RNA干扰对SKOV3卵巢癌细胞株Skp2表达的抑制作用

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术对SKOV3卵巢癌细胞株Skp2表达的抑制作用.方法:设计合成针对Skp2的小干涉RNA(siRNA)并进行转染.实验分为空白对照组、转染组1、转染组2、转染对照组及阴性对照组.采用Real time PCR和Western blotting技术检测各组Skp2 mRNA和蛋白水平的变化,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组卵巢癌细胞增殖情况.结果:应用Skp2-siRNA干扰SKOV3卵巢癌细胞株后,转染组1、转染组2的Skp2mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞增殖明显受限,与空白对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05),转染组1与转染组2之间差异无统计学意义(P＞0.05).转染组1与转染组2基因沉默效率分别为75.31%和76.86%,蛋白抑制率分别为62.10%和63.11%,细胞增殖抑制率分别为52.75%和53.06%.结论:RNAi技术能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株Skp2的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖.     

Cpd5对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：观察Cpd5[2-（2-巯基乙醇）-3-甲基-1,4-萘醌,Compound5]对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法观察Cpd5对SK-OV3细胞的生长抑制作用,AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测Cpd5对SKOV3细胞的凋亡诱导,Hoechst-33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态。结果：5、10、20、30、40、50、60μmol/LCpd5处理SKOV3细胞48h,生长抑制率分别为2.77%、5.19%、10.61%、41.15%、71.37%、82.90%、89.81%。不同时间点（12、24、48和72h）检测,细胞生长抑制率存在剂量-时间依赖关系。流式细胞术检测,30μmol/LCpd5处理12、24和48h后,细胞凋亡率分别达9.25%、20.07%、56.16%;50μmol/L组的细胞凋亡率明显高于30μmol/L,且随时间增加而显著增加。用40、50和60μmol/LCpd5处理细胞12h,光镜观察即可见明显的形态学改变。荧光显微镜观察：AnnexinV-EGFP/PI双染显示,实验组比阴性对照组细胞凋亡率明显增多;Cpd5作用24、48h后,Hoechst-33258染色可见细胞出现明显的凋亡形态,20μmol/L浓度组凋亡率增加,30、40、50、60μmol/L各组细胞凋亡率显著增加。结论：Cpd5能以剂量-时间依赖的方式抑制SKOV3细胞增殖并诱导凋亡,是潜在的抗卵巢癌新化合物。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对人胃癌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人胃癌细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因蛋白激酶B(pAkt)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kip1蛋白表达的影响.方法 分别用不同浓度渥曼青霉素处理处于对数生长阶段的BGC823细胞12、24、48 h,利用MTT实验检测其对胃癌细胞增殖的影响,胃癌细胞凋亡及细胞周期的检测采用流式细胞术,Western-blotting检测p-Akt、p-AMPK、Skp2及P27kip1蛋白的表达变化.结果 渥曼青霉素可明显抑制BGC823细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.20 mmol/L渥曼青霉素作用细胞24 h时,细胞生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(44.44±3.17)％;Western blot检测显示,pAkt、pAMPK及Skp2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少,P27kip1蛋白表达随着药物浓度增加而增加.结论 PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素能够明显下调胃癌细胞的增殖活性,导致胃癌细胞周期被阻滞于G0/G1期并诱导细胞发生凋亡,进一步研究证实PI3K/Akt信号通路介导的Skp2及P27kip1蛋白调控在凋亡过程中发挥重要作用.     

5-氟尿嘧啶在Caco-2细胞模型中的吸收特性

为研究5-氟尿嘧啶(5-FU)在Caco-2细胞模型中的吸收特性,用Caco-2细胞模型,分别测定了在各种条件下对5-FU的吸收。结果显示:吸收在pH6的介质中为佳;吸收的初速随浓度的增加趋于一个饱和值,Michaelis常数K_m=24mmol·L^-1;吸收可被氰化钠、哇巴因、双嘧达莫等代谢抑制剂抑制,也被同类结构的化合物尿嘧啶、胸腺嘧啶、尿核苷等抑制。由此可知,5-FU的吸收可由尿嘧啶载体转运。     

姜黄素联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的探讨姜黄素及其联合顺铂对体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的抑制作用。方法将培养的人卵巢癌SKOV3细胞分别单独(姜黄素组或顺铂组)及联合(姜黄素与顺铂联用组)加入不同浓度姜黄素(5、10、20、40μmol/L)、顺铂(2.5 mg/L)作用后,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测SKOV3细胞增殖情况。结果不同浓度姜黄素组随着药物浓度增加、作用时间延长,细胞的增殖抑制率上升,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组明显高于单一用药组(P<0.05),两药联合应用具有协同作用。结论姜黄素对卵巢癌SKOV3细胞增殖具有抑制作用,在一定范围内,这种抑制作用呈剂量-时间依赖性;姜黄素与顺铂联合应用具有协同作用,可提高SKOV3细胞对顺铂的敏感性,是一种理想的化疗增敏剂。     

前列腺癌组织中Skp2的表达及其与前列腺癌术后复发的关系

目的 研究S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)在前列腺癌患者中的表达及其与前列腺癌术后复发的关系.方法 选择2010年6月-2012年6月接受手术的前列腺癌86例作为观察组,同时选取良性前列腺增生25例作为对照组,检测两组前列腺组织中Skp2的mRNA水平和Skp2蛋白的表达,根据Skp2表达情况将观察组分为阳性组和阴性组,分析Skp2表达与临床病理特征及术后复发的关系.结果 与对照组相比,观察组前列腺癌组织中Skp2mRNA和Skp2蛋白的表达均显著升高(P＜0.05).观察组Skp2阴性35例的1、2、3年复发率为8.57％、25.71％、31.43％,显著低于Skp2阳性51例的27.45％、39.22％、49.02％ (P＜0.05);Skp2阴性患者1、2、3年生存率分别为97.14％、91.43％、82.86％,显著高于Skp2阳性患者的90.19％、84.31％、70.59％ (P＜0.05).结论 前列腺癌组织中Skp2 mRNA和Skp2蛋白的高水平表达与前列腺癌组织分型、临床分期、肿瘤浸润程度以及淋巴结转移有一定关系,可能是前列腺癌发展的重要机制之一.     

HPLC法同时测定人血浆中5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2＇-脱氧尿嘧啶核苷的浓度

目的：建立一种同时测定人体血浆中5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2＇-脱氧尿嘧啶核苷浓度的HPLC法。方法：以肌苷为内标，血浆样品用硝酸银（10％）沉淀蛋白质，采用C18柱，检测波长为266nm，流动相：0．01mol·L^-1磷酸盐（用2mol·L^-1氢氧化钠溶液调pH为7．0）-甲醇（96：4），流速1．0mL·min^-1，柱温为45℃。结果：5-氟尿嘧啶和5-氟-2＇-脱氧尿嘧啶核苷分别在0．1～20μg·mL^-1（r=0．9997）和0．2～40μg·mL^-1（r=0．9997）浓度范围内线性关系良好，最低检测浓度分别为5和10ng·mL^-1，方法回收率分别为98．2％～101．2％、99．5％～102．3％，日内、日间RSD均小于6％。结论：方法灵敏、快速、准确，适用于临床上测定5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2＇-脱氧尿嘧啶核苷的血药浓度及药动学的研究。     

5-氮杂-2-脱氧胞苷提高结肠癌SW620细胞株对5-FU的化学敏感性

目的 探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)可能增强结肠癌SW620细胞株对5-氟尿嘧啶(5-FU)化学敏感性的作用.方法 分别用不含药物组(A组)、5-aza-CdR(B组)、5-FU(C组)以及5-aza-CdR联合5-FU(D组)作用人结肠癌SW620细胞株后,光镜下观察细胞形态学改变,MTT法测定细胞的生长情况和流式细胞术检测细胞凋亡.结果 A、B、C、D组细胞存活率分别为100％、(65.85±0.95)％、(45.14±1.44)％、(30.18±0.89)％;B、C、D组细胞存活率均明显低于A组(P＜0.05),D组低于B、C组(P＜0.05).A、B、C、D组细胞凋亡率分别为(4.50±0.61)0％、(16.80±0.57)％、(12.66±0.43)％、(42.07±0.85)％;与A组比较,B、C、D组引起细胞凋亡增加(P＜0.05);与B组、C组比较,D组促进细胞凋亡作用更明显(P＜0.05).结论 5-aza-CdR在体外提高了结肠癌SW620细胞对5-FU的化学敏感性.     

Skp2在急性白血病中的表达及与预后的关系

目的：探讨Skp2（S期激酶相关蛋白2）在急性白血病中的表达并分析其与预后的关系。方法：采用免疫组织化学法检测Skp2在51例初治急性白血病患者及20倒良性血液病患者（对照组）骨髓细胞中的表达,并分析急性白血病阳性表达与阴性表达完全缓解率的差别。结果：Skp2在急性白血病骨髓细胞中阳性结果的表达率明显高于对照组（P〈0．01）;Skp2阳性表达患者的完全缓解率显著低于阴性表达患者（P〈0．05）。结论：Skp2的过度表达与急性白血病的发生发展密切相关,且阳性表达可能提示急性白血病的预后不良。     

采用组织芯片技术检测乳腺癌中Skp2和p27的表达

目的观察乳腺癌中S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，Skp2）、细胞周期调控因子p27的表达情况．探讨它们在乳腺癌中表达的意义及相互关系。方法选取外科手术切除乳腺癌组织标本80例，采用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测乳腺癌中Skp2和p27的表达。结果80例乳腺癌中Skp2和p27的阳性率分别为46．3％、41．3％。p27阳性乳腺癌中Skp2阳性率为15．2％。p27阴性乳腺癌中Skp2阳性率为68．1％，两者具有显著性差异，P〈0．01。结论Skp2和p27的表达均与乳腺癌组织学类型无关。Skp2高表达、p27低表达与乳腺癌的浸润情况密切相关。Skp2高表达、p27低表达与乳腺癌淋巴结转移密切相关。乳腺癌中Skp2的高表达与p27的低表达之间明显负相关。在乳腺癌细胞增殖调控机制中，p27具有抑制细胞增殖的作用，Skp2促进细胞周期调控因子p27的降解，从而促进细胞增殖。应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，具有快速、方便、经济、准确的特点。     

5-氟尿嘧啶、表阿霉素、丝裂霉素单用及合用时对胰腺癌细胞Aspc-1和Bxpc-3的抑制作用

目的 :观察 5 氟尿嘧啶 (5 FU)、表阿霉素 (E ADM)和丝裂霉素 (MMC)体外对胰腺癌细胞 (Aspc 1及Bxpc 3)的作用和药物联合应用时的相互作用。方法 :采用MTT测定法观察 5 FU、E ADM和MMC单用及合用时对细胞的抑制作用 ,并应用中效原理判定药物合用的效果。结果 :单用或者合用时随着药物浓度的增加其对细胞的抑制作用也增加 ,5 FU和MMC合用于Aspc 1细胞株 ,当效应为 0 .84时CI为1,大剂量时 (效应大于 0 .84 )是协同作用 (CI <1) ,小剂量时 (效应小于 0 .84 )是拮抗作用 (CI >1)。MMC和E ADM合用时表现为轻度的拮抗作用。 5 FU和MMC、MMC和E ADM合用于Bxpc 3,当效应分别为0 .4 9、0 .6 2时CI为 1,大于此效应表现为轻度拮抗(C >1) ,小于此效应则相反。 5 FU和E ADM合用对两株细胞量效曲线图的形态相似表现为轻度的拮抗作用 ,随着效应的增加拮抗作用略有下降。结论 :药物的相互作用与药物浓度有关 ,药物及细胞株的不同其量效曲线存在较大差异。通过动脉灌注或保留导管持续灌注以提高化疗药物局部浓度能够改善胰腺癌的化疗效果。     

The clinical syndrome of 5-fluorouracil cardiotoxicity

Summary 5-fluorouracil (FUra) is one of the most frequently used drugs in cancer treatment, particularly in combination with other agents. Its activity when administered as an infusion rather than a bolus has led to a renewed and increased use. A cardiotoxicity that mimics ischemia has been associated with the administration of FUra in cancer patients. This cardiotoxicity may manifest itself as: (a) dysrythmias with and without cardiorespiratory symptoms (b) ECG changes with and without cardiorespiratory symptoms (c) cardiorespiratory symptoms with and without ECG changes (d) acute myocardial infarct; symptoms and ECG changes (e) ventricular dysfunction (f) cardiogenic shock and (g) sudden death. Several case studies which illustrate the cardiotoxic sequelae that may be associated with the use of this drug are discussed. The incidence, contributing factors, risk factors and mechanisms underlying this phenomenon are undetermined. No appropriate recommendations for monitoring patients or for predicting those patients that will develop such toxicity while receiving FUra can be made at present. Prospective studies to determine the true incidence, spectrum and mechanisms causing this syndrome are ongoing and required for its understanding and prevention.     

人参皂苷Rh2提高人乳腺癌细胞MCF-7对5-氟尿嘧啶诱导凋亡的敏感性

目的探讨人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2,G-Rh2)能否提高人乳腺癌细胞MCF-7对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的敏感性,通过协同作用扩大细胞凋亡信号。方法先用MTT法确定G-Rh2的无毒增敏质量浓度,随后将对数生长的人乳腺癌细胞MCF-7分为4组:control(不加药),G-Rh2(加入10 mg.L-1 G-Rh2),5-FU(加入25 mg.L-1 5-FU),G-Rh2+5-FU组(加入10 mg.L-1 G-Rh2和25 mg.L-15-FU),通过MTT计算联合作用指数,激光共聚焦观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色检测caspase-3、多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymer-ase,PARP)的剪切情况。结果 MTT结果显示,G-Rh2可导致5-FU诱导的人乳腺癌细胞MCF-7死亡率增加,形态学、细胞周期检测、caspase-3和PARP凋亡蛋白免疫荧光染色结果都显示,G-Rh2+5-FU组可显著提高人乳腺癌细胞MCF-7死亡率,且引起的细胞死亡为细胞凋亡作用。结论 G-Rh2可以提高人乳腺癌细胞MCF-7对5-FU的敏感性,通过协同作用诱导细胞凋亡。     

姜黄素与5-氟尿嘧啶联用对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的　体外观察 5 氟尿嘧啶与姜黄素联用对人结肠癌HT 2 9细胞增殖的相互作用。方法　采用MTT法观察不同浓度姜黄素、5 氟尿嘧啶单独或联合应用对HT 2 9细胞生长的抑制作用 ,并利用中效原理判定两药合用的效果。结果　两种药物单独应用时 ,对HT 2 9细胞的抑制作用呈明显的剂量效应关系 ;对于HT 2 9细胞 ,姜黄素的中位抑制浓度为(32± 11) μmol·L- 1,5 氟尿嘧啶的中位抑制浓度为(10 4 0± 4 5 6 ) μmol·L- 1。应用中效原理分析显示 ,两药在联合应用时为协同效应 ,并且在不同的药物浓度配比下呈相同的趋势。增大姜黄素的用量可在更宽的效应范围内获得两种药物的协同效应。结论姜黄素与 5 氟尿嘧啶在联合应用时的相互作用为协同效应 ,本结果对于结肠癌的治疗具有一定的临床意义。     

顺铂、5-氟尿嘧啶、长春新碱配伍对人肝癌细胞株(7721)的相互作用

目的:观察顺铂、5-氛尿嘧啶、长春新碱配伍在体外对人肝癌细胞株(7721)的相互作用.方法:采用MTT法利用中效原理判定两药合用的效果.结果:3种药物单独应用时随着药物剂量增加,其效应也增加;两药大剂量(大于中效剂量)合用时可产生拮抗作用(CI>1);小剂量(小于中效剂量)合用时可产生协同作用(CI>1);两药合用时的浓度比例及给药时间次序不同均会影响效应大小.结论:上述3种药物任何两种合用小剂量产生协同作用,大剂量产生拮抗作用,且效应大小与两药浓度比例及给药时间次序有关.     

人肝癌Bel7402/5-FU耐药株多药耐药与凋亡关系的研究

目的　从凋亡的角度探讨人肝癌细胞Bel74 0 2 / 5 FU多药耐药的分子机制。方法　采用SRB法检测Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性 ,用AnnexinV FITC/PI双标流式细胞术检测Bel74 0 2细胞及其耐药株的凋亡程度 ,PI单染检测细胞周期变化 ,RT PCR方法检测凋亡相关因子bcl 2、bcl xl、bcl xs、bax、fas、p5 3和cpp32的表达情况。 结果　Bel74 0 2 / 5 FU耐药株具有多药耐药性 ;相同剂量 30 μmol·L-1及 15 0 μmol·L-15 FU处理 ,Bel74 0 2细胞凋亡明显增加 ,G0 /G1期增加 ,S期、G2 /GM减少 ,耐药株不出现凋亡增加及细胞周期改变 ;耐药株凋亡相关因子bcl xl、bcl xs和bax表达上调 ,p5 3和cpp32表达下调。 结论　人肝癌Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性可能和凋亡减少有关 ,抗凋亡因子bcl xl表达上调 ,促凋亡因子 p5 3和cpp32表达下调可能参与Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药。     

反相HPLC法测定人血浆中5-氟尿嘧啶的浓度

目的：建立RP-HPLC法测定人血浆中5-氟尿嘧啶的浓度。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱,流动相为0.02mol· L -1的磷酸二氢钾缓冲溶液（pH＝3.0）,流速为1.0mL· min -1,检测波长为264nm,柱温为25℃。结果5-氟尿嘧啶在2.0～30.0μg· mL -1度范围内呈良好的线性关系,检测限为4.0ng。5-氟尿嘧啶浓度为2.0、10.0、20.0μg· mL -1的日内RSD分别为3.6％、2.2％、1.1％,日间 RSD分别为5.2％、3.4％、1.8％,平均回收率分别为105.3％、97.2％、98.6％。结论该方法简便、快速、准确、重现性好,适用于5-氟尿嘧啶的药代动力学研究及临床血药浓度检测。     

瘦素对5-氟尿嘧啶损伤结肠癌细胞的影响

目的探讨不同浓度的瘦素对5-氟尿嘧啶(5-FU)损伤结肠癌细胞的影响。方法同时用5-FU及不同浓度的瘦素进行体外干预结肠癌HT-29细胞株。MTT法检测5-FU50%细胞生长抑制率(IC50)的变化。流式细胞仪、原位末端转移酶标记法(TUNEL)进行周期及凋亡分析。以RT-PCR方法检测caspase-9,caspase-3mRNA的表达。结果瘦素抑制5-FU对HT-29的杀伤作用。抑制5-FU诱导的细胞周期阻滞及细胞凋亡。RT-PCR表明加入瘦素后caspase-9,caspase-3mRNA的表达均下降,且呈剂量依赖性。结论瘦素通过下调caspase-9,caspase-3的表达促进结肠癌细胞产生凋亡抵抗,抑制5-FU的损伤作用。     

雷公藤红素联合5-氟尿嘧啶在人结肠癌细胞中的相互作用

目的体外观察雷公藤红素与5-氟尿嘧啶（5-FU）联用在人结肠癌HCT-116细胞增殖中的相互作用。方法采用MTT法观察不同浓度雷公藤红素及5-FU单独或联合应用对结肠癌细胞的生长抑制作用,并利用中效原理判断联合用药的效果。结果雷公藤红素和5-FU单独应用时,随药物浓度增加对HCT-116细胞的抑制作用也增加,中效浓度分别为3.533μmol/L,9.254μmol/L,两药联用时在大部分效应范围（0〈fa〈83％）表现协同作用（CI〈1），中效浓度为6．433μmol／L．其中雷公藤红素0．099μmol／L，5-FU6．33μmol／L。两药合用给药时间及次序不同时不同时，合用效应无明显差异。结论上述两种药物联合应用时具有较好的协同效应，且药物效应与给药顺序无关。