端粒重复序列结合因子在肾脏肿瘤中的表达水平

目的:研究TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤及相应癌旁组织中的表达水平.方法:定量分析肾组织中TRF1蛋白的表达水平,应用经倍比稀释的TRF133-277纯化蛋白作为定量标准,建立了以抗TRF133-277单抗作定量Wes-tern-blot的方法,并以该方法检测TRF1蛋白在组织中的表达水平.结果:32例肾肿瘤样本均不同程度的表达TRF1蛋白质,均值为2.428±1.352 μg/μl,癌旁自身对照组织TRF1的表达水平为3.611±1.922 μg/μl(t=5.776,P<0.001).肿瘤组织内TRF133-277表达水平较相应癌旁组织显著降低,并与肿瘤的恶性程度相关,差异具有显著性意义(P<0.01).结论:TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤中的表达明显减低,并与肿瘤恶性程度呈负相关.     

人端粒重复序列结合因子基因组和假基因研究

目的：确定人端粒重复序列结合因子(TERF1)的基因组结构和假基因的定位与结构。方法：利用GenBank等生物信息学资源，NCBI提供的BLAST及其他相关的生物信息学工具(Sequencher，DNA Strider和Autoassembler等)，确定TERF1基因组和假基因的定位与结构，并用PCR和测序证实。结果：定位在8q13上的7TERF1基因组由10个外显子构成。它有4个假基因分别分布在第13、18、21和X染色体上(ΨTERF1-X、ΨTERF1-18、ΨTERF1-21和ΨTERF1-X)，其结构均与TERF1 mRNA相似，但缺少部分外显子。ΨTERF1-13、ΨTERF1-18和ΨTERF1-21的周边序列之间存在长度至少60kb的同源片段。结论：TERF1基因组合10个外显子，它有4个加工过的假基因分布在第13、18、21和X染色体上。大片段同源序列属近期重复片段中的染色体间倍增。     

端粒重复序列结合因子2真核表达载体的构建及表达

目的:构建端粒重复序列结合因子2(TRF2)真核表达载体,观察其在胃癌细胞中的表达.方法:EcoRI,HindⅢ双酶切AdTRF2质粒,胶回收1 600 bp小片段,连接入pcDNA3.1载体.经双酶切及测序鉴定后转染SGC7901细胞,空载体质粒转染SGC7901细胞为对照.G418选择培养液培养2个月,选取转染组及对照组细胞克隆.①细胞用阿霉素处理6 h后Western blot法检测TRF2表达.②MTT法检测转染对细胞生长增殖速度的影响.结果:成功构建TRF2真核表达载体,转染后SGC7901细胞TRF2表达明显增高,对细胞的生长增殖速度无明显影响(P＞0.05).结论:成功构建TRF2真核表达载体及稳定转染细胞株,为进一步研究TRF2功能奠定了基础.     

抗人端粒重复序列结合因子多克隆抗体制备及纯化

目的 制备并纯化抗人端粒重复序列结合因子片段（TRF1^33-277)的多克隆抗体。方法 运用基因工程的方法表达人工TRF1^33-277，将表达蛋白经亲和层析大量纯化后免疫白哆，制备血清过柱纯化，将TRF1^33-277和GST交连于CNBr-活化的Sephrose4B柱，血清过GST柱以去除抗GST抗体，然后经GST-TRF1柱吸收抗TRF1抗体，获得兔抗人TRF1多克隆抗体。结果 用此抗体作为一抗。在人膀胱癌细胞总蛋白中检到68KD的特异条带，与阳对照基本一致。结论 兔抗人TRF1多克隆抗体制备方法有效。所获抗TRF1^33-277多克隆抗体为国内首次报道。     

端粒重复序列结合因子1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨人端粒重复序列结合因子1（TRF1）在非小细胞肺癌（NSCLC）肺组织中的表达及其与临床、病理的关系。方法采用Envision免疫组织化学染色法检测40例NSCLC患者手术切除后石蜡包埋标本和37例癌旁正常肺组织中TRF1的表达水平,并分析其与NSCLC患者临床、病理指标及生存期的关系。结果NSCLC组织中TRF1蛋白阳性表达率显著高于癌旁正常组织（P〈0.01）;TRF1蛋白在NSCLC组织中的阳性表达水平与患者性别、年龄、是否长期吸烟、肿瘤大小、淋巴结是否转移、病理TNM分期、分化程度、组织学类型和总生存期等方面的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论TRF1在NSCLC组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织,但其表达水平则与NSCLC的组织学类型、性别、年龄、是否长期吸烟、肿瘤大小、淋巴结是否转移、病理TNM分期、分化程度及预后无关。     

端粒重复序列结合因子1和2及端粒保护蛋白1基因在食管癌中的表达

目的检测端粒重复序列结合因子1和2及端粒保护蛋白1基因在食管癌组织中的表达。方法收集我院33例明确诊断为食管癌患者的中心组织及其相应癌旁组织,然后提取总RNA并逆转录成cDNA,适时荧光定量PCR方法检测TRF1、TRF2和POT1基因在这些组织中的表达水平。结果 TRF1mRNA在食管癌中心和癌旁表达所得CT值分别为（1.42±2.31）和（1.02±1.04）,差异有统计学意义（P〈0.05,n=33）;TRF2为（8.53±2.57）和（8.38±1.50）,两者差异无统计学意义（P〉0.05,n=33）;POT1为（4.72±1.47）和（3.80±1.06）,两者差异有统计学意义（P=0.001,n=33）。结论虽然TRF2基因在食管癌中表达没有统计学差异,但TRF1和POT1基因在食管癌组织中表达显著降低,提示TRF1和POT1有可能与食管癌的发生、发展有着密切的关系。     

人端粒重复序列结合因子1^33—277在大肠杆菌中的？…

目的：建立能高效表达人端粒重复序列结合因子１第＾３３－２７７位（ＴＲＦ１＾３３－２７７）氨基酸的菌株并制备多抗。方法：设计一对引物,分别带有Ｋｐｎ Ｉ和ＥｃｏＲＩ位点,从已经克隆了ＴＲＦ１ｃＤＮＡ全长的重组质粒ｐＣＲⅡ－ＴＯＰＯ－ＴＲＦ１扩增ＴＲＦ１＾３３－２７７ｃＤＮＡ片段,克隆入ＰＧＥＭ－Ｔ质粒,测序和酶切图谱鉴定,ＥｃｏＲＩ酶切后亚克隆入ｐＧＥＸ－３Ｘ的ＥｃｏＲＩ位点之间,筛选在向插入重组子     

端粒重复序列结合因子1和2及端粒保护蛋白1基因在食管癌中的表达

目的检测端粒重复序列结合因子1和2及端粒保护蛋白1基因在食管癌组织中的表达。方法收集我院33例明确诊断为食管癌患者的中心组织及其相应癌旁组织,然后提取总RNA并逆转录成cDNA,适时荧光定量PCR方法检测TRF1、TRF2和POT1基因在这些组织中的表达水平。结果 TRF1mRNA在食管癌中心和癌旁表达所得CT值分别为(1.42±2.31)和(1.02±1.04),差异有统计学意义(P<0.05,n=33);TRF2为(8.53±2.57)和(8.38±1.50),两者差异无统计学意义(P>0.05,n=33);POT1为(4.72±1.47)和(3.80±1.06),两者差异有统计学意义(P=0.001,n=33)。结论虽然TRF2基因在食管癌中表达没有统计学差异,但TRF1和POT1基因在食管癌组织中表达显著降低,提示TRF1和POT1有可能与食管癌的发生、发展有着密切的关系。     

辛伐他汀对颅内动脉瘤大鼠端粒长度、端粒酶反转录酶及端粒重复序列结合因子2基因表达的影响

目的 探讨辛伐他汀对颅内动脉瘤(IA)大鼠端粒长度、端粒酶反转录酶(TERT)和端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因表达的影响.方法 将36只SD大鼠分为对照组、模型组和辛伐他汀组,每组12只.对模型组及辛伐他丁组的大鼠切除双侧卵巢并结扎左侧颈总动脉及双侧肾动脉后支以构建IA模型,对照组仅暴露相应组织及血管后缝合.建模后模型组和辛伐他汀组分别给予生理盐水及辛伐他汀灌胃.于建模后4个月,测定各组大鼠外周血白细胞端粒相对长度、TERT和TRF2 mRNA的相对表达量.结果 建模后4个月,模型组和辛伐他汀组各有8只大鼠形成IA,对照组无大鼠形成IA;对照组、辛伐他汀组和模型组大鼠的端粒相对长度依次缩短(P<0.05),而对照组、模型组和辛伐他汀组TRF2 mRNA相对表达量依次升高(P<0.05);模型组和辛伐他汀组的TERT mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05),但两组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 IA大鼠可能由于端粒酶活性降低而发生端粒长度缩短,辛伐他汀可通过促进TRF2的表达而发挥保护端粒作用.     

急性白血病细胞端粒结合蛋白2表达的研究

目的研究人类白血病细胞株及原代白血病细胞中人端粒结合蛋白2(TRF2)的表达.方法应用实时定量RT-PCR,检测白血病细胞株及原代白血病细胞中TRF2 mRNA的表达,应用Western Blot,检测TRF2蛋白的表达.结果T淋巴系白血病细胞株的TRF2表达显著高于骨髓单个核细胞和髓系白血病细胞株.在原代白血病细胞中,M0和M1亚型患者白血病细胞TRF2的表达高于其他各亚型急性髓系白血病(AML)患者.结论预后差的AML患者和T细胞恶性肿瘤细胞株高表达TRF2,提示TRF2高表达可能和白血病的预后有关.     

人端粒结合因子在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位与周期性表达的研究

目的:研究人端粒结合因子1(telomere repeat binding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达.方法:应用分子克隆技术扩增TRF1基因全长(TRF1FL)和N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列,并克隆入pEGFP-C2真核表达载体,表达绿色荧光(GFP)融合蛋白;将含目的基因质粒转染端粒酶阳性Hela细胞和端粒酶阴性WI38-2RA细胞,Western Blot验证目的蛋白分子量,荧光显微镜观察TRF1在间期细胞和染色体的定位;利用药物阻断HeLa细胞于不同周期,流式细胞仪检测细胞周期,半定量Western Blot检测TRF1在不同细胞周期中的表达.结果:TRF1FL、TRF1ΔNC序列长度分别为1.3 kb和0.9 kb;GFP融合TRF1FL、TRF1ΔNC分子量大小分别为80 kD和60 kD.TRF1FL在间期细胞胞核内呈点状表达,在染色体则表达于染色体未端,TRF1ΔNC在细胞核内呈弥散性表达;TRF1在端粒酶阴性细胞中与早幼粒细胞白血病小体(promyelocytic leukemia body,PML)共定位,在端粒阳性细胞中则没有共定位.TRF1在HeLa细胞中以M期表达量最高,G1/S表达最低,M期表达量是G1/S期的3.9倍(t=12.92,P<0.01).结论:TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中有不同的定位模式,在HeLa细胞中TRF1呈周期性表达.     

hTR反义寡核苷酸对急性白血病原代细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的　探讨端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸 (ASODN)对急性白血病 (AL)原代细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法　应用与人hTR起始密码子互补的硫代ASODN处理AL原代细胞 ,用台盼蓝拒染的方法计数活细胞 ,用端粒酶重复扩增分析 (TRAP) -PCR -ELISA检测法观察端粒酶活性的变化 ,用Giemsa染色、Hoechst332 5 8 PI双染荧光显微镜检查及流式细胞仪检测凋亡细胞的发生。结果　经hTR -ASODN作用后 ,AL原代细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,并与ASODN的浓度和处理时间相关 ,10 μmol/LASODN在作用 72h时端粒酶活性为( 0 0 95± 0 0 6 ) ,较细胞对照组 ( 1 15 4± 0 15 )下调明显 (P <0 0 1) ;在作用第 5天经荧光显微镜可观察到ASODN组细胞凋亡形态学变化。流式细胞仪检测到其凋亡率为 ( 31 72± 8 6 4 ) ,与细胞对照组的凋亡率 ( 6 33± 0 91)比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　hTR -ASODN可明显抑制AL原代细胞端粒酶活性并诱导其凋亡 ,hTR可能成为白血病基因治疗新靶点     

人细胞周期蛋白C在儿童急性淋巴细胞性白血病中的表达及对白血病细胞增殖的影响

目的：探讨人细胞周期蛋白C(Human cyclin C,CCNC)在儿童急性淋巴细胞性白血病（Acute Lymphocyte Leukemia, ALL）中的表达,并初步研究CCNC在体外对白血病细胞增殖的影响。方法：实时荧光定量PCR法检测CCNC在初治ALL、白血病细胞系及正常对照组中的表达,利用基因重组技术构建含有CCNC的全长的真核表达载体PCMV-2B-CCNC,用脂质体Lifefectamine2000将真核表达载体转染至人急淋细胞系6T-CEM细胞株中,Western-blot检测转染后的细胞CCNC蛋白的表达量,流式细胞分析CCNC对白血病细胞增殖的作用。结果：CCNC在对照组小儿、初治小儿ALL骨髓及6T-CEM细胞系中均有表达,在初治ALL中表达强度降低（P<0.05）。基因测序及重组质粒酶切后鉴定成功构建了PCMV-2B-CCNC真核表达载体,将其转染至6T-CEM细胞中,Western-blot检测到转染后的白血病细胞CCNC蛋白表达量增高,流式细胞结果表明在转染了CCNC基因的白血病细胞中,在细胞的Go/G1峰前出现一个亚二倍体峰,细胞凋亡指数有所增高（P<0.05）。结论: CCNC在初治小儿ALL中出现较低的表达强度,在转染人白血病细胞后,具有诱导白血病细胞凋亡作用,有可能与儿童ALL的发病相关。 关键词：儿童急性淋巴细胞性白血病,细胞周期蛋白C     

端粒结合因子－1在脑膜瘤中的表达及临床意义

目的探讨端粒结合因子－1（TRF1）在脑膜瘤及正常脑组织中的表达及其临床意义。方法选取26例脑膜瘤（其中良性脑膜瘤18例,恶性脑膜瘤8例）和10例正常脑组织（脑外伤患者内减压切除的脑组织）石蜡切片标本作为研究对象,应用免疫组化技术检测各组TRF1的表达水平,应用半定量法计算不同标本肿瘤细胞免疫标记的频率和强度积分。结果所有肿瘤组织及正常脑组织中均检测到TRF1表达,其中正常脑组织中TRF1表达高积分构成比为90．00％,良性脑膜瘤的TRF1高积分构成比为66．67％,恶性（间变性）脑膜瘤组为12．50％。经统计分析发现,TRF1在脑膜瘤中的表达与其恶性程度成负相关（L=－0．586,P=0．002）。结论TRF1在人脑膜瘤组织及正常脑组织中均有广泛表达,其在脑膜瘤中的表达水平与其恶性程度呈负相关,TRF1可作为脑膜瘤病理分级及恶性程度判断的参考指标。     

儿童周围血单个核细胞端粒酶活性检测在诊断急性淋巴细胞白血病中的临床意义

目的：寻求一种利用周围血来检测微量的白血病细胞的方法。方法：采用TRAP－ELISA法检测周围血单个核细胞（MNC）端粒酶活性。结果：急性淋巴细胞白血病（ALL）病例组周围血MNC端粒酶活性表达阳性率为92．11％，正常对照组为2．63％。结论：TRAP－ELLSA法检测周围血MNC端粒酶活性可作为诊断ALL一种简单、敏感的方法。