苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞的影响

目的 研究苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞系WBF-344细胞的增殖及AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.方法 用MTT法检测苦参碱含药血清对WBF-344细胞增殖的影响,免疫细胞化学及RT-PCR方法检测苦参碱含药血清对WBF-344细胞AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.结果 5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清作用于WBF-344细胞24 h、48 h、72 h均有不同程度的抑制增殖作用,且存在时间、剂量依赖性.正常培养WB-F344细胞有少量AFP、Notch1蛋白和mRNA表达,肝癌前病变模型组血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达上调,苦参碱含药血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达较模型组血清AFP、Notch1蛋白和mRNA表达下调. 结论肝癌前病变模型组血清可能具有诱导WBF-344细胞向肝癌细胞方向分化的作用,苦参碱含药血清可逆转此作用,以上作用与调节Notch1表达关系密切.     

含中药血清对人激素非依赖性前列腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨不同中药复方水煎剂的大鼠含药血清对人激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3增殖的体外影响.方法:以高剂量(10倍于大鼠常规剂量)的中药复方S、T、F水煎剂对成年雄性去势SD大鼠灌胃(中药组,即S组、T组、F组),每天2次,共3天.另以与中药水煎剂等量的生理盐水灌胃(对照组)进行对照.末次灌胃后于60～90 min时间段内取下腔静脉血制成血清,用以体外培养PC-3,用MTT法测定培养4、24、48、72 h的细胞存活率,比较细胞存活率的差异.结果:中药组和对照组细胞的光密度随培养时间延长均呈增加趋势.培养4 h,各中药组细胞存活率均升高,相互间比较差异无统计学意义.培养24、48 h以后,F组、T组细胞存活率分别开始出现下降.培养4、24、48、72 h,S组细胞存活率均升高,各时间段间差异无统计学意义.结论:中药复方F含药血清抑制PC-3细胞增殖,可用于动物实验进一步明确体内有无抗肿瘤作用;中药复方S促进细胞增殖.     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响

目的：研究姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞体外作用及其对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其抗肿瘤的作用机制。方法：分别用0、6．25、12．5、25、50μmol／L浓度的姜黄素作用于PC-3细胞，12、24、36、48、72、96h后台盼蓝拒染法、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长活性；24h后流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化，透射电镜观察细胞超微结构变化；半定量RT-PCR法检测PC-3细胞内VEGF mRNA的表达；ELISA检测细胞上清液中VEGF浓度。结果：姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖，呈剂量与时间依赖性，不同浓度姜黄素组之间及不同时间组之间差异均有统计学意义（P〈0．01）。不同浓度姜黄素诱导PC-3细胞出现剂量依赖性G2／M期阻滞（P〈0．01），且各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组（P〈0．01），差异有统计学意义；姜黄素作用24h后PC-3细胞出现凋亡的形态学改变；PC-3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中VEGF呈剂量依赖性降低。结论：姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的生长，并促进其G2／M期阻滞和凋亡，VEGF mRNA及蛋白的表达也明显降低，可能是其抑制肿瘤和血管生长的机制之一。     

三氧化二砷对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株Bc1-2、Bax表达的影响

目的了解三氧化二砷对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株细胞增殖、细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响。方法分别以1、2、3、6、10μmol／L的三氧化二砷作用于PC-3细胞，48h后对细胞增殖活性、细胞凋亡及细胞bcl-2、bax基因表达的变化进行检测。结果各浓度的三氧化二砷均可抑制PC-3细胞增殖，并具有剂量依赖性。3、6、10μmol／L的三氧化二砷还可诱导PC-3细胞凋亡，计算细胞凋亡率分别为11．8％、12．7％、29．6％。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PC-3细胞中bcl-2、bax表达的相对强度，发现bcl-2的表达强度随三氧化二砷浓度的升高而逐渐降低（P〈0．01），而bax表达强度变化不明显（P〉0．05）。结论三氧化二砷可有效抑制PC-3细胞增殖，诱导PC-3细胞凋亡，这一过程与三氧化二砷抑制PC-3细胞中bcl-2的表达有关。     

六味地黄丸含药血清通过诱导自噬对氧化应激状态下成骨细胞增殖的影响

目的 观察六味地黄丸含药血清对氧化应激状态下MC3T3-E1细胞增殖、活性氧及自噬水平的影响。方法 用过氧化氢(H₂O₂)模拟氧化应激状态后采用不同浓度的六味地黄丸含药血清干预MC3T3-E1细胞，CCK-8法检测细胞增殖情况；通过细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)检测细胞ROS水平；qRT-PCR检测自噬相关基因Beclin 1、LC3B mRNA表达情况；蛋白印迹法检测自噬相关蛋白Beclin 1、LC3B表达情况。结果 (1)CCK-8结果显示，H₂O₂会抑制成骨细胞的增殖，当其浓度为0.10 mmol/L时具有相对较小程度的抑制增殖效果；六味地黄丸含药血清可以促进氧化应激状态下成骨细胞的增殖，且当体积浓度为20%时促进增殖的效果最好。(2)细胞活性氧检测结果显示，六味地黄丸含药血清组ROS水平降低(P<0.05)。(3)qRT-PCR结果显示，六味地黄丸组Beclin 1、LC3B mRNA表达上调(P<0.05),且该作用会被自噬抑制剂所抑制...     

MiR-29a通过调节HuR影响前列腺癌细胞的生物学行为

目的 研究前列腺癌中miR-29a 对HuR表达的调节，进而影响细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡。方法 通过实时荧光定量（qRT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）检测在正常前列腺上皮细胞RWPE-1和激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3内miR-29a、人抗原R(HuR) mRNA和蛋白的表达水平；miR-29a mimics(模拟剂)、inhibitor（抑制剂）和NC miRNA(对照剂)转染PC-3细胞48 h后检测miR-29a、HuR mRNA和蛋白的表达水平。细胞增殖试剂盒(CCK-8)、迁移和侵袭实验（Transwell小室）、流式细胞术分别检测PC-3细胞被转染后细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的改变。结果 与RWPE-1细胞相比，PC-3细胞中miR-29a的表达下调，HuR mRNA和蛋白的上升（P<0.05）。与对照组相比，miR-29a mimics(模拟剂)、inhibitor（抑制剂）转染PC 3细胞后HuR mRNA无改变，但是能够改变HuR蛋白的表达（P<0.05）。MiR-29a能够抑制细胞增殖、迁移、侵袭，促进细胞凋亡（P<0.05）。结论 在前列腺癌PC-3细胞中，miR-29a通过调节HuR蛋白的表达，进而对细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡产生影响。     

米非司酮对前列腺癌PC-3细胞周期及其蛋白的影响

目的 探讨米非司酮（MIF）对前列腺癌PC-3细胞周期及其调控蛋白的影响及其作用机制。方法 MTT法检测1、10、50、100μmol／LMIF作用于PC-3细胞24～120h的吸光度（A）值，流式细胞仪检测10、50μmol／LMIF作用PC-3细胞48h后细胞周期的变化，免疫组化法和Western blot法检测10、50μmol／LMIF处理48h后PC-3细胞cyclinD1、bax、bcl-2蛋白表达的变化情况。结果 1μmol／LMIF作用24～120h的A值与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）；10、50、100μmol／L组A值与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；MIF对PC-3细胞的抑制作用呈时间-剂量依赖性。MIF作用48h后使PC-3细胞停滞于G1／G0期，并使此期细胞比例从对照组的27．4％增加到10μmol／L组的50．4％和50μmol／L组的59．2％，差异有统计学意义（P〈0．05）。处理后PC-3细胞中bcl-2蛋白和cyclinD1蛋白表达量，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；而bax表达量显著增加。结论 MIF以时间．剂量依赖性方式抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖，可能通过下调cyclinD1蛋白表达，阻止PC-3细胞G1期向S期的转换，使其停留于G1／G0期；同时降低bcl-2蛋白的表达及激活bax蛋白的表达等抑制前列腺癌PC-3细胞增殖。     

全反式维甲酸对脑胶质瘤细胞Cyclin E、Caspase-3表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖抑制作用及细胞周期素Cydin E和凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达的影响。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测全反式维甲酸（ATRA）在不同浓度（1、2、4、8、16μmol／L）、不同作用时间（24、48、72h）处理大鼠胶质瘤C6细胞系后，对细胞增殖抑制率的变化；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测细胞周期素Cyclin E和Caspase-3 mRNA在24、48、72h不同时间点表达变化。结果 ATRA对C6细胞有增殖抑制作用。具有时间和浓度依赖性；药物作用组与无药物作用组之间及药物作用各组之间的OD值和抑制率比较差异有统计学意义（P〈0．01）。随ATRA作用时间的延长，细胞周期素Cyclin E mRNA表达逐渐下降，与细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达逐渐增高（P〈0．01）。结论 ATRA抑制C6脑胶质瘤细胞发生增殖，其机制可能与细胞周期素Cyelin E表达下调。凋亡相关基因Caspase-3上调有关。     

选择性COX-2抑制剂NS398对前列腺癌PC-3细胞增殖与凋亡的影响

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS398对前列腺癌细胞PC-3增殖和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测不同浓度和不同时间NS398对PC-3细胞增殖的影响;RT-PCR法检测不同浓度NS398作用PC-3细胞24h后COX-2 mRNA的表达;酶联免疫测定法(ELISA)检测不同浓度NS398作用PC-3细胞24h后PGE2释放水平;流式细胞仪检测不同浓度NS398作用PC-3细胞24h后细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制PC-3细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性;RT-PCR和ELISA法检测结果显示,随着NS398浓度增高,PC-3细胞COX-2 mRNA表达和PGE2释放水平呈下调趋势;细胞凋亡检测结果显示100、200μmol/LNS398对PC-3细胞具有诱导凋亡的作用。结论NS398可能通过COX-2依赖性途径抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。     

粉防己碱对激素非依赖性人前列腺癌细胞株PC-3增殖和凋亡影响的研究

目的 探讨粉防己碱(TET)对激素非依赖性人前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖抑制和凋亡作用及其机制。方法 应用CCK法观察不同浓度TET（1、2、4、8 μg/mL）对人前列腺癌细胞株PC-3生长的抑制作用;用Annexin-V与PI双染法流式细胞术分析TET对PC-3细胞凋亡的影响;RT-PCR检测TET对人前列腺癌细胞株PC-3 IL-8表达水平的影响。结果 TET对前列腺癌PC-3细胞株增殖有抑制作用,其抑制效应呈剂量依赖性。不同浓度TET作用48 h后,前列腺癌PC-3细胞株的凋亡率随着浓度的增高而升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。不同浓度TET作用48 h后IL-8 mRNA表达水平随着浓度的增加而降低,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 TET能抑制人前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖,并促进人前列腺癌细胞株PC-3的细胞凋亡,其作用机制可能与其下调IL-8 mRNA表达有关。     

Dendritic branch typing and spine expression patterns in cortical nonpyramidal cells

To understand the dendritic differentiation in various types of cortical nonpyramidal cells, we analyzed quantitatively their dendritic branching and spine expression. The dendritic internode and interspine interval obeyed exponential distributions with type-specific decay constants. The initial branching pattern, internode interval and spine density at the light microscopic level divided nonpyramidal cells into three dendritic types, correlated with axonal, neurochemical and firing types. The initial branching pattern determined the overall vertical spread of dendrites. Basket cell subtypes with different firing and chemical expression patterns were distinct in the vertical and horizontal spatial spread, providing diverse input territories. Internode densities of dendritic spines, as well as those of axonal synaptic boutons, did not correlate with the tortuosities and intervals, suggesting a tendency to distribute synapses homogeneously over the arbor. Dendritic spines identified at the electron microscopic level were different in length and shape among subtypes. Although the density was lower than that of pyramidal cells, spines themselves were also composed of several morphological types such as mushroom and multihead ones, which were expressed differentially among subtypes. Correlation of dendritic branching characteristics with differences in spine structure suggests distinct ways to receive specific inputs among the subtypes.     

大鼠失神经靶肌肉注射异体不同细胞对神经再生影响的研究

目的研究注射异体不同细胞于大鼠失神经靶肌肉对神经再生的影响.方法 SD成年大鼠36只,雌性,体重120～150 g,随机分为4组,每组9只.无菌条件下切断左侧坐骨神经,一期神经外膜缝合.术后即于小腿三头肌处注射相应细胞,7天注射1次,共4次.A组注射单纯雪旺细胞1×106/ml 1 ml,B组注射雪旺细胞加成肌细胞(雪旺细胞∶成肌细胞为1∶1)1×106/ml 1 ml,C组注射肾内皮细胞提取液1 ml,D组注射无血清培养液1 ml作对照.术后3个月取手术侧坐骨神经及坐骨神经所支配的小腿三头肌,进行大体和组织形态学观察、神经鞘细胞密度及单位面积靶肌肉(小腿三头肌)运动终板计数.结果术后3个月,各组近端神经鞘细胞均数为A组0.134 5±0.029 8,B组0.093 1±0.025 6,C组0.072 4±0.023 7,D组0.187 7±0.054 2;A组∶D组P值<0.05,B组∶D组、C组∶D组及A组∶B组P值均<0.01,B组∶C组P值＞0.05.术后3个月各组远端神经鞘细胞密度均数为A组0.186 0±0.042 5,B组0.155 1±0.032 1,C组0.104 7±0.013 3,D组0.240 9±0.056 8;A组∶D组P值<0.05,B组∶D组、C组∶D组及B组∶C组P值<0.01,A组∶B组P值＞0.05.术后3个月各组靶肌肉运动终板个数均数为A组6.000±0.866,B组9.000±2.291,C组12.780±1.394,D组3.110±0.782;A组∶D组、B组∶D组及C组∶D组P值<0.01,A组∶B组、A组∶C组及B组∶C组P值<0.01.结论雪旺细胞、混合细胞、肾内皮细胞提取液均有促进神经再生作用,肾内皮细胞提取液优于雪旺细胞及混合细胞.     

尿嘧啶脱氧核苷及超顺磁性氧化铁双标记的神经干细胞活体移植后细胞迁徙及功能性分化的实验研究

目的观察尿嘧啶脱氧核苷(Brdu)及超顺磁性氧化铁(SPIO)双标记的神经干细胞活体移植后存活细胞的迁徙及分化。方法SPIO和Brdu对神经干细胞进行双标记,移植至大脑中动脉梗死模型的对侧脑组织,术后采用MRI监测。第6周MRI检查后取组织切片行免疫组织化学染色,观察神经干细胞的迁徙及分化。结果双标神经干细胞活体移植后第3周MRI开始显示细胞沿胼胝体迁徙,第6周脑组织免疫组织化学染色亦显示干细胞沿胼胝体向对侧迁徙,免疫组织化学荧光双标染色显示移植的神经干细胞可以分化为星形胶质细胞及神经元。结论移植存活的神经干细胞在迁徙过程中能够进行功能性分化。     

大鼠肝窦内皮细胞分离、培养及其生物学特性的初步研究

目的　建立大鼠肝窦内皮细胞 (SEC)的原代分离、培养方法 ,并研究其生物学特性。方法　胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心加选择性贴壁的方法分离SEC ;用光镜、扫描电镜观察培养SEC的形态学变化及超微结构 ;用Ⅷ因子和CD14免疫细胞化学染色及RECA 1单抗间接免疫荧光法观察SEC表面分子的表达。结果　分离培养的SEC得率为 (2 .0 6± 0 .35 )× 10 7/只大鼠 ,活力≥ 92 % ,纯度达 90 % ;光镜下细胞形态典型 ,SEM下可观察到特征性的窗孔结构 ;Ⅷ因子染色阴性而CD14染色阳性 ,RECA 1单抗间接免疫荧光染色阳性。结论　分离培养的SEC细胞得率、活力及纯度较高 ,形态典型且具有一般细胞所没有的窗孔结构及表面标志 ,为其功能和作用机制的深入研究奠定了基础。     

肝干细胞的研究进展及应用前景

目的阐述肝干细胞（liver stem cell，LSC）的研究进展并展望其应用前景。方法广泛查阅近年来相关文献，根据研究成果，综述LSC研究的最新进展。结果LSC向特定的细胞分化和增殖受多种因素影响。LSC活化、分离培养、筛选及鉴定等方法尚未成熟。结论随着研究不断地深入，LSC有望成为肝病治疗的新型种子细胞，但其研究有待进一步完善。     

骨质疏松小鼠模型骨髓间充质干细胞特性的研究

目的 探讨骨质疏松小鼠模型骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells ,MSCs）生物学特性的改变。方法 通过皮下注射地塞米松构建小鼠骨质疏松动物模型（OP组）,同时设立对照（NC组）,分离OP组及NC组骨髓MSCs进行体外培养;通过流式细胞术检测细胞表面分化抗原;运用CKK-8实验检测细胞增殖活力;通过脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡水平;运用碱性磷酸酶（ALP）活性检测、油红O染色及Western blot法检测两组细胞成骨分化及脂肪分化能力。结果 经过骨组织学检测证明模型建立成功,体外培养OP组及NC组骨髓MSCs细胞形态无差异。OP-MSCs细胞表面分化抗原Scal1及CD44为阳性, CD34及CD11b为阴性,与NC-MSCs相似,但OP-MSCs增殖活力下降（P<0.05）;此外两组细胞凋亡水平类似（P>0.05）。成骨分化诱导7 d后OP-MSCs的ALP活性显著低于对照组（P<0.01）,21 d后矿化小结明显减少（P<0.001）;脂肪分化诱导8 d后OP-MSCs形成更多脂滴（P<0.05）。Western blot结果显示OP-MSCs在成骨分化中低表达转录因子Runx2（P<0.05）及Osterix (P<0.001）,但在脂肪分化早期高表达PPARγ（P<0.001）及C/EBPα（P<0.01）。结论 骨质疏松小鼠骨髓MSCs的增殖及分化潜能显著下降。     

兔雪旺细胞的培养方法及形态学研究

利用兔坐骨神经组织进行体外细胞培养研究，获得了雪旺细胞。兔雪旺细胞的形态与其他文献报道的鼠或人的外周神经培养获得的雪旺细胞形态基本相似，典型的雪旺细胞形态特征为胞体较小、梭形、两侧突起纤长、核窄长。倒置显微镜下看，胞体四周常有亮边，细胞成极性生长排列。通过免疫组织化学染色证实具有典型形态的梭状细胞为雪旺细胞，而扁平状形态不规则的细胞为成纤维细胞     

肿瘤干细胞的研究进展

肿瘤具有异质性的特征,随着研究的深入,越来越多的证据提示肿瘤组织中也存在少量具有干细胞性质的肿瘤干细胞,于是人们在此基础上提出了肿瘤干细胞学说,肿瘤干细胞已成为当今肿瘤研究领域的热点。目前,已经从白血病、脑肿瘤、乳腺癌、恶性黑色素瘤及前列腺癌等多种恶性肿瘤中初步分离鉴定出肿瘤干细胞。肿瘤干细胞学说的提出,使得靶向性杀伤肿瘤干细胞从而根治肿瘤成为可能。     

Evidence of pluripotent human prostate stem cells in a human prostate primary xenograft model

INTRODUCTION: The phenotypic plasticity of the human prostate stem cell within human prostate tissue was examined to determine the response of the stem cell to changes in the androgenic environment. METHODS: Prostate xenografts were transplanted into athymic nu/nu mice implanted with testosterone pellets, allowed to establish for 1 month time point, the hosts were castrated and pellets removed, and following 1 month of androgen deprivation, the hosts were stimulated with androgen for 2 days to induce proliferation of the residual population of stem cells (2-month time point). RESULTS: Glands in benign xenografts harvested at the 1- and 2-month time points contained basal cell layers that expressed p63 and high molecular weight cytokeratin, and in which essentially all of the cellular proliferation was localized, consistent with the proposed localization of the prostate stem cell. Benign glandular structures in the xenografts were populated by basal, secretory epithelial, neuroendocrine (NE), or squamous cells overlaying the basal cell layer, whereas, adenocarcinoma glands in the xenografts resembled the original prostate cancer (CaP) tissue. CONCLUSIONS: In this human prostate primary xenograft model, the residual stem cell population that survives transplantation, or androgen deprivation, maintains significant pluripotentiality as demonstrated by the capacity to generate progeny that differentiate along multiple lineages in response to microenvironmental signals, particularly along the secretory epithelial lineage in response to androgen, and along the NE cell lineage in response to androgen deprivation.