转染TNFα基因对胶质瘤细胞致瘤性的影响

目的 研究转染肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）基因的胶质瘤的致瘤性。方法 运用ＭｏＭＬＶ逆转录病毒载体,将ＴＮＦα基因转导至人胶质瘤细胞ＳＨＧ－４４,用Ｇ４１８筛选出阳性细胞克隆,以细胞培养检测细胞生长抑制,以裸鼠接种研究其致瘤性。结果 转染细胞培养上清液中ＴＮＦα含量分别为（５１９８．７±３７５７．４）和（３２１７．４±１１８０．６）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ〈０．０５）,其生物活性达３２０．０ｕ／ｍｌ。运用ＲＴ     

肿瘤坏死因子α基因转导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性研究

应用脂质体转染技术构建能表达肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒。采用鱼精蛋白促进法,将重组病毒介导ＴＮＦ－α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＧＩＬ）。在体外,转染后的ＧＩＬ（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）的抗肿瘤活性比ＧＩＬ＋ＩＬ－２强２～５倍。在荷瘤裸鼠体内,ＴＮＦ－α／ＧＩＬ能显著抑制肿瘤生长。因此,ＴＮＦ－α基因转染的人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）是脑胶质瘤免疫基因治疗的一种有效的效应细胞     

肿瘤坏死因子α基因转导人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活 …

应用脂质体转染技术构建能表达肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒。采用鱼精蛋白促进法,将重组病毒介导ＴＮＦ－α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＧＩＬ）,在体外,转染后的ＧＩＬ（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）的抗肿瘤活性比ＧＩＬ＋ＩＬ－２强２￣５倍,在荷瘤裸鼠体内,ＴＮＦ－α／ＧＩＬ能显著抑制肿瘤生长,因此,ＴＮＦ－α基因转染的人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＮＦ－α／ＧＩＬ）是脑胶质瘤免疫基因治疗的     

外源p53基因和TNFa基因转导对膀胱癌细胞在裸鼠体内的生长抑制

通过逆转录病毒载体将野生型ｐ５３基因、ＴＮＦａ基因单独或与ＩＬ－６基因连接（ＴＮＦＩＬ－６）分别导入膀胱癌细胞株ＥＪ和ＢＩＵ－８７．裸鼠致瘤试验和体外生长实验显示：ｐ５３基因转染组细胞接种裸鼠后９周无肿瘤生长，体外生长速率明显降低，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示Ｈ－ｒａｓ基因表达明显低于非转染组细胞，ＴＮＰａ基因和ＴＮ刊ＩＬ－６基因转染组裸鼠瘤体积明显小于对照组，体外生长速率与对照组无显著差别，两种细胞因子对Ｈ－ｒａｓ基因表达无影响。     

肿瘤坏死因子α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的实验研究

采用脂质体转染技术将能表达肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒质粒ｐＬ（ＴＮＦ－α）ＳＮ导入病毒包装细胞ＰＡ３１７，在细胞培养上清液中得到重组病毒，滴度为１．４×１０９ＣＦＵ／Ｌ。将此病毒上清液感染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），用Ｇ４１８筛选出能表达标记基因ＮｅｏＲ的阳性克隆，ＥＬＩＳＡ法测得ＮｅｏＲ阳性ＴＩＬ培养上清液中存在ＴＮＦ－α，可达５３０ｎｇ／Ｌ，Ｌ９２９依赖细胞法并测出上清液中有ＴＮＦ－α生物学活性。结果表明，我们构建的重组逆转录病毒可介导ＴＮＦ－α基因在人脑胶质瘤ＴＩＬ中的表达     

重组人白介素10对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察重组人白介素１０（ｒｈＩＬ－１０）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法 离体培养大鼠胸主动脉 ＶＳＭＣ并分别接受不同浓度ｒｈＩＬ－１０、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）的刺激,采用ＭＴＳ／ＰＥＳ 法确定ＶＳＭＣ的增殖状态并与对照组比较。结果　与对照组相比,ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ均对ＶＳＭＣ增殖具有明显的刺 激作用（Ｐ＜０．０５）。单独应用ｒｈＩＬ－１０对血管平滑肌细胞生长没有影响。在ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ分别刺激下,ｒｈＩＬ－１０均可 抑制ＶＳＭＣ的生长（Ｐ<０．０５）。结论　ｒｈＩＬ－１０可抑制细胞因子和生长因子诱导的ＶＳＭＣ增殖。     

前列腺素E2对跨膜型和分泌型肿瘤坏死因子胞毒作用的影响

研究比较前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）对两型肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）胞毒效应。跨膜型ＴＮＦα（ＴＭ－ＴＮＦα）和分泌型ＴＮＦα（Ｓ－ＴＮＦα）在杀伤靶细胞的同时,可引起靶细胞释放大量ＰＧＥ２（Ｐ〈０．０１）。用环氧化酶抑制剂消炎痛可部分或大部分阻断ＴＭ－ＴＮＦα诱导靶细胞产生的ＰＧＥ２（Ｐ〈０．０１）并县也可抑制ＴＭ－ＴＮＦα的细胞效应（Ｐ〈０．０１）,其抑制程度与ＰＧＥ２阻断程度一致。但消炎痛却不能     

通痹灵对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞产生IL-1、TNF-α及PGE2的影响

为探讨中药复方制剂通痹灵（以桂枝芍药知母汤为基础）对佐剂性关节炎大鼠（ＡＡ）滑膜细胞分泌白细胞介素１（ＩＬ－１）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）和前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的影响,采用大鼠膝关节滑膜细胞原代培养的方法,检测脂多糖（ＬＰＳ）诱导关节滑膜细胞培养上清中ＩＬ－１、ＴＮＦ－α的活性和ＰＧＥ２的含量。结果：ＡＡ大鼠滑膜细胞培养上清中ＩＬ－１、ＴＮＦ－α的活性和ＰＧＥ２的含量高于正常组（Ｐ＜０．０１）;通痹灵可使ＡＡ大鼠滑膜细胞异常升高的ＩＬ－１、ＴＮＦ－α和ＰＧＥ２分泌功能恢复正常（与ＡＡ组比Ｐ＜０．０１,与正常组比Ｐ＜０．０５）;甲氨喋呤（ＭＴＸ）也在一定程度上下调了滑膜细胞的分泌功能（与ＡＡ组比Ｐ＜０．０１,与正常组比Ｐ＜０．０５）;消炎痛对ＰＧＥ２的产生具有明显的抑制作用（与ＡＡ组比Ｐ＜０．０１,与正常组比Ｐ＜０．０１）,但进一步上调了ＡＡ大鼠滑膜细胞分泌ＩＬ－１、ＴＮＦ－α的功能（与正常组比Ｐ＜０．０１）。结论：ＩＬ－１、ＴＮＦ－α和ＰＧＥ２在类风湿性关节炎（ＲＡ）发病机理中占有重要地位;通痹灵对ＲＡ的治疗作用可能与其抑制滑膜细胞过度分泌细胞因子及炎症介质有关。     

MTT比色法检测MGC803^T细胞毒效应的研究

用插入突变的膜结合型ＴＮＦ－α基因的重且逆转录病毒载体转染人胃癌细胞ＭＧＣ，获得膜结合型ＴＮＦ－α基因转染阳性的人胃癌细胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３＾Ｔ）。用ＭＴＴ比色法、＾３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测ＭＧＣ８０３＾Ｔ及未转染的人胃癌细胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３＾Ｎ）细胞表面ＴＮＦ－α的细胞毒效应。结果表明，ＭＧＣ８００＾Ｔ对鼠纤维肉瘤细胞Ｌ９２９有杀伤作用，而对照细胞ＭＧＣ８００＾Ｎ无杀伤作用，说明     

通痹灵对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞产生IL—1,TNF—α及PGE …

为探讨中药复方制剂通痹灵（以桂枝芍药和母汤为基础）对佐剂性关节炎大鼠（ＡＡ）滑膜细胞分法白细胞介素１（ＩＬ－１）肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）和前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的影响。采用大鼠膝关节滑膜细胞原代培养的方法,检测脂多糖（ＬＰＳ）诱导关节滑膜细胞培养上清中ＩＬ－１,ＴＮＦ－α的活性和ＰＧＥ２的含量。结果：ＡＡ大鼠滑膜细胞培养上清中ＩＬ－１,ＴＮＦ－α的活性和ＰＧＥ２的含量高于正常组（Ｐ〈０．０１     

多聚甲醛固定法检测MGC803^T细胞膜表面分子功能的研究

用插入突变的膜结合型ＴＮＦ－α基因的重组逆转录病毒载体转染人胃癌细胞ＭＧＣ８０３，获得膜结合型ＴＮＦ－α基因转染的阳性人胃癌细胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３＾Ｔ）。用多聚甲醛固定ＭＧＣ８０３＾Ｔ及未转染的人胃癌组胞ＭＧＣ８０３（ＭＧＣ８０３＾Ｎ），检测其细胞膜表面ＴＮＦ－α的细胞毒活性。结果表明，ＭＧＣ８０３＾Ｔ细胞对鼠纤维肉瘤细胞Ｌ９２９有杀伤作用，而对照细胞ＭＧＣ８０３＾Ｎ无杀伤作用，说明逆转录     

自身免疫性甲状腺炎与肿瘤坏死因子α的关系

探讨肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）在自身免疫性甲状腺炎发病过程中的作用，为深入对该病诊断、治疗的认识提供理论依据。方法分别用酶联吸附法（ＥＬＩＳＡ）、生物活性法检测自身免疫性甲状腺炎患者２５例、Ｇｒａｖｅｓ病患者９例、正常人１８例的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）体外诱生ＴＮＦα的能力。结果自身免疫性甲状腺炎患者ＴＮＦα活性显著高于正常对照组（Ｐ＜０．００１），Ｇｒａｖｅｓ病患者ＴＮＦα活性低于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。两种方法所测ＴＮＦα有较好相关性（ｒ＝０．９７２、Ｐ＜０．００１）。自身免疫性甲状腺炎患者ＴＮＦα与血清总三碘甲状腺原氨酸（ＴＴ３）、游离三碘甲状腺原氨酸反相关（ｒ分别为－０．４３７、－０．４２３，Ｐ均＜０．０５）与抗甲状腺过氧化物酶抗体（ＴＰＯ－Ａｂ）、抗甲状腺球蛋白抗体（ＴＧＡ）正相关（ｒ分别为０．５３、０．５１，Ｐ均＜０．０１）；与患者病程、甲状腺肿大无关。结论ＴＮＦα在自身免疫性甲状腺炎发病过程中起着重要作用     

TNF—α拮抗胰岛素样生长因子—1对人α1（Ⅰ）胶原启动子？…

目的：探讨ＴＮＦ－α对胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）激活人α１（Ⅰ）胶原启动子的作用。方法：构建含不同长短α１（Ⅰ）胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因的重组体ｐＣＯＬＨ１ ０．２７,ｐＣＯＬＨ１ ２．５用脂质体法瞬时转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的人皮肤成纤维细胞中,加入ＩＧＦ－１或（和）ＴＮＦ－α,测定ＣＡＴ活性。结果;１００ｎｇ／ｍｌ ＩＧＦ－１可使转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的ｐＣＯ     

BCG-PSN对荷瘤小鼠IL-2水平及肿瘤生长的影响

将卡介菌多糖核酸（ＢＣＧ＿ＰＳＮ）及肿瘤坏死因子（ＴＮＦ＿α）用于荷肉瘤（Ｓ１８０）小鼠的治疗。结果证明，ＢＣＧ＿ＰＳＮ（０５ｍｇ／ｍｌ）及ＴＮＦ＿α（１０００Ｕ／ｍｌ）均能显著抑制Ｓ１８０实体瘤的生长，抑瘤率分别为５８１０％和３６２５％，抑瘤率与荷瘤鼠脾细胞的ＩＬ＿２诱生水平呈正的直线相关。ＢＣＧ＿ＰＳＮ还能显著延长荷Ｓ１８０腹水瘤鼠的存活期，生命延长率达３１５％。ＴＮＦ可能由于它的毒副作用而使其抑瘤效果低于ＢＣＧ＿ＰＳＮ，且与后者无协同作用。     

肿瘤坏死因子对鼠甲状腺细胞增殖的影响

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对甲状腺细胞生长增殖有何影响尚未定论。本文采用四氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定ＴＮＦ－α对ＦＲＴＬ－５细胞生长增殖的影响，结果显示在不存在ＴＳＨ条件下，ＴＮＦ在２００～２０００Ｕ／ｍｌ范围内对ＦＲＴＬ－５细胞既可明显细胞癌溶解作用，亦无明显促增殖作用，在ＴＳＨ存在条件上，上述剂量ＴＮＦ对ＦＲＴＬ－５细胞增殖有轻－中度抑制作用，说明ＴＮＦ对甲状腺细胞增殖的抑制作用可能主要通过抑制Ｔ     

复方血竭合剂治疗大鼠系膜增生肾小球肾炎的实验研究

目的：观察复方血竭合剂对系膜增生性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）模型大鼠的治疗作用。方法：根据献方法制作ＭｓＰＧＮ动物模型,观察复方血竭合剂对其肾损伤有关指标的作用。结果：复方血竭合剂可明显降低模型大鼠肾小球肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）的活性。结论：复方血竭合剂能抑制系膜细胞（ＭＣ）增生,减少系膜基质的积聚,其作用可能与其抑制肾小球分泌ＴＮＦ－α有关。     

EB病毒LMP与EGF自分泌在鼻咽癌细胞生长中的作用及其相互关系

以ＬＭＰ基因转染ＣＮＥ１细胞为对象，用放射免疫分析（ＲＩＡ）和细胞增殖实验（ＭＴＴ）等方法，研究ＥＢ病毒ＬＭＰ和ＥＧＦ自分泌在高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１生长增殖中的作用和关系。结果示：从细胞培养液中检获ＥＧＦ；细胞可在无血清培养液中生长。说明ＣＮＥ１细胞具有ＥＧＦ自分泌促生长功能。转染ＰＣＭＶα－ＬＭＰＤＮＡ的ＣＮＥ１细胞ＬＭＰ的ＰＣＲ和ＬＭＰ单抗免疫组化检测均为阳性，证明ＬＭＰ基因转染成功。ＥＧＦ自分泌量和无血清培养下ＥＧＦ的促生长反应，ＬＭＰ转染细胞均高于未转染细胞，表明ＥＢ病毒ＬＭＰ可通过促进ＥＧＦ自分泌而促进鼻咽癌细胞生长增殖。     

妊高征患者血浆肿瘤坏死因子和血管内皮生长因子变化及意义

目的测定妊高征患者血浆中肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ, ＴＮＦ）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕ－ｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ, ＶＥＧＦ）水平的变化及意义。方法采用双抗体夹心 ＥＬＩＳＡ法（酶联免疫法）测定妊高征患者（妊高征组）和正常妊娠妇女（对照组）产前血浆ＴＮＦ－α和ＶＥＧＦ水平。结果妊高征组血浆ＴＮＦ－α水平［（８６±２４）ｐｇ／ｍｌ］明显高于对照组［（４７±１６）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０１）;而血浆ＶＥＧＦ水平妊高征组［（２２±１０）ｐｇ／ｍｌ］则明显低于对照组［（３９±１５）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０１）。结论妊高征患者血浆中 ＴＮＦ－α异常升高和ＶＥＧＦ异常降低,可能是妊高征时血管内皮细胞功能异常及妊高征发病中的重要环节之一。     

表皮生长因子受体反义基因转染对人恶性胶质细胞体外生长的影响

目的 探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）反义基因转染对人恶性胶质瘤细胞Ｕ８７ＭＧ体外生长的影响,方法 构建ＥＧＦＲ反义基因表达载体,应用脂质体转染法将其导入Ｕ８７ＭＧ细胞,ＰＣＲ方法鉴定转染单克隆,Ｗｅｓｔｅｍ印迹杂交检测ＥＧＦＲ蛋白表达水平。通过绘制生长曲线和软琼脂集落形成实验测定反义ＥＧＦＲ基因对恶性胶质瘤细胞体外生长的抑制作用,结果 转染反义ＥＧＦＲ基因的细胞克隆株ＡＳ１－ＡＳ６的ＥＧＦＲ蛋白     

EB病毒LMP与EGF自分泌在鼻咽癌细胞生长中的作用及其相互 …

以ＬＭＰ基因转染ＣＮＥ１细胞对象，用放射免疫分析（ＲＩＡ）和细胞增殖实验（ＭＴＴ）等方法，研究ＥＢ病毒ＬＭＰ和ＥＧＰ自分泌在高分化鼻咽细胞株ＣＮＥ１生长增殖中的作用和关系，结果示：从细胞培养液中检获ＥＧＦ；细胞可在血清培养液中生长，说明ＣＮＥ１细胞具有ＥＧＦ自分泌促生长功能，转染ＰＣＭＶα－ＬＭＰＤＮＡ的ＣＮＥ１细胞ＬＭＰ的ＰＣＲ和ＬＭＰ单抗免疫组化检测均为阳性，证明ＬＭＰ基因转染成功，ＥＧＦ自分