LPSp联合HBsAg对孕鼠血清IFN-γ、IL-4I、L-6水平的影响

目的观察革兰氏阴性非致病成团泛菌脂多糖（LPSp）联合乙肝表面抗原（HBsAg）对孕鼠细胞免疫功能的影响。方法将50只孕鼠（共产胎鼠368只）随机分为5组各10只,联合低剂量组肌注HBsAg 100μl＋LPSp 5μl,联合中剂量组肌注HBsAg 100μl＋LPSp 15μl,联合高剂量组肌注HBsAg 100μl＋LPSp 25μl,HBsAg组肌注HBsAg 100μl,对照组肌注生理盐水100μl,测量各组胎鼠体质量、身长及胎脑重,采用ELISA法检测孕鼠血清中IL-4I、L-6及IFN-γ的含量。结果联合各剂量组IFN-γI、L-4I、L-6水平均明显高于HBsAg组及对照组,且呈浓度依赖性;HBsAg组IFN-γ水平明显低于对照组I,L-4I、L-6水平明显高于对照组,P均〈0.01。各组胎鼠体质量、身长及胎脑重比较均无统计学差异。结论 LPSp能有效调节Th1/Th2型细胞因子的平衡,有望在乙肝病毒宫内感染的预防及治疗中发挥重要作用。     

影响乙肝疫苗免疫效果的因素

影响乙型肝炎病毒(HBV)疫苗免疫的因素很多,政府和民众对乙型肝炎(乙肝,HB)了解和认识程度、经济等状况、有关行政部门的重视程度和管理力度决定是否推行HBV疫苗免疫接种;接种者的年龄及个体差异、用药情况、疫苗的种类、接种方案、接种方法和剂量、是否辅用佐剂等对接种后能否尽早产生保护性抗-HBs均有不同程度的直接影响．对不同人群、不同个体应采用不同的接种方案和剂量,必要时应用佐剂或免疫调节剂．     

人用狂犬病疫苗作为狂犬病毒抗原检测阳性对照的意义

目的探讨人用狂犬病疫苗能否作为目前应用的快速诊断狂犬病毒抗原的ELISA试剂盒的阳性对照。方法在对四川省犬只唾液和脑组织进行狂犬病带毒情况的流行病学调查时,同时加用人用狂犬病疫苗作阳性对照,比较试剂盒中标准阳性对照与抗原阳性对照的差异。结果①人用狂犬病疫苗作为阳性对照的灵敏度、特异度高,为100%,诊断粗符合率和调整一致性也均为100%。②标准阳性对照和抗原阳性对照的阳性率间没有差异。结论人用狂犬病疫苗稳定性较好,可用作ELISA抗原检测试剂盒中的阳性对照。     

狂犬病毒在不同细胞培养中持续感染的特性研究

用在犬病毒ＣＶＳ株鼠脑感染ＢＳＲ,ＢＨＫ和ＭＮＡ细胞,建立了不同的持续感染狂犬病毒的细胞株（ＰＩＲＶＣ）实验表明,不同的ＰＩＲＶＣ均经历了一个急性感染期和一个慢性感染期,在急性感染期,释放到上清的病毒滴度经过了一段高振幅的周期性上下波动后,大量细胞脱落,由少数贴壁细胞生长成片,从而进入一个慢性感染期,这一时期释放到上清病毒滴度的波动幅度急剧下降直至丧失,同时对ＰＩＲＶＣ急性期病毒增殖特性进行了动态     

表达狂犬病毒糖蛋白的重组痘苗病毒对狗的免疫效果观察

用表达狂犬病毒糖蛋白的两株重组痘苗病毒对狗口服、划痕和肌肉注射三种途径的免疫效果进行观察。结果口服免疫未见抗体阳转,而划痕和肌注免疫在第七天就能诱导中和抗体。中和抗体滴度达642。以肌肉注射、皮下注射和脚掌注射免疫小鼠,亦获得较好的免疫效果。     

结核复合抗原疫苗不同抗原组合对小鼠免疫功能的影响

目的 探讨在辅以卡介苗非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列(CpG)佐剂和铝佐剂的情况下,结核病复合抗原疫苗中抗原85b(Ag85b)、融合蛋白早期滤液蛋白10(CFP-10)和相对分子质量为6000的早期分泌抗原靶蛋白(ESAT-6)及热休克蛋白X(HspX)不同组合对小鼠免疫功能的影响.方法 将48只BALB/c小鼠按抗原组合分为8组:(1)A组:Ag85b+CFP-10/ESAT-6+HspX+佐剂,(2)B组:CFP-10/ESAT-6+HspX+佐剂,(3)C组:Ag85b+HspX+佐剂,(4)D组:Ag85b+CFP-10/ESAT-6+佐剂,(5)E组:Ag85b+佐剂,(6)F组:CFP-10/ESAT-6+佐剂,(7)G组:HspX+佐剂,(8)对照组:生理盐水.每组6只,皮下免疫,共免疫3次,间隔2周,末次免疫后1周处死小鼠.酶联免疫斑点实验和淋巴细胞增殖实验检测小鼠脾淋巴细胞分泌γ-干扰素和白细胞介素-4及抗原特异性淋巴细胞增殖情况.酶联免疫吸附实验检测小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度.结果 E组γ-干扰素的斑点数[中位数(四分位间距),122.8个(78.4～184.4个)]明显高于C组和对照组[14.3个(6.5～14.6个)和0.5个(0.5～1.3个)],差异均有统计学意义(u值均为0.0,均P＜0.01);D组白细胞介素-4的斑点数[173.5个(7 8.8～233.4个)和132.8个(50.3～159.4个)]明显多于对照组[0.5个(0.5～1.3个)和5.3个(2.9～6.5个)],差异有统计学意义(u值均为0.0,均P＜0.01);A、C、D和E组的刺激指数(2.42±0.50、2.18±0.37、2.86±0.51和2.70±0.15)明显高于对照组(1.11±0.13),差异有统计学意义(F值为20.96,均P＜0.01);HspX激发的抗原特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体稀释倍数对数值(3.90～5.21)均明显高于Ag85b(3.30～4.51)和CFP-10/ESAT-6蛋白(3.10～4.05),差异均有统计学意义(F值为43.8～70.4,均P＜0.01).结论 在辅以佐剂的情况下,不同抗原组合对小鼠免疫功能的影响有差别,3种抗原同时免疫并未获得最好的免疫效果,提示抗原间的相互作用可能对免疫效果产生影响.

Abstract：

Objective To study the immune function of mice immunized by different combinations of antigen 85b ( Ag85b), fusion protein culture filtered protein 10 ( CFP-10), early secreted antigenic target 6 kDa protein (ESAT-6) and heat shock protein X (Hsp X) with combined adjuvants of Bacille CalmetteGuerin (BCG) CpG and aluminum.Methods According to antigen combinations, 48 BALB/c mice were divided into 8 groups: ( 1 ) group A: Ag85b + CFP-10/ESAT-6 + HspX + adjuvant; (2) group B: CFP-10/ESAT-6 + HspX + adjuvant; ( 3 ) group C: Ag85b + HspX + adjuvant; (4) group D: Ag85b + CFP-10/ESAT-6 + adjuvant; (5) group E: Ag85b + adjuvant; (6) group F: CFP-10/ESAT-6 +adjuvant; (7)group G: HspX + adjuvants; (8) control group: saline (6 mice per group).The mice were subcutaneously immunized 3 times.One week after the third subcutaneous immunization, spleens were collected for enzymelinked immunospot (ELISPOT) assay to detect IFN-γ and IL-4 secretion, and for the lymphocyte proliferation assay to observe antigen-specific lymphocyte proliferation.Serum samples were separated for enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect the titers of antigen-specific IgG, IgG1 and IgG2a antibodies.Results The amount of IFN-γ spots in Group E [median ( quartile), 122.8 (78.4 - 184.4 )]was significantly more than that in group C [14.3 (6.5 - 14.6)] and the control group [0.5 (0.5 - 1.3)](u =0.0, P ＜ 0.01 ).The amount of IL-4 spots in Group D stimulated with Ag85b and CFP-10/ESAT-6 [173.5 (78.8 -233.4), 132.8 ( 50.3 - 159.4)] were significantly more than those in the control group [0.5 (0.5 - 1.3 ), 5.3 ( 2.9 - 6.5 )] ( u = 0.0, P ＜ 0.01 ).The level of stimulation index of lymphocyte proliferation in Group A, C, D, E(2.42 ±0.50, 2.18 ±0.37, 2.86 ±0.51, 2.70 ±0.15) was significantly higher than that of the control group ( 1.11 ± 0.13 ) ( F= 20.96, P ＜ 0.01 ).The level of antigen-specific IgG, IgG1 , IgG2a antibody titers induced by Hsp X [lg( antibody dilution degree), 3.90 -5.21] was significantly higher than those induced by Ag85b (3.30-4.51 ) and CFP-10/ESAT-6 (3.10 -4.05) ( F = 63.8 - 70.4, P ＜ 0.01 ) .Conclusions With the use of adjuvants, different antigen combinations showed different influences on the immune function in mice.A combination of 3 antigens did not elicit the best immune effect, suggesting that the interaction among antigens may affect their immunity.     

用免疫组织化学法证实人脑神经根、脊髓后根神经节的狂犬病毒抗原

应用免疫组织化学法（ＳＰ）法检查５例死于狂犬病的人脑神经根、脊髓后根神经节,结果显示在嗅束（４／４）、视交叉（３／３）、动眼神经根（１／１）、迷走神经根（１／３）的神经细胞胞浆内和每个节段的脊髓后根神经节的神经节细胞胞浆内有狂犬病毒抗原,而神经纤维阴性。结果表明狂犬病毒可以通过神经系统的脊髓后根和脑神经根传播。     

PHKCV皮内微量接种免疫应答效果的研究

由于疫区犬的数量和隐性带毒有扩大和增加的趋势而且免疫失败的例子也屡有报导,这或与传统的免疫方法不相适应有关。为探索新的免疫途径,我们于1990年对94名志愿者进行人群肌注原代地鼠肾组织培养人用狂犬疫苗(PHKCV简称组苗)皮内微量接     

狂犬病疫苗皮内微量接种免疫记忆持久性及再免后免疫效果的实验研究

本次实验旨在观察皮内接种（ID）0．1mL原代地鼠肾细胞培养疫苗（PHKCV）后,再肌注浓缩PHKCV,以观察其所诱生的免疫回忆反应的效果。结果表明：ID非浓缩PHKCV0．1mL后间隔180天、365天、545天和730天再肌注浓缩PHKCV,于首剂肌注后第7天、14天和30天的抗体阳性率分别为96．55％、100％、100％;76．67％、100％、100％;75．86％、100％、100％;75％、100％、100％。上述第7天（即肌注2剂后）抗体阳性率均显著高于常规5剂初免的抗体阳性率40．74％（P＜0．01）。上述结果提示：现行浓缩PHKCV有较好的免疫持久性,ID0．1mL非浓缩PHKCV后可维持免疫记忆达2年,且再肌注2～3剂就可产生比常规5剂初免还要好的免疫效果。     

结核复合抗原疫苗不同抗原组合对小鼠免疫功能的影响

Objective To study the immune function of mice immunized by different combinations of antigen 85b ( Ag85b), fusion protein culture filtered protein 10 ( CFP-10), early secreted antigenic target 6 kDa protein (ESAT-6) and heat shock protein X (Hsp X) with combined adjuvants of Bacille CalmetteGuerin (BCG) CpG and aluminum.Methods According to antigen combinations, 48 BALB/c mice were divided into 8 groups: ( 1 ) group A: Ag85b + CFP-10/ESAT-6 + HspX + adjuvant; (2) group B: CFP-10/ESAT-6 + HspX + adjuvant; ( 3 ) group C: Ag85b + HspX + adjuvant; (4) group D: Ag85b + CFP-10/ESAT-6 + adjuvant; (5) group E: Ag85b + adjuvant; (6) group F: CFP-10/ESAT-6 +adjuvant; (7)group G: HspX + adjuvants; (8) control group: saline (6 mice per group).The mice were subcutaneously immunized 3 times.One week after the third subcutaneous immunization, spleens were collected for enzymelinked immunospot (ELISPOT) assay to detect IFN-γ and IL-4 secretion, and for the lymphocyte proliferation assay to observe antigen-specific lymphocyte proliferation.Serum samples were separated for enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect the titers of antigen-specific IgG, IgG1 and IgG2a antibodies.Results The amount of IFN-γ spots in Group E [median ( quartile), 122.8 (78.4 - 184.4 )]was significantly more than that in group C [14.3 (6.5 - 14.6)] and the control group [0.5 (0.5 - 1.3)](u =0.0, P ＜ 0.01 ).The amount of IL-4 spots in Group D stimulated with Ag85b and CFP-10/ESAT-6 [173.5 (78.8 -233.4), 132.8 ( 50.3 - 159.4)] were significantly more than those in the control group [0.5 (0.5 - 1.3 ), 5.3 ( 2.9 - 6.5 )] ( u = 0.0, P ＜ 0.01 ).The level of stimulation index of lymphocyte proliferation in Group A, C, D, E(2.42 ±0.50, 2.18 ±0.37, 2.86 ±0.51, 2.70 ±0.15) was significantly higher than that of the control group ( 1.11 ± 0.13 ) ( F= 20.96, P ＜ 0.01 ).The level of antigen-specific IgG, IgG1 , IgG2a antibody titers induced by Hsp X [lg( antibody dilution degree), 3.90 -5.21] was significantly higher than those induced by Ag85b (3.30-4.51 ) and CFP-10/ESAT-6 (3.10 -4.05) ( F = 63.8 - 70.4, P ＜ 0.01 ) .Conclusions With the use of adjuvants, different antigen combinations showed different influences on the immune function in mice.A combination of 3 antigens did not elicit the best immune effect, suggesting that the interaction among antigens may affect their immunity.     

柱层析法纯化人用地鼠肾细胞狂犬病毒灭活疫苗的研究

目的改进和提高现行人用地鼠肾细胞狂犬病灭活疫苗的纯度和保护效价。方法　将原代地鼠肾细胞 (PHKC)培养并收获的aG株狂犬病毒原液超滤浓缩 40～ 5 0倍 ,再经Sepharose 6FastFlow分子筛柱层析 ,收集完整的病毒颗粒 ,除菌、灭活、添加Al (OH) 3 佐剂制成纯化地鼠肾细胞狂犬病毒疫苗。结果　浓缩狂犬病毒经过柱层析纯化 ,抗原比活性较纯化前平均提高 2 9 5 4倍 ,纯化效果平均达到 96 1% ,疫苗效力平均达到 2 98IU/ml,其余检测结果均符合现行有关规程。结论　凝胶分子筛柱层析技术 ,是一种快捷而经济的改进现行狂犬疫苗质量的有效方法     

免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响

目的观察不同免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。以不同免疫途径(皮下,腹腔,滴鼻)用P6蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(MDC、IL-2、弗氏佐剂),每组15只,采用皮下注射途径免疫。共免疫3次,间隔2周,用ELISA检测小鼠血清特异性IgG抗体,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。结果在大肠埃希菌中成功表达P6蛋白。3种免疫途径相比,皮下途径免疫诱导的IgG抗体滴度为1 279.97±3.87,腹腔免疫组为427.16±3.08,滴鼻免疫组为253.98±3.30,差异有统计学意义(F=5.43,P<0.05)。采用皮下免疫途径时,MDC组诱导的IgG抗体滴度、IL-4水平分别为7 421.02±3.30和79.64±2.75,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。IFN-γ水平和脾淋巴细胞增殖指数与IL-2组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用MDC佐剂并采用皮下途径注射可使NTHiP6蛋白疫苗获得较好的免疫效果。     

转移因子增强狂犬病疫苗免疫效果的研究

目的探索转移因子(TF)作为人用纯化Vero-细胞狂犬病疫苗佐剂的可能性。方法分为单针免疫和多针免疫方案。单针免疫是用疫苗或用疫苗加胸腺肽1针免疫；多针免疫按常规5针免疫程序(即0、3、7、14、30天各注射1针)。加TF组按3针免疫程序(即0、7、30天各注射1针)和4针免疫程序(即0、3、7、30d各注射1针)，3组狂犬病疫苗均为0．2ml／只，肌肉注射；TF与疫苗混合后肌肉注射。结果单针加入TF(3mg／只)后免疫，在免疫后第7天抗体阳转，效价达1：86。此外，加入TF(3mg／只)后免疫5针可达到5针常规疫苗免疫效果。结论TF作为人用纯化Vero-细胞狂犬病疫苗的佐剂可增强狂犬病疫苗免疫的效果。     

狂犬病毒新型快速荧光斑点抑制实验方法的建立

目的建立一种新型的快速荧光斑点抑制实验用于狂犬病毒抗体的检测。方法本研究以携带绿色荧光蛋白基因的嵌合狂犬病毒HEP-GFP株为基础毒株,建立了一种新型快速荧光斑点抑制实验(RFFIT-GFP);并对多份人、犬、猫的血清进行了检测,还将该检测结果与传统的RFFIT,ELISA相比较。结果与结论RFFIT-GFP和RFFIT,ELISA测定的结果基本相一致,特异性都比较高,而且RFFIT-GFP是一种比它们更为简便、经济的检测方法。     

枯草芽孢杆菌芽孢佐剂免疫途径及效果的动物实验观察

目的探讨以表面展示免疫球蛋白结合蛋白功能域(FDIBP)的枯草芽孢杆菌芽孢制备的黏膜佐剂不同途径免疫的应用效果。方法分别将表面展示FDIBP的重组枯草芽孢杆菌芽孢及大肠杆菌不耐热毒素(LT)与人IgG(hIgG)作为佐剂共孵育制备疫苗,通过灌胃、滴鼻途径免疫BALB/c小鼠,5周后收集外周血、肺泡、小肠及阴道冲洗液。采用ELISA方法检测血清中IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、抗hIgG特异性IgG抗体,同时检测血清及肺泡、小肠、阴道冲洗液中抗hIgG特异性IgA抗体水平。结果与无佐剂免疫者比较,枯草芽孢杆菌芽孢佐剂滴鼻能有效提高小鼠体液免疫产生的抗原特异性抗体IgA及IgG水平(P<0.01),但未能有效刺激细胞免疫上调血清IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ水平;通过灌胃途径免疫者上述特异性抗体及细胞因子水平均无显著变化(P均>0.05)。结论展示FDIBP的枯草芽孢杆菌芽孢可用作滴鼻途径黏膜疫苗佐剂,能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应。     

应用RT-nested-PCR检测犬唾液中狂犬病毒的初步研究

目的建立RT-nested-PCR方法,用于检测可疑狂犬唾液中的狂犬病毒,为狂犬病的快速诊断提供一种新思路。方法根据N基因的保守区序列设计2对引物,通过反应条件的优化,建立RT-nested-PCR的方法,以扩增狂犬病毒的N基因,并用该方法检测可疑狂犬唾液中的狂犬病毒。结果该方法的最小RNA检出量可达11.2fg,并具有较好的特异性和重复性。结论建立的RT-nested-PCR检测法,特异性强,敏感度高,结果可靠,操作便捷,值得推广应用。     

不同佐剂对旋毛虫Ts87重组蛋白免疫小鼠保护性的影响

目的 比较福氏完全佐剂（CFA）等6种佐剂对于旋毛虫Ts87重组蛋白（rTs87）免疫保护性的影响。 方法 经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析鉴定的rTs87分别与上述各种佐剂免疫ICR小鼠，每间隔2周免疫1次，共免疫3次。ELISA检测免疫小鼠血中抗原特异性IgG抗体水平。攻击感染45 d后剖杀小鼠取肌幼虫（ML）并计数，计算肌幼虫减虫率。 结果 rTs87相对分子质量（Mr）约为40 000，可被旋毛虫感染鼠血清和rTs87免疫鼠血清识别，分别与佐剂CFA（或IFA）、IMS 1312、ISA720、Quil-A及氢氧化铝免疫后均引起较强的IgG抗体反应，各佐剂免疫组减虫率分别为49.4%、49.2%、63.5%、65.1%和70.8%，与空白对照组比较有统计学意义；单纯抗原rTs87免疫组获得了23.7%的减虫率，与对照组及各佐剂免疫组差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 佐剂CFA（或IFA)、IMS1312、ISA720、Quil-A及氢氧化铝均能不同程度增强rTs87对小鼠的保护性免疫力，其中佐剂ISA720、Quil-A和氢氧化铝的保护效果更好。     

不同免疫方案对日本血吸虫22.6 kDa重组蛋白保护性免疫力的影响

目的比较福氏完全佐剂(FCA)、福氏不完全佐剂(FIA)与氢氧化铝(Al(OH)3)的免疫增强作用,探讨不同免疫方案对日本血吸虫22．6 kDa蛋白保护性免疫力的影响。方法通过基因工程技术获得rSj22．6／26GST重组抗原的大量表达,用亲和层析法制备rSj22．6／26GST融合蛋白并以凝血酶酶切获得纯化重组日本血吸虫22．6 kDa抗原(rSj22．6)。将纯化rSj22．6抗原分别与FCA、 FIA和Al(OH)3混合后,按照不同的免疫程序分别免疫BALB／c小鼠后进行日本血吸虫尾蚴攻击感染试验。用减虫率及减卵率表示免疫保护效果。结果 Western blot结果证实纯化的酶切产物是日本血吸虫22．6 kDa抗原。rSj22．6抗原与不同佐剂的免疫保护性实验结果提示:与PBS对照组相比．rSj22．6与FCA、FIA的协同作用均能诱导较高的成虫减虫率和总体减卵率(P均<0．01); rSj22．6与Al(OH)3的协同作用虽能诱导产生一定的总体减卵率(P<0．01),但未见有统计学意义的成虫减虫率(P>0．05)。各佐剂干预组所诱导的小鼠抗日本血吸虫感染的保护作用差异均无显著性(P均>0．05)。rSj22．6抗原诱导的保护作用在福氏佐剂的辅助下强于在Al(OH)3作用下的保护作用。结论福氏佐剂和Al(OH)3均可在一定程度上增强rSj22．6免疫小鼠的抗感染保护性免疫力,但福氏佐剂的增效作用强于Al(OH)3。     

Hca-F抗原-HSP70BCG疫苗免疫对小鼠肝癌Hca-F的免疫保护效应

目的探讨化学交联法构建的Hca-F抗原-卡介苗热休克蛋白70(HSP70BCG)复合物对Hca-F肝癌的主动免疫保护效应及其机制。方法采用ADP亲和层析方法提取HSP70BCG,超速离心法提取粗制肿瘤抗原,采用化学连接法或加入ADP构建Hca-F抗原-HSP70BCG复合物,免疫正常小鼠,3次后检测对Hca-F攻击的主动免疫保化效应,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Hca-F刺激下的脾细胞增殖反应,用流式细胞仪检测脾细胞表型的变化。结果化学交联法和加入ADP构建的Hca-F抗原-HSP70BCG复合物免疫可延长小鼠的存活时间,增强脾细胞对抗原刺激的应答能力和细胞介导的细胞毒活性、提高γδT细胞的百分率。结论 Hca-F抗原-HSP70BCG复合物免疫可诱导抗瘤免疫保护效应。