NBD多肽预处理的树突状细胞延长移植心存活时间的实验研究

目的 探讨NBD多肽预处理的供体源性树突状细胞(DC)在诱导心脏移植免疫耐受中的作用及可能机制.方法 体外培养供体源性BALB/c小鼠骨髓树突状细胞并以NBD多肽预处理(NBD多肽-DC,在小鼠心脏移植前7 d,将NBD多肽.DC输至受者C57BL/6小鼠体内.应用Cu-T建立小鼠颈部异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,病理分析检测排斥反应程度.混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性,并用ELISA方法测定受者血清Thl型细胞因子(IFN-γ和IL-12)和Th2型细胞因子(IL-4和IL-10)水平的变化.结果 NBD多肽-DC可使移植心脏存活天数延长至(21.83±3.54)d,较PBS对照组的(6.66±1.21)d明显延长(P＜0.01),降低排斥反应病理分级(Stanford 1～2级),能诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,使受者小鼠血清INF-γ和IL-12水平显著降低(P＜0.01).而IL-4和IL-10水平明显升高(P＜0.01).结论 NBD多肽预处理的供体源性DC能够诱导针对移植供者产生的特异性免疫耐受现象,其机制可能与诱导受者T细胞的抗原特异性低反应性及Th1/Th2免疫偏移有关.     

抗白细胞介素6单克隆抗体治疗延长小鼠同种心脏移植物存活时间的实验研究

目的 观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型.实验动物随机分为同系移植组、移植治疗组(每日注射3 g/L anti-IL-6 mAb 0.1 mL)和移植模型组(注射等量生理盐水).ELISA法检测受鼠移植术后第3、6 天外周血IL-6的表达水平,观察各组移植心脏存活时间,病理分析检测排斥反应程度,流式细胞术(FCM)检测各组受鼠脾脏及移植心脏中CD4+ CD25+调节性T细胞比例变化,RT-PCR检测移植心脏IL-6、IFN-γ、IL-17、RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平.结果 ①治疗组外周血IL-6表达水平较模型组明显降低(P<0.01);②治疗组移植心脏存活时间较模型组明显延长[(22.0±2.3)d vs(7.7±0.8)d,P<0.01],排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);③治疗组移植心脏中IFN-γ、IL-6、IL-17和RORγt mRNA表达水平较模型组显著下降(均P<0.05),脾脏及移植心脏中浸润的CD4+ CD25+调节性T细胞比例及Foxp3 mRNA表达水平均明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论 anti-IL-6 mAb治疗可抑制Th1、Th17型细胞因子的分泌,促进CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞产生,抑制单个核细胞浸润并有效延长小鼠同种移植心脏的存活时间.     

核因子-κB抑制剂熊果酸延长小鼠心脏移植物存活时间

目的:研究熊果酸对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的作用.方法:体外实验:CD3、CD28单抗刺激B6小鼠T细胞,实验组加入不同浓度的熊果酸.24 h后检测P65核转位程度;48 h后检测T细胞表面CD25、CD69表达情况.体内实验:熊果酸用0.5%羧甲基纤维索钠混悬.行BALB/c到B6的小鼠心脏移植.实验组使用10m...     

脾切除延长大鼠异种移植心脏存活时间的实验研究

目的:采用小鼠至大鼠心脏移植模型,研究脾切除联用免疫抑制剂对异种移植物存活时间的影响。方法:动物随机分为组,分别采用脾切除、来氟米特()或二者联用以观察对异种移植心脏存活时间的影响。法检测血清。7LefELISAIgG用免疫组织化学法检测。IgG结果:单行脾切除使移植心脏存活(±)天4.401.14(P,脾切除联用使移植心脏存活<0.05)CsA(±)天与组比较,4.750.95(IIP。脾切除联用显著延长移植心脏存活时间达(±)天,且显著降低受体血清>0.05)Lef8.202.17水平和移植物中沉积IgGIgG(P。加用不能显著增加脾切除联用的效果。<0.05)CsALef结论:脾切除可显著延长小鼠至大鼠移 植心脏存活时间。脾切除和具有协同免疫抑制作用,可降低移植后受体血清水平及移植物中沉积,延长异种移植物LefIgGIgG的存活时间。     

内皮祖细胞灌注供心延长心脏移植物存活时间的实验研究

 目的 研究供体内皮祖细胞（endotherial progenitor cell, EPC）灌注供心对同种异体心脏移植物生存时间的影响。方法 获取Sprague Dawley （SD）大鼠的骨髓细胞,通过密度梯度离心法分离培养单个核细胞,取贴壁细胞选择性诱导培养2周以上,获取内皮祖细胞（EPC）。以Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色法鉴定EPC。20只体重200～250g的雄性SD大鼠为供体,20只体重200～250g的雌性Wistar大鼠为受体,分为4组,每组5对。组I：术后不使用环胞霉素;组II：术后7d每天使用环胞霉素5mg/kg;组III：术中供心经冠脉灌注内皮祖细胞1×106个,术后不使用环胞霉素;组IV：术中供心经冠脉灌注内皮祖细胞,术后7d每天使用环胞霉素5mg/kg。观察各组供心存活时间。结果 贴壁细胞经诱导培养后3d开始伸展,5d形成集落,7~10d增殖加速并出现条索状结构,2周大部分细胞呈多角形。Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双染,免疫荧光染色阳性率大于70％。组I、II、III、IV各组供心平均存活时间分别为6.2±0.8、11.6±1.1、9.4±1.1和18.8±1.6d。组II、III、IV移植物的平均存活时间较组I显著延长（P<0.05）。结论 内皮祖细胞灌注合并环胞霉素运用可以延长大鼠心脏移植物的存活时间。     

IDO基因转染延长同种异基因大鼠移植心脏的存活

目的:了解逆转录基因载体介导的吲哚胺-2,3-加双氧酶(IDO)基因转染能否延长同种异基因大鼠移植心脏的存活时间及机理。方法:把同种异基因大鼠心脏移植模型(Lewis→BN)分成4组,A组为对照组,同种异基因大鼠心脏移植(Lewis→BN);B组:IDO基因转染后的供体心脏移植给受体大鼠;C组:空载体转染供体心脏,再移植给受体大鼠;D组:同种异基因大鼠心脏移植 CsA组(CsA5mg/kg/d×7天)。观察记录移植心脏的存活时间及术后6天组织病理学检查明确排斥反应的诊断和分级,RT-PCR检测术后6天移植心脏TNF-α的mRNA表达,FCM检测外周血活化的T细胞(CD3 CD25 )、有核细胞CD86 表达等方法探讨其机理。结果:A、B、C、D组移植心脏平均存活时间为7.2±0.45、13.2±2.16、7.1±0.62和15.6±3.21天,其中B、D组术后6天CD3 CD25 、有核细胞CD86 表达、供心组织急性排斥反应的强度和TNF-α的mRNA表达较A、C组显著降低(P<0.05),A、C组具有典型重度急性排斥反应特征而B、D组最轻。结论:逆转录基因载体介导的IDO基因转染能够延长移植心脏存活时间的作用,其机理包括抑制反应性T细胞、抑制有核细胞共刺激信号CD86表达、抑制心肌组织表达TNF-α等。     

Toll样受体4抑制剂联合雷帕霉素对小鼠移植心脏存活的影响

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对小鼠心脏移植后移植物存活的影响.方法 采用小鼠腹部异位心脏移植模型,供者为BALB/C小鼠,受者为C57BL/6小鼠.受者分为4组:对照组、雷帕霉素(Rapa)组、TAK-242组及Rapa+TAK-242组,术后移植后观察移植物存活情况;部分受者于术后7 d或15 d获取移植心脏用于组织病理学检测.结果 TAK组移植心脏平均生存时间稍延长但未达到统计学意义[(8.2±0.2)d vs(7.6±0.2)d,P=0.086].Rapa+TAK-242组移植心脏平均生存时间较对照组显著延长[(56.1±3.7)d vs(7.6±0.2)d,P<0.001],并且优于Rapa组[(56.1±3.7)d vs(19.2±1.5)d,P<0.001].组织病理学结果 提示Rapa+TAK-242组移植物排斥反应最轻,组织中CD11c阳性树突状细胞减少,CD3阳性淋巴细胞浸润减少,C4d沉积减轻.结论 TAK联合Rapa能够减少移植心脏组织内炎症细胞浸润,减轻排斥反应,延长移植心脏存活.     

α-黑素细胞刺激素处理的树突状细胞对小鼠心脏移植物存活时间的影响

目的:观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)处理的小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)预防同种异基因小鼠心脏移植排斥反应的效果.方法:在供者BALB/c小鼠DC培养的过程中加入α-MSH,用流式细胞仪分析DC的表型变化,用ELISA方法检测培养上清中IL-12的分泌水平.在同种异基因心脏移植前,分别将α-MSH处理后7 d的 DC(α-MSH-DC)和正常培养7 d的 DC(Day7-DC)输至受者C57BL/6小鼠体内,并另设输入PBS的小鼠为对照组,通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化.结果:α-MSH-DC表面分子的表达明显低于Day7-DC.α-MSH-DC培养上清中分泌IL-12 [(95.2±6.3) pg/ml]的水平也明显低于Day7-DC[(197.1±10.2) pg/ml].与PBS组[(7.17±0.26) d]相比,Day7-DC组[(6.25±0.61) d]的心脏移植物存活时间缩短;而α-MSH-DC组[(15.08±1.32) d]的心脏移植物存活时间明显延长.与Day7-DC和PBS组相比,α-MSH-DC组移植后血清IL-2和IFN-γ细胞因子水平明显降低.结论:α-MSH可以抑制体外培养的DC表面分子的表达和IL-12的分泌;α-MSH处理的DC在体内能延长同种异基因心脏移植物的存活时间.     

术前输注负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞延长移植心存活时间的实验研究

目的:利用负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞(imDC)干扰T细胞抗原间接识别途径,观察对同种异体移植心存活时间的影响。方法:用低剂量粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)培养受者小鼠骨髓源性imDC,并在培养过程中加入供者可溶性抗原共同孵育,流式细胞术检测细胞表型,观察其在体外刺激自体T细胞增殖的能力,并于术前1周将约2.0×106个树突状细胞(DC)输入受者体内,观察其对同种异体移植心存活时间的影响。结果:受者DC可通过共同孵育的方式有效负载供者抗原,负载供者抗原的受者imDC在体外不能有效刺激自体T细胞活化增殖,将其于术前输入受者体内,移植心的存活时间由(7.2±1.7)天延长至(17.7±3.3)天。结论:术前输注负载供者抗原的受者imDC,可明显延长移植心的存活时间。     

小鼠-大鼠颈部及腹部异种心脏移植模型的建立及比较

目的:建立并比较小鼠—大鼠颈部和腹部协调性异种心脏移植模型。方法:用昆明小鼠和Whister大鼠分别做供体和受体,将小鼠的升主动脉和肺动脉和肺动脉分别与大鼠的右颈总动脉和右颈外静脉端端吻合,建立颈部异种心脏移植模型;将小鼠的升主动脉和肺动脉分别与大鼠的腹主动脉和下腔静脉端侧吻合,建立腹部异种心脏移植模型。通过取心时间、血管吻合时间及并发症对颈部和腹部模型进行比较。结果:正式实验阶段颈部和腹部模型的移植成功率分别为90％和93.3％,移植心平均存活时间分别为2.67±0.73和2.43±0.69天,并发症发生率明显低于预实验阶段。病理检查移植心呈典型的急性血管性排斥改变。结论:小鼠—大鼠颈部和腹部心脏移植模型有各自的特点,经过一定时期的训练,均可稳定的用于实验,是研究协调性异种移植的理想模型。     

环孢霉素和供体脾细胞门静脉接种延长小鼠心脏移植存活

目的探讨同种异系抗原门静脉接种和环孢霉素A(CsA)对同种异系间小鼠心脏移植存活期的影响。方法无菌条件下取出NIH/q新生小鼠(出生24 h内)的心脏,行BALB/C小鼠耳后皮下移植。移植前1周,预先用NIH/q小鼠脾细胞或用与供、受体无关的C57BL/6小鼠脾细胞行受体小鼠门静脉或腔静脉接种,同时给予小剂量CsA(4 mg/kg·b.w.喂服(术前7 d~术后5 d)。观察各组移植物的存活时间。结果供体脾细胞门静脉接种加CsA组移植物存活时间为(31.00±3.23)d,较其他各组显著延长(n=6,P<0.05);单纯门静脉接种组和单纯CsA组移植物存活时间分别为(16.11±1.97)和(18.50±2.59)d,较对照组[(11.71±1.50)d]显著延长(P<0.05);供体脾细胞经腔静脉接种以及与供、受体无关的C57BL/6小鼠脾细胞门静脉接种对移植物存活时间无显著影响(P>0.05)。结论供体脾细胞门静脉接种和CsA对延长同种异系小鼠心脏移植存活时间有协同作用,其作用具有抗原特异性。     

环孢霉素和供体脾细胞门静脉接种延长小鼠心脏移植存活

OBJECTIVE: To investigate the effect of portal venous inoculation of donor splenocytes combined with cyclosporin A (CsA) administration on cardiac allograft survival in mice. METHODS: Heterotopic cardiac transplantation between fully allogenic NIH/q and BALB/C strain mice was performed. A modified procedure of neonatal heart-in-ear transplantation, as originally described by Fulmer et al, was adopted. We prepared donor splenocytes from NIH/q or third-party C57BL/6 spleens for BALB/C recipients, which were injected preoperatively via the recipient portal vein or the systemic vein 1 week before the heart-in-ear transplantation. The recipients were subsequently treated with a short course of the immunosuppressive agent, CsA (4 mg/kg starting from 7 d before the operation till 5 d after it). RESULTS: Portal venous inoculation of donor splenocytes combined with CsA significantly prolonged cardiac graft survival (n=6, P<0.05) that reached 31.00+/-3.23 d, and 2 of the 6 allografts survived for more than 35 d. Donor splenocytes injected via the systemic vein or third-party C57BL/6 mice splenocytes injected via the portal vein did not prolong graft survival (P>0.05). CsA alone or portal venous inoculation of donor-specific splenocytes alone also prolonged graft survival (P<0.05), with mean graft survival time of 18.50+/-2.59 d and 16.11+/-1.97 d respectively. CONCLUSION: Combination of portal venous inoculation of donor-specific splenocytes and CsA can prolong murine cardiac allograft survival, which is donor antigen-specific.     

雷公藤内酯醇抗心脏移植排斥反应的实验研究

目的验证雷公藤内酯醇的抗移植排斥反应作用。方法应用小鼠同种异位心肌移植模型。结果和结论雷公藤内酯醇可明显延长移植心的存活期,其免疫抑制效果与用药剂量和给药时机有关,术后给药可明显延长移植物存活期。     

A study of human cardiac allograft in a patient with four-year survival

A report is presented of a patient surviving four years with a human cardiac allograft. The allograft arteries showed marked graft arteriosclerosis with intimal fibrocellular proliferation. The arteriosclerotic lesions occurring in the larger epicardial vessels were strikingly similar to spontaneous atherosclerosis. The relationship of the long-term survival to the use of a permanent transvenous pacemaker and of the development of severe vascular lesions to acute rejection and hyperlipemia are discussed.     

B7反义肽预处理脾细胞诱导异基因嵌合体形成及延长移植物存活

目的　尝试以B7 CD2 8/CTLA4为靶点 ,用B7反义肽 (B7AP)预处理供者的脾细胞 ,免疫受者后结合输注供者骨髓细胞 ,诱导受体形成异基因嵌合体。方法　每只用 5× 10 6/ 10 0 μlB7AP预处理的供者小鼠 (C5 7BL/ 6 )脾细胞免疫受者小鼠 (BALB/c) ,诱导特异性同种低免疫应答反应 ;在此基础上每只受者小鼠输注供者骨髓细胞 2× 10 7/ 10 0 μl,诱导受者形成异基因嵌合体 ,以流式细胞术 (FACS)连续动态监测嵌合状态的维持情况并用小鼠心肌移植模型研究移植物存活的影响因素。结果　在受者体内成功诱导出了特异性同种低免疫应答反应 ,应答水平只有正常未免疫组的 4 3%(n =6 ,P <0 0 0 1) ;嵌合状态可以维持到 10 0d以上 (n =6 ) ,15 0d时嵌合率仍有 3.4 5 % ;嵌合小鼠进行同种异体小鼠心肌移植存活超过 10 0d(n =6 ) ,而对照组阿霉素组只能延长至 16d(n =6 )。结论　B7AP预处理小鼠脾细胞可诱导形成异基因嵌合体 ,并显著延长同种小鼠心肌移植存活的时间 ,为移植免疫的研究提供了一个简单易行的嵌合体平台技术 ,也为用B7AP在移植免疫中的应用进行了有益的尝试。     

Microencapsulation of rat islets prolongs xenograft survival in diabetic mice.

ＭｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｏｆｒａｔｉｓｌｅｔｓｐｒｏｌｏｎｇｓｘｅｎｏｇｒａｆｔｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｍｉｃｅＺｈｏｕＭａｏｈｕａ周茂华，ＣｈｅｎＤｏｎｇｍｉｎｇ陈东明，ＹａｏＱｉ姚琦，ＸｉａＺｈａｏｊｉ夏兆骥，ＷａｎｇＣｈ...     

输入供体血对延长大鼠移植胰腺功能存活时间的初步研究

目的:探讨供体血输入同种大鼠对诱导胰腺移植耐受的可能性.方法:用雄性Wistar大鼠作为实验的供受体,胰腺移植当天取供体大鼠全血1ml,注入糖尿病受体大鼠腹腔,辅以短期的硫唑嘌呤(Aza).结果:移植胰腺功能存活28～112天(平均64.2天),与单纯用硫唑嘌呤组(10.2天)或单纯输入供体血液组(9.8天)相比,移植胰腺功能存活时间显著延长(P＜0.01).结论:移植前短期使用免疫抑制剂加移植当天供体血液输入能延长大鼠移植胰腺功能存活.     

Activation of aryl hydrocarbon receptor prolongs survival of fully mismatched cardiac allografts

Recent data suggest that activation of aryl hydrocarbon receptor (AhR) by its high-affinity ligand 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) results in expansion of regulatory T (Treg) cells and suppresses the development of autoimmune and allergic diseases in several models. Treg cells have been increasingly documented to suppress allograft rejection and even to establish stable long-term graft acceptance. However, the involvement of TCDD in the regulation of solid organ transplantation rejection is largely unknown. Here, we examined whether activation of AhR with TCDD altered cardiac allograft rejection in an allogeneic heart transplant model. Recipient C57BL/6 (H-2b) mice were adminis-trated with a single intraperitoneal injection of TCDD, and the murine cardiac transplant models from BALB/c (H-2d) to C57BL/6 (H-2b) were built 24 h later. The complete cessation of cardiac contractility was defined as the observation endpoint. The effect of TCDD on T-cell proliferation was assessed by mixed lymphocyte reaction (MLR). Histological and immunohistochemical analyses were performed to estimate the severity of rejection. The phenotype and cytokine profile of lymphocytes were analyzed by flow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Activation of AhR remarkably prolonged the survival of cardiac allografts to more than 20 days. In vitro, TCDD ugregulated the frequency of CD4+CD25+Foxp3+ Treg cells and suppressed the proliferation of T lymphocytes. In vivo, the prolonged survival time was associated with increased number of Treg cells in allografts and spleens. Furthermore, the secretion of interferon-γ (IFN-γ) and interleukin-17 (IL-17) was reduced to less than 50% of that of the PBS treatment control group by TCDD treatment, whereas IL-10 was elevated to 10-fold of that of the PBS treatment control group. Collectively, our data indicate that activation of AhR with a single dose of TCDD significantly prolonged the survival of fully allogeneic cardiac grafts, and the mechanism underlying this effect might be involved in the induction of Treg cells.