胎兔颅骨成骨样细胞体外培养模型的建立△

目的建立成骨细胞体外培养模型,为骨代谢和成骨机理研究提供细胞学基础.方法用酶消化和组织块移行生长相结合方法,从胎兔颅骨中分离出成骨样细胞群进行原代及传代培养,应用组织学、酶细胞化学、免疫细胞化学和染色体染色对其生物学和遗传学特性进行鉴定.结果胎兔颅骨成骨样细胞具有体内成骨细胞的形态特征、ALP活性及合成分泌BMP等的功能,并能在体外发生钙化,其遗传学性状稳定.结论该模型具有体内成骨细胞的生物学和遗传学特性,可用于成骨细胞代谢和成骨作用的体外研究.     

人肝细胞生长因子基因转染成骨细胞移植治疗早期股骨头缺血性坏死的实验研究

目的 探讨人肝细胞生长因子(hHGF)基因转染成骨细胞移植促进股骨头的早期血管新生,增强坏死股骨头的局部骨修复能力.方法 36只新西兰兔随机分成对照组、移植转染hGHF基因组和未转染成骨细胞组.体外分离、培养胎兔颅骨中的成骨细胞,利用脂质体介导hHGF基因体外转染成骨细胞,同时建立兔激素性股骨头缺血坏死模型,然后将细胞通过髓芯减压后移植于坏死的股骨头内,组织形态学分析血管发生和骨修复情况.结果 胎兔颅骨中分离培养的成骨细胞表达Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶,hHGF基因转染成骨细胞体外及体内检测均有hHGF蛋白的表达.转染hHGF基因的成骨细胞组和成骨细胞组移植坏死的股骨头内的新生骨小梁与单纯髓芯减压组比较有差异性,同时基因转染组的新生血管数较对照组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 hHGF基因转染可促进缺血股骨头的血管新生,并增加骨形成.显著促进坏死骨修复.     

成骨细胞体外培养技术

成骨细胞是骨形成的主要功能细胞,对它的研究成为研究骨代谢和成骨机制的重要途径。选择便捷高效的体外培养方法,是开展体外成骨细胞研究的前提。随着细胞培养技术的发展,人们已经通过分离培养、诱导分化、与破骨细胞共培养乃至建立3D共培养体系,从许多动物的骨组织中成功培养或者诱导形成具有典型成骨特性的细胞。本文就常见的成骨细胞体外培养技术和鉴定方法做简要概述。     

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞增殖和分化影响的实验研究

目的：研究TGF-β对成骨细胞增殖和分化的影响。方法：利用已建立的胎兔颅骨成骨样细胞体外模型，采用MTT法、流式细胞仪检测、骨钙素、胶原和钙含量测定来分析不同浓度的TGF-β对成骨样细胞增殖和分化的影响。结果：低浓度TGF-β（0.010.1ng/ml）促进成骨样细胞增殖，使S期细胞增加，但高浓度TGF-β（110ng/ml）抑制成骨样细胞的增殖。在TGF-β0.01-1ng/ml范围内，与对照组相比，TGF-β各治疗组的骨钙素、胶原和钙含量明显增加，并随TGF-β浓度增加而增加，到TGF-β10ng/ml时，增加不再明显。结论：TGF-β对成骨细胞的增殖表现为双相作用，低浓度促进，高浓度时抑制，可明显促进成骨细胞的分化，并呈一定的量效关系，其有效剂量为0.011ng/ml。     

骨膜源性成骨细胞的分离培养及鉴定

目的：寻找理想的骨组织工程种子细胞。方法：取兔骨膜组织，采用酶消化法和组织块培养法获取成骨细胞，体外培养传代，观察细胞的形态、生长特点及成骨特性。结果：培养的骨膜成骨细胞形态多为三角形或梭形，生长增殖迅速，具有成骨能力。结论：白骨膜获得的细胞是成熟的成骨细胞，可以做为骨组织工程中比较理想的种子细胞。     

TGF-β和BMP对胎兔颅骨成骨样细胞增殖和分化相互作用的实验研究

目的研究转化生长因子β(TGF-β)和骨形态发生蛋白(BMP)对成骨细胞增殖和分化的影响及其相互作用。方法取胎兔颅骨成骨样细胞进行体外培养，使用不同方法，加入TGF-β与BMP，在不同时间点检测其成骨样细胞增殖和分化的相互作用。结果TGF-β增加成骨样细胞DNA含量，抑制ALP活性、骨钙素的产生和矿化骨基质的形成。而BMP的作用相反。联合应用时，TGF-β减弱了BMP对成骨样细胞骨钙素产生和ALP活性的增强作用，BMP降低了TGF-β对成骨样细胞DNA合成的促进作用。在序惯性给药时，早期(9d)用BMP治疗并不影响随后加入的TGF-β对成骨样细胞ALP活性和基质钙化的抑制作用。而早期(10d)用TGF-β治疗却诱导了随后加入的BMP对成骨样细胞分化的促进作用。结论TGF-β促进成骨细胞增殖，BMP促进成骨细胞分化，它们在各自的不同时期发挥对成骨样细胞增殖和分化的影响。     

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用

目的 :探讨TGF β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用。方法 :显微相差动态观察、细胞增殖计数、ALP活性测定及骨结节计数观察TGF β体外成骨作用。结果 :TGF β对该细胞的增殖 ,低剂量有促进作用 ,高剂量有抑制作用。TGF β(在 3～ 7d)对ALP活性有促进作用 ,并呈一定的时效和量效关系。TGF β低剂量对骨结节形成有促进作用 ,高剂量时为强有力的抑制作用 ,与剂量有相关关系。结论 :TGF β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨表现为双相作用。     

鼠颅盖骨成骨细胞体外培养及ALP免疫组化法鉴别纯化

体外培养成骨细胞，是研究力学环境，电磁刺激及药物治疗等理化因素对骨生长代谢影响机制的一种基本方法，如何消除和减少成纤维细胞的污染，鉴别纯化成骨细胞，是该方法应用中的主要困难。本实验中，观察了ＳＤ乳鼠顶骨组织学结构；建立起体外培养乳鼠顶骨成骨细胞模型；应用细胞化学和免疫组织化学技术，对培养成骨细胞进行定性和定位将其纯化达９０％以上，形态学观察证实，成骨细胞在体外培养４０天左右时，在编织骨样组织形成，     

新型双相陶瓷材料复合成骨细胞构建人工骨及其体内成骨的观察

目的 观察骨髓来源的成骨细胞与新型双相陶瓷材料复合培养后细胞生长状况及其体内异位成骨能力。方法 将来源于兔骨髓的成骨细胞与新法制备的HA/TCP共培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况;然后将复合物自体异位植入体内,6周后观察体内成骨情况。结果 扫描电镜显示材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长;植入体内6周后取材见内植物有新骨形成、多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构。结论 新型双相陶瓷支架可用作组织工程骨的细胞外基质材料,骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞。     

大鼠骨髓基质细胞体外培养诱导成骨能力的研究

目的：观察大鼠骨髓基质细胞在体外培养生长时的生物学特性，及诱导分化为成骨细胞的能力。方法：取成年大鼠2只，处死后分离、培养骨髓基质细胞，第8天时添加矿化液诱导培养，细胞经传代后绘制生长曲线。应用倒置相差显微镜、透射电镜观察其生长特性，并进行甲苯胺蓝染色，Won Kossa染色，碱性磷酸酶染色。结果：培养的大鼠骨髓基质细胞呈成纤维细胞样生长，增殖活跃。经诱导后，细胞碱性磷酸酶活性高，连续培养30天，Von-KaSSR染色显示有局灶状钙盐沉积。结论：MSCs易于分离培养，体外扩增速度快，在矿化条件下，骨髓基质细胞在体外即具有很强的成骨能力，为研究其作为骨组织工程种子细胞植入体内成骨奠定基础。     

新型双相陶瓷材料复合成骨细胞构建人工骨及其体内成骨的观察

目的 观察骨髓来源的成骨细胞与新型双相陶瓷材料复合培养后细胞生长状况及其体内异位成骨能力。方法 将来源于兔骨髓的成骨细胞与新法制备的HA／TCP共培养2周，通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况；然后将复合物自体异位植入体内，6周后观察体内成骨情况。结果 扫描电镜显示材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长，有良好增殖活动性和稳定细胞表型，材料中心区未见细胞生长；植入体内6周后取材见内植物有新骨形成、多位于内植物表面，可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构。结论 新型双相陶瓷支架可用作组织工程骨的细胞外基质材料，骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞。     

兔骨髓基质细胞的分离培养

目的 为骨组织工程寻找一种理想的种子细胞。方法 采取兔骨髓组织，应用梯度离心获取骨髓基质细胞，体外培养传代，通过光镜、透射电镜及成骨特性的鉴定，观察细胞的形态、生长特点及成骨特性。结果 培养的骨髓基质细胞形态多为三角形或梭形，生长增殖迅速，具有成骨能力，易于定向分化为成骨细胞。结论 自骨髓获得的骨髓基质细胞具有明显的增殖能力和成骨活性，可以做为骨组织工程中比较理想的种子细胞。     

成骨细胞体外培养模型的研究进展

多种细胞参与骨的形成、重建和修复过程,其中成骨细胞的作用尤为重要,它不仅调节骨的矿化,还间接调节骨吸收功能,它的数量和功能变化直接影响多种骨骼疾病的发生、发展和预后。作为骨组织中最重要的力学感受细胞和成骨效应细胞,它的功能及调节机制已成为骨生物学研究的重中之重。目前用于研究成骨细胞生物学特性的细胞模型种类繁多,而每种模型都有其自身特点,在选择实验对象时需要对其生物学特性进行综合评估。本文将针对成骨细胞不同种属来源的原代细胞和细胞系作一简要概述。     

体外培养成骨细胞的研究进展

随着体外细胞培养技术的发展,人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质、骨膜及骨外组织中成功培养出了具有典型成骨细胞特性的细胞,研究表明培养出的成骨细胞具有良好的生物学特性,在不同环境下可以形成骨组织,联合支架的应用,构建组织工程骨,将其植入体内修复骨缺损.现就成骨细胞的来源、分化调控因子、复合移植及中医药方面的研究进展作一综述.     

兔骨髓基质细胞体外成骨分化鉴定及与煅烧骨复合培养的实验研究

目的研究兔骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的生物学特性及其与牛煅烧骨体外复合培养的生物相容性.方法将体外培养1周的兔骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化,于1、2、4周时提取RNA,采用RT-PCR技术检测ALP和I型胶原mRNA表达,并对培养2周的细胞行VonKossa染色观察钙结节形成;另制备细胞-煅烧骨复合物,继续培养1、7、14 d后取出,扫描电镜观察及X射线衍射仪检测.结果体外诱导培养2、4周后,兔骨髓基质细胞成功表达ALT和I型胶原,VonKossa染色可见钙结节形成.扫描电镜及X射线衍射分析证实细胞在煅烧骨表面大量贴附成活,14 d后细胞铺满支架表面,合成并分泌胶原纤维及钙盐.结论兔骨髓基质细胞体外可成功向成骨细胞诱导分化,成骨特性表达佳;与牛煅烧骨体外复合培养显示良好的生物相容性.     

c-Fos、c-Jun在兔成骨样细胞内的表达

用组织块移植法对兔颅骨细胞进行分离培养。相差显微镜观察，组织化学染色，免疫组织化学染色，mRNA原位杂交及体外钙化检测表明该细胞群符合成骨样细胞的特点。在此基础上用免疫组织化学SP法观察了c-F0s，c-Jun在成骨样细胞内的表达及其与骨钙素合成的关系。结果显示c-Fos、c-Jun从第一代到第十一代成骨样细胞内均有表述，且早期表述较多，可位于胞核、核膜及胞浆内。第六代以后的细胞仅胞浆着色。在c-Fos、c-Jun高表达时骨钙素合成减少c-Fos、c-Jun低表达时骨钙素合成增加，提示c-Fos、c-Jun对骨钙素具有负调控作用。本实验结果为c-Fos、c-Jun参与骨代谢提供了直接证据，同时也为观测成骨细胞生长分化及其影响固素提供了有价值的指标．有助于促进牙周炎牙槽骨骨吸收机理及其它骨代谢相关研究。     

人骨膜细胞生物学特性的实验研究

目的 探讨人骨膜细胞体外培养的生物学特性. 方法 以胫骨骨膜组织为材料,采用组织块法分离细胞,完全培养基培养,通过倒置显微镜观察细胞形态学,锥虫蓝染色计数法检侧细胞增殖能力;流式细胞学分析细胞表面抗原.随机分为3组,成骨实验组和成软骨实验组分别加入不同的定向培养剂,对照组加入完全培养基,采用碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色检测各组细胞的成骨和成软骨分化指标. 结果 骨膜细胞在体外培养条件下呈贴壁生长,细胞生长曲线证实骨膜细胞传至第9代仍保持良好的增殖能力,流式细胞仪检测证实细胞表面抗原CD90及CD105呈阳性;组织化学染色检测证实成骨实验组分化后细胞碱性磷酸酶及钙结节呈阳性,成软骨实验组分化后细胞蛋白聚糖及Ⅱ型胶原呈阳性,对照组各项指标均生阴性.结论 骨膜细胞体外培养细胞增殖能力强,具有间充质干细胞的特性和良好的成骨和成软骨分化潜能,其定向诱导分化的成骨细胞和软骨细胞均具有各自明显的细胞功能表达.     

体外培养成骨细胞研究新进展

成骨细胞是骨形成细胞,对骨组织的生长发育、骨代谢平衡、骨量维持和损伤修复起关键作用.一旦成骨细胞生成不足或功能降低,不能及时补充由于破骨细胞活动所导致的骨吸收、骨量丢失,将直接导致骨形成减少.随着细胞培养技术的发展,人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质和骨膜中成功分离培养出了具有典型成骨细胞特征的细胞株,研究表明培养后的成骨细胞在体内仍具有良好的成骨能力,在不同环境下可以形成骨组织.将分离培养的成骨细胞大量增殖后回植于体内,具有取材方便,成骨能力好等优点,且不需考虑免疫反应和传播疾病的危险.     

鼠骨组织成骨细胞的离体培养和生长特性

目的：观察大鼠骨组织来源成骨细胞的体外分离培养的条件及生长特征，为骨组织工程学实验研究奠定基础。方法；取出生24hSD乳鼠的顶骨，酶经法分离培养成骨细胞并传代，观察其生物学特征，并进行ALP活性测定，绘制生长曲线、分裂指数曲线和贴壁率曲线、测定细胞贴壁及延展时间。并将培养细胞进行冻存、复苏、比较细胞特性有无改变。结果：培养细胞在第8代以前生长性状稳定，具有典型的成骨细胞特性，可作为实验细胞；第4d为细胞生长倍增时间，第5－6d细胞达生长高峰；第4d细胞分裂最为旺盛，达18％；传代后10h贴壁率最高，为90％；冻存复苏后的细胞生物学特性无改变。结论：本实验方法体外培养的成骨细胞，生长性状稳定，增殖速度快，具有与体内成骨细胞相同的生物学特性，保证了相关实验的可靠性和准确性，可作为骨组织工程学研究的种子细胞。     

成骨细胞接种于脱蛋白骨中修复骨缺损的实验研究

目的　探讨成骨细胞悬液接种于脱蛋白型松质骨中对骨缺损修复的能力。方法　以 2 8天胎兔颅骨为骨源 ,用酶消化法分离成骨细胞 ,取第 3代成骨细胞制成细胞悬液 ,以 5× 1 0 6 /ml浓度接种于具有三维空间结构的异种脱蛋白型松质骨中 ,然后用此复合物修复兔颅骨缺损 ,本组作为实验组 (共 1 0只 )。对照组Ⅰ (共 1 0只 ) ,仅用异种脱蛋白型松质骨修复兔颅骨缺损。对照组Ⅱ (共 1 0只 )为成骨细胞。对照组Ⅲ (共 1 0只 )为空白对照组。结果　 8周后 ,实验组 :X线片均显示骨缺损周围有骨小梁通过 ,支架上有钙化阴影。大体观察 :缺损周围与正常骨组织之间无分界线 ,植入物硬度接近于正常骨组织。组织学分析 :支架上有大量新骨形成 ,支架有部分被降解吸收。四环素荧光标记证实在支架上有新生骨。所有对照组均无新生骨 ,仅见缺损区有纤维样组织覆盖。结论　体外培养的成骨细胞经增殖后接种于异种脱蛋白型松质骨中可以用来修复骨缺损