基质金属蛋白酶-11在骨肉瘤中的表达及生物学功能研究

目的检测基质金属蛋白酶-11(matrix met alloproteinase-11,MMP-11)在骨肉瘤组织及癌旁组织中的表达特征,并观察敲低其表达对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法采用荧光定量PCR(Quantitative RT-PCR)和免疫组化染色技术检测40例骨肉瘤及癌旁组织中MMP-11的表达特征。体外试验采用骨肉瘤细胞系(HOS和Saos-2)转染MMP-11siRNA(试验组)和siRNA control(阴性对照组),48h后收集细胞,提取RNA和蛋白质,通过荧光定量PCR和蛋白质印迹观察两组细胞中MMP-11的表达变化;同时采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)、细胞划痕试验以及流式细胞术探究敲低MMP-11表达对骨肉瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响。结果骨肉瘤组织中MMP-11mRNA的表达量较癌旁组织明显升高,癌旁组织中MMP-11mRNA的表达量为(1.0±0.22),则其在骨肉瘤组织中相对表达量为(3.94±0.79)(P0.05)。免疫组化染色技术亦显示MMP-11蛋白在骨肉瘤组织的阳性率显著高于癌旁组织(P0.05)。骨肉瘤细胞中转染MMP-11siRNA可显著降低细胞内源性MMP-11表达水平(P0.05)。敲低MMP-11的表达可显著抑制HOS和Saos-2细胞的增殖及迁移能力,并增加细胞凋亡(P0.05)。结论 MMP-11在骨肉瘤中呈现高表达状态,敲低其表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移并增加细胞凋亡,提示MMP-11在骨肉瘤的发生和发展过程发挥促癌作用。     

微小RNA-125a-5p负性调控基质金属蛋白酶11对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的检测微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)在骨肉瘤细胞及正常成骨细胞(NHOst)中的表达特征,并探讨其通过负性调控基质金属蛋白酶11(MMP-11)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用荧光定量PCR分析骨肉瘤细胞及正常成骨细胞中miR-125a-5p的表达情况。体外转染miR-125a-5p模拟物(mimics)至骨肉瘤细胞系(HOS和Saos-2),并观察其对细胞增殖及凋亡的影响。通过双荧光素酶报告基因试验及Western blot验证miR-125a-5p对MMP-11的负性调控作用。结果 miR-125a-5p在HOS和Saos-2细胞中的表达均显著低于NHOst细胞(P 0. 05)。HOS和Saos-2细胞中转染miR-125a-5p mimics可显著升高细胞内源性miR-125a-5p表达水平(P 0. 05)。过表达miR-125a-5p抑制HOS和Saos-2细胞的增殖,并促进细胞凋亡(P 0. 05)。miR-125a-5p与MMP-11信使RNA(mRNA) 3'-非编码区(3'-UTR)存在互补结合位点,其通过与MMP-11结合而抑制骨肉瘤细胞中MMP-11蛋白的表达(P 0. 05)。结论 miR-125a-5p在骨肉瘤细胞中呈现低表达,过表达miR-125a-5p可通过负性调控MMP-11抑制骨肉瘤细胞的增殖,并促进细胞凋亡,提示miR-125a-5p可作为骨肉瘤新的分子治疗靶点。     

乳腺癌转移抑制蛋白1下调PI3K/AKT1通路抑制骨肉瘤细胞转移

目的 探讨乳腺癌转移抑制蛋白1(BRMS1)在骨肉瘤转移中的作用和机制。方法免疫组化检测骨肉瘤组织中BRMS1蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)法检测8例骨肉瘤组织和8个骨肉瘤细胞系BRMS1 mRNA表达的变化;western blot检测正常成骨细胞系(HOSB)及人骨肉瘤细胞系(OS187、COL、LM7、SJSA、MG63、HOS、SAOS-2、CCH-D)和BRMS1蛋白和AKT1蛋白磷酸化的水平;侵袭小室(Transwell)法检测过表达BRMS1的HOS细胞转移能力的变化。结果 骨肉瘤组织中BRMS1蛋白表达较癌旁正常骨组织明显减少。骨肉瘤细胞OS187、COL、LM7、SJSA、MG63、HOS、SAOS-2和CCH-D BRMS1 mRNA和蛋白的表达水平较正常成骨细胞HOSB明显降低,而AKT1蛋白磷酸化水平明显升高。HOS细胞过表达BRMS1后,HOS细胞转移能力和AKT1蛋白磷酸化水平明显降低。运用AKT1蛋白磷酸化抑制剂LY294002明显抑制HOS细胞转移能力。结论 BRMS1可以抑制骨肉瘤细胞HOS细胞转移,其机制可能与抑制AKT1蛋白磷酸化有关。     

MicroRNA-212在前列腺癌中的表达和功能研究

目的检测microRNA-212在前列腺癌组织和细胞株中的表达情况并研究其与前列腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的关系。方法检测前列腺癌标本及细胞系中microRNA-212的表达情况。在DU145和PC3转染microRNA-212 mimics、microRNA-212 inhibitor或者NC阴性对照物,通过MTT、Transwell、流式细胞仪检测其相关生物学情况。结果前列腺癌组织中的microRNA-212表达显著低于癌旁组织。前列腺癌细胞系中microRNA-212较正常前列腺上皮细胞系的表达低。microRNA-212的表达与Gleason评分、脉管侵犯和淋巴结转移密切相关。MTT实验和Transwell实验表明,转染了microRNA-212 mimics的DU145和PC3细胞,其增殖率降低,microRNA-212的上调抑制了DU145和PC3细胞的迁移和侵袭能力。转染了microRNA-212 inhibitor的DU145和PC3细胞则表现出较强的增殖、迁移和侵袭能力。流式细胞仪分析结果表明,转染了microRNA-212 mimics的DU145和PC3细胞的凋亡显著增加,转染了microRNA-212 inhibitor的DU145和PC3细胞凋亡受到抑制。结论前列腺癌组织中microRNA-212表达显著下降,microRNA-212的表达与Gleason评分、脉管侵犯和淋巴结转移密切相关,microRNA-212能够抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭并促进前列腺癌细胞凋亡。     

人骨髓核分化抗原对人骨肉瘤Saos-2细胞凋亡和增殖的影响

[目的]探讨人骨髓核分化抗原(MNDA)对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及凋亡的影响.[方法]逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法定量测定Saos-2细胞中MNDA的mRNA表达差异.将MNDA基因转染Saos-2细胞,应用MTT法测定转染后的肿瘤细胞增殖,流式细胞仪定量检测细胞凋亡程度,没有转染质粒的和转染空质粒的做为对照组.[结果] MNDA的mRNA在骨肉瘤Saos-2细胞中表达明显降低.转染MNDA后人骨肉瘤Saos-2细胞的凋亡程度高于对照组,增殖率低于对照组.[结论]转染MNDA可诱导人骨肉瘤Saos-2细胞发生凋亡,抑制骨肉瘤细胞的增殖率.     

miR-144CCNB1信号调节通路在肝癌增殖、迁移和侵袭作用及相关机制的研究

目的探讨microRNA-144细胞周期蛋白B1(miR-144CCNB1)信号调节通路在肝癌增殖、迁移和侵袭作用及其相关机制。方法以2011年1月~2016年1月我院收治的100例肝癌患者的肝癌组织和癌旁组织为研究标本,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌及其癌旁组织的miR-144表达和CCNB1蛋白表达情况,采用RNA干扰技术沉默CCNB1基因,并将靶向CCNB1的siRNA转染至肝癌细胞系HepG2和QGY-7703中,检测其对肝癌细胞生长、迁移和侵袭的生物学行为的影响。结果肝癌组织中miR-144表达较癌旁组织明显下调,CCNB1蛋白在肝癌组织的表达水平较癌旁组织明显上调,miR-144高表达者预后无瘤生存期较其低表达者明显长,而CCNB1蛋白低表达者无瘤生存期明显长于其高表达者,差异有统计学意义(P0.05);与未处理者和阴性对照模拟物相较,转染CCNB1 siR肝癌细胞CCNB1蛋白表达水平明显下降;与未处理和阴性对照模拟物相较,转染CCBN1 siR HepG2细胞凋亡百分明显升高,转染CCNB1 siR HepG2细胞增殖能力明显下降,转染CCNB1siR HepG2细胞迁移能力明显降低;与阴性对照模拟物和未处理细胞相较,转染CCNB1-siR QGY-7703细胞克隆团数(成瘤能力)明显减少。结论 miR-144CCNB1信号调节通路在肝癌增殖、迁移和侵袭中发挥重要作用,其可能机制为miR-144负向调控CCNB1表达,从而影响肝癌细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为,为肝癌治疗的新靶点提供理论依据。     

人类细胞凋亡芯片筛选骨肉瘤凋亡相关蛋白

目的通过人类细胞凋亡芯片筛选骨肉瘤中表达异常的凋亡相关蛋白,为近一步深入功能机制研究奠定基础。方法应用人类细胞凋亡芯片,筛选骨肉瘤组织及癌旁组织中表达有差异的凋亡相关蛋白。应用ImageJ1.42图片处理软件求出每个孔的灰度值,进行统计分析。结果凋亡相关蛋白Bcl-2、cIAP-2、Clusterin、HSP27、Survivin在骨肉瘤组织中和癌旁组织中都有表达,且其在骨肉瘤组织中的表达水平大于癌旁组织（P〈0.05）。结论凋亡蛋白Bcl-2、cIAP-2、Clusterin、HSP27、Survivin在骨肉瘤组织中表达上调,可能参与骨肉瘤的发病机制。     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的：研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法 ：采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中（分别为过表达组和抑制剂组）,并设置miR阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果：与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达（P<0.05）,而HOXB4在骨肉瘤中高表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞...     

前列腺癌细胞系及组织中α-1,6岩藻糖基转移酶的表达及意义

目的 探讨α-1,6岩藻糖基转移酶(α-1,6 fucocyltransferase,FUT8)在不同前列腺癌细胞系、癌及癌旁组织中的表达差异及其意义.方法 培养前列腺正常上皮细胞(RWPE-1)、4种前列腺癌细胞(22RV1、LNCap、PC-3、DU145)及2种其他类型泌尿系统肿瘤细胞(T-24、786-O),收集15对前列腺癌及癌旁组织,提取总RNA,采用RT-PCR检测不同细胞系、癌及癌旁组织中FUT8 mRNA的表达,并进行差异比较.结果 FUT8 mRNA在前列腺癌细胞系中的表达高于前列腺正常上皮细胞系(RWPE-1)、膀胱癌细胞系(T-24)以及肾癌细胞系(786-O).雄激素非依赖性前列腺癌细胞系(PC-3、DU145)中FUT8 mRNA的表达高于雄激素依赖性前列腺癌细胞系(LNCap);前列腺癌转移灶细胞系(PC-3、DU145)中FUT8 mRNA的表达高于前列腺癌原发灶细胞系(22RV1).同时还发现,FUT8 mRNA在前列腺癌组织中的表达高于癌旁组织.以上差异均有统计学意义(P<0.01).结论 FUT8在不同前列腺癌细胞系、癌及癌旁组织中存在差异表达,可能参与前列腺癌的雄激素非依赖性转化及进展转移等过程.     

慢病毒介导的microRNA-21-siRNA对肝癌细胞系HepG2生物学行为的影响

目的 通过构建慢病毒介导( lentivirus,LV)的microRNA-21-siRNA,探讨下调microRNA-21对肝癌细胞系HepG2生物学行为的影响.方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体pGCSIL-GFP,将重组microRNA-21-RNAi-LV转染肝细胞癌HepG2.体外设为干扰组(microRNA-21 -siRNA,SI组)、阴性对照组(negative control,NC组)和正常组(normal,N组);分别采用聚合酶链反应方法检测microRNA-21目的基因的表达的情况;用噻唑蓝比色法检测增殖情况、transwell小室迁移实验检测迁移情况、Hochest33258凋亡实验检测凋亡情况.体内实验设为SI组和NC组,观察反义microRNA-21对裸鼠移植瘤生长的影响.结果 (1)micmRNA-21 -RNAi-LV可显著降低microRNA-21的表达.(2) MTT实验96h后SI组增殖能力显著低于NC组和N组(P=0.0031,P＜0.05).(3)迁移能力减弱(P =0.0004,P＜0.05).(4)SI组细胞凋亡明显增加,促凋亡基因caspase3基因表达上调(P =0.0002,P＜0.05).(5)各组裸鼠皮下肿瘤生长比较差异无统计学意义(P=0.0624,P＞0.05).结论 microRNA-21 -siRNA通过抑制microRNA-21的表达抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低其迁移能力.     

MDM4表达在肾细胞癌中的临床相关性与作用研究

目的:通过研究肾细胞癌(RCC)组织MDM4的mRNA和蛋白表达水平,分析其与RCC临床病理特征的相关性,并利用细胞系研究MDM4对RCC细胞迁移和侵袭能力的作用,探讨其潜在的作用。方法:选取2014年1月～2017年2月在我院行手术切除治疗的RCC组织标本82例和癌旁组织标本20例为研究对象,应用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测MDM4的表达水平。收集患者性别、年龄、病理分级等临床病理资料,并分析其与MDM4mRNA表达的相关性。体外应用RCC细胞系研究MDM4对RCC细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织相比,MDM4 mRNA和蛋白在RCC组织中表达显著上调。统计学分析发现,MDM4mRNA的表达与RCC病理TNM分期和远隔转移呈正相关(P0.01)。肿瘤细胞系ACHN细胞中MDM4表达显著高于其他肿瘤细胞系及人正常肾小管上皮细胞HK-2(P0.01)。体外沉默MDM4显著抑制ACHN的细胞增殖、迁移和侵袭。结论:MDM4表达与RCC的恶性特征及癌细胞增殖、迁移和侵袭能力密切相关,有望成为RCC的潜在治疗靶点。     

RecQ5表达与骨肉瘤组织恶性程度间的关系分析

目的分析RecQ5在不同组织和细胞上的表达差异,推断RecQ5与组织恶性程度间的关系。方法选取骨肉瘤标本共35例、癌旁组织标本20例及正常骨组织标本20例,通过免疫组织化学染色法检测不同组织中RecQ5的表达情况,并进一步分析其表达程度与骨肉瘤分期的关系;培养hFOB1.19、U2OS和MG-63细胞株,通过Real-timePCR和Westernblot法检测RecQ5的表达程度。结果RecQ5在人骨肉瘤组织中低表达。正常骨组织中,RecQ5的表达阳性率为100%(20/20),在癌旁组织中的表达阳性率为90%(18/20),而在骨肉瘤组织中,RecQ5表达阳性率为68.5%(24/35);正常骨组织、癌旁组织与骨肉瘤组织的RecQ5表达阳性率之间比较差异具有统计学意义(P=0.004),但正常骨组织与癌旁组织之间的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。RecQ5的表达强度随着组织恶性程度的不断增加而逐渐减弱,差异具有统计学意义(P<0.05),且在骨肉瘤组织中,其也随着肿瘤分期增加而表达强度逐渐减弱(P<0.05)。RecQ5在人骨肉瘤细胞株MG-63和U2OS中mRNA和蛋白表达水平较正常人成骨细胞hFOB1.19中低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RecQ5的表达水平与组织的恶性程度呈负相关,RecQ5的缺失与骨肉瘤的发生存在相关性。     

异丙酚通过调控miR-506对骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响

目的:研究异丙酚是否通过调控微小RNA(miRNA/miR)-506影响骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡。方法:骨肉瘤HOS细胞分为NC组(未处理)、Pro-L组(1 μg/mL异丙酚)、Pro-M组(5 μg/mL异丙酚)、Pro-H组(10 μg/mL异丙酚)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-506组(转染miR-506 mimic)、Pro+anti-miR-NC组(转染antimiR-NC+10 μg/mL异丙酚)、Pro+anti-miR-506组(转染miR-506 inhibitor+10 μg/mL异丙酚)。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞增殖,免疫印迹实验(Western blotting)评估细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,Transwell实验检测迁移侵袭,流式细胞术分析细胞凋亡,荧光定量PCR测定miR-506表达。结果:与NC组比较,Pro-L、Pro-M、Pro-H组HOS细胞的抑制率、p21、Bax蛋白水平、凋亡率和miR-506表达水平逐渐增加,CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平、迁移细胞数和侵袭细胞数逐渐减少,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-506组HOS细胞的抑制率、凋亡率、p21、Bax蛋白水平比miR-NC组升高,迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平比miR-NC组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pro+anti-miR-506组较Pro+anti-miR-NC组降低HOS细胞中miR-506表达水平、抑制率、凋亡率、p21、Bax蛋白水平,提高迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论: 1、5、10 μg/mL异丙酚上调miR-506的表达,抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭,并且促进其凋亡。     

骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞介导HOSJ—8603细胞凋亡

目的：探讨骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞（OSS－CTL）对人骨肉瘤细胞系HOS－8603细胞凋亡的诱导作用,以揭示其抗肿瘤机制。方法：OSS－CTL与HOS－8603细胞按不同效靶比共同孵育后,通过电镜观察HOS－8603细胞的超微结构变化,并用流式细胞仪定量检测OSS－CTL与HOS－8603细胞凋亡发生状况。结果：HOS－8603细胞被OSS－CTL攻击后浓缩、深染,致密的染色质沿核膜下凝聚,并有凋亡小体形成。效靶比为1：1、50：1、100：1时,HOS－8603细胞凋亡发生率分别为0．6％、12．4％及21．6％。结论：OSS－CTL可通过诱导人骨肉瘤细胞系HOS－8603发生细胞凋亡起到抗肿瘤作用,且效靶比值增大后靶细胞凋亡的数量有明显增多的趋势。     

长链非编码RNA MALAT1在肝癌中表达及功能研究

目的:探讨长片段非编码RNA(lnc RNA)MALAT1在肝癌中的表达及其的功能。方法:用q RT-PCR方法检测80例肝癌患者手术切除的癌组织及其癌旁组织,以及不同肝癌细胞系(Hep G2、Hep3B、HCCLM3、Hu H7)与正常肝细胞系(L02)中MALAT1的表达。分别用MTT试验、划痕试验、流式细胞术检测肝癌细胞(Hep G2、Hu H7)转染MALAT1 si RNA后增殖、迁移、凋亡的变化。结果:80例配对标本中,72例(90%)肝癌组织MALAT1表达较其癌旁组织明显上调,MALAT1在不同肝癌细胞系中的表达水平均不同程度明显高于正常肝癌细胞(均P0.05);Hep G2、Hu H7转染MALAT1 si RNA后,增殖率均呈时间依赖性降低、划痕愈合能力均明显减弱(均P0.05),细胞凋亡率分别为17.0%、16.41%,而各自的对照组分别为8.89%、6.56%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:MALAT1在肝癌中的表达上调,且可能与肝癌的恶性生物学行为密切相关,对其作用机制的进一步研究,有望为肝癌的治疗找到新的靶点。     

反义 miR-224在结肠癌组织中的表达及其对癌细胞增殖的影响

目的探讨微小 RNA(miRNA)miR-224在结肠癌组织中的表达,以及对体外癌细胞增殖和凋亡的影响。方法收集2011年2月至2014年3月行手术治疗的134例结肠癌和癌旁组织标本,利用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测标本中 miR-224表达情况;对人结肠癌细胞 SW480进行 miR-224反义寡核苷酸转染并培养,利用克隆形成实验和流式细胞仪检测 miR-224反义寡核苷酸对 SW480细胞增殖和凋亡的影响,利用 Real-time PCR 和 Western blot 法对不同转染组细胞中 Bcl-2表达情况进行检测。结果miR-224在结肠癌组织中相对表达水平显著高于癌旁组织(P <0.05);反义 miR-224组人结肠癌 SW480细胞克隆形成率显著低于对照组,而细胞凋亡指数则高于对照组,差异均具有统计学意义(P <0.05);反义 miR-224组细胞 Bcl-2相对表达量和蛋白相对表达量均低于对照组(P <0.05)。结论miR-224在结肠癌组织中呈高表达,减少 miR-224表达可抑制结肠癌细胞增殖,并加速细胞凋亡,有可能成为结肠癌早期发现及基因治疗的新靶位。     

碳水化合物反应元件结合蛋白在肝癌中表达与作用

目的:探讨碳水化合物反应元件结合蛋白(Ch REBP)在肝癌(HCC)中的表达与生物学作用。方法:分别用q RT-PCR、免疫组化、Western blot法检测73例HCC组织与癌旁组织以及多种HCC细胞系与正常肝细胞系中Ch REBP的m RNA与蛋白表达;观察si RNA干扰Ch REBP表达后,HCC细胞周期、凋亡以及增殖的变化。结果:Ch REBP的m RNA与蛋白表达在HCC组织中表达均明显高于癌旁组织、在所有HCC细胞系中均明显高于正常肝细胞系(均P0.05)。干扰Ch REBP表达后,HCC细胞发生明显G1-S期阻滞、细胞增殖明显降低(均P0.05),但细胞凋亡未发生明显变化(P0.05)。结论:Ch REBP在HCC中表达升高,且可能通过调控细胞周期促进HCC细胞的增殖,从而在HCC的发展中起了重要的作用。     

微小RNA-146a在骨肉瘤中的表达及意义

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-146a在骨肉瘤中表达的意义和miRNA-146a对骨肉瘤的作用机制.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测骨肉瘤标本和癌旁组织中miRNA-146a表达量,并采用Cox回归模型分析其与患者生存期的相关性.质粒转染miRNA-146a进入骨肉瘤细胞TE85中,检测转染后细胞活性、细胞凋亡和细胞中YY1、Fas蛋白的表达.结果 癌旁组织和骨肉瘤组织中miRNA-146a的表达量分别为1.213±0.525和0.734±0.263,差异有统计学意义(P＜0.05).miRNA-146a的表达量与患者的生存时间呈正相关(P＜0.05).转染miRNA-146a24 h后,50、100 nmol/L组人骨肉瘤细胞活性明显降低至(65.161±5.528)％和(40.385±8.442)％(P＜0.05),细胞凋亡率分别明显升高至(38.671±12.415)％和(59.513±9.058)％ (P＜0.05),细胞中YY1蛋白表达量明显降低(分别为0.472±0.014和0.272±0.005,P＜0.05),而Fas蛋白表达量明显升高(0.292±0.010、0.584±0.006,P＜0.05).转染miRNA-146a 48 h后,与对照组比较,50、100 nmol/L组人骨肉瘤细胞活性、凋亡率、YY1表达量和Fas蛋白表达量变化与转染24 h的变化相似.结论 miRNA-146a对骨肉瘤的作用是通过下调YY1的表达,而上调Fas蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖同时促进骨肉瘤细胞的凋亡.     

雷帕霉素对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察雷帕霉素(RAPA)对人骨肉瘤细胞U-2OS和Saos-2增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 体外培养骨肉瘤细胞株U-2OS和Saos-2;噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测不同浓度雷帕霉素对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响;Western blot检测雷帕霉素作用后骨肉瘤细胞Fas蛋白表达的变化.结果 MTT检测显示雷帕霉素可抑制入骨肉瘤细胞增殖,在雷帕霉素浓度达到20 nmol/L时,抑制作用显著提高(P＜0.05),增殖抑制率分别达到31.2％和28.7％.流式细胞检测显示在雷帕霉素浓度达到20 nmol/L时,其诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用显著增强(P＜0.05).Western blot检测显示经雷帕霉素作用48 h后的骨肉瘤细胞Fas蛋白的表达明显增强.结论 雷帕霉素对入骨肉瘤细胞株U-2OS和Saos-2的增殖有抑制作用并可诱导其发生凋亡,其可能是通过上调Fas蛋白的表达而发挥作用的.     

过表达FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

目的探讨FOXO1对骨肉瘤细胞侵袭迁移能力的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和人骨肉瘤细胞U2OS、MNNG/HOS中FOXO1的mRNA表达水平。利用pcDNA3.1-FOXO1重组质粒建立FOXO1过表达的细胞模型,空载质粒(pcDNA3.1-vector)作为对照,qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。确定成功过表达FOXO1基因后利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测骨肉瘤细胞的增殖能力(吸光度值),Transwell实验体外检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力,并采用qRT-PCR和western blot的方法检测基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达变化。结果人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、U2OS中FOXO1的mRNA的表达水平显著低于人成骨细胞hFOB 1.19(P0.05),且骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1的表达水平较低。重组质粒pcDNA3.1-FOXO1转染后,骨肉瘤细胞U2OS的FOXO1表达水平显著升高。与对照组(pcDNA3.1-vector)比较,U2OS-FOXO1过表达组的细胞的增殖能力降低(P0.05),侵袭迁移和迁移能力降低,MMP9较对照组表达水平明显降低(P0.05)。结论骨肉瘤细胞中FOXO1表达水平明显低于正常成骨细胞。过表达FOXO1可能通过下调MMP9抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力。