骨形成蛋白 mRNA的表达与腭裂形成之间的关系

目的 检测正常胎鼠和腭裂胎鼠的腭突中骨形成蛋白５ｍＲＮＡ表达的变化。探讨骨形成蛋白５（ＢＭＰ５）在腭裂形成中的作用。方法 采用原位杂交技术观察在不同发育时期,正常胎鼠和腭裂胎鼠腭突中ＢＭＰ５ｍＲＮＡ的表达情况。结果 正常组和腭裂组比较结果表明,妊娠期第１４日和第１５日,正常组腭突的未分化间充质细胞和上皮细胞中ＢＭＰ５ｍＲＮＡ的表达呈强阳性,而腭裂组为弱阳性,妊娠第１６月,ｍＲＮＡ的表达呈强阳性,而     

利用三维CT重建和基因检测系统评价TCDD对小鼠面颅骨发育的致畸作用

目的 通过小鼠胚胎面颅三维计算机断层扫描重建技术，结合成骨相关基因检测系统分析2, 3, 7, 8-四氯代二苯并[b, e][1, 4]-二噁英（TCDD）对面颅骨发育的致畸作用。方法 将孕鼠分为对照组和实验组，于小鼠胚胎期第12.5天，使用TCDD （玉米油配制）按40μg/kg对实验组孕鼠单次灌胃，对照组单次灌胃等体积玉米油。收集胚胎期第13.5天和第14.5天胎鼠头颅，组织切片检测成骨相关基因的表达情况。收集两组胚胎期第18.5天小鼠胚胎头颅进行显微计算机断层扫描并三维重建，将面颅骨分块测量、对比分析。结果 TCDD造成小鼠多种面颅畸形，包括颅缝早闭、上颌骨及腭骨水平短小、翼腭突畸形及下颌下降不足。实验组小鼠下颌骨的宽度和体积明显减少，腭突的水平生长明显受损，导致垂直延伸过度，腭中缝宽大，形成腭裂。实验组小鼠腭突内，成骨分化相关基因Runx2、Osterix、Col1a1、Bmp2和Bmp4表达下调。实验组小鼠腭突内芳香烃受体水平升高，雌激素受体水平下降。结结论 TCDD能显著抑制小鼠面颅骨发育，特别是造成颅缝早闭和腭骨成骨抑制，该效应与多种成骨相关基因的异常表达相关。     

TGF-β2、TGF-β3启动子甲基化在TCDD诱发小鼠腭裂过程中的作用

目的:探讨转化生长因子β(TGF-β)2、TGF-β3启动子甲基化模式在2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英(TC-DD)诱导腭裂发生中的作用.方法:将42只C57BL/6N孕鼠分为对照组和TCDD组,每组各21只.在妊娠第10天(GD10)暴露于64μg/kg TCDD建立腭裂小鼠模型,对照组采用等体积的玉米油灌胃.3...     

化学诱导小鼠先天性肾积水动物模型的实验研究

目的:探讨一种化学诱导小鼠先天性肾积水动物模型的方法。方法:将C57BL/6J孕鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。在第12个妊娠日(GD),对照组采用玉米油灌胃,实验组采用2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(TCDD)灌胃。GD18,统计胎鼠的数量、存活率以及畸形发生情况。分析胎鼠及孕鼠各主要脏器组织学结构,电镜观察胎鼠输尿管和肾脏的超微结构。结果:GD18,对照组胎鼠的输尿管和肾脏均正常。实验组胎鼠肾积水发生率为100%(3级86.2%,4级13.8%)。实验组胎鼠下段和中段输尿管黏膜层移行上皮增生,管腔狭窄,输尿管上皮细胞核仁明显,靠边,核大,染色质丰富,异染色质少,常染色质发达;肾间质纤维化,肾小管结构模糊,上皮细胞肿胀,膜性结构破裂。对照组胎鼠肾积水发生率低于实验组。结论:TCDD所诱导的胎鼠肾积水动物模型,与人类肾盂输尿管连接处梗阻(UPJO)在病理学表现上类似,可用于UPJO发病机制与病因学等方面的研究。     

维甲酸诱导腭裂发生的过程中对TGF-β/Smad信号途径的抑制作用

目的探讨维甲酸在诱导腭裂发生过程中对Smad2磷酸化的影响,并分析其可能的致畸机制。方法建立维甲酸诱导的腭裂模型,利用HE染色观察维甲酸诱导腭裂发生的过程;应用免疫组化检测E12 d、E13 d、E14.5 d、E15 d、E15.5 d、E16 d(Ed:Embryonic day)对照组和实验组胎鼠模型腭突中嵴上皮内P-Smad2蛋白的表达。结果在腭突融合过程中,内源性的Smad2通过磷酸化能够被激活。与对照组相比,维甲酸可抑制腭突中嵴上皮中Smad2的磷酸化表达。结论维甲酸诱导腭裂的发生,与中嵴上皮细胞中Smad2磷酸化的抑制密切相关。     

2,3,7,8-四氯二苯二噁英诱导腭裂发生的差异蛋白筛选

目的:以蛋白质组学方法筛选2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致先天性腭裂发生的差异表达蛋白.方法:以TCDD诱导建立胎鼠先天性腭裂模型,行腭部的大体解剖及组织学检查.取实验组和对照组胎鼠的腭组织,分别提取组织总蛋白.通过双向电泳和质谱分析,...     

甲基N-硝基亚硝基胍和视黄酸致ICR小鼠腭裂发育模型的建立

目的:建立发生率较高、畸形类型明确、易于获得并可用于不同类型化学物致腭裂发生机制研究的动物模型.方法:采用致突变性化合物甲基N-硝基亚硝基胍(MNNG)和非致突变性致畸物视黄酸(RA)作用于ICR小鼠(对照组采用溶剂),观察不同剂量和不同给药时间的胚鼠腭裂畸形发生率,确定诱导腭裂发生的最佳作用条件,并通过光镜、电镜等手段对其畸形特征作进一步分析.结果:孕10 d一次给予40 mg/kg MNNG所致腭裂的发生率为55.2%,一次给予80 mg/kg RA腭裂发生率几乎达100%;光镜结果显示这2种化学物诱导的腭裂均为小腭;电镜结果表明孕16 d对照组腭中嵴上皮细胞表面有大量的丝状伪足而实验组中则无.结论:成功建立了可供两类不同腭裂发生分子机制研究的动物模型,为进一步研究腭裂畸形的分子机制奠定了基础.     

小鼠胚胎腭突融合过程中IRF6蛋白在腭突组织中表达的实验研究

目的观察小鼠胚胎腭突融合过程中IRF6蛋白在腭突组织中的表达情况,探讨唇腭裂发生原因。方法 60只C57BL/6J近交系受孕小鼠分别于妊娠第13.0天(GD13.0)、GD14.0、GD14.5及GD15.0时断颈处死,取小鼠胚头经固定、石蜡包埋、切片,行苏木素-伊红染色及免疫组织化学检测不同胚胎发育时期的腭突组织中IRF6蛋白的表达。结果 GD13.0时,腭突上皮、舌上皮可见IRF6蛋白表达;GD14.5时,腭突中嵴上皮接触,IRF6蛋白的表达水平达到高峰;GD15.0时,表达水平下降(P<0.05)。结论 IRF6蛋白在两侧腭胚突的接触、融合期发挥调节作用。     

2,3,7,8-四氯二苯并二噁英作用下鼠胚及乳鼠心脏组织ANF mRNA的表达变化

目的 目前认为心房利钠因子或多肽(atrial natriuretic factor,ANF)mRNA的表达水平可作为心脏疾病严重程度的诊断标准,研究2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)作用下SD大鼠胎鼠及乳鼠心肌组织ANF mRNA表达变化特点,探讨TCDD是否对心脏功能产生一定影响.方法 将实验动物分为0.05、0.5、5、10 μg/kg 4个实验组,采用RT-PCR半定量法,检测对照组及TCDD实验组胎鼠及乳鼠心肌组织ANF mRNA表达的变化.结果 与对照组比较,实验组心脏组织中ANF mRNA的表达出现不同程度的增加.结论 TCDD染毒可以使胎鼠及乳鼠心脏组织ANF mRNA表达升高,从而推测TCDD可能对心脏功能产生一定的损伤.     

bcl-2基因在腭裂胎鼠腭突间充质细胞中的表达

目的 通过小鼠胚胎腭裂模型,探讨地塞米松对不同孕期日小鼠胚胎腭突间充质细胞(embryonic palatal mesenchymal cells,EPMs)增殖与凋亡的影响.方法 选取孕鼠30只,分为实验组和对照组.实验组于11.5孕期日(gestational day,GD)腹腔注射50 mg/kg地塞米松,对照组注射等量生理盐水.获取13.5、14.5、15.5、16.5GD的胚胎284只,其中实验组196只,对照组为98只.头部石蜡包埋,标准颅颌冠状位5μm连续切片,进行HE染色和bcl-2免疫组织化学染色.形态学观察及EPMs中bcl-2阳性细胞计数、统计学分析.结果 ①bcl-2阳性信号呈棕褐色颗粒,存在于核膜周围及胞浆中.②实验组14.5、15.5 GD EPMs阳性细胞数密度明显少于对照组(P＜0.05),而16.5 GD阳性细胞数密度高于对照组(P＜0.01).③对照组15.5 GD EPMs的阳性信号最强,13.5 GD EPMs的阳性信号表达较弱但广泛.结论 胎鼠腭裂的发生与EPMs中bcl-2基因的低表达,EPMs凋亡水平升高有关.