CIC-3氯通道对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究CIC-3氯通道蛋白过表达对H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法蛋白免疫印迹法检测CIC-3蛋白表达；形态学方法、DNA琼脂糖电泳、MTT法和流式细胞仪观察和分析H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂、细胞存活率、凋亡率及CIC-3蛋白过表达对其影响。结果CIC-3蛋白过表达减轻H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞形态学改变、DNA断裂及细胞凋亡率，增加细胞存活。结论提示CIC-3氯通道蛋白过表达保护H2O2诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡。     

氯苄四氢小檗碱对抗H2O2引起无血清培养的血管内皮细胞凋亡及坏死

目的：研究氯苄四氢小檗碱对过氧化氢（H2O2）引起无血清培养的小牛主动脉血管内皮细胞的凋亡、增殖、坏死的影响。方法：通过体外细胞培养，以噻唑兰（MTT）法测定细胞存活率；用流式细胞术检测细胞DNA含量及凋亡细胞百分率、增殖率；DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度。结果：H2O2诱导无血清培养的内皮细胞凋亡，氯苄四氢小檗碱可显降低内皮肌细胞中凋亡细胞百分率，并抑制其增殖，也减少凋亡细胞DNA断裂，同时也减少其引起的平滑肌细胞坏死。结论：氯苄四氢小檗碱可对抗H2O2引起的无血清培养的血管平滑肌细胞凋亡、增殖及坏死。     

迷迭香酸抗过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡作用的研究

目的探讨迷迭香酸对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞活性;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的表达。结果经500μmol·L-1H2O2处理24h后,细胞凋亡率为34.9%±2.55%,出现核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学改变,所以随后实验选择500μmol·L-1H2O2为诱导血管平滑肌细胞凋亡的最佳浓度。①500μmol·L-1的H2O2处理血管平滑肌细胞24h能引起细胞活性明显降低;细胞凋亡率明显增加,达35.7%±1.33%;细胞中Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax蛋白比值减少,Fas和FasL蛋白表达升高。②用迷迭香酸(10、20、40μmol·L-1)预处理细胞30min,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率,呈浓度依赖性;细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值升高,Fas和FasL蛋白表达降低。结论迷迭香酸能拮抗H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡;其作用机制可能与升高细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值,减少Fas、FasL蛋白表达有关。     

氯通道阻断剂对H_2O_2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响

目的观察氯通道阻断剂对H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响,探讨氯通道在RIN-mβ细胞凋亡中的作用。方法采用H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡模型,观察氯通道阻断剂(DIDS、NPPB和NFA)对细胞存活率、形态学变化、凋亡的影响。结果氯通道阻断剂单用时对胰岛RIN-mβ细胞活力无明显影响,但能明显提高H2O2处理的胰岛RIN-mβ细胞的存活率。与模型对照组相比,氯通道阻断剂DIDS、NPPB和NFA对抗组细胞存活率明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论氯通道阻断剂对H2O2诱导的RIN-mβ细胞损伤和凋亡具有明显的保护作用。     

三氧化二砷对人肝癌细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导HepG2细胞凋亡及其机制。方法采用MTT法、形态学观察及流式细胞术方法检测As2O3对HepG2细胞的生长抑制、凋亡作用的影响,用Western blot检测As2O3处理后HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果As2O3对HepG2细胞有明显的抑制增殖作用,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈典型的凋亡形态学改变,As2O3呈时间依赖性诱导HepG2细胞凋亡。As2O3处理不同时间后,Bcl-2蛋白表达水平下调,caspase-3蛋白表达水平升高。结论As2O3具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与其下调Bcl-2蛋白的表达,促进caspase-3活化有关。     

土贝母皂苷诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞凋亡的研究

目的　研究土贝母皂苷 (下称皂苷 )对人鼻咽癌细胞株CNE 2Z细胞凋亡的影响。方法　MTT法检测皂苷对CNE 2Z细胞生长的影响 ;形态学方法 (荧光显微镜和透射电镜 )、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在皂苷作用下CNE 2Z细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况 ;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2、bax和cas pase 3表达的变化。 结果　皂苷抑制CNE 2Z细胞的生长 ,其效果与皂苷的浓度和作用时间相关 ;诱导CNE 2Z细胞发生典型程序性死亡 ;凋亡抑制基因bcl 2表达逐渐减少 ;而凋亡诱导基因bax和caspase 3在 1、3、5h表达增高。 结论　诱导细胞凋亡是皂苷发挥抗瘤效果的一种重要机制 ;皂苷诱导的CNE 2Z细胞凋亡与bcl 2、bax和caspase 3基因有关     

灯盏乙素抑制过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及机制

目的：观察灯盏乙素对过氧化氢（H2O2）诱导PC12细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法：采用H2O2诱导PC12细胞凋亡模型，用碘化丙啶（PI）单染和PI／Annexin V双染检测细胞凋亡，用DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA断裂，并采用RT-PCR检测Bcl-2 mRNA表达、荧光光度法检测caspase-3活性。结果：灯盏乙素可以抑制H2O2诱导的膜磷脂酰丝氨酸外翻，增加Bcl-2 mRNA表达，减小caspase-3活性，并降低DNA片段化和细胞凋亡率。结论：灯盏乙素显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡，其抗细胞凋亡作用可能与其增加Bcl-2表达、抑制caspase-3活化有关。     

普罗布考抑制过氧化氢诱导血管平滑肌细胞的凋亡

目的研究抗氧化剂普罗布考(probucol)对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法以1mmol·L-1H2O2为VSMC凋亡诱导剂,probucol浓度为100、10和1μmol·L-1,孵育6h,采用Annexin V-FITC染色、TUNEL法和Hoechst33258染色法观察细胞凋亡;Western blot检测细胞中ASK-1和Trx-1蛋白的表达。结果H2O2可促使VSMCs凋亡,细胞中ASK-1蛋白表达增加,Trx-1蛋白表达降低。Probucol可减轻H2O2所致的细胞凋亡,呈浓度依赖性;同时细胞中ASK-1蛋白表达降低,Trx-1蛋白表达增加。结论probucol能拮抗H2O2诱导的血管平滑肌细胞凋亡,其机制可能与降低细胞中ASK-1蛋白表达,升高Trx-1蛋白表达有关。     

飞燕草素葡萄糖苷通过上调SOX2OT减轻高糖诱导的心肌细胞损伤

摘要：目的:探讨飞燕草素葡萄糖苷（DPg）对高糖（HG）诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响及可能机制。方法:体外培养H9C2细胞,不同剂量(1,10,100μmol·L-1)的DPg作用于33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导的H9C2细胞24 h,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中兔抗鼠B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关蛋白（Bax）的蛋白表达,试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平,RT-qPCR检测SRY盒转录因子2重叠转录本（SOX2OT）表达。转染SOX2OT过表达载体、小干扰RNA至H9C2细胞,经33.3 mmol·L-1葡萄糖诱导24 h后,检测细胞增殖、凋亡、Bax和Bcl-2蛋白表达及MDA和SOD水平。结果:DPg可提高高糖诱导的H9C2细胞吸光度（A）值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）,且呈剂量依赖性。DPg可剂量依赖性促进高糖诱导的H9C2细胞中SOX2OT的表达,过表达SOX2OT可提高高糖诱导的H9C2细胞A值（P<0.05）,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量（P<0.05）,并促进Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。与未敲减SOX2OT的H9C2细胞比较,敲减SOX2OT的H9C2细胞经100μmol·L-1DPg和高糖处理后A值、Bcl-2蛋白表达和SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量升高（P<0.05）,并抑制Bcl-2蛋白表达和SOD活性（P<0.05）。结论:DPg可能通过上调SOX2OT表达抑制HG诱导的H9C2细胞凋亡和氧化应激。     

H2O2预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

摘要 目的 探讨H2O2预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧引起H9C2细胞凋亡的影响。方法 大鼠心肌细胞系（H9C2）经体外培养扩增,使用对数生长期细胞做实验处理。分别使用0、5、10、20、50、100μmol/L浓度 H2O2处理H9C2细胞,流式细胞仪（FCM）、MTT法和免疫印迹法（Western blot法）检测不同浓度H2O2处理对H9C2细胞凋亡率、增殖活性和STAT3磷酸化水平的影响,以确定最佳H2O2预处理浓度。观察低浓度H2O2预处理对缺氧/复氧所引起细胞损伤的影响,细胞随机分为4组,①对照组：常规培养;②缺氧／复氧组：预先在 5％CO2,95%N2培养箱中培养 120min,复氧30min ;③H2O2预处理组：给予H2O2处理90min换液,24h后缺氧/复氧处理;④AG490+ H202组：在H2O2预处理前10min给予10μmol/L AG490处理,其余处理同H2O2预处理组。AnnexinV-FITC/PI双染法及流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡,MTT法检测H9C2细胞增殖活性,免疫印迹法（Western blot法）检测STAT3磷酸化水平。结果20μmol/L组的STAT3磷酸化水平明显高于其他各浓度组（P<0.01）,心肌细胞凋亡率亦明显低于50μmol/L及100μmol/L浓度组（P<0.01）,而其心肌细胞增殖活性及细胞凋亡率与5μmol/L及10μmol/L浓度组无明显差异; H2O2预处理能降低大鼠心肌细胞凋亡率（P<0.05）,增加心肌细胞活性（P<0.05）上调P- STAT3水平（P<0.05）。缺氧损伤后给予AG490处理可使H2O2预处理保护作用消失。结论20μmol/L H2O2预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有适应性保护作用。可能机制是激活 JAK2-STAT3通路发挥抑制细胞凋亡作用。     

山楂叶总黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨山楂叶总黄酮(FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置显微镜观察细胞生长状况和形态变化,琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状图谱,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体比率及线粒体膜电位的变化。结果与模型组比较FMCL 100、30mg.L-1两组PC12细胞活性增强,贴壁生长数量增多,而圆缩脱落者减少,未见典型DNA梯状图谱,凋亡比率下降,线粒体膜电位回升,且在一定范围内存在剂量依赖关系。结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

槲皮素对过氧化氢损伤小鼠成纤维细胞的保护作用

目的探讨槲皮素对过氧化氢(H_2O_2)损伤小鼠成纤维细胞(NIH-3T3)的保护作用。方法体外培养NIH-3T3细胞,取对数生长期的NIH-3T3细胞分成四个实验组。对照组(C)仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。实验1(Q_1)组先用0．5mmol/LH_2O_2作用细胞30min,然后再用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24h。实验2(Q_2)组先用含有501μmol/L的槲皮素培养基作用24h,再换含有0．5mmol/L H_2O_2作用细胞30min。H_2O_2实验(H_2)组先用含有0．5mmol/L H_2O_2作用细胞30min,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24h。取培养细胞提取DNA和制备1×10~7/ml细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率；应用Weaster blod和细胞免疫组化技术检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、HSP-70、NF- kB蛋白质的表达。结果由TUNEL和Ladder实验得出,Q_1组的细胞凋亡率明显低于H_2组和Q_2组。由Weaster blod和细胞免疫组化技术检测分析得出,Q_1组与Q_2、H_2组相比,Bcl-2的表达明显增高,Bax、Caspase-3、NF-kB、HSP-70的表达减低。结论槲皮素可能主要是通过抑制NF-kB的表达,提高HSP-70的表达,对H_2O_2诱导的NIH-3T3细胞损伤产生保护作用。     

甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤保护作用比较研究

目的：比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤的保护作用。方法：采用细胞株培养的方法,建立PC12细胞H2O2损伤模型,通过MTT法和流式细胞分析仪检测细胞存活率和凋亡率;采用免疫细胞化学染色法检测PC12细胞bcl-2和bax表达。结果：PC12细胞经H2O2损伤后,细胞存活率降低、凋亡率增加,甘西鼠尾草注射液与丹参注射液处理组均可有效缓解上述改变（P〈0.05）;两药均使bcl-2表达增加（P〈0.05）,bax表达减少（P〈0.05）。结论：甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤具有明显保护作用。其机理可能与增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,进而抑制细胞凋亡有关。     

Endothelin-1 induces contraction via a Syk-mediated p38 mitogen-activated protein kinase pathway in rat aortic smooth muscle

Although spleen tyrosine kinase (Syk) has crucial roles in various cells, its function on vascular smooth muscle contraction has not been determined. In the present study, we performed experiments to determine if Syk contributes to the endothelin-1 (ET-1)-mediated contraction in rat aortic smooth muscle. ET-1-induced contraction of aortic strips was inhibited by piceatannol, PD98059, and SB203580, inhibitors of Syk, extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2), and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), respectively. Piceatannol also attenuated high K(+)-induced contraction. ET-1 dose-dependently enhanced the activity of Syk and this was inhibited by piceatannol in both rat aortic strip and rat aortic smooth muscle cells. The phosphorylation of p38 MAPK and heat shock protein 27 (HSP27), but not that of ERK1/2, in response to ET-1 was inhibited by both piceatannol and SB203580. These results suggest that Syk may play an important role in the regulation of aortic smooth muscle contraction induced by ET-1, which may be mediated by the p38 MAPK/HSP27 signaling pathway.     

原花青素对人冠状动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究原花青素对人冠状动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT实验检测原花青素对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞增殖的影响,运用流式细胞术、基因组DNA电泳观察凋亡特征性＂梯状＂条带检测细胞凋亡,采用Caspase活性定量检测试剂盒分析Caspase-9、Caspase-3的活性。结果原花青素对人冠状动脉平滑肌细胞具有明显的抑制作用,且其作用有剂量依赖性。流式细胞仪检测显示原花青素可以显著诱导人冠状动脉平滑肌细胞凋亡,DNA电泳显示原花青素作用于人冠状动脉平滑肌细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带。原花青素作用后人冠状动脉平滑肌细胞Caspase-9、Caspase-3活性明显升高。结论原花青素可能通过线粒体信号通路抑制人冠状动脉平滑肌细胞的生长并诱导其凋亡。     

H_2O_2预处理对多巴胺损伤PC12细胞的适应性保护作用

目的探讨H2O2预处理对多巴胺(dopamine,DA)损伤PC12细胞的适应性保护作用。方法透射电镜、Hoechst染色和PI染色流式细胞仪(flowcytometry,FCM)观测细胞凋亡,MTT代谢率法观察细胞线粒体氧化磷酸化功能状态,Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)。结果50μmol·L-1DA作用PC12细胞24h后,电镜可观察到PC12细胞体积缩小,核染色质浓缩、边集,核碎裂等细胞凋亡征象。Hoechst33258染色显示,DA(50μmol·L-1)作用24h后,经H2O2预处理的PC12细胞的凋亡量较未预处理的明显减少。50、100和200μmol·L-1DA作用24h后,PC12细胞的凋亡率分别为(20.9±1.8)%、(40.5±6.4)%、(88.1±3.9)%,而经H2O2预处理的PC12细胞的凋亡率分别下降至(4.9±2.9)%、(12.0±1.4)%、(61.5±3.4)%(P<0.01)。20、40、80μmol·L-1DA作用细胞24h后,细胞MTT代谢率明显下降,而H2O2预处理抑制20、40、80μmol·L-1DA引起的PC12细胞MTT代谢率的下降(P<0.01)。50μmol·L-1DA作用24h后,PC12细胞的平均Rh123荧光强度由正常对照的(46.87±0.33)下降至(4.39±2.93),而经H2O2预处理的PC12细胞,其平均Rh123荧光强度仅下降到(10.50±0.28),下降程度明显减轻(P<0.01)。结论H2O2预处理对DA损伤PC12细胞具有适应性保护作用。     

促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对过氧化氢氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的保护作用及其机制。方法采用600μmol.L-1的过氧化氢造成体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤模型。实验设计分为5组:对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢+10 kIU.L-1EPO组,过氧化氢+20 kIU.L-1EPO组和过氧化氢+40 kIU.L-1EPO组。MTT法检测细胞活性,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法测定细胞的凋亡率。结果过氧化氢模型组RPE细胞的活性明显降低,不同浓度的EPO药物干预组的细胞活性较模型组明显升高,并随着EPO浓度的升高而升高。过氧化氢模型组RPE细胞SOD活性降低,MDA的含量增加;而EPO药物干预组SOD活性较模型组明显升高,MDA含量减少,差异有显著性。过氧化氢模型组RPE细胞的凋亡率升高,而不同浓度的EPO药物干预组降低RPE的凋亡率,凋亡率随着EPO浓度的升高而降低。结论促红细胞生成素对过氧化氢诱导的人RPE细胞的氧化损伤有保护作用,其机制可能与抑制氧化反应、提高抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关。     

人参皂苷Rb1对H_2O_2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察人参皂苷Rb1对H2O2诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其可能作用机制。方法在培养的新生大鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量组人参皂苷Rb1(20、40、80mg·L-1)对心肌细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及细胞内钙离子变化的影响。结果不同剂量组人参皂苷Rb1可以减少心肌细胞凋亡率、降低MDA含量、增加SOD活性、减少细胞内钙超载。结论人参皂苷Rb1可以抑制H2O2引起的新生大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与其抗脂质氧化和减少细胞内钙超载有关。     

二乙酰二脱水卫矛醇诱导人白血病HL-60细胞凋亡与Bcl-2家族的关系

目的　探讨抗肿瘤药物二乙酰二脱水卫矛醇 (di acetyldianhydrogalactitol,DADAG )诱导肿瘤细胞凋亡机制。方法　透射电镜、DNA梯形条带、流式细胞术及Westernblot法分别检测凋亡和凋亡相关基因Bcl 2家族成员表达的动态变化。结果　透射电镜可见细胞异染色质固缩、边集及凋亡小体形成 ;DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的“DNAlad der” ;流式细胞仪DNA直方图上出现亚二倍体峰。DADAG4 μmol·L-1处理HL 6 0细胞 6h后 ,Bcl 2蛋白水平开始下降 ,Bad蛋白水平明显上调 ,相反 ,Bcl XL 蛋白水平呈时间依赖性地下降。结论　DADAG诱导白血病HL 6 0细胞凋亡 ,与Bcl 2、Bcl XL 蛋白水平下降 ,Bad蛋白水平明显上调有关