致敏豚鼠气道及肺组织fos基因的表达

哮喘是呼吸系统常见病之一，其发病机制至今未明。有研究表明，哮喘与原癌基因调控有关［１］。我们通过本实验探讨原癌基因在哮喘发病中的作用，拟从基因水平探索哮喘的发生机制。一、材料与方法盐酸胍、ＳＤＳ购自美国Ｓｉｇｍａ公司，［α－３２Ｐ］ｄＡＴＰ（放射比活度为１１１ＧＢｑ／ｍｍｏｌ）为北京福瑞公司产品。ｃ－ｆｏｓ质粒及ＦＯＳ蛋白抗体由本校解剖教研室提供。实验动物及模型建立：选用３５０－４５０ｇ健康豚鼠。（１）哮喘组：动物１８只用１％卵蛋白１．５ｍｌ腹腔注射致敏，两周后用１％卵蛋白超声雾化吸入诱发哮喘，…     

致敏豚鼠气道及肺组织c—myc基因的表达与哮喘发病的关系

研究原癌基因在哮喘发病中的作用。方法以卵蛋白致敏诱发豚鼠哮喘建立实验模型。用分子杂交技术分别观察正常及哮喘发作后ｃ－ｍｙｃ在豚鼠气道及肺组织中的表达水平。结果：原癌基因ｃ－ｍｙｃ在豚鼠哮喘发作后即刻表达增强，且呈时间依赖关系，并可被糖皮质激素部分抑制。     

原癌基因表达在哮喘气道重塑中的作用

目的观察原癌基因表达在哮喘气道重逆中的作用。方法卵蛋白致敏豚鼠 建立哮喘模型。Dot-blot,North-ern-blot分子杂交及免疫组织化学技术观察豚鼠气道上皮,肺组织中原癌基因c-fos,c-myc,c-jun和c-sis的表达及其与气道重塑的关系。结果：正常豚鼠气道及肺组织中c-fos和c-myc mRNA无或很少表达,哮喘发作后,豚鼠气道上皮及肺组织c-fos和c-mycmRNA的表达明显增加;免疫组织化学染色显示Fos,Myc,Jun及Sis在政党豚鼠低水平表达,4种原癌基因产物表达增,国,阳性反应细胞主要分布于气道上皮细胞胞质、气道及细支气的上皮细胞胞核及浸润的炎症细胞中,病理结果显示气道粘膜及小鼠气管平滑肌周围淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞浸润,气道平滑肌显著增生,结论原部达在气道重逆过程中有重要作用。     

哮喘豚鼠肺组织Eotaxin基因表达与嗜酸粒细胞活化相关

目的　探讨哮喘发病中嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)基因表达与嗜酸粒细胞 (Eos)活化的关系及糖皮质激素的作用 .方法　将豚鼠 30只随机分为哮喘组、地塞米松治疗组及正常对照组 .卵蛋白致敏及诱发哮喘 ;制备豚鼠肺组织病理标本 ,HE染色 ;免疫组织化学技术观察 Eos阳离子蛋白 (ECP)在哮喘气道粘膜中的表达 ;原位分子杂交方法观察肺组织中 Eotaxin m RNA的表达 ;将二者行相关性分析 .结果　与地塞米松治疗组、正常对照组相比较 ,哮喘组豚鼠肺组织中 ECP细胞 (172± 4 4 )· mm- 2与 eotaxin m RNA(196±5 7)· mm- 2表达明显增强 (P<0 .0 0 1) ,Eos活化增多 ;且二者呈正相关性 (r=0 .74 4 7,P=0 .0 135 ) ;糖皮质激素对 Eotaxinm RNA(2 0± 14 )· mm- 2 ,ECP(2 6± 19)· mm- 2 表达有显著的抑制作用 .结论　哮喘豚鼠肺组织中 Eotaxin表达增强 ,Eos活化增多 .糖皮质激素能抑制 Eotaxin表达及 Eos活化     

哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞Fas表达及药物的影响

目的：研究哮喘时嗜酸性粒细胞凋亡与Ｆａｓ表达的关系及药物地它们的影响。方法：应用地塞米松（ＤＭ）、雷公藤甲素及氨茶碱（ＡＭ）干预哮喘豚鼠,以ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡,以ＲＴ－ＰＣＲ及原位杂交检测ＦａｓｍＲＮＡ表达。结果：哮喘组Ｅｏｓ凋亡率较正常对照组显著降低。应用ＤＭ、ＴＰ、ＡＭ后均显著增加。正常豚鼠Ｅｏｓ可检测到ＦａｓｍＲＮＡ表达,不同Ｅｏｓ表达差异不显著。哮喘组ＦａｓｍＲＮＡ明显减少,以低密度     

哮喘豚鼠肺组织PKC的表达及对TXA2释放的影响

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在哮喘发病中的作用。方法：采用卵蛋白雾化吸入致敏哮喘模型，在诱发哮喘２４ｈ后放射性同位素标记方法测定哮喘豚鼠肺组织总ＰＫＣ活性及膜活性变化，采用免疫组织化学的方法检测肺组织ＰＫＣ的表达，体外检测ＰＫＣ活化剂ＰＭＡ和抑制剂Ｈ－７对肺组织血栓烷Ａ２（ＴＸＡ２）释放的影响。结果：①哮喘组肺组织ＰＫＣ活性显著增加；②ＰＭＡ引起了肺组织ＴＸＡ２的释放的增加，而Ｈ－７则抑制了ＰＭ     

小青龙汤对哮喘豚鼠肺及胸腺的神经生长因子表达作用研究

目的 探讨小青龙汤时哮喘豚鼠肺及胸腺的神经生长因子(NGF)表达的影响.方法 采用免疫组织化学和RT-PCR法.观察正常对照组、哮喘组、小青龙汤组、氨茶碱组及小青龙汤组配氨荼碱组的豚鼠肺和胸腺NGF表达的变化.结果 哮喘组豚鼠NGF在肺和胸腺表达明显高于正常组,差异具有统计学意义(P相似文献   

NK2受体mRNA在哮喘豚鼠肺组织中表达的研究

目的 研究NK2受体mRNA在哮喘豚鼠气管、支气管及肺组织中的表达.方法 用吸入卵蛋白致敏及激发诱喘方法制作哮喘豚鼠20例;正常对照组10例,以生理盐水替代卵蛋白雾化溶液吸入.用RT-PCR的方法检测肺组织中NK2受体mRNA相对含量;用原位杂交的方法在显微镜下观察NK2受体mRNA在气管、支气管及肺组织中表达的部位及强度同时用光密度对NK2受体mRNA相对含量进行分析.结果 NK2受体mRNA主要分布在气管黏膜下及平滑肌周围;哮喘豚鼠肺组织中NK2受体mRNA相对含量为(1.04±0.112),高于正常对照组豚鼠(0.796±0.30),差异有统计学意义(P＜0.05);哮喘豚鼠气管、支气管黏膜下和平滑肌周围NK2受体mRNA表达的相对含量[OD(9.339±0.817 7)]较正常对照组[OD(2.265±0.74)]明显增高(P＜0.05).结论 哮喘豚鼠气管、支气管黏膜下平滑肌周围NK2受体mRNA相对含量表达上调,肺组织中NK2受体mRNA相对含量增多.     

哮喘豚鼠气道上皮细胞Fas、NOS-2的表达

目的 :检测哮喘豚鼠气道上皮细胞Fas、NOS 2的表达 ,评价两者在哮喘发病机制中的作用。方法 :2 4只豚鼠随机分为 3组 :①哮喘组。用 10 %卵白蛋白 1ml腹腔注射致敏 ,2周后 ,用 1%卵蛋白超声雾化吸入 ,连续激发10次 ,复制豚鼠哮喘模型。②地塞米松 (Dxm)处理哮喘组。诱喘同哮喘组 ,在每次激发前 5min腹腔注射Dxm 0 .5mg/kg。③正常对照组。用生理盐水代替诱喘剂。应用免疫组化方法 (SP法 )检测气道上皮细胞Fas、NOS 2的表达。结果 :哮喘组豚鼠气道上皮细胞Fas的表达上调 [0 .2 2 37± 0 .0 32 4 ,与正常组 (0 .16 6 6± 0 .0 2 86 ) ,P <0 .0 0 1];Dxm促进Fas的表达 (0 .2 4 19± 0 .0 36 2 ,与正常组相比 ,P <0 .0 0 1;但与哮喘组相比 ,差别无显著性 ) ;正常对照组有较少的阳性表达。哮喘组豚鼠气道上皮细胞NOS 2的表达明显上调 (0 .2 5 6 7± 0 .0 345 ) ,Dxm组阳性信号稍弱 (0 .2 318± 0 .0 2 2 9) ,正常对照组有较少的阳性表达 (0 .182 9± 0 .0 2 5 9)。但哮喘组与Dxm组之间差别无显著性 (P >0 .0 5 )。哮喘豚鼠气道上皮细胞NOS 2、Fas的改变呈总体正相关 (r =0 .789,P <0 .0 1)。结论 :NOS 2为上皮损伤性因素 ,Fas可能为修复性因素。两者表达的同时上调说明气道上皮的损伤与修复同时进行     

RT-PCR检测NK1mRNA在哮喘豚鼠气道表达的研究

目的 应用RT-PCR半定量法检测哮喘豚鼠气道神经激肽1受体(NK1)mRNA表达的相对含量.方法 用卵蛋白超声雾化法制作哮喘豚鼠模型,随机分成正常对照组及诱喘组.RT-PCR技术检测(NK1)mRNA,图像分析测定(NK1)mRNA的相对含量.结果 诱喘组(NKl)mRNA的相对含量较正常组明显增多.结论 NK1参与了卵蛋白诱发哮喘的发病机制.     

Gqα在哮喘豚鼠肺组织中的表达变化及胸腺素对其影响

哮喘的发病机制复杂,已知有众多细胞因子、血活性物质参与,但始终未能找到关键的致病因子或物质。Ｇ蛋白是联接多种细胞膜受体与选择性效应器之间信号转导的重要蛋白质,它的水平及活性变化调节着体内绝大多数生理、生化、免疫反应和与其相关的基因表达[1]。本试验通过观察哮喘豚鼠肺组织鸟嘌呤核苷酸结合蛋白ｑα亚基(Ｇｐｒｏｔｅｉｎｑαｓｕｂｕｎｉｔ,Ｇｑα)含量的变化,旨在深入了解哮喘发病的分子机制,进而从分子水平探讨胸腺素治疗哮喘的理论依据。1　材料与方法1.1　动物模型　　雄性豚鼠15只(本校实验动物中心提供),体重300～450ｇ…     

薄荷醇下调肺组织P物质改善哮喘气道炎症及气道高反应性的研究

目的 探讨雾化吸入薄荷醇对哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的作用及其对肺组织P物质(substance P,SP)含量的影响.方法 按随机数字表法将30只6～8周龄BALB/c雌鼠分为对照组、哮喘组及薄荷醇治疗组,哮喘组和薄荷醇治疗组用鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发建立哮喘模型,薄荷醇治疗组于每次雾化激发前给予1.6％薄荷醇溶液5 mL雾化吸人30 min,连续10 d,对照组用PBS替代.于末次雾化24 h内行肺功能检测小鼠气道高反应性;48 h内灌取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)计数细胞总数及细胞分类;肺组织HE染色观察肺部病理改变;ELISA检测血清总免疫球蛋白E(IgE)水平及肺匀浆SP含量;免疫组化染色检测肺组织SP的表达.结果 哮喘组气道高反应性明显高于对照组(P＜0.05),而薄荷醇治疗组较哮喘组显著降低(P＜0.05);哮喘组BALF细胞总数及嗜酸性粒细胞绝对计数均较对照组明显增加(P＜0.01),薄荷醇治疗组较哮喘组显著减少(P＜0.01);HE染色显示,哮喘组支气管和血管周围炎症细胞浸润明显,薄荷醇治疗组较哮喘组明显减轻;ELISA结果显示,哮喘组血清总IgE水平及肺匀浆SP含量均较对照组升高(P＜0.01),薄荷醇治疗组较哮喘组减轻(P＜0.05);免疫组化染色结果显示,哮喘组肺组织SP在气道上皮细胞及血管周围强阳性表达,薄荷醇治疗组中度阳性表达.结论 雾化吸入薄荷醇能减轻哮喘小鼠气道炎症及降低气道高反应性,可能与减少SP含量进而减轻肺部神经源性炎症相关.     

哮喘平冲剂对哮喘豚鼠模型肺组织形态学的影响

目的:探讨哮喘平冲剂对哮喘豚鼠模型肺组织的形态学影响。方法:采用卵蛋白致敏哮喘豚鼠模型,观察实验过程中哮喘豚鼠的一般情况及肺组织形态学变化。结果:各治疗组豚鼠的一般情况明显优于模型组,且经哮喘平冲剂治疗后哮喘豚鼠气道炎症细胞明显减少;支气管平滑肌未肥厚;哮喘平冲剂能明显改善支气管上皮损伤,粘液腺增生等病理改变。结论:哮喘平冲剂治疗哮喘的作用机理与改善肺组织形态学变化有关。     

哮喘豚鼠气道内NK-1R mRNA表达及其含量的研究

目的:研究哮喘豚鼠气道内神经激肽1受体(NK-1R)mRNA的分布及相对含量.方法:用卵蛋白超声雾化法制作哮喘豚鼠模型;原位杂交技术检测NK-1R mRNA,光镜观察其在气道内表达的部位.图像分析测定NK-1R mRNA的相对含量.结果:哮喘组NK-1R mRNA表达程度明显高于正常组;NK-1RmRNA分布于气管上皮细胞上层细胞表面、黏膜下层、血管周围上皮细胞、炎性细胞的表面和平滑肌细胞、腺体细胞表面.结论:NK-1R参与了卵蛋白诱导的哮喘豚鼠发病机制.     

豚鼠哮喘模型的气道反应性测定

豚鼠哮喘模型的气道反应性测定Ａｇｕｉｎｅａｐｉｇｍｏｄｅｌｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅａｉｒｗａｙｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓｉｎａｓｔｈｍａ王长征，郭先健，王顺朝（第三军医大学新桥医院）６３００３７气道高反应性（ＢＨＲ）是仍罹患哮喘症状的支气管哮喘患者的...     

哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1的表达与气道炎症关系的研究

目的研究哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1(STAT1)的表达及动态变化,探讨STAT1蛋白与哮喘气道炎症的相关性及地塞米松的影响.方法 48只豚鼠随机分为6组,卵白蛋白腹腔注射与雾化吸入诱发豚鼠哮喘发作,在激发后0 h、24 h、72 h、5 d,以及地塞米松治疗后第5 d,测定哮喘豚鼠支气管粘膜周围肺组织嗜酸粒细胞(EOS)浸润与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞数量, 酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中γ-干扰素浓度,免疫组化测定哮喘豚鼠气道上皮细胞中STAT1表达.结果豚鼠在诱喘后各个时相(0 h、24 h 、72 h及5 d) BALF中嗜酸粒细胞的变化与支气管粘膜肺组织EOS浸润密度正相关(r=0.815,P＜0.001).气道上皮细胞中STAT1表达与支气管粘膜周围肺组织EOS浸润及BALF中EOS数量均呈正相关(r=0.752,P＜0.001; r=0.692,P＜0.01) .地塞米松能抑制上皮细胞STAT1表达(5 d与治疗组相比,P＜0.01).BALF中γ-干扰素浓度与气道上皮细胞STAT1表达呈负相关(r=-0.499,P＜0.05).结论支气管哮喘存在支气管上皮细胞STAT1的持续活化及过度表达,并与嗜酸粒细胞聚集增多有密切关系.     

哮喘大鼠肺内神经生长因子表达与气道炎症的相关性

目的:探讨哮喘大鼠肺内神经生长因子(NGF)与气道炎症相关指标的关系,为抗NGF治疗哮喘提供实验数据.方法:48只SD大鼠随机等分为:对照组、哮喘组和NGF阻断组.光镜下测量支气管基底膜厚度及计数黏膜下成纤维细胞的数目.HE染色观察气道病理改变,碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸的含量并以此计算胶原蛋白的含量,ELISA法检...     

糖皮质激素对哮喘豚鼠肺组织T-bet基因表达的影响

目的 探讨哮喘豚鼠肺组织中T-bet基因m-RNA的表达水平，并观察了糖皮质激素对T-bet基因表达的调节作用。方法 采用RT-PCR技术，检测哮喘豚鼠肺组织中T-bet基因表达水平及糖皮质激素对该基因表达的影响。结果 哮喘组肺组织中T-bet基因的表达水平较低，经糖皮质激素干预后哮喘豚鼠肺组织中T-bet基因的表达水平显著增高。糖皮质激素治疗组肺组织中T-bet基因的表达水平和哮喘组间有显著性差异（P〈0．001）。结论 糖皮质激素可上调哮喘豚鼠肺组织中T-bet基因表达水平低下。     

中药泡桐花浸膏对哮喘豚鼠肺组织作用的病理学研究

目的　观察中药泡桐花对哮喘豚鼠肺病理组织学的影响。方法　常规制备泡桐花浸膏 ,分别观察泡桐花浸膏对卵清白蛋白所致豚鼠诱喘潜伏期、支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞分类计数及对豚鼠肺组织病理学的影响。结果　泡桐花浸膏能明显延长豚鼠诱喘潜伏期 ,优于地塞米松 (P <0 .0 0 1) ;对肺组织炎性细胞浸润有明显的抑制作用。能减轻炎症反应对哮喘豚鼠肺组织结构的破坏。结论　中药泡桐花浸膏能够明显改善哮喘豚鼠肺组织的病理变化 ,对哮喘豚鼠有显著的治疗作用