厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法选用Survivin siRNA转染和厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,作用48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用,免疫组化法观察Survivin蛋白表达的变化。结果 Survivin siRNA转染和厄洛替尼两者单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549作用48 h后,两种因素单独或联合应用都对细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制率分别为（47.68±4.09）%、（60.28±3.23）%、（78.14±4.34）%,较对照组差别有统计学意义（P〈0.01）,并能明显降低细胞内Survivin蛋白的表达水平,联合应用较两者单独应用对细胞增殖的抑制作用更显著（P〈0.01）,对Survivin蛋白表达的抑制作用更强。结论应用siRNA沉默Survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。     

培美曲塞与厄洛替尼联合或序贯治疗对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨培美曲塞与厄洛替尼联合或序贯对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法以人肺腺癌A549细胞为研究对象,分别应用培美曲塞与厄洛替尼单药、联合及不同序贯方法干预72 h后,MTT法检测细胞增殖及抑制情况,并计算联合指数(CI),流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡情况,蛋白质印迹法(Western印迹法)检测磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)及磷酸化-ATK(p-AKT)的表达情况。结果培美曲塞序贯厄洛替尼组(P-E)对A549细胞增殖的抑制率及凋亡率较高,明显高于培美曲塞(P)和厄洛替尼(E)单药组以及厄洛替尼联合(E+P)或序贯培美曲塞组(E-P)(P均0.05)。E组和E+P/E-P组的G1期细胞所占比例较对照组明显增多(P0.05),P组和P-E组的S期细胞所占比例较对照组明显增多(P均0.05)。各药物干预组细胞凋亡率均较对照组明显增高,且P-E组细胞凋亡率明显高于其他组(P均0.05)。P-E组A549细胞p-AKT及p-EGFR的表达水平均明显低于对照组(P均0.05)。结论培美曲塞可有效抑制肺腺癌A549细胞的增殖作用,且与厄洛替尼序贯应用的协同效果更为明显,其作用机制可能与p-EGFR及p-AKT信号通路相关。     

自噬在厄洛替尼诱导的肺腺癌细胞A549凋亡中的作用

目的探讨自噬对厄洛替尼(Erlotinib,特罗凯)诱导的肺腺癌细胞A549凋亡中的影响。方法用厄洛替尼和(或)自噬抑制剂3甲级腺嘌呤(3-MA)处理人肺腺癌A549细胞系,AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观察细胞酸性自噬泡的变化;Western印迹法检测自噬相关蛋白Beclin1及凋亡相关蛋白Caspase9的表达。结果流式细胞仪检测示厄洛替尼组、3-MA组、厄洛替尼+3-MA组细胞凋亡率为(56.35±0.71)%、(9.47±0.15)%、(78.40±0.52)%。厄洛替尼组经吖啶橙染色后,细胞内酸性自噬泡明显增加,呈明亮的红色荧光,而加入3-MA联合作用后,则上述现象被抑制。Western印迹结果示对照组、厄洛替尼组、3-MA组、厄洛替尼+3-MA组Beclin1和Caspase9相对灰度值分别为0.54±0.03、0.86±0.03、0.37±0.02、0.70±0.04和0.43±0.03、0.77±0.03、0.57±0.04、0.90±0.02。结论厄洛替尼可以诱导肺腺癌细胞A549细胞系凋亡,并可激活其自噬;3-MA可能通过抑制自噬且上调Caspase9的表达增强厄洛替尼对肺腺癌细胞的杀伤作用。     

厄洛替尼对人胰腺癌细胞凋亡及survivin蛋白表达的影响

目的 研究厄洛替尼对人胰腺癌细胞PANC-1凋亡及survivin蛋白表达的影响.方法 培养人胰腺癌细胞,培养液中加入不同浓度厄洛替尼,MTT比色法检测PANC-1细胞增殖变化,流式细胞学检测PANC-1细胞的凋亡率;Western印迹检测survivin蛋白的表达情况.结果 厄洛替尼能明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长,随用药时间的延长和用药浓度的提高,抑制率明显增强(P＜0.05);12.5 μmol/L厄洛替尼作用24、48、72 h的PANC-1细胞凋亡率(％)分别为9.51±1.38,14.50±1.65,16.6±1.89.结论 厄洛替尼通过下调survivin蛋白的表达诱导人胰腺癌细胞PANC-1凋亡,从细胞水平为其抗肿瘤浸润提供了新的治疗思路和实验依据.     

厄罗替尼对肺腺癌细胞凋亡的影响

目的 研究厄罗替尼对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响以及对表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达的影响.方法 采用MTT法检测不同浓度的厄罗替尼对A549细胞的增殖抑制作用;以倒置相差显微镜、流式细胞术、TUNEL法及DAPI荧光染色法检测细胞凋亡;以免疫荧光法分析厄罗替尼对EGFR蛋白表达的影响.结果 厄罗替尼抑制A549生长呈时间浓度依赖性;厄罗替尼处理A549后倒置相差显微镜、DAPI及TUNEL均见到明显的凋亡细胞(P<0.05);药物处理组使细胞发生明显的G1期阻滞(P<0.05);TUNEL检测到200 μmol/L厄罗替尼组细胞凋亡率为(42.13±1.4)%,显著高于对照组(0.82±0.03)%(P<0.05);免疫荧光法表明厄罗替尼明显下调EGFR表达(P<0.05).结论 厄罗替尼杀伤A549细胞的机制与介导细胞凋亡、阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR信号途径有关.     

二甲双胍对肺腺癌耐厄洛替尼细胞株A549ER的耐药逆转作用

目的 探讨二甲双胍对人肺腺癌耐厄洛替尼细胞株A549ER的耐药逆转作用.方法 将人肺腺癌细胞株A549细胞设为亲本组;将耐厄洛替尼细胞株A549ER细胞分为空白对照组、厄洛替尼组、二甲双胍组和联合用药组（厄洛替尼±二甲双胍组）,采用CCK8法检测不同浓度药物作用下各组细胞的50％抑制浓度（IC50）,计算耐药倍数和逆转倍数.采用流式细胞术检测各组A549ER细胞的凋亡率和细胞周期,计算增殖指数.结果 在0 ～ 20 mmol/L浓度范围内,二甲双胍对A549细胞及A549ER细胞均有生长抑制作用,抑制率随二甲双胍浓度升高而增加.厄洛替尼对A549细胞和A549ER的IC50分别为15.15 μmol/L和118.8 μmol/L,A549ER的耐药倍数为7.84.联合用药组A549ER细胞IC50为73.55 umol/L,耐药倍数为4.85.二甲双胍对A549ER厄洛替尼耐药性的逆转倍数为1.62.空白对照组、厄洛替尼组、二甲双胍组和联合用药组的凋亡率分别为（5.53±3.00）％、（7.51±3.73）％、（10.25 ±4.23）％和（16.92±1.20）％.根据细胞周期结果计算空白对照组、厄洛替尼组、二甲双胍组和联合用药组的增殖指数分别为0.84±0.15、0.78 ±0.10、0.73±0.08和0.60 ±0.09.结论 A549ER细胞较A549细胞对厄洛替尼有明显的耐药性;二甲双胍对A549ER细胞厄洛替尼的耐药性具有逆转作用;二甲双胍通过抑制细胞生长、促进细胞凋亡、减缓细胞周期进程等途径逆转A549ER细胞耐药.     

厄洛替尼抑制核转录因子κB表达及其对胰腺癌细胞侵袭力的影响

目的探讨厄洛替尼对胰腺癌细胞侵袭力的影响及其相关分子机制。方法细胞培养人胰腺癌细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell体外侵袭实验观察厄洛替尼对人胰腺癌细胞株(PANC-1)细胞侵袭力的影响,并用Western印迹检测survivin蛋白的表达情况。结果厄洛替尼对人PANC-1细胞的生长具有抑制作用,并且具有剂量依赖性(P<0.05);厄洛替尼作用于PANC-1胰腺癌细胞上清液条件培养基可显著抑制PANC-1细胞的侵袭;厄洛替尼作用48 h后可以显著抑制胰腺癌PANC-1细胞分泌核转录因子(NF)-κB,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论厄洛替尼通过抑制NF-κB的表达,抑制胰腺癌细胞的侵袭力。     

靶向HER2基因的siRNA联合卡铂对肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的 探讨靶向HER2基因的siRNA联合卡铂对肺腺癌A549细胞的抑制作用.方法 设计并合成3对靶向HER2基因的siRNA(2621组、1724组、1491组),分别转染肺腺癌A549细胞,同时设阴性对照组及空白组.应用实时荧光定量PCR法和免疫组化法检测细胞内HER2 mRNA及其蛋白的表达.应用流式细胞术检测卡铂与HER2 siRNA联合应用时肺癌A549细胞的凋亡率.结果 2621组和1724组HER2 mRNA及蛋白表达均低于1491组和阴性对照组.流式细胞术检查显示,各组间细胞凋亡率比较P＜0.01,HER2 siRNA+卡铂组细胞的凋亡率均高于对应浓度的卡铂组.结论 siRNA能抑制HER2基因在肺癌A549细胞中的表达,并与卡铂协同诱导癌细胞凋亡.     

厄洛替尼联合放疗对MKN45细胞株的影响

目的:观察厄洛替尼联合放疗对人胃癌MKN45细胞周期和凋亡的影响,了解厄洛替尼对放疗增敏的作用机制.方法:通过MTT法和集落形成实验,检测厄洛替尼和放射线对MKN45细胞的生长抑制作用,计算出半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)和放射生物学参数平均致死剂量(mean lethal dose,D0)、准阈剂量(quasi-threshold,Dq)值,得出放射增敏比;流式细胞仪检测MKN45细胞经厄洛替尼及联合放射线处理后细胞的凋亡率及周期分布情况;Westernblot法检测厄洛替尼及联合放射线对MKN45细胞的Bax与Bcl-2蛋白表达的影响.结果:厄洛替尼及放射线均能抑制MKN45细胞的生长,随用药浓度或剂量的增高,抑制作用增强(P<0.01).厄洛替尼与放射线联合对MKN45细胞的抑制作用大于单药和单纯照射(P<0.01);两者联合使S期细胞比率明显降低,放射敏感的G2/M期和G0/G1期细胞比率明显增加(71.87±0.77vs60.72±0.26,P<0.01),细胞凋亡率增加;厄洛替尼联合放射线作用于细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达则明显增加.结论:厄洛替尼通过增加G2/M和G0/G1期细胞比率,降低Bcl-2、升高Bax蛋白表达,从而降低Bcl-2/Bax比率,增加细胞凋亡,以此提高MKN45细胞的放射敏感性.     

肺腺癌A549细胞KDR基因沉默后对厄罗替尼敏感性的影响

目的研究激酶功能区受体(KDR)基因沉默对人肺腺癌A549细胞增殖和对化疗药物厄罗替尼敏感性的影响。方法设计合成KDR的si RNA序列,LipofectamineTM2000转染人A549细胞。RT-PCR和Western印迹检测KDR在干扰后m RNA和蛋白的表达情况,通过流式细胞仪检测细胞周期。MTT法和细胞克隆形成试验观察KDR基因沉默后A549细胞对厄罗替尼的敏感性。结果 KDR基因沉默48 h后,A549细胞的KDR基因和蛋白表达明显降低(P<0.05)。细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数明显减少(P<0.05)。KDR基因沉默组细胞对厄罗替尼的敏感性显著性增强。结论 KDR特异性si RNA能显著沉默A549细胞KDR基因,抑制细胞增殖,并增强A549细胞对厄罗替尼的敏感性。     

RNAi技术对A549细胞survivin基因表达及顺铂敏感性的影响

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术沉默抗凋亡基因survivin,观察其对人肺腺癌细胞A549增殖以及顺铂药物敏感性的影响.方法 将靶向survivin的基因片段插入到载体后构建重组质粒,将其导入A549细胞,RT-PCR及免疫荧光法分析转染前后A549细胞survivin mRNA及蛋白的表达情况,MTT法检测转染后A549细胞对顺铂的敏感性变化.结果 成功构建pGenesil1.1-survivin重组质粒.转染重组质粒后,A549细胞survivin mRNA和蛋白的表达明显降低;转染前顺铂对A549细胞的IC50明显高于转染后(P＜0.05).结论 靶向survivin的RNAi表达载体能下调survivin基因表达,增强顺铂对A549细胞的药物敏感性.     

survivin—siRNA对肺癌细胞A549增殖抑制的影响

目的探讨survivin—siRNA对肺癌细胞A549的增殖抑制作用。方法将针对survivin的siRNA表达载体与脂质体和pSi—scrambled两个对照组一起分别转染肺癌细胞A549后，利用半定量RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平，MTT法测定细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果转染72h后，实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体对照组的31.1％，蛋白表达水平是脂质体对照组的29．2％。MTT检测实验组细胞的生长速度是脂质体对照组的36．6％，流式细胞术发现实验组G1期细胞比例明显高于两个对照组，而G2期和S期细胞比例减少，细胞出现凋亡。结论利用survivin—siRNA可明显抑制肺癌细胞A549的增殖，细胞受阻于G1期，诱导细胞凋亡。     

PVT1通过促进肿瘤干细胞特性介导肺腺癌细胞PC9厄洛替尼抵抗

目的探究浆细胞瘤转化迁移基因(PVT) 1对肺腺癌肿瘤干细胞特性及厄洛替尼抵抗的影响。方法慢病毒介导转染PVT1干扰载体si PVT1-1及si PVT1-2下调肺腺癌细胞PC9中PVT1的表达作为干扰A组及干扰B组细胞,转染对照载体为对照组细胞。实时荧光定量PCR(q PCR)技术检测PVT1、CD133和CD44 mRNA的表达水平,Western印迹检测CD133和CD44蛋白的表达水平。CCK-8法检测细胞对厄洛替尼的半抑制浓度(IC50),方差分析及SNK-q检验比较各组指标间的统计学差异。结果干扰A组及干扰B组PVT1、CD133和CD44 mRNA的表达水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05)。干扰A组及干扰B组CD133和CD44蛋白表达水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05)。干扰A组及干扰B组厄洛替尼IC50显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 PVT1可通过诱导肺腺癌细胞干细胞特性的维持促进其厄洛替尼抵抗的发生。     

吉非替尼在H3255突变细胞株凋亡中的作用及对BIM表达的影响

目的探讨吉非替尼在肺癌突变细胞株凋亡中的作用及可能机制。方法将H3255肺腺癌细胞株培养至对数生长期,将其随机分为5组,吉非替尼组加入1μmol/L吉非替尼培养48 h;DMSO对照组仅加入0.1%DMSO培养48 h;转染组以促凋亡蛋白(BIM)重组腺病毒转染,阴性对照组以不带BIM的空载体转染,空白对照组不转染,继续培养48 h。采用Annexin PI单染法检测各组细胞凋亡率;Western blot法检测各组BIM蛋白表达。结果吉非替尼组细胞凋亡率及BIM蛋白表达明显高于DMSO对照组(P均<0.01),与阴性对照组、空白对照组比较,转染组细胞凋亡率及BIM蛋白表达显著增高(P均<0.01),吉非替尼组与转染组细胞凋亡率无明显差异。结论吉非替尼对存在EGFR突变的H3255肺腺癌细胞株有明显促凋亡作用,且促凋亡作用与BIM重组腺病毒转染效果相当,其机制可能与增强BIM表达有关。     

厄洛替尼对核转录因子κB表达以及单核细胞凋亡的影响

目的 研究厄洛替尼对单核细胞分化发育过程中核转录因子(NF) κB表达和凋亡的影响.方法 分别在单核细胞系的培养液中加入EGF、厄洛替尼、EGF+厄洛替尼处理,Western印迹检测NF-κB的表达情况,流式细胞学检测单核细胞的凋亡率.结果 厄洛替尼对人单核细胞的凋亡具有抑制作用,其抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性(P＜0.05);各组单核细胞的凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05);厄洛替尼可以显著地抑制单核细胞分泌NF-κB.结论 厄洛替尼可以有效抑制单核细胞凋亡和迁移,进而调控单核细胞的分化.     

双靶点阻滞对肺腺癌细胞的协同抑制作用及其可能机制

目的探讨联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2)对肺腺癌A549细胞株的协同抑制作用及其可能机制。方法采用不同药物干预肺癌A549细胞株,分为4组:正常对照组、单药吉非替尼组、单药塞来昔布组、联合用药组。药物干预细胞48 h后台盼蓝(trypan blue)染色法检测药物对细胞生长的影响;以Hoechst33258染色法和流式细胞术观察用药前后细胞凋亡和细胞周期的变化。采用Western blot检测EGFR和COX-2蛋白的表达情况。结果随着时间和剂量增加,单药吉非替尼与塞来昔布对A549细胞的抑制作用增强,加药48 h,联合用药组抑制率明显高于单药组(P0.01)。联合用药组细胞凋亡率明显高于单独用药组(32.40%vs7.12%和8.43%;P0.01)。联合用药组S期细胞比例为(3.2±0.9)%,较单药吉非替尼组[(37.4±1.6)%]和单药塞来昔布组[(21.0±3.1)%]明显减少(P0.01);联合用药组G0/G1期细胞比例为(87.2±6.4)%,较单药吉非替尼组[(61.4±5.2)%]和单药塞来昔布组[(51.8±4.7)%]明显增加(P0.01)。与单独用药组比较,联合用药组EGFR和COX-2蛋白的表达明显减弱(P0.05)。结论联合用药通过EGFR和COX-2双靶点阻滞发挥作用,有望为肺癌的化学预防和治疗提供新的策略。     

RNA干扰K-ras基因对肺腺癌H441细胞EGFR-TKI耐药性的影响

目的探讨RNA干扰K-ras基因对肺腺癌H441细胞株细胞EGFR-TKI耐药性的影响。方法构建靶向K-ras基因的表达载体并转染肺腺癌H441细胞,分别检测转染后细胞中K-ras蛋白及基因表达以及对吉非替尼敏感性的改变。结果实验组中K-ras基因及蛋白的表达量明显低于对照组(P0.05);实验组中细胞凋亡率及细胞增殖抑制率均显著升高(P0.05)。结论靶向突变K-ras基因的si RNA可以诱导肺腺癌H441细胞凋亡,减弱对吉非替尼的耐药性,为肺癌的基因治疗提供了新的思路和方法。     

相关基因在苦参碱诱导人肺腺癌细胞凋亡中的表达

目的 探讨苦参碱对肺腺癌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 肺腺癌A549细胞进行传代培养后,分别加入30、60、120、240 mg/L的苦参碱,MTT法检测其对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关.苦参碱可诱导A549细胞凋亡,与作用时间呈正相关.苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01),而显著升高Bax蛋白表达水平.结论 Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达增高可能在苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡中起重要作用.     

华蟾素联合吉非替尼对裸鼠肺腺癌移植瘤生长及对凋亡基因Bcl-xL、Bax表达的影响

目的 探讨华蟾素联合吉非替尼对裸鼠肺腺癌移植瘤生长及对凋亡基因Bcl-xL、Bax表达的影响.方法 建立40只人肺腺癌H1975细胞的裸鼠移植瘤模型,随机分为华蟾素组、吉非替尼组、华蟾素联合吉非替尼组及空白组(给予生理盐水干预),每组各10只,连续7d予药物干预.药物干预后第23天测量肿瘤体积,并计算肿瘤抑制率.采用TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡指数,荧光定量PCR法检测Bcl-xL、Bax mRNA的表达,Western印迹法检测Bcl-xL、Bax蛋白的表达.结果 联合组肿瘤抑制率为62.21％,明显高于空白组、华蟾素组和吉非替尼组(P＜0.05);TUNEL法结果显示,联合组的凋亡指数为(10.47±3.05),显著高于空白组、华蟾素组和吉非替尼组(P＜0.05).荧光PCR和Western印迹法检测结果显示,华蟾素、吉非替尼及二者联合用药均能使基因Bcl-xL表达水平显著下调和使基因Bax表达水平明显上调,且联合用药对下调Bcl-xL表达与上调Bax表达的能力均强于单独用药(P＜0.05).结论 华蟾素联合吉非替尼对裸鼠肺腺癌移植瘤具有明显的抗肿瘤效果,能抑制基因Bcl-xL表达和促进Bax表达,华蟾素联合吉非替尼抗肿瘤的重要机制之一可能是与诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

甜菜碱联合藻蓝蛋白对肺癌细胞A549体内外增殖的影响

目的探讨甜菜碱和藻蓝蛋白二者单独以及联合使用对肺癌细胞A549和肺癌荷瘤鼠肿瘤增殖的影响。方法选取40只裸鼠制成肺癌细胞A549荷瘤鼠模型,成模后随机分为甜菜碱组、藻蓝蛋白组、甜菜碱+藻蓝蛋白组和对照组,每组各10只,分别喂食甜菜碱和藻蓝蛋白以及二者联合喂食,对照组给予生理盐水注射。MTT检测A549细胞活性,流式细胞仪A549细胞周期,Western印迹检测A549细胞内丝裂原活化蛋白激酶蛋白(MAPK)的表达。建立肺癌细胞A549荷瘤鼠模型,分别喂食甜菜碱和藻蓝蛋白以及二者联合喂食后游标卡尺检测肿瘤体积的变化。结果 4%浓度的甜菜碱单独作用A549细胞48 h时,细胞活性明显降低(P0.05),而藻蓝蛋白(0～40μg/L)单独作用A549细胞48 h时,细胞的活性变化相对较小。与对照组相比,二者联合使用时细胞活性显著降低(P0.05)。与对照组相比,甜菜碱和藻蓝蛋白单独及联合使用时A549细胞周期G1期均下降,而G2/M期细胞比值明显升高。甜菜碱和藻蓝蛋白分别和联合作用A549细胞48 h与对照组相比,MAPK蛋白水平表达显著升高(P0.05)。结论甜菜碱和藻蓝蛋白二者联合使用可更好地抑制肺癌细胞株A549增殖和减小肺癌荷瘤鼠肿瘤体积。