参白解毒方抑制HCT116细胞增殖的药效及机制

目的 探讨参白解毒方（SBJDF）抑制结直肠癌（CRC）细胞HCT116增殖的药效及机制。方法 利用参白解毒方（0、0.25、0.5、1、2、4 g·L^-1）处理HCT116细胞48 h，噻唑蓝（MTT）比色法检测参白解毒方对HCT116细胞活力的影响，分别设置空白组、参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组，倒置显微镜观察参白解毒方对HCT116细胞形态的影响，克隆形成实验观察参白解毒方对HCT116细胞增殖能力的影响，JC-1探针检测参白解毒方对HCT116细胞线粒体膜电位（Δψm）的影响，流式细胞仪检测HCT116细胞周期分布和细胞凋亡率，蛋白免疫印迹法（Western blot）分析参白解毒方对细胞周期，抗凋亡以及核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的影响。结果 参白解毒方有效抑制HCT116细胞活力，引起细胞形态改变，呈浓度依赖性；与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组克隆形成率均明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组诱导HCT116细胞发生G₀/G₁期阻滞（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组周期蛋白D₁（CyclinD₁）表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组细胞周期蛋白A₂（CyclinA₂），周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（4 g·L^-1）组周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）表达显著下降（P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组课诱导HCT116细胞凋亡，并下调抗凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关xl蛋白（Bcl-xl）表达（P<0.05，P<0.01），降低HCT116细胞线粒体膜电位；与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组可下调NF-κB信号通路相关蛋白IκB激酶α（IKKα）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化p65蛋白（p-p65）的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 参白解毒方有效抑制HCT116细胞增殖，其机制可能通过抑制HCT116细胞NF-κB信号通路的激活，引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡。     

脉络宁注射液对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的NF-κB/TF通路的影响

目的： 研究脉络宁注射液对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的核转录因子-κB（NF-κB）/组织因子（tissue factor,TF）通路的干预作用。 方法： HUVECs在5%CO₂ 37 ℃条件培养于含10%胎牛血清、0.5%双抗和10 μg·L^-1碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的DMEM低糖培养基中,5 mg·L^-1 LPS诱导HUVECs 24 h后形成的炎症细胞模型,采用MTT法观察脉络宁注射液对炎症细胞模型活性的影响,从而确定脉络宁治疗组的低、中、高剂量;采用ELISA法检测白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的活性;采用Western blotting检测NF-κB和TF的含量。 结果： 与模型对照组比较,脉络宁治疗组的作用增加显著（P<0.05或P<0.01）,但在12 mg·L^-1后有趋于平稳或下降,则确定脉络宁低、中、高剂量组分别是4,8,12 mg·L^-1;脉络宁各剂量组的IL-6和TNF-α的含量都有显著降低（P<0.01）和显著降低炎症细胞模型的NF-κB和TF的蛋白表达（P<0.01）。 结论： 脉络宁注射液的抗炎作用与其拮抗NF-κB/TF活化有一定的关系。     

竹节参醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用

目的： 观察竹节参醇提物对脂多糖（LPS）刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步 探讨。 方法： 用不同质量浓度的竹节参醇提物处理RAW264.7细胞,噻唑蓝（MTT）法检测细胞活性;检测LPS刺激的RAW264.7细胞一氧化氮（NO）释放量以及竹节参醇提物干预后RAW264.7细胞NO释放量;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、 白介素1β（IL-1β）分泌;聚合酶链反应（PCR）法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达;免疫印迹（Western blot）法检测胞浆胞核核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达。 结果： 竹节参醇提物作用RAW264.7细胞的安全范围<100 mg·L^-1;LPS的用药质量浓度为1 mg·L^-1;与LPS模型组相比,竹节参醇提物0.1,1,10,40 mg·L^-1能有效抑制NO释放（抑制率分别为31.2%,41%,46.1%,55.2%）和抑制TNF-α,IL-1β的分泌（P<0.05或P<0.01）;竹节参醇提物10,40 mg·L^-1能下调LPS模型组iNOS mRNA表达且抑制NF-κB的核移位。 结论： 竹节参醇提物对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有保护作用,其保护机制可能与调控NF-κB通路,进而抑制NO的释放,降低TNF-α,IL-1β,iNOS表达有关。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响及其机制

目的: 探讨川芎嗪(TMP)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)所诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其机制。方法: 利用Ang Ⅱ(0.1 μmol·L^-1)刺激新生大鼠心肌细胞建立肥大细胞模型。培养心肌细胞随机分为6组:对照组,Ang Ⅱ(0.1 μmol·L^-1)组,低剂量TMP(0.01 mmol·L^-1)组,中剂量TMP(0.1 mmol·L^-1)组,高剂量TMP(1 mmol·L^-1)组,吡咯烷二硫化氨基甲酸酯(PDTC,100 μmol·L^-1)组。在给药处理24 h后,收集各组心肌细胞,检测心肌细胞总蛋白含量、β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达量和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达量。结果: Ang Ⅱ刺激导致培养心肌细胞的总蛋白含量[Ang Ⅱ组(296.7±27.6)mg·L^-1,对照组(184.3±11.6)mg·L^-1,P<0.05]、β-MHC mRNA表达量(Ang Ⅱ组0.936±0.059,对照组0.496±0.030;P<0.05)明显增加,这证实心肌肥大的发生;TMP以剂量依赖的方式抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。同时TMP 1 mmol·L^-1降低Ang Ⅱ诱导的肥大心肌细胞中磷酸化NF-κB(Ang Ⅱ组0.861±0.065,TMP组0.655±0.052,P<0.05)和I-κB蛋白的表达量(Ang Ⅱ 组0.785±0.042,TMP组0.525±0.045,P<0.05)。在应用Ang Ⅱ刺激心肌细胞同时,给予NF-κB抑制剂PDTC也能抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。结论: 川芎嗪通过抑制心肌细胞内NF-κB途径,而抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。川芎嗪的这些作用构成了它对心脏疾病具有保护作用的机制之一。     

鳖甲煎丸通过HIF-1α/NF-κB信号通路调控巨噬细胞极化的机制探讨

目的 探讨鳖甲煎丸通过调控巨噬细胞极化防治肝纤维化的作用和机制。方法 运用血清药理学方法，体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，通过氯化钴（CoCl₂）刺激RAW264.7细胞建立体外缺氧模型，将细胞随机分为空白组、CoCl₂模型组（200 mmol·L^-1）、鳖甲煎丸低（0.55 g·kg^-1）、中（1.1 g·kg^-1）、高（2.2 g·kg^-1）和扶正祛瘀胶囊组（0.56 g·kg^-1扶正祛瘀胶囊）。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测巨噬细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6 mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬细胞极化相关蛋白与HIF-1α/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平；细胞免疫荧光检测NF-κB信号通路相关蛋白、HIF-1α的分布及表达。结果 与空白组比较，CoCl₂刺激24 h后，RAW264.7细胞增殖受抑制明显（P<0.05）；与模型组比较，用相应含药血清处理24 h后，各用药组能促进RAW264.7细胞增殖（P<0.05）。与空白组比较，模型组HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均有明显升高（P<0.05）；与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊处理后能不同程度的降低巨噬细胞中HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平（P<0.05）。与空白组比较，模型组HIF-1α及M1巨噬细胞表型蛋白IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达明显升高（P<0.05），M2巨噬细胞表型蛋白IL-10表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组HIF-1α、IL-6、TNF-α蛋白表达降低（P<0.05），CD163、IL-10蛋白表达升高（P<0.05）。与空白组比较，模型组NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β（p-IKKα/β）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白表达明显升高（P<0.05）；与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-IκBα蛋白表达明显降低（P<0.05）。与空白组比较，模型组促进HIF-1α和NF-κB p65的入核表达；与模型组比较，鳖甲煎丸和扶正祛瘀胶囊组能抑制HIF-1α和NF-κB p65的入核表达。结论 鳖甲煎丸可调控巨噬细胞极化，减轻缺氧环境下巨噬细胞相关炎症反应损伤，从而延缓肝纤维化进展，其机制可能与其调控HIF-1α/NF-κB信号通路有关。     

八角中莽草酸对人肝癌HepG-2细胞增殖及NF-κB蛋白表达的影响

目的：探讨八角中莽草酸对人肝癌细胞HepG-2细胞增殖及其核因子-κB（NF-κB）p65蛋白表达的影响。方法：用不同浓度的莽草酸处理HepG-2细胞,MTT法测定莽草酸对HepG-2细胞的生长抑制率;倒置显微镜下观察莽草酸作用HepG-2细胞后的形态学变化;采用hoechest33342荧光染色观察莽草酸作用于人肝癌HepG-2细胞48 h后细胞凋亡形态变化。Western blot试验观察莽草酸对人肝癌HepG-2细胞NF-κB（p65）蛋白表达的影响。结果：MTT实验结果表明,莽草酸对人肝癌HepG-2细胞的生长抑制作用呈现时间依赖性和剂量依赖性;倒置显微镜下观察细胞形态可以发现,经莽草酸处理48 h后的各组细胞中,可观察到随着药物浓度的增加,细胞凋亡形态变化越来越明显,细胞数量逐渐变少。荧光染色观察随着药物浓度增加,凋亡细胞增多且明显,当莽草酸质量浓度达1 g·L^-1时,出现较多的凋亡小体。NF-κB（p65）蛋白的表达随莽草酸浓度升高而显著下降。结论：莽草酸对人肝癌细胞HepG-2有较显著的生长抑制作用,莽草酸对人肝癌HepG-2细胞表达NF-κB（p65）明显减弱,其诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用机制可能下调NF-κB表达水平有关。     

基于NF-κB炎症通路探讨五味消毒饮对IgA肾病大鼠的抗炎机制

目的 观察五味消毒饮对免疫球蛋白（Ig）A肾病（IgAN）大鼠核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响，并探讨其治疗IgA肾病的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组，模型组，贝那普利组（10 mg·kg·d^-1），五味消毒饮组（2.75 g·kg·d^-1），每组10只。采用牛血清白蛋白（BSA）灌胃，四氯化碳（CCl₄）皮下注射以及脂多糖（LPS）尾静脉注射方法共9周建立IgAN大鼠模型，各组给予相应剂量的药物灌胃，正常组和模型组给予等量生理盐水，连续给药28 d。检测大鼠24 h尿蛋白（UTP），血肌酐（SCr），尿素氮（BUN），血清白蛋白（ALB）水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1β（IL-1β），白细胞介素-6（IL-6）的含量，苏木素-伊红（HE）染色，免疫荧光及透射电镜观察肾脏病理改变，免疫组化法（IHC），实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测肾组织中IL-6，IκB激酶β（IKKβ），磷酸化IκB激酶β（p-IKKβ），NF-κB抑制蛋白α（IκBα），磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα），NF-κB p65，磷酸化NF-κB p65（p-p65）的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠UTP水平显著升高（P<0.01），肾小球系膜细胞增生，系膜基质增多，系膜增厚，电子致密物沉积增多，大量IgA沉积于肾小球系膜区并呈现不规则颗粒及团块状分布；血清中TNF-α，IL-1β，IL-6水平显著升高（P<0.01）；肾组织中IL-6，IKKβ，p-IKKβ、IκBα，p-IκBα，NF-κB p65，p-p65的表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组大鼠UTP水平显著降低（P<0.01），肾组织损伤情况均有所减轻；血清中TNF-α，IL-1β，IL-6水平显著降低（P<0.01）；肾组织中IL-6，IKKβ，p-IKKβ，IκBα，p-IκBα，NF-κB p65，p-p65的表达显著降低（P<0.01）。各组间SCr，BUN，血清白蛋白相比无明显差异。结论 五味消毒饮可降低IgAN大鼠的蛋白尿，其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路及其相关炎症因子的过度表达有关。     

五味消毒饮对脂多糖诱导大鼠肾系膜细胞NF-κB信号通路的影响

目的 观察五味消毒饮对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾系膜细胞（HBZY-1）核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响，并探讨其作用机制。方法 将大鼠肾系膜细胞随机分为正常组、模型组、贝那普利组（50 μmol·L^-1）、五味消毒饮高、低剂量组（2.75、0.69 g·kg^-1）。正常组、模型组、贝那普利组使用10%正常大鼠血清，五味消毒饮高、低剂量组使用10%含药血清。除正常组外，其余4组给予LPS（100 μg·L^-1）以体外干预。倒置显微镜观察细胞形态的变化；免疫荧光法（IF）检测NF-κB p65的表达；噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、层粘连蛋白（LN）和纤连蛋白（FN）的含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞中IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶β（p-IKKβ）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）、NF-κB p65蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组细胞增殖显著增多（P<0.01），细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量显著增多（P<0.01），IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA表达显著升高（P<0.01），p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组细胞增殖明显降低（P<0.05，P<0.01），细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量明显减少（P<0.05，P<0.01），IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达明显降低（P<0.05，P<0.01），p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白的表达显著降低（P<0.05，P<0.01）。结论 五味消毒饮可减轻由LPS诱导的肾系膜细胞损伤，其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的启动有关。     

甘草附子汤调控NF-κB信号通路抑制胶原诱导型关节炎小鼠骨质破坏的作用

目的 探讨甘草附子汤（GCFZ）抑制胶原诱导型关节炎（CIA）小鼠模型骨质破坏的作用机制。方法 将30只雄性DBa/1J小鼠随机分为5组,分别为正常组、CIA组、甘草附子汤低剂量组（GCFZ-L,2.4 g·kg^-1）、甘草附子汤高剂量组（GCFZ-H,4.8 g·kg^-1）和甲氨蝶呤组（MTX,1 mg·kg^-1）,每组6只,二次免疫法诱导CIA模型;观察记录各组小鼠关节炎指数,苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠踝关节组织病理学变化;番红-固绿染色检测小鼠踝关节软骨破坏情况;显微计算机断层扫描（Micro-CT）扫描检测小鼠踝关节骨质破坏的情况;免疫组化法观察踝关节核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、核转录因子-κB抑制蛋白激酶α/β（IKKα/β）、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白激酶α/β（p-IKKα/β）的表达情况。结果 与正常组比较,CIA组关节肿胀明显,关节炎指数评分显著升高（P<0.01）;与CIA组比较,GCFZ-L组、GCFZ-H组和MTX组均能显著抑制关节肿胀,并且明显降低关节炎指数评分（P<0.05,P<0.01）。HE染色和番红-固绿染色显示,与CIA组比较,治疗组（GCFZ-L组、GCFZ-H组和MTX组）能明显抑制滑膜的侵袭,并且关节软骨破坏明显减轻。Micro-CT扫描分析显示,与CIA组比较,治疗组（GCFZ-H组和MTX组）骨破坏评分显著降低（P<0.01）。免疫组化结果显示,与正常组比较,CIA组NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα/β和p-IKKα/β积分吸光度均显著升高（P<0.01）;而与CIA组比较,治疗组（GCFZ-H组和MTX组）NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα/β和p-IKKα/β积分吸光度均明显降低（P<0.05,P<0.01）;而GCFZ-L组仅NF-κB p65积分吸光度显著降低（P<0.01）。结论 甘草附子汤可能通过调控NF-κB信号通路来抑制CIA小鼠的骨质破坏。     

波叶山蚂蝗α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的：评价波叶山蚂蝗提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。方法：通过建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对波叶山蚂蝗石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取物进行活性筛选。结果：波叶山蚂蝗3个提取物均有较好的α-葡萄糖酶抑制作用,抑制活性均远远大于阳性对照阿卡波糖（IC₅₀=1 103.01 mg·L^-1）,其中以石油醚部位（DSPE）活性最好（IC₅₀=45.16 mg·L^-1）。乙酸乙酯部位（DSEA）和正丁醇部位（DSME）对α-葡萄糖苷酶抑制活性呈显浓度依赖性。结论：波叶山蚂蝗3个提取部位有较显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性,具有开发应用的价值。     

玉郎伞提取物对大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨玉郎伞（YLS）提取物对大鼠急性肺损伤（ALI）的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为7组,分别为正常组,模型组,阳性对照组（地塞米松,3 mg·kg^-1）,玉郎伞水提物（TYLS）高、低剂量组（按生药量计60,30 g·kg^-1）,YLS总黄酮（FYLS）高、低剂量组（0.1,0.05 g·kg^-1）,每组动物连续灌胃给药7 d,于末次给药后30 min,采用腹腔注射20%酵母混悬液5 mL·kg^-1 2次诱发大鼠急性肺损伤模型。最后测定肺组织的湿干比重（W/D）和肺组织髓过氧化物酶（MPO）的活性,免疫组化法测定大鼠肺组织中核因子-κB p65（NF-κB p65）的表达、ELISA法测定肺组织白介素-1β（IL-1β）的含量,并HE染色观察肺组织病理形态改变。结果：与正常组比较,模型组肺W/D和MPO活性增大、肺组织IL-1β含量增加、NF-κB p65表达升高（均P<0.01）,肺组织有炎性病理改变。与模型组比较,TYLS高、低剂量组（4.31±0.15）,（4.72±0.35）及FYLS高剂量组（4.74±0.23）肺W/D低于模型组（5.01±0.33）（P<0.05,P<0.01）;TYLS高剂量组及FYLS高剂量组的肺MPO活性为（1.000±0.304）,（0.956±0.139）U·g湿片^-1,肺IL-1β含量为（265.58±47.05）,（222.31±53.99）ng·L^-1,肺组织细胞NF-κB p65阳性率为（51.00±8.62）%,（48.88±11.80）%,均比模型组明显降低（P<0.05,P<0.01）;另外,从组织病理学角度上看,TYLS及FYLS组肺损伤程度也有所减轻,以高剂量组较为明显。结论：预先给予TYLS或FYLS可明显减轻ALI大鼠肺组织炎症反应及肺水肿程度,其机制可能是通过干扰NF-κB途径从而抑制IL-1β生成。     

岩大戟内酯B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的:探讨岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及生长周期的影响。方法:取对数生长期的MDA-MB-231细胞,加入JB,使终质量浓度分别为0,2.5,5,10,20,40,80 mg·L^-1,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测岩大戟内酯B对MDA-MB-231细胞的生长抑制率。另设10,20,40,80 mg·L^-1组的JB,采用流式检测技术分析岩大戟内酯B对MDA-MB-231细胞的细胞周期,RT-PCR及Western blot检测真核细胞翻译起始因子(eIF4E),细胞周期蛋白D₁(CyclinD₁)基因mRNA表达及蛋白水平。结果:随着岩大戟内酯B浓度增加可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,G₁期细胞阻滞。与空白组比较,20,40 μmol·L^-1的岩大戟内酯B可抑制CyclinD₁和eIF4E的mRNA表达,转染eIF4E-siRNA组CyclinD₁的mRNA表达及蛋白水平也被抑制,同时细胞周期阻滞在G₁期(P<0.05,P<0.01)。结论:岩大戟内酯B可通过下调eIF4E及CyclinD₁的表达而阻滞细胞周期于G₁期。     

痛泻要方调节T淋巴细胞亚群改善慢性应激下大肠癌免疫微环境的机制

目的 探讨痛泻要方对慢性应激下小鼠大肠癌免疫微环境的影响及可能的作用机制。方法 取SPF级BABL/C雄性小鼠40只,随机分成正常组、应激组、痛泻要方组（13.65 g·kg^-1）、痛泻要方应激组（13.65 g·kg^-1）,每组10只。采用慢性束缚应激方法构建应激性小鼠模型,应激7 d后治疗组给予痛泻要方灌胃,在第14天通过强迫游泳实验和悬尾实验检测痛泻要方对应激后小鼠的行为学改变情况,同时对各组小鼠进行大肠癌皮下瘤种植。观察痛泻要方对小鼠体质量、肿瘤体积的影响;末次给药后,收集小鼠血清、瘤体样本。用免疫组化、流式细胞术检测瘤体内T淋巴细胞亚群（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺）含量变化;用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠外周血中皮质酮（CORT）、血清白细胞介素（IL）-2、γ干扰素（IFN-γ）、IL-6和IL-10含量;并用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠核转录因子-κB（NF-κB）抑制蛋白（IκB）激酶α/β（IKKα/β）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65蛋白表达。结果 与正常组比较,应激组小鼠瘤体体积增大（P<0.05）;CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺数量下降（P<0.05,P<0.01）;CD8⁺数量有上升趋势;辅助性T细胞1（Th1）细胞因子IFN-γ含量降低（P<0.05）;辅助性T细胞2（Th2）细胞因子IL-10含量升高（P<0.05）;CORT含量升高（P<0.05）;p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达升高,但差异无统计学意义;IKKα/β蛋白表达升高（P<0.05）;IκBα蛋白表达明显下降（P<0.05）。与正常组比较,痛泻要方组瘤体生长速度下降,但差异无统计学意义;CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺数量显著上升（P<0.01）;CD8⁺数量下降（P<0.05）;Th1细胞因子IL-2、IFN-γ含量升高（P<0.05）;Th2细胞因子IL-6、IL-10含量降低（P<0.05）;CORT含量降低,但差异无统计学意义;p-NF-κB p65蛋白表达下降,但差异无统计学意义;NF-κB p65、IKKα/β蛋白表达明显下降（P<0.05）;IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）。与应激组比较,痛泻要方应激组瘤体生长速度下降,但差异无统计学意义;CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺数量上升（P<0.01）;CD8⁺数量下降（P<0.05）;Th1细胞因子IL-2、IFN-γ含量升高（P<0.05）;Th2细胞因子IL-6、IL-10含量降低（P<0.05）;CORT含量降低（P<0.05）;p-NF-κB p65、NF-κB p65、IKKα/β蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）。结论 痛泻要方可阻延慢性应激下大肠癌生长,有效改善大肠癌免疫微环境的恶化,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路,调节T淋巴细胞亚群功能,从而抑制促炎因子分泌有关。     

痰瘀同治调控TLR4/NF-κB/IκB通路对糖尿病大鼠心肌炎症反应的影响

目的 观察痰瘀同治对糖尿病大鼠心肌Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）/核转录因子-κB抑制蛋白（IκB）信号通路的干预作用,探讨其改善糖尿病大鼠心肌炎症病变的相关机制。方法 选取清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、化痰组、化瘀组、痰瘀同治组、阿拉氯胺组、模型组。除正常组外,其余各大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）55 mg·kg^-1建立糖尿病模型,正常喂养3周后,化痰组、化瘀组、痰瘀同治组每日分别给予小陷胸汤（4.05 g·kg^-1）,血府逐瘀汤（7.02 g·kg^-1）,抵当陷胸汤（8.10 g·kg^-1）灌胃,阿拉氯胺组每日予阿拉氯胺（3 mg·kg^-1）灌胃,连续给药8周后麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测心肌组织TLR4蛋白及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;免疫组化法检测NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠心肌TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平均有不同程度下降（P<0.01）;组间比较发现,痰瘀同治组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平比化瘀组和化痰组下降更明显（P<0.05,P<0.01）。结论 痰瘀同治法能够改善糖尿病大鼠心肌炎症病变,且效果优于单独使用化痰法或化瘀法,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/IκB信号通路的激活有关。     

地黄饮子含药血清通过PPARγ/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应＊

目的 研究中药地黄饮子抑制脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞炎症反应的作用机制。方法 使用1 mg·L^-1的LPS诱导小鼠小胶质细胞系（BV2）构建细胞炎症模型，实验分组为空白组、模型组、地黄饮子组（14.5 g·kg^-1）、米诺环素组（150 mg·kg^-1）。地黄饮子组和米诺环素组予以10%的含药血清干预，空白组和模型组给予同等浓度的空白血清。明场下观察细胞形态的变化，实时荧光定量PCR检测促炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平，Western blot检测PPARγ蛋白表达和NF-κB p65活化水平，细胞免疫荧光检测NF-κB p65入核情况。结果 与空白组比较，模型组促炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平均显著升高（P < 0.01）；PPARγ蛋白水平明显降低，NF-κB磷酸化水平明显增高，差异均有统计学意义（P <0.01），LPS刺激使BV2细胞核内NF-κB含量明细增多；给予地黄饮子或米诺环素含药血清干预后，与模型组比较，炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的 mRNA 水平均显著降低（P < 0.05），PPARγ蛋白水平明显升高（P < 0.05），NF-κB磷酸化水平和入核含量明显减少（P < 0.05）。结论 地黄饮子可能通过调控PPARγ/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应。     

胃痞消对胃癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞NF-κB p65表达的影响

目的：探讨健脾化瘀解毒复方胃痞消对胃癌前病变（gastric precancerous lesions,GPL）的疗效及其分子学机制。方法：将SD大鼠随机分为正常组,模型组,维酶素组（0.2 g·kg^-1·d^-1）,胃痞消高、中、低剂量组（15,7.5,3.75 g·kg^-1·d^-1）。除正常对照组外,其他组均采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）饮水液自由饮用、饥饱失常、耗气泻下法复制GPL大鼠模型,连续18周。从第9周起,给药组按上述剂量连续灌胃给药共10周,观察胃痞消对胃黏膜上皮细胞核因子（NF-κB）p65阳性表达评分的影响。结果：模型组胃黏膜上皮细胞NF-κB p65的表达评分较正常组显著升高（P<0.01）;胃痞消各剂量组可不同程度降低NF-κB p65的表达评分（P<0.05）,并以胃痞消低剂量组最为显著（P<0.05）。结论：胃痞消能抑制NF-κB信号通路的异常激活,下调NF-κB p65蛋白的表达,能在一定程度上抑制异形细胞的增殖、侵袭、迁移,具有防治胃癌前病变的作用。     

葛根芩连汤对KKAy糖尿病小鼠TLR4/IKKβ/NF-κB信号通路的影响

目的 观察经方葛根芩连汤对KKAy小鼠部分炎性因子及脂多糖介导的炎症通路中关键靶点的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法 选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠65只及对照C57BL/6J小鼠13只予屏障系统、高脂饲料喂养,随机血糖≥13.9 mmoL·L^-1,为成模小鼠44只。随机分为5组,每组11只。正常组（生理盐水20 mL?kg^-1）、阿卡波糖组（3.9 mg?kg^-1）、葛根芩连汤高、低剂量组（1.82、0.45 g?kg^-1）及模型组（生理盐水20 mL?kg^-1）,连续灌胃给药8周,1次/d,系统评价血糖及体质量。末次给药12 h后,摘眼球取血,提取血清及肌肉、肝脏组织。采用半定量酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）及葡萄糖转运子4（GluT4）含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肌肉组织IκB磷酸化激酶β（IKKβ）蛋白、核转录因子-κB（NF-κB）及肝组织Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组体质量及血糖显著升高（P<0.01）;与模型组比较,阿卡波糖组及葛根芩连汤组能够明显降低体质量及血糖水平（P<0.05,P<0.01）。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α、IL-6含量显著升高（P<0.01）,GluT4含量明显下降（P<0.05）;与模型组比较,各给药组炎性因子TNF-α、IL-6含量均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）,阿卡波糖组与葛根芩连汤高剂量组GluT4含量明显升高（P<0.05,P<0.01）。Western blot分析显示,与正常组比较,模型组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均有升高（P<0.01）;与模型组比较,阿卡波糖组与葛根芩连汤组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 葛根芩连汤可能在调节肠道菌群的基础上,通过下调TLR4通路中关键炎性因子的水平,抑制其激活,提高GluT4的转位及活性水平,从而在一定程度上抑制炎性级联效应,改善2型糖尿病。     

基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨益气通脉方干预ApoE-∕-小鼠肝脏炎症及脂质沉积的影响

目的 探究益气通脉方（YQTM）通过调控核转录因子-κB（NF-κB）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）信号通路对载脂蛋白E^-∕-敲除（ApoE^-∕-）小鼠肝脏炎症的影响。方法 将40只ApoE^-∕-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组（阳性药组）、YQTM低、中、高剂量组（0.39、0.78、1.56 g·kg^-1）。各给药组在高脂饲料喂养基础上分别给予相应剂量药物灌胃,连续12周。8只C57BL/6J小鼠为空白组,普通饲料喂养。12周后,采用油红O（oil red O）染色、马松（Masson）染色法观察小鼠主动脉病变情况并判断是否造模成功;oil red O染色观察小鼠肝脏中脂肪沉积;苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏组织病变情况;Masson染色观察小鼠肝脏胶原蛋白纤维分布;酶标仪检测小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）的表达水平;肝脏中TC、TG水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠肝脏白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）的表达水平;免疫组化法（IHC）观察小鼠肝脏NF-κB、NLRP3的表达区域;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肝脏中NF-κB、NF-κB抑制蛋白（IκB）、IκB激酶β（IKKβ）、磷酸化（p）-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和胱天蛋白酶-1（Caspase-1）蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组小鼠主动脉脂质沉积严重,肝脏细胞内脂肪滴积大量聚集且细胞质内充满脂肪空泡（P<0.01）,小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均显著升高（P<0.01）,肝脏中TG、TC水平升高（P<0.01）;肝组织IL-1β和IL-18含量,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,YQTM各剂量组小鼠主动脉斑块减轻,肝脏内脂肪聚集减少,炎症细胞浸润得到缓解（P<0.05,P<0.01）。小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）;肝脏中TG、TC水平有所减少;肝组织L-1β、IL-18水平,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 YQTM对ApoE^-∕-小鼠肝脏炎症的干预机制可能是与下调NF-κB/NLRP3信号通路有关。     

基于NF-κB信号通路探讨苓桂术甘汤对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎保护作用

目的 观察苓桂术甘汤对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）模型小鼠的疗效及相关作用机制。方法 将72只7周龄SPF级C57BL/6小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、地塞米松组（5 mg·kg^-1）、苓桂术甘汤高、中、低剂量组（9.36、4.68、2.34 g·kg^-1）,每组12只。除正常组外,其余各组采用鼻滴法予LPS（50 μg/只）构建小鼠ALI模型。给药组分别在造模前连续灌胃给药7 d。造模后12 h取小鼠肺组织,测定双肺湿/干质量比（W/D）;苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理形态学变化;支气管肺泡灌洗液（BALF）采用细胞计数仪计算总细胞数,瑞氏吉姆萨染色检测炎性细胞的分类（中性粒细胞、巨噬细胞）与数量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测BALF中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子-κB（NF-κB）炎症通路中NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB p65及二者磷酸化蛋白的表达,并计算磷酸化蛋白/总蛋白比值。结果 与正常组比较,模型组小鼠肺组织严重损伤,肺泡完整结构被破坏,肺泡壁增厚,大量炎性细胞与红细胞浸润,肺水肿显著加重（P<0.01）。BALF中总细胞与炎性细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著上调（P<0.01）;与模型组比较,苓桂术甘汤高、中、低剂量组与地塞米松组小鼠肺损伤明显缓解,肺水肿显著减轻（P<0.01）。BALF中总细胞与中性粒细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著下调（P<0.01）,巨噬细胞数量明显减少（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤对LPS-ALI小鼠具有抗炎保护作用,能有效减轻炎症、利水消肿,其机制可能与抑制NF-κB通路活化有关。     

黄芪-莪术配伍对结肠癌原位移植瘤模型小鼠SDF-1/CXCR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨黄芪-莪术抑制结肠癌原位移植瘤模型小鼠肿瘤生长的可能作用机制。方法 运用分子对接技术预测黄芪、莪术中主要活性成分与通路靶点蛋白基质细胞衍生因子-1（SDF-1）,趋化因子受体4（CXCR4）,核转录因子-κB p65（NF-κB p65）的分子间相互作用。建立CT26.WT结肠癌原位移植瘤模型进行体内实验验证。将60只BALB/c雄性小鼠随机分为假手术组,模型组,5-氟尿嘧啶（5-Fu）组、黄芪-莪术低、中、高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,5-Fu组（30 mg·kg^-1）腹腔注射,黄芪-莪术低、中、高剂量组（0.32,0.64,1.28 g·kg^-1）灌胃。干预15 d后,完整剥离原位瘤,取肿瘤相邻结肠组织5~6 cm。测量并计算肿瘤体积,苏木素-伊红（HE）染色观察肿瘤组织及结肠组织病理学变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中趋化因子SDF-1及其受体CXCR4,磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织趋化因子SDF-1及其受体CXCR4,NF-κB p65,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）,癌基因c-Myc蛋白及mRNA表达水平。结果 与模型组比较,5-Fu与黄芪-莪术治疗均能降低原位瘤体积（P<0.05,P<0.01）,5-Fu组抑瘤率最高（61.38±2.34）%,黄芪-莪术中剂量组抑瘤率（43.43±3.71）%。与模型组比较,各药物组肿瘤与结肠组织的病理学改变转轻。与模型组比较,黄芪-莪术显著下调了肿瘤小鼠结肠组织SDF-1,CXCR4,p-NF-κB p65蛋白表达水平（P<0.01）,对肿瘤组织SDF-1,CXCR4,NF-κB p65,Cyclin D₁,c-Myc的蛋白及mRNA表达明显下调（P<0.05,P<0.01）。结论 黄芪-莪术能够抑制结肠癌原位移植瘤的生长,其干预机制可能与调节SDF-1/CXCR4/NF-κB信号通路中相关蛋白及其mRNA表达有关。