牛种布鲁氏菌2308强毒株dsbG基因缺失突变株的构建与初步评价

目的 研究dsbG基因对布鲁氏菌2308毒力的影响。方法 以布鲁氏菌2308亲本株为模板,通过同源重组和抗性替代的方法,构建布鲁氏菌dsbG基因缺失株(2308ΔdsbG)。将毒力株2308、疫苗株RB51、2308ΔdsbG缺失株在相同起始浓度下恒温振荡培养,观察其生长变化趋势;将各菌株按200:1的感染复数侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8),比较其在胞内的生存能力和粘附侵袭力。结果 成功构建并获得了布鲁氏菌dsbG缺失株,且10代内未发现回复现象,遗传性较稳定。2308ΔdsbG缺失株与2308亲本株相比在体外具有相似的生长趋势,但其对宿主细胞的粘附侵袭和胞内的繁殖能力显著低于亲本株。结论 dsbG基因在布鲁氏菌的致病能力中发挥重要作用,dsbG基因的缺失显著降低了牛种布鲁氏菌2308的粘附侵袭和胞内生存能力。     

SRB51：一种新的有效的牛种布氏菌活菌苗候选株

牛种布氏菌是一种可引起牛流产和人的不规则热、关节炎、心内膜炎和骨髓炎的胞内寄生菌。活的减毒的牛种布氏菌S19菌苗在控制牛布病中作为有效因子，但S19具有某些缺点，诸如干扰疾病血清诊断的OPS一特异的抗体反应、某些情况下导致免疫动物流产以及对人有致病性等[1]。Schuring·G[2]等人从90年代初开始研制一种新的牛种布氏菌的有效活菌苗SRB51，它是牛种布氏菌毒性株2308（52308）在含利福平的培养基上传代并通过粗糙型筛选单个菌落自然获得，该苗苗缺乏菌细胞表面的LPS—O一侧链。与S19菌苗相比具有某些优越性[3，4，5]，美国农业…     

贵州省2株牛种布鲁氏菌分子流行病学特征分析

目的 分析贵州省牛种布鲁氏菌分子流行病学特征,为牛种布鲁氏菌病疫情的防控提供科学依据。方法 采用BCSP31-PCR及AMOS-PCR技术对经传统方法鉴定为牛种布鲁氏菌的2株分离株进行属/种复核,采用基于布鲁氏菌rpoB基因的单核苷酸多态性分析了解其rpoB基因型,采用MLVA-16技术进行MLVA分型,了解其与国内牛种布鲁氏菌的聚类关系,采用MLST技术分析其序列型及其与国内菌株间的遗传进化关系。结果 2株分离株经BCSP31-PCR和AMOS-PCR技术被鉴定为布鲁氏菌属细菌,未能明确其具体种型;其rpoB基因型相同;MLVA分型与新疆牛种布鲁氏菌共享同一MLVA-16型(4-5-3-12-2-2-3-1-6-43-8-5-5-5-3-3); MLST分析鉴定2株菌均为ST2型,最小间距图显示2株菌与布鲁氏菌属内的牛种布鲁氏菌遗传距离最近,属同一个遗传复合体。结论 贵州省2株牛种布鲁氏菌分离株间的遗传距离近,与新疆牛种3型布鲁氏菌为同一MLVA型,提示分离株引起的感染可能为外省输入。     

AMOS-PCR对布鲁氏菌种型鉴定的应用

目的评价AMOS-PCR方法鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。方法用已建立的AMOS-PCR方法在国内检测标准菌株和对国内分离的布鲁氏菌地方株种型进行检测。结果羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌1,2,4、猪种布鲁氏菌1型和绵羊附睾布鲁氏菌有特异条带。结论AMOS-PCR是一种快速、简便、特异的鉴定布鲁氏菌的方法之一。     

AMOS-PCR在宁夏布鲁氏菌种型鉴定中的应用

目的评价AMOS-PCR方法在布鲁氏菌种型鉴定中的实用性,为快速鉴定布鲁氏菌提供辅助方法。方法血培养法分离布鲁氏菌,用常规方法和AMOS-PCR对牛种104M疫苗株、羊种M5株和宁夏分离的5株布鲁氏菌进行种型鉴定。结果 5个分离菌株经AMOS-PCR均扩增出731和178 bp的特异性条带,鉴定为羊种布鲁氏菌。结论 AMOS-PCR在布鲁氏菌鉴定中具有特异、快速、准确等特点,适合作为一种辅助鉴定方法推广应用。     

布鲁氏菌属牛、羊、猪三大杆菌菌种简易鉴定方法

<正> 作者用国内外鉴定布鲁氏菌株10个鉴定指标,对国内外207株菌作鉴定试验。结果证明,只有“Tb”牛种噬菌体裂解试验、二乙胺基硫代甲酸纳(DEDTC)滤纸片抑菌试验、蕈糖分解试验三个指标,对牛、羊、猪三大菌种具有决定性的鉴定作用。207株菌中,有199株来源于国内各地,有8株来自国外,用作试验中的对照。根据207株布鲁氏菌鉴定结     

河南省20株布鲁氏菌鉴定与PFGE分子分型研究

目的检测与分析河南省2010-2012年20株布氏菌型别及PFGE脉冲场凝胶电泳指纹图谱特征。方法采集病人静脉血,分别以试管凝集试验(SAT)、双相血培养瓶分离培养、热裂解法制备DNA模板和AMOS-PCR鉴定4种布氏菌型别。采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对检出的布鲁氏菌进行分子分型鉴定。结果分离培养的20株布鲁氏菌经鉴定,19株为羊种,1株为牛种;羊种布鲁氏菌经XbaI酶切与脉冲场凝胶电泳后,共获得了8种不同带型,带型相似度在80%~100%之间,牛种与羊种菌株在带型相似度上差异较大,具有较好的分辨能力。结论河南省病人感染的布鲁氏菌以羊种为主要型别,AMOS-PCR与PFGE作为布鲁氏菌菌型鉴定与分子分型的技术手段,为布鲁氏菌病的病原学监测与应急检测提供依据。     

牛羊猪种布鲁氏菌快速鉴别PCR方法的建立及评价

目的 建立一种可在一个反应体系中同时鉴别布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的快速PCR鉴别方法。方法 将布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的扩增引物进行优化组合,建立全新的BAMS-PCR方法;随后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对现场分离的219株布鲁氏菌进行鉴别,评价其在布鲁氏菌鉴别中的应用价值。最后,用该方法对临床标本中布鲁氏菌的DNA进行扩增,评价其在临床诊断中的实用性。结果 BAMS-PCR方法可在同一反应中同时鉴别布鲁氏菌及牛种(1,2,4型),羊种(1,2和3型)和猪种(1型)布鲁氏菌,并有较好的特异性和敏感性。布鲁氏菌属,牛种,猪种和羊种布鲁氏菌引物的检测灵敏度分别为10 pg/μL,100 pg/μL, 10 pg/μL和100 pg/μL。BAMS-PCR对219株临床分离菌株的鉴定结果和常规生物分型方法的鉴定符合率为100%。经BAMS-PCR检测,97份临床血清样本仅6份为阳性,全血和组织(羊脾)样本全部为阴性。结论 BAMS-PCR是一种简便、快速、高效、准确的布鲁氏菌鉴别方法,可作为临床分离菌株的首选鉴别方法。     

牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗双重实时荧光定量PCR方-法的建立

目的 建立一种区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒感染株的双重荧光定量PCR方-法。方法 分别以布鲁氏菌4型分泌系统中VirB8基因、VirB12基因序列设计2对引物及探针,优化实时荧光PCR反应体系及条件。以牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株、牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株、大肠杆菌、沙门氏菌基因组DNA进行 Realtime-PCR扩增,评价该方-法特异性。分别构建布鲁氏菌VirB12基因和VirB8基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行Realtime-PCR扩增,测定该方-法的敏感性。结果 本方-法具有良好的特异性,牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株基因组DNA同时出现VirB8基因与VirB12基因阳性扩增,牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株仅出现VirB8基因阳性扩增,大肠杆菌、沙门氏菌均未扩增出目的条带,对VirB8基因及VirB12基因片段阳性质粒的检测限分别为约10² copies/μL和10³ copies/μL。该方-法仅用于鉴别区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒株。结论 本研究建立的布鲁氏菌双重Realtime-PCR方-法,具有良好的特异性和敏感性,为今后鉴别牛种布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗免疫牛与自然感染牛提供技术支撑。     

从一只牧犬体内分离出牛种布鲁氏菌

牛种布鲁氏菌的自然宿主是牛,从人体和羊体中分离出牛种布鲁氏菌曾有报道。但从狗体内分离出牛种布鲁氏菌的报道却是罕见的。 本文报告,于1987年3月从牧犬中分离出工株牛种布鲁氏菌3生物型菌株。该菌株分离自新疆阿勒泰地区,菌株编号87—11。当时该地正进行犬种布鲁氏菌的血清学调查,在一牧场的种畜队发现一只土种狗的血清对S型布鲁氏菌凝集滴度为1:200,对R型     

多位点序列分型在新疆人间布鲁氏菌病临床分离株遗传进化研究中的应用

目的 探讨多位点序列分型(MLST)技术在新疆人间布鲁氏菌病分离株遗传进化研究中的应用价值,了解分离株的种群结构和遗传进化关系。方法 采用MLST对2015、2016年分离自新疆7个地州的24株人间布鲁氏菌病分离株和3株布鲁氏菌标准参考菌株进行分析,统计各菌株序列型(STs),运用BioNumerics软件构建菌株最小进化树,分析菌株间遗传关系;收集过往研究的186株全国不同地区布鲁氏菌分离株MLST结果,分析各ST型分布特点。结果 24株人间布鲁氏菌分离株全部为ST8型,3株标准参考菌株(羊种16M、牛种544A、猪种1330S)分别为ST7型、ST1型、ST14型;24株人间布鲁氏菌分离株的9个MLST位点变异完全相同,分离株种群结构单一。ST8型菌是我国主要流行的布鲁氏菌,且以北方流行为主;MLST能较好的区分布鲁氏菌种别,但不能有效区分生物型别。结论 ST8型菌(羊种3型)是新疆人间布鲁氏菌病的主要流行菌株,MLST技术可作为人间布鲁氏菌种群结构和遗传进化关系研究的补充手段。     

内蒙古布鲁氏菌临床分离株多位点序列分型研究

目的探讨临床分离布鲁氏菌的种群结构和遗传进化特征。方法布鲁氏菌标准参考菌株羊种16M,牛种544A和猪种1 330 S作为对照菌株,采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing,MLST)方法对内蒙古地区分离的116株羊种布鲁氏菌进行分析,确定待测菌株的序列型(STs),用软件BioNumerics(Version 5.0)构建菌株的最小生成树。结果116株羊种布鲁氏菌全部为ST8型,9个MLST位点的变异完全相同,分离株种群结构单一;羊种菌的生物型与ST型无明显关联,ST8型菌系该地区的主要流行菌种,并与内蒙古地区先前分离羊种布鲁氏菌进化程度相同,且有密切的亲缘关系。结论羊种布鲁氏菌的序列分型(ST)与常规生物分型存在差异,ST8型菌可能具有较强的环境适应性和致病性。MLST是一种较好的羊布鲁氏菌种群和进化关系研究方法,但更适合于具有较大时间跨度和地理分布菌株间的流行病学调查。     

猪种S_2苗在猪体血清抗体消长试验情况观察

猪种S_2苗是中国兽药监察所研制成功的1株可供猪、牛、绵羊、山羊等动物预防布鲁氏菌病(简称布病)用的弱毒菌苗,它具有毒力稳定、免疫原性良好、可口服免疫,对人畜安全等特性。它还解决了使用Rev.Ⅰ苗时出现的血清抗体长期不消退的问题(有些抗体可以存留2年),干扰野毒感染诊断和Rev.Ⅰ苗严格限于3～6月龄动物接种,排除了成年动物、怀孕动物用苗可造成流产等2大问题。所以该苗备受联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)联合布鲁氏菌病专家委员会和各国学者的关注。并将S_2苗与19号苗和Rev.Ⅰ苗一起排入国际菌苗的行列。本试验再次证实S_2苗在猪体血清中的抗体消失快,抗体消长与野毒广西株C_(73)在猪体血清中的抗体消长有着显著差别,不存在干扰野毒感染诊断的问题,现将试验报道如下。     

分泌牛种布鲁氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞A7的悬浮培养研究

牛种布鲁氏菌杂交瘤细胞Ａ７株分泌高中和性的牛种布鲁氏菌单抗ＩｇＧ１，该细菌被培养在Ｔｅｃｈｎｅ－Ｔ１０４ｇａｊｆ１．５升细胞培养装置中，此显示很低的机械剪切力。在悬浮培养时，Ａ７细胞密度可达１．２３×１０６＾６ｍｌ以上，单克隆抗体效价达１Ｌ５１２。     

河南省20株布鲁氏菌鉴定与PFGE分子分型研究北大核心CSCD

目的 检测与分析河南省2010-2012年20株布氏菌型别及PFGE脉冲场凝胶电泳指纹图谱特征。方法 采集病人静脉血,分别以试管凝集试验（SAT）、双相血培养瓶分离培养、热裂解法制备DNA模板和AMOS-PCR鉴定4种布氏菌型别。采用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对检出的布鲁氏菌进行分子分型鉴定。结果 分离培养的20株布鲁氏菌经鉴定,19株为羊种,1株为牛种;羊种布鲁氏菌经XbaI酶切与脉冲场凝胶电泳后,共获得了8种不同带型,带型相似度在80%~100%之间,牛种与羊种菌株在带型相似度上差异较大,具有较好的分辨能力。结论 河南省病人感染的布鲁氏菌以羊种为主要型别,AMOS-PCR与PFGE作为布鲁氏菌菌型鉴定与分子分型的技术手段,为布鲁氏菌病的病原学监测与应急检测提供依据。     

布鲁氏菌的脂肪酸分型研究

目的探索脂肪酸分型方法对布鲁氏菌进行分型的可能性。方法选择90株布鲁氏菌经化学方法提取菌体脂肪酸后,用气相色谱分析,获得布鲁氏菌脂肪酸成分的数据资料。并利用SPSS11.5统计软件对获得的数据资料进行聚类分析。结果布鲁氏菌脂肪酸分型方法将90株布鲁氏菌分为5组:第1组为部分牛种菌;部分羊种菌;部分猪种菌;部分绵羊附睾种;部分变异牛种;部分变异羊种;沙林鼠种标准株。第2组为猪种1、2、3、5型标准株和疫苗株S2;羊种疫苗株M28和Rev.1;绵羊附睾种标准株。第3组为部分羊种;部分变异羊种菌;部分牛种3型和6型;犬种;部分绵羊附睾种。第4组为犬种菌标准株。第5组为部分羊1型;部分变异羊种;部分牛1型;部分猪1型和3型。结论依据布鲁氏菌菌体脂肪酸含量差异可以对布鲁氏菌进行分型;依据19∶0CYCLOω8c,18∶1ω7c,16∶0三种脂肪酸含量差异可以区分猪种布鲁氏菌和犬种布鲁氏菌;脂肪酸分型结果进一步提示犬种布鲁氏菌不只1个生物型;脂肪酸分型结果进一步证实牛3型和牛6型布鲁氏菌高度同源。     

布鲁氏菌外膜蛋白的研究——Ⅲ.牛种、羊种布鲁氏菌非典型株外膜蛋白SDS—PAGE图谱的特点

牛种、羊种布鲁氏菌非典型株的菌细胞经机械方法破碎、酶解后用两性离子去污剂提取其外膜蛋白并与光滑型菌株的相应成分进行SDS-PAGE图谱比较,发现两种类型的菌株外膜蛋白图谱有极大的相似之处(即布鲁氏菌光滑型菌株所共有的谱带,非典型株也全具备),但非典型株与光滑型菌株不同的是分子量大于97.4kD的热修饰蛋白电泳谱带发生丢失现象:即这一组的谱带除一条明显变宽外,其余着色变浅或基本消失,当热修饰蛋白在高温SDS系统解聚成单体后,其电泳谱带牛种菌两种类型的菌株基本一致,但对羊种菌非典型株的单体却明显增加了两条谱带,以此显示与光滑型菌株的不同。     

布鲁氏菌耐药性与耐药机制研究进展

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病发病率逐年攀升,给公共卫生、畜牧业和社会经济发展带来重大损失。以多西环素联合利福平或链霉素为首选的抗生素治疗方案,在布鲁氏菌病的治疗中发挥关键作用,但随之布鲁氏菌出现耐药,给临床治疗带来挑战。本文就2013-2022年发表的牛羊源布鲁氏菌(主要是羊种、牛种布鲁氏菌)及人源布鲁氏菌(主要是羊种布鲁氏菌)耐药研究进展,包括耐药种类、耐药率及可能的耐药机制作一综述,为布鲁氏菌病的临床治疗和布鲁氏菌的耐药机制研究提供参考。     

提取布鲁氏菌质粒DNA的初步探讨

为了探讨布鲁氏菌是否携带质粒,我们于1987～1989年开展了本项实验研究,现将实验结果报告如下。 一、材料和方法 1.菌株:所用菌株有国际标准强毒菌株544A、16M、1330S和弱毒菌苗菌株M_5、S_2、104M。同时有对照质粒株E.coli PBR322和PVB110株。本次用10株布鲁氏菌和2株对照质粒株采用两种不同方法各提取     

布鲁氏菌DNA同源性研究（综述）

微生物DNA(脱氧核糖核酸)同源性测定包括鸟嘌呤加胞嘧啶克分子百分比(G+Cmol％)和DNA-DNA分子杂交率试验两项内容。由于是通过DNA碱基成分和基因相似性的研究来鉴定微生物种,因而是本质的最可靠的方法。国外在1968年用其证明绵羊附睾种菌、沙林鼠种菌、犬种菌与布鲁氏菌属中的羊种菌、猪种菌和牛种菌同属。微生物学者确定布鲁氏菌属细菌DNAG+Cmol％为56％～58％,与布鲁氏菌届DNA分子杂交率应大于75％。