8 Hz/130 dB次声对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨8 Hz,130 dB次声作用对海马细胞内钙离子浓度的影响. 方法: 将48只SD大鼠随机分为6个组,即对照组、次声作用1 d组、次声作用7d组、次声作用14 d组、次声作用21 d组、次声作用28 d组. 采用急性细胞分离技术,通过钙离子荧光探针及激光共聚焦显微镜观察大鼠脑海马细胞内钙离子浓度变化. 结果: 频率8 Hz,声压级130 dB次声分别作用2 h/d后,海马细胞内钙离子浓度于1 d组即有增高(P<0.01),7 d组仍呈增高趋势,至14 d组达高峰并呈现细胞内钙离子超载征象,至28 d组已回落. 结论: 8 Hz,130 dB次声作用不同时间可导致海马细胞内钙离子浓度不同程度增高,随作用时间延长,海马细胞对次声作用呈现适应性.     

戊四氮点燃癫痫大鼠海马Ca2+浓度及CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的表达

目的 探讨戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+] i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIα ( calcium / calmodulin-dependent protein kinase IIα, CaMKIIα) mRNA的表达.方法 动物分为正常对照组和PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫观察2组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i浓度变化,反转录多聚酶链反应方法测定海马CaMKIIα mRNA的表达.结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]i浓度明显升高(P<0.05),CaMKIIα mRNA表达水平明显降低(P<0.05).结论 PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKIIα的表达异常,由此引起空间学习记忆受损.     

戊四氮点燃癫痫大鼠海马Ca^2＋浓度及CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的表达

目的 探讨戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2＋浓度（[Ca2＋] i）、Ca2＋/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIα （ calcium / calmodulin-dependent protein kinase IIα, CaMKIIα） mRNA的表达.方法 动物分为正常对照组和PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫观察2组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2＋]i浓度变化,反转录多聚酶链反应方法测定海马CaMKIIα mRNA的表达.结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2＋]i浓度明显升高（P〈0.05）,CaMKIIα mRNA表达水平明显降低（P〈0.05）.结论 PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKIIα的表达异常,由此引起空间学习记忆受损.     

柴胡皂苷a对谷氨酸激活大鼠海马星形胶质细胞内Ca2+浓度增加和IL-6释放的抑制作用

目的研究柴胡皂苷a(SSa)对谷氨酸(G lu)激活大鼠海马星形胶质细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)和白介素-6(IL-6)释放的影响。方法将原代培养并纯化的海马星形胶质细胞分为4组:对照组、L-G lu激活组(含L-G lu 0.1 mmol/L)和含L-G lu 0.1 mmol/L SSa的药物干预组(SSa剂量分别为1.25 mg/L和0.625 mg/L),作用12 h后,运用Fluo3/Am荧光法测定星形胶质细胞内[Ca2 ]i,ELISA法测细胞外液IL-6水平。结果G lu可显著升高星形胶质细胞[Ca2 ]i(P<0.01),并使细胞外液IL-6水平显著增加(P<0.01);SSa能明显抑制G lu激活星形胶质细胞([Ca2 ]i)的增加(P<0.01),并能降低G lu激活星形胶质细胞外液中IL-6的水平(P<0.01);其中1.25 mg/L剂量的SSa对G lu激活的星形胶质细胞细胞内[Ca2 ]i升高和IL-6释放均有较好的抑制作用,与对照组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论SSa可抑制G lu激活的星形胶质细胞[Ca2 ]i升高和IL-6释放,这可能是其抗癫痫作用机制之一。     

肿瘤坏死因子α对心肌细胞内受磷蛋白表达和细胞内钙的调节作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对培养的乳鼠心肌细胞内受磷蛋白(PLB)和肌浆网钙泵蛋白同功酶(SERCA2a)基因表达及细胞内游离钙离子浓度的影响.方法体外培养的乳鼠心肌细胞被随机分成对照组和不同浓度TNFα(1、10、30、50、70μg/L)干预组,用单管一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting技术,观察TNFα对乳鼠心肌细胞PLB和SERCA2a基因表达的影响.采用Fluo-3/Am荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦显微镜下测定TNFα对单个乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度的影响.结果TNFα浓度依赖性增高PLB mRNA和蛋白质的表达,10、30、50、70μg/L TNFα组PLB mRNA表达量分别较对照组增加66%、106%、141%、189%(P＜0.05),蛋白质的表达分别较对照组提高30%、48%、73%、114%(P＜0.001).而1μg/L TNFα组与对照组PLB mRNA和蛋白质表达差异均无显著性.TNFα不影响SERCA2a的表达.50μg/L TNFα作用细胞24 h,能降低异丙肾上腺素刺激的[Ca2 ]i变化幅度的增高,[Ca2 ]i变化幅度较对照组减少33%(P＜0.01),但对静息状态下[Ca2 ]i变化幅度无影响.结论TNFα可增强心肌细胞内PLB的表达,降低心肌细胞内[Ca2 ]i的变化,这可能与TNFα对心肌细胞的负性肌力作用有关.     

尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca2+浓度及Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα表达的影响

目的 探讨尼莫地平( nimodipin,NIM)对戊四氮( pentylenetetrazol,PTZ) 点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离 Ca2+浓度([Ca2+]I)、ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium / calmodulin-dependent protein kinase Ⅱa,CaMKⅡα 蛋白表达的影响.方法 将动物分为正常对照组、PTZ 组和 NIM + PTZ组,采用 PTZ 慢性点燃癫痫模型,应用 Mor-ris 水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]I变化,Western blot方法测定 CaMKⅡα蛋白的表达.结果 PTZ 组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]I明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与 PTZ 组比较,NIM + PTZ 组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]I;下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05).结论 PTZ 点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM 可以降低细胞内[Ca2+]I;,提高 CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力.     

齐墩果酸对谷氨酸诱导神经细胞损伤的影响

目的 研究齐墩果酸(oleanolie acid,OA)对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的影响.方法 选用新生Wistar大鼠原代培养海马神经元,建立谷氨酸细胞毒性模型,借助于共聚焦显微镜结合钙荧光指示剂Fluo-3-AM观察OA对海马神经元[Ca2 ]i的影响.结果 1、10、100 μmol/L OA 谷氨酸组细胞内[Ca2 ]i均明显下降,与谷氨酸对照组相比[Ca2 ]i分别降低了0.32±0.05,0.41±0.06和0.43±0.09,差异均有显著性(P＜0.05).结论 OA可以降低谷氨酸诱导海马神经元[Ca2 ]i升高,对谷氨酸诱导的海马神经元损伤有一定的保护作用.     

130 dB次声对大鼠纹状体NOS阳性神经元及ChAT免疫阳性神经元表达的影响

目的: 探讨130 dB次声作用对大鼠纹状体一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元及乙酰胆碱转移酶(ChAT)免疫阳性神经元表达的影响.方法: SD大鼠接受频率为16 Hz和8 Hz,130 dB次声,2 h·d-1,分别作用7,14及21 d后,采用神经化学解剖学方法观察纹状体NOS阳性神经元和ChAT免疫阳性神经元表达的影响.结果: 次声作用后,大鼠NOS阳性神经元数目表现为先升高后降低,而ChAT免疫阳性神经元随时间增加数目减少. 16 Hz组ChAT免疫阳性神经元计数较8 Hz组数目显著减少 (P＜0.01). 结论: 次声作用后,NOS神经元和ChAT免疫阳性神经元表达与次声的频率和作用时间有关.     

GPR40反义RNA对胰岛β细胞内Ca2+浓度及胰岛素分泌的影响

目的应用反义RNA技术特异性下调胰岛β细胞G蛋白耦联受体(GPR40)的表达,观察其对胰岛β细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及胰岛素分泌的影响。方法体外分离SD大鼠胰岛β细胞,将GPR40反义RNA表达载体pcDNA3.1(+)-GPR40(-)用脂质体体外瞬时转染胰岛细胞,Western blot检测GPR40蛋白的表达,将1.0 mmol/L游离脂肪酸(软脂酸∶油酸=2∶1)与胰岛细胞共培养10,30,60 min,进行高葡萄糖刺激胰岛素释放试验,利用荧光探针Fura-2/AM,测定胰岛细胞[Ca2+]i变化,放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度变化。结果与对照组和空白质粒转染组比较,GPR40反义RNA可显著降低细胞GPR40蛋白的表达水平(P<0.05),在各作用时间点,GPR40反义RNA转染组[Ca2+]i显著低于对照组(P<0.05),同时GPR40反义RNA转染组胰岛细胞的胰岛素分泌明显低于对照组(P<0.05)。结论 GPR40介导游离脂肪酸刺激β细胞内[Ca2+]i升高和胰岛素分泌。     

脑心综合征大鼠心肌细胞内[Ca2+]i对KCl除极的反应性增强

目的 研究脑心综合征(cerebro-cardiac syndrome,CCS)心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)对KCl除极的反应性,通过心肌[Ca2 ]i的变化来探讨脑心综合征心律失常的发生机制.方法 用线栓法栓塞右侧大脑中动脉建立脑心综合征模型.采用酶法分离心肌细胞,Fluo-3/AM负载后采用激光共聚焦扫描显微镜观察心肌[Ca2 ]i对KCl除极后的反应性.结果 假手术组与正常组心室肌[Ca2 ]i对KCl除极后的反应性无显著差别(P>0.05);模型组心室肌[Ca2 ]i的升高幅度、速度以及不同时间点的恢复程度均显著高于假手术组(P<0.05);且加KCl后CCS 24 h组心肌[Ca2 ]i的上升速度明显高于CCS 2 h组(P<0.05),在扫描不同时间点恢复程度显著快于CCS 2 h组(P<0.05).结论 脑心综合征心肌[Ca2 ]i在KCl除极后升高速度、幅度及恢复程度都发生改变,可能是脑心综合征心律失常发生机制之一.     

8 Hz/90 dB次声暴露后心肌细胞凋亡及相关机制研究

目的：观察不同时间90dB次声诱导的大鼠心肌细胞凋亡,并探讨其相关机制．方法：用8Hz／90dB的次声分别作用大鼠1,7,14,21和28d,每日2h,观察大鼠心肌细胞凋亡率的变化,测定大鼠7心肌细胞钙离子浓度的变化．结果：大鼠心肌细胞凋亡率随时间逐渐增大（P〈0．01）,大鼠心肌细胞内钙离子浓度随时问逐渐增多（P〈0．01）．结论：90dB次声可引起大鼠心肌凋亡,与次声暴露时间有关．     

褪黑素在叠氮钠所致的海马锥体细胞钙超载中的神经保护作用

目的 观察叠氮钠对急性分离的大鼠海马锥体神经元胞内游离钙的作用以及不同浓度的褪黑素（Melwatonin, MT)的影响。方法 海马锥体细胞的急性分离，新型游离钙荧光探针Fluo-4AM负载海马锥体细胞，激光共聚焦动态检测胞内游离钙的变化及叠氮钠，褪黑和荷包牡丹碱的作用。结果 在孵育液中加入叠氮钠（0.8mg/ml）能使急性分离的海马锥体细胞胞内游离钙在200s内急剧升高并维持在高水平，处于钙超载状态。褪黑素能使NaN3所致的海马锥体细胞内处于超载状态的游离钙显著下降，并有量效关系。结论 叠氮钠导致海马神经细胞损伤的早期原因可能是钙超载，MT促进钙离子向细胞外的转运而抑制叠氮钠所致的钙超载。     

CNTF对AMPA和NMDA引起海马神经元Ca2+浓度升高的作用

①目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对两种谷氨酸(Glu)离子型受体激动剂(α-氨基羧甲基异哑恶唑丙酸,AMPA;N-甲基-D-天冬氨酸,NMDA)激发的海马神经元内游离Ca2+([Ca2+]i)升高的作用.②方法原代培养海马神经元,在有或无CNTF条件下用活细胞内荧光探针Fura-2-AM实时检测AMPA和NMDA引起海马神经元内[Ca2+]i变化的情况.③结果 AMPA和NMDA均可引起细胞内[Ca2+]i升高,并呈量效依赖性;CNTF可快速抑制NMDA引起的海马神经元内[Ca2+]i升高(t=2.97～4.86,P＜0.05),而对AMPA的作用无影响(t=0.22～0.74,P＞0.05).④结论 CNTF可能通过与NMDA型受体相互作用而快速启动Ca2+信号的途径,保护因Glu引起的海马神经元损伤.AMPA型受体可能与CNTF的快速作用无关.     

辛伐他汀对多柔比星损伤心肌细胞钙稳态作用的研究

目的:探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对多柔比星(doxorubicin,DOX)损伤心肌细胞的保护作用。方法:将培养72 h的新生SD大鼠心肌细胞随机分为对照组、DOX损伤组、1μmol/L SIM干预组、10μmol/L SIM干预组、20μmol/L SIM干预组,继续培养24 h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测心肌细胞存活率;荧光染料Fluo-3/AM检测心肌细胞内钙离子荧光强度;蛋白质印迹法检测肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)的表达。结果:与对照组相比,DOX损伤组心肌细胞存活率明显下降(P<0.01);钙离子荧光强度明显增强(P<0.01);SERCA2a蛋白表达显著下降(P<0.01)。给予SIM处理后,心肌细胞存活率显著上升(P<0.01),钙离子荧光强度显著下降(P<0.01),SERCA2a表达明显改善(P<0.01)。结论:辛伐他汀对多柔比星损伤的心肌细胞的保护作用可能与部分改善SERCA2a的表达、抑制钙超载有关。     

GDNF与甲泼尼龙对脊髓损伤后细胞内游离钙含量的影响

目的：比较胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）与甲泼尼龙（MP）对脊髓损伤组织细胞内游离钙及水含量的影响。方法：SD大鼠分成对照组、GDNF组、MP一及GDNF＋MF组,改良Allen法撞击致伤脊髓T13节段,蛛网膜下腔给予GDNF 20μl,尾静脉给予MP 30mg/kg,不同时间取伤段脊髓以Fura-2法测定细胞内钙[Ca^2 ]i及组织中水含量。结果：治疗组[Ca^2 ]i及组织中水含量明显低于对照组（P＜0．01）;伤后24h[Ca^2 ]i及组织中水含量GDNF组＞MP组及GDNF＋MP组（P＜0．01）,MP组与GDNF＋MP组无差异（P＞0．05）;伤后72h的[Ca^2 ]i水平,GDNF组＞MP组＞GDNF＋MP组（P＜0．05）;组织中水含量GDNF组＞MP组及MP＋GDNF组（P＜0．01）;伤后7天[Ca^2 ]i的水平,GDNF组＞MP组＞GDNF＋MP组（P＜0．01）;组织中水含量各治疗组无显著差异（P＞0．05）。结论：GDNF、MP及其联合应用均能降低脊髓组织[Ca^2 ]i水平,减轻组织水肿,作用效果MP超过GDNF,MP联合GDNF治疗脊髓损伤能增强MP的疗效。     

8 Hz/130 dB次声对大鼠睾丸超微结构的影响

目的:应用透射电镜技术观察8 Hz/130 dB次声作用后的雄性大鼠睾丸细胞超微结构变化,探讨次声对大鼠睾丸超微结构的影响. 方法:将48只SD雄性大鼠随机分为1,7,14,21 d和4个相应的对照组,每组6只. 实验组动物次声作用2 h/d. 对照组动物置于同一次声压力舱内,不予次声作用. 于次声作用后不同时间点(1,7,14 d)取睾丸组织,透射电镜下观察. 结果:随着次声作用时间的增加,睾丸细胞超微结构损伤加重,细胞凋亡增加、畸形精子增多. 次声作用终止后7 d,各种细胞超微结构的急性变化基本消失,细胞凋亡下降;14 d后7,14,21 d组畸形精子仍显著高于对照组. 结论: 8 Hz/130 dB次声作用可导致大鼠睾丸超微结构损伤、细胞凋亡、畸形精子增加,具有明显的量效关系;8 Hz/130 dB次声作用终止后,各种细胞急性变化恢复较快,但精子畸形恢复较慢.     

海马参与雌激素加重咬合干扰致去卵巢大鼠慢性咬肌痛敏

目的: 探究海马参与雌激素(主要为17β-雌二醇,17β-estradiol,E2)和实验性咬合干扰(experimental occlusal interference,EOI)对双侧卵巢摘除(ovariectomy,OVX)大鼠慢性咬肌痛敏影响的分子机制。方法: 将32只OVX大鼠随机分为4组(8只/组),对照组: OVX组,于OVX术后7 d开始0 μg/d E2(即用溶剂vehicle替代),不施加EOI;实验组:(1)OVX+E2组,于OVX术后7 d开始80 μg/d E2替代,不施加EOI;(2)OVX+EOI组,于OVX术后7 d开始0 μg/d E2替代,术后17 d施加EOI;(3)OVX+E2+EOI组,于OVX术后7 d开始80 μg/d E2替代,术后17 d施加EOI。于OVX术前、术后7 d(E2替代开始)、术后17 d(E2替代10 d,即EOI开始)、术后24 d(EOI 7 d)分别测试机械刺激反应阈值,建模完成后取大鼠双侧海马进行免疫荧光染色,观察海马CA3区神经元磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular signal regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)表达情况,以及取大鼠双侧海马进行Western Blot定量检测p-ERK1/2表达量。结果: 与对照组[左侧:(135.3±8.5) g,右侧:(135.4±10.8) g]相比,OVX+E2组[左侧:(113.3±5.6) g,右侧:(112.5±5.6) g]和OVX+EOI组[左侧:(93.3±5.4) g,右侧:90.8±5.5) g]大鼠双侧咬肌机械刺激反应阈值显著降低(P<0.01);OVX+E2+EOI组[左侧:(81.2±6.2) g,右侧:79.8±7.7) g]阈值降低较对照组、OVX+E2组和OVX+EOI组显著(P<0.05);对照组、OVX+E2组、OVX+EOI组和OVX+E2+EOI组大鼠双侧海马CA3区p-ERK1/2阳性神经元比例依次增高,且组间差异有统计学意义(P<0.05);p-ERK1/2蛋白表达量在对照组、OVX+E2组、OVX+EOI组依次增高,组间差异无统计学意义(P > 0.05),OVX+E2+EOI组p-ERK1/2表达量显著高于其他3组(P<0.05)。结论: 高浓度E2可加重EOI导致的OVX大鼠慢性咬肌痛敏,其中枢机制可能与海马内ERK1/2信号通路有关。     

巨细胞病毒感染对神经细胞[Ca^2＋]i/钙调素及线粒体膜电位的影响

目的观察巨细胞病毒感染组和正常对照组小鼠海马神经细胞[Ca^2＋]iCaMmRNA及线粒体膜电位。方法将BALB／C乳鼠同母鼠随机分为实验对照组（18只）和病毒感染组（35只），感染后56天检测两组小鼠海马神经细胞的[Ca^2＋]iCaMmRNA及线粒体膜电位。结果病毒感染组小鼠海马[Ca^2＋]iCaMmRNA增高及线粒体膜电位明显下降（P〈0．01），与正常对照组比较差异有显著性。结论巨细胞病毒感染所引起的小鼠海马[Ca^2＋]iCaMmRNA及线粒体膜电位的改变可能是其导致神经系统功能紊乱的机制之一。     

丹曲林钠对类缺血小鼠皮质神经元的[Ca2+]i和细胞活力的影响

目的: 观察类缺血后神经元内钙离子浓度及细胞活性的变化,探讨缺血性神经元的损伤与细胞内钙离子的关系及丹曲林钠(Dantrolene)的作用. 方法: 采用孕小鼠皮层神经元培养技术,应用相差显微镜观察培养的神经元形态,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子浓度. 结果: 给予神经元类缺血处理5 min后,神经元内钙离子浓度与丹曲林钠组无显著差异(P>0.05). 类缺血处理10 min后再灌注15 min细胞损伤程度较丹曲林钠干预组[Ca2+]i和MTT有显著性差异(P<0.01). 结论: 丹曲林钠可抑制神经元细胞内钙离子浓度的升高,降低缺血性神经元损伤的程度.