三线定量胶体金免疫亲和试纸法定量中药饮片中黄曲霉毒素B1及B1、B2、G1、G2总量的研究

目的利用三线胶体金侧流向免疫色谱技术,针对中药特点对样品前处理和检测曲线进行研究,建立快速、准确的定量测定中药饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2总量的方法,迅速检测中药饮片中黄曲霉毒素的污染程度。方法利用胶体金免疫亲和法建立《中国药典》2020年版规定限度的24种中药饮片中黄曲霉毒素测定方法,进行方法学验证,并对60种中药饮片,共计195批次样品进行分类测定。同时利用液质联用(三重四级杆质谱法)对上述样品进行定量检测,并比对2种检测方法。采用配对t检验法比较2种方法的检测结果是否存在显著性差异;通过加入其他真菌毒素对试纸条的特异性进行考察。结果通过胶体金侧流向免疫色谱技术测定中药饮片中黄曲霉毒素含量,胶体金方法和液质联用方法检测结果一致,无显著性差异,加样回收率为80.3%～119.7%,与黄曲霉毒素M1和M2、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮等其他真菌毒素没有交叉反应。单独研究黄曲霉毒素B1与B1、B2、G1和G2总量之间无交叉干扰,且其含量测定符合《中国药典》2020年版规定的标准检验要求。结论胶体金检测方法可以准确、定量、快速检测中药饮片中黄曲霉毒素含量。该方法具有简单、快捷和低毒等优点。     

中成药及中药材中黄曲霉毒素B1含量的调查实验研究

中药大多为天然植物药,在采收贮藏过程中极易发霉,污染黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是强致癌物质。因此对中药污染黄曲霉毒素含量进行调查研究,为制定其限度标准提供依据,是一个急待解决的问题。本调查实验研究采用酶联免疫吸附分析法(ELISA) [1] ,对中成药及中药材进行抽样检测,检测了不同剂型4 4个品种114批中成药,以及2 4个品种51批中药材中黄曲霉毒素B1(AFB1)的含量。1　仪器和材料DG30 2 2型酶联免疫检测仪(华东电子仪器厂)。AF....     

酶联吸附免疫法和胶体金免疫色谱技术在中药黄曲霉毒素检测中的应用进展

黄曲霉毒素是中药中较易产生的毒性极强的真菌毒素之一。建立黄曲霉毒素简单、快速、高通量、现场化的检测方法对实现中药黄曲霉毒素限量监控、保障中药安全性具有重要意义。酶联吸附免疫法(ELISA)和胶体金免疫色谱(GICA)技术为中药黄曲霉毒素的大批量快速检测和现场单个或少数样品即时检测提供了有效的技术手段。虽然现在已有较多关于此类检测方法的报道,但没有形成标准方法。对已报道的中药黄曲霉毒素检测方法进行综述,以期为形成方法标准提供参考。     

黄曲霉毒素B1免疫快速检测技术研究进展及其在中药中的应用

黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)是由产毒真菌(如黄曲霉和寄生霉菌)产生的有毒次级代谢产物,具有致癌、致畸、致突变作用。研究表明AFB1广泛存在于农作物、食品、饲料甚至中药中,对人类健康造成了严重的安全隐患。建立一系列适用于不同基质中AFB1的多种快速检测技术,为预防和控制食品与药品的安全、保障人类健康方面具有重要意义。随着小分子免疫技术的不断提高,近年来各种检测形式的AFB1免疫快速技术被开发利用到现场快速检测领域,该文系统综述了我国现行有效的AFB1检测相关标准及近年来一些地区和国家等对中药材中黄曲霉毒素的限量标准情况,这些限量标准主要针对食品、饲料及一些易污染中药材中的黄曲霉毒素,而研究表明除了限量标准进行规定的中药材品种外也存在一些药用植物及其产品也有被黄曲霉毒素污染的情况。并对AFB1抗原抗体制备技术,以及基于抗原抗体特异性识别功能的快速检测方法包括酶联免疫吸附法、亲和色谱法、荧光免疫法、化学发光免疫法和新型免疫传感器法的开发及应用进行了归纳总结与对比。以期为中药规范化种植、中药集散贸易市场、药店医院、中药质量监管等方面形成快速、准确、灵敏的检测技术标准提供参考,确保中药的质量安全。     

闽产砂仁中黄曲霉毒素B1的含量测定及限量制定

目的 对闽产21批次砂仁中黄曲霉毒素B1的含量进行测定,并初步制定其限量标准.方法 间接竞争酶联免疫吸附法（ELISA法）.结果 被测样品均有不同程度的污染黄曲霉毒素B1(AFB1),并且在贮藏过程中有发霉现象者含量较高.结论 建立中药长泰砂仁的黄曲霉毒素B1含量限度标准非常必要.     

中药黄曲霉毒素测定酶联免疫吸附法的研制

《中国药典》2020年版通则2351《真菌毒素测定法》中黄曲霉毒素测定法第三法采用了酶联免疫吸附法。该方法利用高通量单克隆抗体筛选技术,筛选得到了中药材专属性可仅特异性识别黄曲霉毒素B_1和可以特异性识别黄曲霉毒素B_1,B_2,G_1,G_2总量的2类特异性单克隆抗体。通过优化包被抗体、酶标抗原浓度,以及酶联免疫吸附法的反应体系,分别建立了可用于中药材、饮片及中药制剂中黄曲霉毒素B_1和黄曲霉毒素B_1,B_2,G_1,G_2总量测定的专属性酶联免疫吸附法。该方法在实际样品测定中回收率为60%～120%,相对标准偏差15%。另外,针对现行《中国药典》中药材黄曲霉毒素测定前处理方法复杂、昂贵等问题,通过筛选和方法优化,建立了不依赖于免疫亲和柱的中药材黄曲霉毒素液液萃取前处理方法,该提取方法可以对中药材中的黄曲霉毒素进行高效提取。黄曲霉毒素酶联免疫吸附法作为中药黄曲霉毒素控制的有效方法,有效降低检测成本,便于操作,实现检测关口前移,有利于实现全生产过程的质量监管。     

中成药及中药材中黄曲霉毒素B_1含量的调查实验研究

中药大多为天然植物药,在采收贮藏过程中极易发霉,污染黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是强致癌物质。因此对中药污染黄曲霉毒素含量进行调查研究,为制定其限度标准提供依据,是一个急待解决的问题。本调查实验研究采用酶联免疫吸附分析法(ＥＬＩＳＡ)[1],对中成药及中药材进行抽样检测,检测了不同剂型44个品种114批中成药,以及24个品种51批中药材中黄曲霉毒素Ｂ1(ＡＦＢ1)的含量。1　仪器和材料ＤＧ3022型酶联免疫检测仪(华东电子仪器厂)。ＡＦＢ1标准品、ＡＦＢ1抗原结合物、ＡＦＢ1抗体(Ⅰ抗)、酶标羊抗兔辣根过氧化物酶(Ⅱ抗)、聚苯乙烯酶标板,均…     

胶体金免疫层析法测定中药材中黄曲霉毒素B1的含量

目的验证胶体金免疫层析法测定中药材中黄曲霉毒素B1含量的准确性。方法通过假阳性率/假阴性率实验、对100批次样品同时采用胶体金免疫层析法和高效液相法进行测定并比较结果。结论胶体金免疫层析法测定结果高符合率,无假阴性结果。结论该法适用于中药材中黄曲霉毒素B1的抽样现场快检筛查。     

山萸肉饮片中黄曲霉毒素B1含量及限度的研究

目的测定山萸肉饮片中黄曲霉毒素B1(AFB1)的含量并建立限度标准。方法间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)。结果山萸肉饮片均有不同程度的污染黄曲霉毒素B1(AFB1),炮制后降低,但都在国家规定的食品类AFB1限度范围之内。结论山萸肉饮片中黄曲霉毒素B1的含量限度标准初步确定为≤5μg/kg,与国家食品类限度标准相同。     

加热炮制对中药饮片黄曲霉毒素B1含量的影响

目的:比较不同炮制方法对中药饮片黄曲霉毒素B1(AFB1)含量的影响。方法:间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)测定中药饮片加热炮制前后黄曲霉毒素B1含量。结果:加热炮制能够降低饮片AFB1的含量,但对含量较高者炮制并不能使其达到安全范围。加热炮制的方法不同,对AFB1的含量影响不同。结论:加热炮制对饮片AFB1含量有一定影响。应当建立饮片AFB1含量限度标准。含油脂不多的果实类饮片AFB1的含量限度标准初步确定为≤5μg/kg,含油脂较多的种子类药材饮片限量标准初步为20μg/kg,与国家食品类限度标准相同。     

中药黄曲霉毒素含量测定及限度标准的研究

中药材在加工、贮藏、运输的过程中,如条件不当,很容易发生霉变,污染黄曲霉毒素。建立黄曲霉毒素AFB1含量限度标准非常必要。可以采用酶联免疫吸附法（ELISA法）,在实验研究的基础上,参考食品黄曲霉毒素AFB1含量限度标准,分别建立中药材、中药饮片和中成药的黄曲霉毒素含量限度标准。     

免疫亲和柱净化-在线柱后光化学衍生 HPLC-FLD 检测莲子中黄曲霉毒素B1, B2, G1, G2及其液质确证

目的:建立高效液相色谱-在线柱后光化学衍生-荧光检测器检测药食同源中药材莲子中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的含量,并采用液质联用法进行确证。方法:样品以甲醇-水(80∶20)溶液提取,经免疫亲和柱净化后,利用在线柱后光化学衍生-HPLC-FLD进行分析测定。并进一步采用LC-MS/MS对阳性样品进行确证。结果:在优化条件下,黄曲霉毒素B1,G1在0.3～30μg.L-1,黄曲霉毒素B2,G2在0.09～9.0μg.L-1线性关系良好,r>0.999 9,回收率86.7%～99.1%,RSD<4.87%。黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的检测限(LOD)分别为0.08,0.03,0.10,0.03μg.kg-1。所测的20批莲子样品中,有14批样品的黄曲霉毒素检测结果呈阳性,其中黄曲霉毒素B1的污染水平为0.40～586μg.kg-1,黄曲霉毒素总量(B1+B2+G1+G2)的污染水平为0.40～602.5μg.kg-1。通过LC-MS/MS确证,在与对照品相同的保留时间处,样品与对照品有相同的特征离子碎片,排除了样品假阳性的可能。结论:该方法简便快速,灵敏度高,重复性好,适用于莲子中黄曲霉毒素的检测。     

HPLC法同时测定21种中药饮片中4种黄曲霉毒素的含量

目的:对21种中药饮片中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2进行含量测定,了解中药饮片的质量状况。方法:采用高效液相色谱(HPLC)-柱后碘衍生法进行含量测定,Waters Sunfire C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温35℃,以甲醇-乙腈-水(33∶12∶55)为流动相,流速1.0 mL/min。荧光检测器激发波长λex=360 nm,发射波长λem=450 nm。以0.05%碘溶液为衍生溶液,衍生化泵流速为0.3 mL/min,衍生化温度为70℃。结果:21种中药饮片中,只有胖大海、酸枣仁、大枣、全蝎、淡豆豉、牛蒡子、千金子7个品种未检出黄曲霉毒素;4批柏子仁、6批薏苡仁全部检出黄曲霉毒素,检出率均为100%,其中3批柏子仁的黄曲霉毒素含量超出法定标准限量,不合格率75%;2批薏苡仁的黄曲霉毒素含量超出法定标准限量,不合格率33%。桃仁、陈皮等其余12个品种亦检出黄曲霉毒素,但含量未超出法定标准限度。结论:虽然黄曲霉毒素检测成本较高,但为保证用药安全、减少用药风险,对中药饮片进行合理的黄曲霉毒素监督检测具有必要性。     

免疫亲和柱净化-在线柱后光化学衍生-HPLC-FLD 同时测定甘草中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2 和赭曲霉毒素A的含量

目的:建立同时检测甘草中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2和赭曲霉毒素A的免疫亲和柱净化-在线柱后光化学衍生-HPLC- FLD测定的方法.方法:样品经甲醇-水(80:20)超声提取后,用免疫亲和柱净化和富集;以甲醇和0.5％乙酸溶液为流动相进行梯度洗脱,通过柱后光化学衍生,荧光检测器测定.结果:黄曲霉毒素G2,G1,B2,B1和赭曲霉毒素A的检测限分别为0.02,0.06,0.015,0.03,0.25μg·kg-1,平均加样回收率为76.0％～103％,RSD低于13％.结论:该方法快速简便、准确,可用于甘草中同时测定黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2和赭曲霉毒素A的含量.     

不同牛膝饮片黄曲霉毒素B1含量比较和限度的确定

目的:比较不同牛膝饮片黄曲霉毒素B1(AFB1)的含量并确定限度标准.方法:间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA).结果:牛膝、酒牛膝饮片有不同程度的污染AFB1,但都在国家规定的食品AFB1限度范围之内.结论:牛膝饮片的黄曲霉毒素B1(AFB1)的含量限度标准初步确定为≤5μg·kg-1,与食品AFB1限度相同.     

免疫亲和柱净化HPLC柱后光化学衍生化法检测中药及染菌中药制剂中间体的黄曲霉毒素

目的:采用免疫亲和柱净化,结合柱后光化学衍生化的高效液相色谱-荧光检测器建立同步检测常用中药材及染菌中药制剂中间体中的黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的方法.方法:采用免疫亲和柱净化洗脱结合柱后光化学衍生手段,建立黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的分析方法,并分别对14种中药材及染菌中药制剂中间体进行检测.结果:黄曲霉毒素B2和G2,B1和G1分别在0.15 ～ 6.0和0.5 ～20.0 ng·mL-1线性关系良好,方法准确稳定.所选的14种中药中川芎和柏子仁检测出黄曲霉毒素B1,而以染菌中药川芎所制备的5种提取物中均未检出黄曲霉毒素.结论:采用此方法检测常用中药材及其制剂中间体中的黄曲霉毒素无干扰性杂峰,结果准确可靠.     

高效液相色谱柱后衍生法测定果实类药材中的黄曲霉毒素

目的 检测果实类药材中的黄曲霉毒素,了解其污染情况。方法 样品经70％甲醇提取、免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-柱后衍生-荧光检测器进行分析测定果实类药材中4种黄曲霉毒素(G2、G1、B2、B1)的含量。结果 检测的25批次的药材中,共6个批次样品检出黄曲霉毒素,检出率为24％;桃仁和莲子2个批次样品黄曲霉毒素B1含量超过5 μg·kg-1,阳性率为8％。结论 果实类药材中黄曲霉毒素的含量大部分低于国家关于黄曲霉毒素的含量标准,但尚需要继续研究扩大监测品种。     

间接竞争酶联免疫吸附法快速筛检莲子中黄曲霉毒素B1的污染水平

建立间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)快速筛检"药食同源"中药-莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)的污染水平,并采用超快速液相串联质谱(UFLC-MS/MS)进行结果确证。通过基质匹配,AFB1在0.171~7.25μg·L-1线性关系良好(R2>0.978),半数抑制浓度(IC50)为1.29μg·L-1,加样回收率为74.73%~126.9%,RSD<5%,检测限(IC10)为0.128μg·L-1。将ic-ELSIA法应用于20批莲子中AFB1的筛查,结果显示:于30℃,30%湿度条件下贮藏一年的1~15号样品中AFB1污染水平为1.19~115.3μg·kg-1,40%样品中AFB1含量超过限量标准(5μg·kg-1);新购买的16~20号样品中AFB1污染率为40%。以上结果经液质联用技术确证,通过计算ic-ELISA和液质测定结果之间的皮尔森相关系数可知,二者测定结果的匹配度达0.997。建立的ic-ELISA分析方法操作简便、灵敏、结果准确,可用于莲子中AFB1的高通量现场快速检测。     

赵磊1,刘仕聪2,刘云菲2,李正刚1,王路宏1,孙艳涛2

目的:建立蛴螬的黄曲霉毒素的测定方法。方法:采用光化学衍生进行前处理,分子荧光-高效液相色谱法对蛴螬中黄曲霉毒素进行测定,以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)为流动相;激发波长λex=360nm,发射波长λex=450nm;流速1.0mL·min-1。结果:建立的方法能有效测定黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的含量。结论:采用的光化学衍生-高效液相色谱法的实验结果表明,试验方法准确、简便,可用于测定有害物质黄曲霉毒素。     

6种中药材黄曲霉毒素B_1快速检测方法研究

目的:建立中药材黄曲霉毒素B_1胶体金快检方法。方法:对酸枣仁、莲子、薏苡仁、槟榔、决明子和远志6种中药材的前处理方法进行研究,使胶体金法检测能够检测6种中药材中黄曲霉毒素B_1;同时建立高效液相色谱法为标准方法,对快检方法的准确性进行验证。结果:胶体金快检方法检测6种中药材黄曲霉毒素B_1灵敏度为5μg·kg-1,重复性和特异性良好;两种方法检测6种中药材样品共计111批次,结果表明快检方法的判断准确性与液相方法相比达到98.2%。结论:快检方法对样品的结果判断与液相色谱法高度一致,胶体金快检方法简单、快速、准确,可用于酸枣仁等6种中药材中黄曲霉毒素B_1筛查。