内注入丹菟注射液3－5ml，15d后重复进行1次，对照组不注药物。两组均在治疗前后抽取关节液测定一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。并观察肿痛的缓解率。结果：治疗组治疗前后关节液中NO、SOD和MDA含量变化有显著性差异（P＜0．05），对照组无显著性差异（P＞0．05）。治疗组肿痛缓解率69．4％，对照组为38．8％，两组总缓解率比较有显著性差异（P＜0．01）。结论：丹菟注射液可以降低创伤性关节炎关节液自由基的含量，对创伤性关节炎治疗有显著临床疗效。